Name: Caracterização de Metabolic Estado em não-humanos Primatas com o Teste de Tolerância à glicose intravenosa (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: Aprenda a realizar o teste de tolerância à glicose intravenosa em macacos para caracterizar o estado metabólico e avaliar a progressão de doenças metabólicas. Este método padronizado facilita pesquisas sobre resistência à insulina.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Os autores gostariam de reconhecer o forte apoio da DHMRI CLAS equipe de cuidados de animal, Facility Gerente Sr. Daniel Peralta e atendendo veterinário, Dr. Glicério Ignacio, DVM MRCVS.

Todos os procedimentos com animais foram aprovados pelo Instituto David H. Murdock Research IACUC localizado no Campus North Carolina Research (NCRC), sob o protocolo 14-017, Caracterização de um modelo de primata não humano de diabetes e pré-diabetes / resistência à insulina e eficácia da terapêutica para melhorar a sensibilidade à insulina e a função metabólica. 1. Seleção de animais e preparação do estudo <ol><li> Select dieta e peso dos animais estáveis ​​com base em registros mensais de consumo alimentar e peso corporal. NOTA: Os animais que exibiram um declínio recente no apetite não devem ser caracterizadas até sua ingestão de alimentos tenha se estabilizado. <ol><li> Para os animais maduros (&gt; 5-6 anos), não selecione animais cujos pesos entre meses consecutivos corpo diferem em mais de 10%, sem antes examinar o macaco e exclusão de outras do que mudar de estado metabólico para a mudança dramática no peso causas. </li></ol></li><li> Para a glucose, insulina e c-Peptide analitos, prepare-se K 2 EDTA tubos de coleta de amostra com inibidor de protease (aprotinina e DPP4I). NOTA: O cocktail DPP4I + Aprotinina proporciona um amplo espectro de inibição da protease caso seja necessário para analitos adicionais (glucagon, GLP-1). No caso de analitos adicionais não são recolhidos, os tubos de sangue devem ser preparados da mesma maneira de manter a coerência na recolha de amostras. As amostras para os ensaios não validados para este método devem ser recolhidos separadamente, de acordo com as recomendações do fabricante. <ol><li> Prepara-se o cocktail de inibidores de protease através da mistura de 100 mg de liofilizado de aprotinina com 10 ml de DPP4I. Adicionar 10 uL da mistura de aprotinina + DPP4I a cada tubo de sangue para cada mililitro de sangue recolhido. </li><li> Adicionar um adicional de 10 ul do cocktail inibidor de protease a cada tubo para uma possível sobrecarga de recolha. Armazenar os tubos de sangue tratado a -20 ° C até à sua utilização. Mantenha os tubos sobre gelo molhado durante o procedure e centrifugação a 4 ° C. </li><li> Use um tubo separador de soro para recolher uma amostra de sangue na linha de base para a análise química do soro padrão. Para o hemograma completo (CBC), use um padrão de K 2 EDTA sem inibidores da protease. Use cryovials a plasma alíquota e soro após as amostras de sangue foram centrifugadas. </li><li> Rotular os tubos de sangue e os criotubos de forma adequada com a identificação dos animais, a data, o procedimento, ponto de tempo e volume da amostra. Rotular os criotubos com o analito (s) no plasma para o ensaio apropriado. </li></ol></li><li> Preparar a solução salina heparinizada através da injeção de 0,15 ml de 1.000 unidades USP por ml de heparina em um saco de 250 ml de solução salina normal. Se obter uma solução de 0,06 mg de heparina / ml. Desenhar 40 - 60 ml desta solução para uma solução salina de bloqueio para a lavagem entre as amostras. Desenhar um adicional de 1 ml e 5 ml em seringas separadas para a descarga do porto de infusão de dextrose antes e depois da infusão, respectivamente. </li></ol> 2.Sedação Animal e Preparação <ol><li> Retire os alimentos de gaiola do animal não menos do que 14 horas antes do procedimento, e não mais do que 18 horas. NOTA: É importante que os animais ser submetidos a jejum durante o procedimento, para evitar qualquer variação pós-prandial em valores de glicemia. Também é uma precaução para evitar a regurgitação e aspiração do conteúdo do estômago, enquanto anestesiados. </li><li> sedar animais para a duração do procedimento de IVGTT com cetamina administrada por via intramuscular como uma anestesia geral, a 10 mg / kg. Administrar cetamina adicional (5 - 10 mg / kg) em intervalos de 20-30 minutos, ou conforme necessário, durante o procedimento. <ol><li> Pesar o animal sedado. Colocar o animal numa posição reclinada lateralmente sobre uma mesa aquecida procedimento. </li><li> Monitorar os parâmetros clínicos a cada 15 a 20 minutos para assegurar que o animal está situado num plano estável de anestesia. Medir a frequência cardíaca (100-200 bpm) e SPO 2 (&gt; 92%) com um oxímetro de pulso. Medir a frequência respiratória (20 - 50 respirações / min) w<html> om um cronômetro, contando respirações visual ou à mão mais de quinze segundos e multiplicando por quatro. temperatura medida (&gt; 97 ° F) por via retal. Monitorar a cor da mucosa ao redor da gengiva e lábios (húmidas, rosa). </li></ol></li><li> Preparar dois locais cânula. Use cortadores de cabelo para cortar o cabelo da área de interesse, onde