Name: Normotérmica Ex Vivo Perfusão rim para a Preservação do rim Os enxertos antes do transplante (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Aprenda a técnica de perfusão renal normotérmica ex vivo para preservação de enxertos renais antes do transplante. Este método mantém condições fisiológicas estáveis e reduz a lesão isquêmica fria.

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Queremos agradecer Sorin Group (Milão, Itália) para nos fornecer custom made circuitos de perfusão renal. Além disso agradecemos XVIVO Perfusão Inc. (Gotemburgo, Suécia) para nos fornecer solução Steen, BBraun AG (Melsungen, Alemanha) para o fornecimento de bombas de seringa, e Rieber GmbH &amp; Co KG (Reutlingen, Alemanha).

Nota: Uma vista geral esquemática do protocolo de estudo é apresentado na Figura 1. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig1.jpg" /> Figura 1. Protocolo do Estudo. Este protocolo do estudo ex vivo normotérmica de perfusão renal baseia-se num modelo suíno. Após a dissecção cirúrgica dos vasos do enxerto renal e lavagem com 500 ml de histidina-triptofano-cetoglutarato (HTK), o enxerto pode ser recuperada. Após armazenamento a frio (SCS), durante 3 horas, o enxerto de rim, é perfundido ex vivo normotérmica (NEVKP) por várias horas até ao transplante designado. Todos os animais receberam cuidados de acordo com os &#39;&#39; Princípios do Laboratório Animal Care &#39;&#39; formuladas pela Sociedade Nacional de Pesquisa Médica e da &#39;&#39; Guia para o Cuidado de Animais de Laboratório &#39;&#39; publicado pelo National Institutes of Health,Ontário, Canadá. O Comité do Instituto Geral de Toronto Research Animal Care aprovado todos os estudos. 1. Os animais <ol><li> Use suínos machos Yorkshire (27-33 kg) neste protocolo. </li></ol> 2. Órgão Retrieval <ol><li> Procedimento pré-operatório <ol><li> Casa dos porcos Yorkshire do sexo masculino em um centro de pesquisa para pelo menos uma semana para reduzir o seu nível de estresse. Jejuar os suínos para um mínimo de 6 horas antes da indução da anestesia. </li><li> Iniciar anestesia do porco por uma injecção intramuscular de cetamina (25 mg / kg), a atropina (0,04 mg / kg) e midazolam (0,15 mg / kg). Posteriormente, o transporte do animal a partir da instalação de alojamento para a sala de cirurgia (OR). </li><li> Coloque o porco em decúbito dorsal sobre a mesa da OR. Deixá-lo respirar 2 L de oxigênio com 5% de isoflurano espontaneamente. Depois de relaxamento, expor as cordas vocais com um laringoscópio e pulverizá-los com lidocaína a 2% para evitar um espasmo causado pela intubação. AfTer intubação com um tubo de 6,5 milímetros, bloquear a braçadeira com 3-5 ml de ar. Nota: capnometria revela a posição correta do tubo traqueal. </li><li> Abaixe o gás isoflurano a 2,5%. Definir o ventilador para 14-16 respirações / min e o volume corrente de 10 - 15 ml / kg de peso corporal. Monitorar o porco de perto. A freqüência cardíaca e saturação de oxigênio são registradas por oximetria de pulso. </li><li> Sob condições estéreis, introduzir um 8.5 Fr. x 10 centímetros do cateter na veia jugular na técnica de Seldinger 13. Portanto, utilizar uma agulha para perfurar o recipiente venosa. Após a introdução de um fio, substitua a agulha com um cateter. Elimine o fio e fixar o cateter à pele. Administrar 200 ml de solução de Ringer com lactato por hora durante toda a cirurgia. </li></ol></li><li> Procedimento Cirúrgico <ol><li> Na sequência de desinfecção e cobertura do campo cirúrgico, realizar uma incisão na linha média do xifóide até sínfise púbica. Para melhorar a exposição, alargar a abordagem cirúrgica comuma incisão lateral esquerdo. Cubra os grandes e pequenos entranhas com uma toalha e posicioná-los para o lado esquerdo para o ideal acesso para o rim direito. </li><li> Separa-se a veia cava inferior (IVC) a partir da aorta abdominal. Ramos da aorta ligadura da parte de trás da aorta. </li><li> Após a dissecção aórtica completa para as costas, passe uma ligadura em torno da aorta cranial aos ramos renais. Além disso, coloque duas ligaduras cranianos da bifurcação ilíaca. Colocar um laço em torno da artéria renal esquerda. </li><li> Livre o rim direito do seu tecido aderente. Dissecar a veia renal, artéria, e ureter. </li><li> Abra o diafragma e administrar 1000 UI de heparina por kg de peso do doador para o coração. Para um modelo de DCD, injetar 40 mval de KCl intracardial 3 min após heparinização sistêmica para induzir uma parada cardíaca. A parada cardíaca é valorizado como ponto de isquemia quente de partida. </li><li> Enquanto isso, para a coleta de sangue, conecte as linhas de sacos CPDA (citrato, fosfato, dextrose, umdenosine) para o cateter introduzido na veia jugular esquerda superior. Realizar uma rotação suave (1.500 xg sem freio). Remover plasma e creme leucocitário sob condição estéril (classe biossegurança gabinete II) e armazenar os eritrócitos para transfusão. </li><li> Canular da aorta com uma linha de limpeza de órgãos acima da bifurcação ilíaca. Amarre as ligaduras na aorta e da artéria renal esquerda. </li><li> Lavar o rim com uma solução de histidina-triptofano-cetoglutarato (HTK) com uma pressão de 100 cm de H 2 O. Fixe a veia torácica e recolher o sangue através do cateter jugular. Cortar a cava abdominal abaixo da