o cateter será inserido, e esterilizar toda a região com a alternância de scrubs de clorexidina e álcool 70%. <ol><li> Coloque um cateter na região das veias esquerda ou direita cefálica ou safena e anexá-lo para um flush heparina salina (0,06 mg de heparina / ml) com uma torneira de três vias. Este é o site coleta de sangue amostragem. </li><li> Coloque o segundo cateter em outra perna ou braço na região das veias cefálica ou safena e anexar uma porta. Utilize este site para a infusão de dextrose. Use uma pequena, 1 ml rubor de solução salina heparinizada para manter a patente cânula antes da infusão de dextrose. </li></ol></li></ol>e_title &quot;&gt; 3. IVGTT Procedimento NOTA: O procedimento IVGTT é composto por 8 pontos temporais sorteio de amostragem de sangue (Tabela 1). <ol><li> Tome o exemplo de linha de base e usar um glicosímetro portátil para medir o nível de glicose no sangue em jejum. Obter uma amostra de soro para análise química padrão, assim como uma amostra de sangue para hemograma completo, a fim de avaliar a saúde em geral do animal. Recolha de amostras de plasma para ensaiar os níveis de glucose e de insulina a partir da amostra de base utilizando um kit validado para utilização em macacos, conforme as instruções do fabricante 8, 9. NOTA: É importante ter uma pré-estiragem de 0,5 ml tomados a partir da cânula antes de tomar qualquer amostra para a recolha de sangue para remover o sangue residual ou heparina no espaço morto da cânula. </li><li> Após a obtenção da amostra de linha de base, infundir a dose de 50% de dextrose (250 mg / kg) ao longo de 30 seg para o porto de infusão de dextrose. NOTA: Os modelos de dose mais elevada (500 mg / kg) pode ser usado,embora a dose deve ser fixado através de procedimentos, a fim de fazer comparações longitudinais. <ol><li> Lavar o porto de infusão com 5 ml de soro fisiológico heparinizado para certificar-se de que não há dextrose deixado no porto. O final da infusão é a T0. Tem o técnico substitua as luvas, como dextrose residual a partir da infusão podem contaminar amostras de sangue subseqüentes. </li></ol></li><li> O primeiro pós-infusão ponto de tempo de amostragem é em T3 min, a partir do final da infusão de dextrose, seguido de T5 minutos, T7 minutos, T10 minutos, T15 minutos, T20 minutos, e o último ponto de tempo de amostra é em T30 min. Recolha plasma de cada ponto de tempo a níveis de glicose no ensaio e insulina com a amostra de base (veja o passo 3.1). <ol><li> No T3 min ponto de tempo, use o segurou a mão glicosímetro para verificar mais uma vez o nível de glicose no sangue. NOTA: As leituras glicosímetro na linha de base e T3 são apenas para confirmar a infusão da dextrose. O nível de glucose no sangue no ponto de tempo T3 min deve ser ~ 100 mg / dl maior compared para o nível de glicose no plasma em jejum basal. </li></ol></li></ol> 4. Recuperação de Animais e processamento de amostras <ol><li> Retirar as cânulas e aplicar pressão para os locais sondados para hemostasia após a T30 min ponto de tempo. Monitorar o animal até que ele recuperou a consciência e está sentando-se. alimentação oferta uma vez que o animal está totalmente recuperado. </li><li> Imediatamente coloque cada amostra de sangue total em K 2 tubos de EDTA em gelo. Centrifugar a 3000 rpm a uma temperatura de 4 ° C no decurso de 10 min de colheita. Partes alíquotas de plasma em criotubos, congelar e armazenar a -80 ° C até análise. <ol><li> Deixar o sangue para dentro do tubo de soro para análise química do soro padrão em repouso à temperatura ambiente durante não menos do que 20 minutos e a não mais do que 30 minutos antes de centrifugação a 3000 rpm à temperatura ambiente. Congelar as amostras de soro até analisadas num período de 48 horas de coleta. NOTA: Refrigerar toda a amostras de sangue coletadas para análise CBC até comosayed no prazo de 24 horas da coleta. </li></ol></li></ol> 5. Tratamento de Dados <ol><li> Depois de estabelecer as curvas de insulina no plasma e de glucose, determinar a velocidade de eliminação da glucose a partir do declive K do logaritmo natural de valores de glicose acima da linha de base 16, 17. NOTA: A NHP saudável pode vir a ter uma taxa de depuração de glicose K bem acima de 1, muitas vezes maior do que 2 ou mais, como um animal saudável, muitas vezes, retornar aos seus valores de glicose basais dentro de 30 min. Como a produção de insulina cai, a taxa de eliminação da glucose K vai cair mais drasticamente, caindo abaixo de 1. </li><li> Calcula-se a AUC no seu conjunto, como a soma dos totais da área dos trapézios representando a área sob a curva de cada segmento de linha entre os pontos de tempo, através de T30 16, 17. NOTA: Tradicionalmente, a AUC dos primeiros dez minutos do procedimento é considerado o acute a resposta da insulina à glicose (AR), enquanto a AUC do último 20 min do processo é considerada a resposta tardia de insulina (LIR). Como o animal torna-se mais dismetabólica, a AUC de insulina irá aumentar, reflectindo a compensação para o aumento da insensibilidade à insulina. Como as transições para animais de diabetes, no entanto, a AUC irá diminuir, muitas vezes inicialmente na fase aguda de insulina, capturado pelo ar. </li></ol>

<ol><li>Bergman, R., Phillips, L., Cobelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiologic+evaluation+of+factors+controlling+glucose+tolerance+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Physiologic evaluation of factors controlling glucose tolerance in man.</a> J. Clin. Invest. 68, 1456-1457 (1981).</li>
<li>Bergman, R., Prager, R., Volund, A., Olefsky, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equivalence+of+the+insulin+sensitivity+index+in+man+derived+by+the+minimal+model+and+the+euglycemic+glucose+clamp%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Equivalence of the insulin sensitivity index in man derived by the minimal model and the euglycemic glucose clamp.</a> J. Clin. Invest. 79, 790-800 (1987).</li>
<li>Hovorka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partitioning+glucose+distribution%2Ftransport%2C+disposal%2C+and+endogenous+production+during+IVGTT%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Partitioning glucose distribution/transport, disposal, and endogenous production during IVGTT.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 282, E992-E1007 (2002).</li>
<li>Salinari, S., Guidone, C., Bertuzzi, A., Manco, M., Asnaghi, S., Mingrone, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First-phase+insulin+secretion+restoration+and+differential+response+to+glucose+load+depending+on+the+route+of+administration+in+type+2+diabetic+subjects+after+beriatric+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">First-phase insulin secretion restoration and differential response to glucose load depending on the route of administration in type 2 diabetic subjects after beriatric surgery.</a> Diabetes Care. 32 (3), 375-380 (2009).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Clinical+Diabetes+Research%3A+Methods+and+Techniques%22">Clinical Diabetes Research: Methods and Techniques</a>. Roden, M. , John Wiley & Sons. (2007).</li>
<li>Cobelli, C., Pacini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+secretion+and+hepatic+extraction+in+humans+by+minimal+modeling+of+c-peptide+and+insulin+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Insulin secretion and hepatic extraction in humans by minimal modeling of c-peptide and insulin kinetics.</a> Diabetes. 37, 223-231 (1988).</li>
<li>Lorenzo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disposition+index%2C+glucose+effectiveness%2C+and+conversion+to+type+2+diabetes%3A+the+insulin+resistance+atherosclerosis+study%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Disposition index, glucose effectiveness, and conversion to type 2 diabetes: the insulin resistance atherosclerosis study.</a> Diabetes Care. 33, 2098-2103 (2010).</li>
<li>Hansen, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+and+treatment+of+type+2+diabetes+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Investigation and treatment of type 2 diabetes in nonhuman primates.</a> Methods Mol Biol. 933, 177-185 (2012).</li>
<li>Hansen, B. C., Bodkin, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+IVGTT.+Importance+of+method+used+to+calculate+glucose+disappearance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Standardization of IVGTT. Importance of method used to calculate glucose disappearance.</a> Diabetes Care. 16 (5), 847(1993).</li>
<li>Hardwood, J. H., Listrani, P., Wagner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonhuman+primates+and+other+animal+models+in+diabetes+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Sci+Tech%22%5BJournal%5D)">Nonhuman primates and other animal models in diabetes research.</a> J Diabetes Sci Tech. 3, 503-514 (2012).</li>
<li>De Koning, E. J., Bodkin, N. L., Hansen, B. C., Clark, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+in+Macaca+mulatta+monkeys+is+characterized+by+islet+amyloidosis+and+reduction+in+beta-cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus in Macaca mulatta monkeys is characterized by islet amyloidosis and reduction in beta-cell population.</a> Diabetologia. 36, 378-384 (1993).</li>
<li>Letiexhe, M. R., Scheen, A. J., Gerard, P. L., Desaive, C., Lefebvre, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+secretion%2C+clearance+and+action+before+and+after+gastroplasty+in+severely+obese+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obes+Relat+Metab+Disord%22%5BJournal%5D)">Insulin secretion, clearance and action before and after gastroplasty in severely obese subjects.</a> Int J Obes Relat Metab Disord. 18, 295-300 (1994).</li>
<li>Letiexhe, M. R., Scheen, A. J., Gerard, P. L., Desaive, C., Lefebvre, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postgastroplasty+recovery+of+ideal+body+weight+normalizes+glucose+and+insulin+metabolism+in+obese+women%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Postgastroplasty recovery of ideal body weight normalizes glucose and insulin metabolism in obese women.</a> J Clin Endocrinol Metab. 80, 364-369 (1995).</li>
<li>Kim, S. H., Abbasi, F., Chu, J. W., McLaughlin, T. L., Lamendola, C., Polonsky, K. S., Reaven, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rosiglitazone+reduces+glucose-stimulated+insulin+secretion+rate+and+increases+insulin+clearance+in+nondiabetic%2C+insulin-resistant+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Rosiglitazone reduces glucose-stimulated insulin secretion rate and increases insulin clearance in nondiabetic, insulin-resistant individuals.</a> Diabetes. 54, 2447-2452 (2005).</li>
<li>Toffolo, G., Breda, E., Cavaghan, M. K., Ehrmann, D. A., Polonsky, K. S., Cobelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+indexes+of+beta-cell+function+during+graded+up+and+down+glucose+infusion+from+C-peptide+minimal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Quantitative indexes of beta-cell function during graded up and down glucose infusion from C-peptide minimal models.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 280, E2-E10 (2001).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+beta-cell+insulin+secretory+function+using+a+graded+glucose-infusion+with+C-peptide+deconvolution+in+dysmetabolic%2C+and+diabetic+cynomolgus+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetology+and+Metabolic+Syn%22%5BJournal%5D)">Quantification of beta-cell insulin secretory function using a graded glucose-infusion with C-peptide deconvolution in dysmetabolic, and diabetic cynomolgus monkeys.</a> Diabetology and Metabolic Syn. 5, 40(2013).</li>
<li>Xiao, Y. F., Wang, B., Wang, X., Du, F., Benzinou, M., Wang, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xylazine-induced+reduction+of+tissue+sensitivity+to+insulin+leads+to+acute+hyperglycemia+in+diabetic+and+normoglycemic+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Xylazine-induced reduction of tissue sensitivity to insulin leads to acute hyperglycemia in diabetic and normoglycemic monkeys.</a> Anesthesiology. 13 (33), (2013).</li>
<li>Porte, D., Kahn, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-cell+dysfunction+and+failure+in+type+2+diabetes+potential+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">β-cell dysfunction and failure in type 2 diabetes potential mechanisms.</a> Diabetes. 50, Suppl 1. S160-S163 (2001).</li>
<li>DeFronzo, R. A., Tobin, J. D., Andres, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+clamp+technique%3A+a+method+for+quantifying+insulin+secretion+and+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Glucose clamp technique: a method for quantifying insulin secretion and resistance.</a> American Journal of Physiology. 237 (3), G214-G223 (1979).</li>
<li>Ferrannini, E., Gastaldelli, A., Miyazaki, Y., Matsuda, M., Mari, A., DeFronzo, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-cell+function+in+subjects+spanning+the+range+from+normal+glucose+tolerance+to+overt+diabetes%3A+a+new+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">β-cell function in subjects spanning the range from normal glucose tolerance to overt diabetes: a new analysis.</a> J Clin Endocrinol Metab. 90 (1), 493-500 (2005).</li>
<li>Vaughan, K. L., Szarowicz, M. D., Herbert, R. L., Mattison, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+anesthesia+protocols+for+intravenous+glucose+tolerance+testing+in+rhesus+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Primatol%22%5BJournal%5D)">Comparison of anesthesia protocols for intravenous glucose tolerance testing in rhesus monkeys.</a> J Med Primatol. 43, 162-168 (2014).</li>
<li>Kemnitz, J. W., Kraemer, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+glucoregulation+in+rhesus+monkeys+sedated+with+ketamine%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Primatology%22%5BJournal%5D)">Assessment of glucoregulation in rhesus monkeys sedated with ketamine.</a> American Journal of Primatology. 3, 201-210 (1982).</li>
<li>Dutton, C. J., Parvin, C. A., Gronowski, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+glycated+hemoglobin+percentages+for+use+in+the+diagnosis+and+monitoring+of+diabetes+mellitus+in+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Vet+Res%22%5BJournal%5D)">Measurement of glycated hemoglobin percentages for use in the diagnosis and monitoring of diabetes mellitus in nonhuman primates.</a> Am J Vet Res. 64, 562-568 (2003).</li>
<li>Rai, V., Iyer, U., Mani, I., Mani, U. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+biochemical+changes+in+insulin+dependent+and+non-insulin+dependent+diabetes+mellitus+and+their+role+in+the+development+of+secondary+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Diab+Dev+Countries%22%5BJournal%5D)">Serum biochemical changes in insulin dependent and non-insulin dependent diabetes mellitus and their role in the development of secondary complications.</a> Int J Diab Dev Countries. 17, 33-37 (1997).</li>
<li>Shirasaki, Y., Yoshioka, N., Kanazawa, K., Maekawa, T., Horikawa, T., Hayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+physical+restraint+on+glucose+tolerance+in+cynomolgus+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Primatol%22%5BJournal%5D)">Effect of physical restraint on glucose tolerance in cynomolgus monkeys.</a> J Med Primatol. 42, 165-168 (2013).</li>
</ol>

Os autores são filiados a uma organização de pesquisa de contrato (Crown Bioscience) activas no domínio da doença metabólica.

O IVGTT avalia a capacidade de libertação estimulada por glicose insulina por uma única infusão de dextrose com base no peso do corpo 5, 12, 13. A partir do ensaio, a glucose no sangue em jejum e o nível de insulina é alcançada, e que permite uma avaliação da capacidade do animal para libertação de insulina e retornar o nível de glucose elevada no sentido da linha de base. Isto proporciona ao utilizador informação para caracterizar o animal como um normal de glicose e de controlo saudável nível de insulina, u...

O IVGTT é um ensaio funcional conveniente que é rotineiramente utilizada para determinar a função das células-β em seres humanos em diferentes estados metabólicos 5, 7. Em modelos animais de diabetes tipo 2, é bem reconhecido como uma ferramenta para caracterizar animais que mostram a progressão da doença metabólica de um saudável para um estado hiperglicémico dismetabólica 8, 9. O modelo animal mais próximo de DT2 é demonstrada em primatas não humanos (PNH), dos quais rhesus e cynomolgus macacos são exemplos notáveis. Estes animais desenvolvem naturalmente T2D com os mesmos fatores de risco de idade e obesidade contribui para sua incidência como em humanos 10. Além disso, há uma progressão da doença e patologia semelhante pancreática, apresentando depósitos amilóides medida que a doença progride dismetabólica 11. Aqui nós relatamos em nosso método padrão de realizar uma IVGTT em NHPs como parte de nossa caracterização colônia de estado metabólico nestes animais. Este método éfácil de executar em relação à outra mais demorado, e técnicas dispendiosas 2. O IVGTT é útil para a caracterização de uma grande colônia de animais rápida e frequentemente. Quando tomados em consideração com o nível de hemoglobina glicosilada (HbA1c), história dietética e ingestão de alimentos do animal, bem como a sua magra massa gorda e do corpo por cento, o IVGTT é normalmente suficiente para caracterizar o estado metabólico de um animal e a progressão para a diabetes declarada 6 , 8. HbA1C representa o nível glicêmico média ao longo da vida de um glóbulo vermelho, proporcionando uma medida confiável dos níveis de glicose ao longo das seis semanas anteriores a três meses. Quando medido a partir da amostra de sangue de linha de base em jejum do IVGTT, este valor fornece uma janela para o controlo da glicemia durante os meses entre procedimentos. Se o animal tem a transição de dismetabólica para diabéticos desde a sua última IVGTT, um valor de HbA1C muito superior ao seu valor anterior indicariaque a transição começou logo após a sua última IVGTT, ao passo que, um valor de HbA1C mais perto de seu valor anterior indicaria que eles têm apenas recentemente transferida. De um modo geral, em macacos rhesus, a HbA1C valores superiores a 6% são considerados anormais, e indicam mau controlo glicémico 10, 23. glicemia devem ser interpretados dentro do contexto do comportamento e estado geral de saúde do animal como um todo. macacos diabéticos - como seres humanos - hiperfagia exposição, polidipsia e poliúria. habitação grupo de animais fornece desafios significativos para a medição desses indicadores e do cuidado individual necessários para dismetabólica e macacos diabéticos. Recomendamos isoladamente abrigando os animais, a fim de que o cuidado mais personalizado pode ser fornecido, e os marcadores comportamentais da saúde do macaco mais facilmente ser monitorado 8. Além disso, os macacos diabéticos irá apresentar perda de peso, assim como um perfil lipídico elevado (maiorcolesterol, hipertrigliceridemia) e metabolismo mineral perturbado na química do soro. É importante para medir marcadores da função hepática e renal na química do soro, como danos a estes órgãos são frequentemente complicações de avançar metabólica distúrbio / diabetes, e podem ser co-determinantes do glicêmico, lipídico e desequilíbrios minerais 9, 11, 18, 24 . Ao utilizar este método, os valores históricos gerado a partir de várias caracterizações, frequentes ao longo da vida de um macaco são de particular valor. Se outros procedimentos, como uma braçadeira de glicose ou classificados infusão de glicose (GGI), são necessários para avaliar plenamente a saúde de um animal, é comumente sobre caracterização inicial, quando sua história não está disponível. IVGTTs No entanto, uma vez que uma linha de base foi estabelecida, repetidas de uma frequência de três em três meses são normalmente suficiente para acompanhar o progresso de um animal. Isto é particularmente importante quando os animais estão inscritos em vários estudos ao longo de umano civil com base em seu estado metabólico. Embora a sua saúde pode permanecer relativamente estável por ano de cada vez, quando o estado metabólico de um animal piora, um aumento dramático na resistência à insulina e intolerância à glucose pode ocorrer muito rapidamente. os valores de HbA1c permitir alguma interpolação do declínio ou a melhoria do estado de saúde do animal entre os procedimentos agendados três meses de intervalo. Por esta razão, este método é ideal para a caracterização de animais utilizados em vários estudos longitudinais, ao longo do seu tempo de vida natural.

<table><tbody><tr>Centrífuga <td></td><td></td><td>Allegra X-15R</td><td>plasma: 4 &#176; C a 3.000 rpm por 10 min</td></tr><tr><td>Soro centrífugo</td><td></td><td></td> Sorvall ST16R<td>: 22 &#176; C a 3.000 rpm por 10 min</td></tr><tr><td>Thermo Scientific -86 &#176; C Freezer, Série Forma 88000</td><td>Modelo: 88500A</td><td></td>Dextrose 50% (D50)Webster 07-8008986 I.V. infusão de glicose 3 ml Seringa Luer Lock Midwest Veterinary Suppy serial coleta de sangue 5 ml Seringa Luer Lock Midwest Veterinary Suppy salinização heparinizada flush 10 ml Luer Lock Seringa Midwest Veterinary Suppy <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>entrega de esponjas de gaze I.V. D50</td></tr><tr><td>2 x 2</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>366.23000.4</td><td>Usado seco, com 70% de álcool e solução de clorohex a 2%</td></tr> 4 <tr><td>ml tubos separadores de soro&nbsp;</td><td>Midwest Veterinary Supply</td><td>366.45000.4</td><td>tubo de coleta de sangue para painel superquímico</td></tr><tr><td>K2EDTA, 2 ml</td><td>VWR</td><td>95057-239</td><td>tubos de coleta de sangue</td></tr><tr><td>Aprotinina, 100 mg</td><td>Sigma</td><td>A1153-100MG</td><td>tubo de coleta de sangue aditivo protease</td></tr><tr><td>22 G x 1" Cateteres</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>193.75250.2</td><td>Cateter I.V.</td></tr><tr><td>Plugue de Injeção W/ Tampa</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.11500.2</td><td>%50 porta de infusão de dextrose</td></tr><tr><td>Porus Tape, 1/2" x 10 yd</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.85000.2</td><td>mantém a aderência de cateteres e hep. Fechaduras</td></tr><tr><td>Solução de clorexidina 2%</td> <td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>193.08855.3</td><td>local do cateter de preparação</td></tr><tr><td>70% Etanol</td><td>VWR</td><td>71001-654</td><td></td></tr><tr><td>torniquete</td> do local do cateter de preparação <td>Webster</td><td>07-8003432</td><td></td></tr><tr><td>torneira de 3 vias</td><td>Midwest Veterinary Supply</td><td>366.28510.4</td><td>hep. bloqueio</td></tr><tr><td>37 "conjunto de extensão</td><td>Webster</td><td>07-8454200</td><td>hep. lock</td></tr><tr><td>Exel 50-60cc LL Seringas</td><td>Midwest Veterinary Suppy</td><td>001.12250.2</td><td>Lavagem de solução salina heparinizada</td></tr><tr><td>250 ml saco 0.9% solução salina</td><td>Webster</td><td>07-8365593</td><td>lavagem</td></tr><tr><td>1.000 U Heparina, 10 ml</td><td>Webster</td><td>07-883-4916</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina (Ketaset) 100&nbsp; mg / ml</td><td>Fort Dodge</td> <td>(AV encomendado)</td><td></td></tr> <tr><td>Tiras de teste de glicose Precision Xtra 50 / bx</td><td>Abbott (American Diabetes Wholesale)</td> <td>9381599728K7</td><td>teste de linha de base / níveis de glicose no sangue</td></tr><tr><td>T3 Masimo Rad 57</td><td>DRE</td><td>6052057V</td><td>oxímetro de pulso</td></tr><tr><td>Pavia termômetro retal</td><td>Patterson</td><td>07-8391335</td><td></td></tr><tr><td>Precision Xtra Glucometer</td><td>Abbott</td><td>9381599728K7</td><td>Glicosímetro portátil</td></tr></tbody></table>

caracterização de metabolic estado em não-humanos primatas com o teste de tolerância à glicose intravenosa

Characterization of Metabolic Status in Nonhuman Primates with the Intravenous Glucose Tolerance Test

O teste de tolerância à glucose intravenosa (IVGTT) desempenha um papel fundamental na caracterização da homeostase da glucose. Quando tomados em conjunto com exames laboratoriais, inclusive dos níveis de glicose no sangue, tanto no alimentados e em jejum estado, HbA1c, níveis de insulina, história clínica de dieta, composição corporal e peso corporal, uma avaliação do controle glicêmico normal e anormal pode ser feita . Interpretação de um IVGTT é feito através da medição de alterações nos níveis de glucose e insulina ao longo do tempo em relação ao desafio de dextrose. Os componentes críticos a ser considerados são: os níveis de glucose de pico de insulina e chegaram em relação ao T0 (final da infusão de glucose), a taxa de eliminação da glucose K derivado a partir do declive de uma rápida eliminação de glucose no primeiro 20 min (T1 a T20), o tempo de para voltar à linha de base de glicose, e a área sob a curva (AUC). Estas medidas IVGTT irá mostrar alterações características à medida que a homeostase de glicose a partir de uma saudável toa estado metabólico doente 5. Aqui descrevemos a caracterização de primatas não humanos (macacos rhesus e cynomolgus), que são o modelo mais relevante animais de diabetes do tipo II (DT2) em seres humanos e a IVGTT e quadro clínico desses animais a partir de uma magra saudável, para dismetabólica obesos, e T2D estado 8, 10, 11.

Os resultados mostrados na Figura 1 são demonstrativas de curvas típicas de glucose e de insulina a partir maduros, saudáveis e diabéticos macacos cynomolgus ao longo de 30 min uma IVGTT. Os dados de macacos diabéticos saudáveis ​​e avançados são mostrados, a fim de contrastar as diferenças óbvias entre animais de ambos os extremos do intervalo de caracterização metabólica. Este protocolo IVGTT tem sido utilizado com sucesso pelos autores em macacos rhesus, com resultado...

O objetivo deste protocolo é o de apresentar um método padrão para executar testes de tolerância à glicose intravenosa (IVGTTs) para avaliar o controle glicêmico em primatas não humanos e avaliar o seu estado metabólico do saudável dismetabólica.

Caracterização de Metabolic Estado em não-humanos Primatas com o Teste de Tolerância à glicose intravenosa

The intravenous glucose tolerance test (IVGTT) plays a key role in the characterization of glucose homeostasis. When taken together with serum biochemical ...

O objetivo geral deste teste de tolerância à glicose intravenosa, ou IVGTT, é caracterizar a progressão da doença metabólica em macacos, desde um estado saudável até um estado desmetabólico e hiperglicêmico. Este método pode ser utilizado para estabelecer grupos de indivíduos estratificados de acordo com seu status metabólico, para investigações dietéticas ou farmacológicas da eficácia terapêutica de tratamentos para resistência à insulina na diabetes. A principal vantagem desta técnica é que ela é fácil de realizar em comparação com outras técnicas mais demoradas e onerosas.De 14 a 18 horas antes de iniciar o procedimento, remova o alimento da gaiola do macaco para evitar qualquer variação pós-prandial nos valores glicêmicos. Na manhã seguinte, pese o animal sedado. Em seguida, posicione o primata em posição decúbito lateral sobre uma mesa de procedimento aquecida.A cada 15 a 20 minutos, utilize um oxímetro de pulso para medir a frequência cardíaca e a saturação periférica de oxigênio no capilar. Use um cronômetro para medir a frequência respiratória e um termômetro para medir a temperatura por via retal. Confirme também, em cada verificação dos parâmetros clínicos, que a membrana mucosa ao redor da gengiva e dos lábios está úmida e rosada.Após confirmar a saúde basal do animal, use uma tesoura elétrica para aparar os pelos nas áreas onde os cateteres serão inseridos, seguido pela esterilização de ambas as regiões com fricções alternadas de clorexidina e álcool a 70%. Quando os locais estiverem prontos, insira o primeiro cateter e conecte a cânula a uma solução de lavagem com heparina-salina utilizando uma torneira de três vias. Este é o local de coleta de sangue para amostragem.Fixe a torneira com fita adesiva para assegurá-la à perna. A colocação do cateter é fundamental para a perviedade e para coletas sanguíneas seriadas precisas. Por isso, é importante considerar uma região medial e mais próxima da veia safena para fixar e manipular facilmente o sistema de bloqueio com lavagem heparinizada.Em seguida, posicione o segundo cateter e conecte um acesso para a infusão de dextrose, seguido pela administração de uma lavagem de um mililitro de soro fisiológico heparinizado para manter a cânula pérvia até a infusão de dextrose. Fixe o acesso ao braço com fita adesiva para assegurá-lo. Quando ambos os cateteres estiverem posicionados, colete uma amostra basal e utilize um glicosímetro portátil para medir o nível de glicose no sangue em jejum.Colete uma amostra de soro para análise clínica padrão, bem como uma amostra de sangue total para contagem completa de células sanguíneas, a fim de avaliar a saúde geral do animal. Inverta a amostra de sangue total. Após cada coleta sanguínea, misture as amostras em tubos com EDTA contendo inibidores de protease.Após obter as amostras basais, infunda a dose de dextrose a 50% durante 30 segundos através da porta de infusão de dextrose. Em seguida, faça uma lavagem com cinco mililitros de soro fisiológico heparinizado, de modo que nenhuma dextrose permaneça na porta. Ao final da infusão, troque as luvas, pois a dextrose residual da infusão pode contaminar as amostras subsequentes de sangue.O primeiro ponto temporal da coleta de amostras após a infusão é aos três minutos do final da infusão de dextrose, seguido por amostras nos tempos cinco, sete, 10, 15 e 20 minutos, sendo a última amostra obtida aos 30 minutos. Centrifugue as amostras para análise de glicose e insulina dentro de 10 minutos após a coleta, em seguida alíquotas do plasma devem ser transferidas para criovials para congelamento e armazenamento a menos 80 graus Celsius, até a análise posterior das amostras. Na coleta da amostra aos três minutos, utilize o glicosímetro portátil para verificar o nível de glicose no sangue, a fim de confirmar a infusão de dextrose.Após a coleta da última amostra, remova as cânulas, aplicando pressão nos locais cateterizados para obter hemostasia, e monitore o animal até que esteja completamente recuperado. Aqui, são apresentadas curvas típicas de glicose e insulina de macacos-cinomolgos maduros, saudáveis e diabéticos ao longo de um IVGTT de 30 minutos. Os valores basais de glicose em jejum de macacos saudáveis podem ser tão baixos quanto 50 a 60 miligramas por decilitro, com um pico inicial de glicose plasmática observado no tempo T de três minutos.Isso é drasticamente mais baixo do que o pico típico de glicose plasmática exibido por animais diabéticos. Ao longo do procedimento, os níveis de glicose de animais saudáveis frequentemente retornam aos seus valores basais, enquanto os níveis de animais dismetabólicos e diabéticos não retornam. A curva de insulina acompanhante para um animal saudável exibe dois picos, correspondentes a uma queda inicial rápida na glicose sanguínea mediada em grande parte pelos efeitos periféricos da insulina no transporte e captação de glicose.A magnitude desses efeitos periféricos, mesmo durante a primeira fase da resposta à insulina, não iguala a contribuição do fígado para a redução da glicose, que, durante o segundo pico de insulina — menor, mas mais sustentado — tem o maior impacto sobre os níveis glicêmicos por meio da supressão da produção endógena de glicose. Uma vez que o animal se torna excessivamente diabético, a produção de insulina em resposta ao bolo de dextrose cai drasticamente. Os níveis glicêmicos permanecerão elevados ao longo do procedimento.Como ocorre com a glicose, a depuração agora é mediada quase inteiramente por mecanismos independentes de insulina. Após este procedimento, outros métodos, como infusão graduada de glicose ou o clamp hiperinsulinêmico euglicêmico, podem ser realizados para responder perguntas adicionais sobre a sensibilidade à insulina. Não se esqueça de que trabalhar com agulhas expostas ao sangue de macacos pode ser extremamente perigoso, devido ao risco de exposição ao vírus da herpes B.Precauções, como o uso do equipamento de proteção individual adequado e o máximo cuidado ao manipular materiais cortantes, devem sempre ser observadas durante a realização deste procedimento.

characterization-metabolic-status-nonhuman-primates-with-intravenous

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

O grampo hiperinsulinêmico euglicêmico-, ou clamp de insulina, é o padrão ouro para avaliar a ação da...

Hiperinsulinêmico euglicêmico-Clamps em Consciente, Ratos Unrestrained

Este vídeo apresenta como realizar um teste oral de tolerância à glicose em um camundongo de laboratório.

Teste oral de tolerância à glicose (OGTT): medindo o metabolismo da glicose em camundongos

O atual artigo descreve a geração e caracterização metabólica de ratos alimentados com dieta de alto teor de gordura como um modelo de obesidade e resistência à insulina induzida pela dieta. Possui ainda mais protocolos detalhados para executar o teste de tolerância à glicose oral e o teste de tolerância à insulina, monitoramento de alterações de todo o organismo de glicose metabolismo na vivo.

Estudo do metabolismo in vivo da glicose em camundongos alimentados com dieta de alto teor em gordura usando o teste oral de tolerância à glicose (OGTT) e o teste de tolerância à insulina (ITT)

A incidência da obesidade está aumentando e aumenta o risco de doenças pulmonares crônicas. Estabelecer os mecanismos subjacentes e estratégias preventivas, animal bem definido modelos são necessários. Aqui, nós fornecemos três métodos (teste de tolerância à glicose, pletismografia de corpo e fixação do pulmão) para estudar o efeito da obesidade sobre os resultados pulmonares em camundongos.

Teste de tolerância à glicose intraperitoneal, medição da função pulmonar e a fixação do pulmão para estudar o impacto da obesidade e metabolismo prejudicado em resultados pulmonares

Este protocolo descreve o uso de um analisador de composição do corpo e sistema de monitoramento animal metabólico para caracterizar a composição corporal e parâmetros metabólicos em camundongos. Um modelo de obesidade induzido pelo alto teor de gordura alimentar é usado como um exemplo para a aplicação dessas técnicas.

Composição corporal e análise de enjaulamento metabólico em ratos de alta gordura Fed

O artigo atual descreve um protocolo detalhado para o jejum intermitente isocalístico 2:1 para proteger e tratar de encontro à obesidade e ao metabolismo danificado da glicose em ratos do selvagem-tipo e do ob/ob.

Avaliação dos efeitos metabólicos do jejum intermitente isocalórico 2:1 em camundongos

Este protocolo demonstra a medida precisa e reproduzível do consumo de oxigênio em ilhotas pancreáticas de primatas não humanos. As técnicas de carregamento de ilhotas e revestimento da microplaca fornecem uma estrutura para a medição eficiente da respiração em outros tipos de esferóides cultivados.

Análise do consumo de oxigênio em ilhotas pancreáticas de primatas não humanos

Este estudo descreve a medição direta da produção de glicose hepática em um modelo de rato com síndrome do ovário policístico usando um rastreador de glicose isotópico estável via veia da cauda em estados ricos em jejum e glicose em conjunto.

Avaliação da Produção de Glicose Hepática em um Modelo de Rato da Síndrome do Ovário Policístico

Aqui, apresentamos um protocolo para quantificar o significado fisiológico do impacto da atividade do tecido adiposo marrom (BAT) no metabolismo humano. Isto é conseguido combinando carga de carboidratos e calorimetria indireta com medidas de mudanças supraclaviculares de temperatura. Esta nova abordagem pode ajudar a desenvolver um alvo farmacológico para a termogênese BAT em humanos.

Usando uma combinação de calorimetria indireta, termografia infravermelha e níveis de glicose no sangue para medir a termogênese do tecido adiposo marrom em humanos

A bateria de testes (IMAP) para a realização de uma avaliação aprofundada das capacidades cognitivas auditivas e contribuindo para a capacidade de ouvir é descrito. É rápido para administrar, criança-amigável e livre de confunde linguística. Geração de estímulo e gerenciamento de protocolos são controlados através de uma plataforma de software (IHR-STAR) para garantir procedimentos replicáveis.

Making Sense of Listening: A bateria de testes IMAP

Aprenda a realizar o teste de tolerância à glicose intravenosa em macacos para caracterizar o estado metabólico e avaliar a progressão de doenças metabólicas. Este método padronizado facilita pesquisas sobre resistência à insulina.

Caracterização de Metabolic Estado em não-humanos Primatas com o Teste de Tolerância à glicose intravenosa

Explorar mais vídeos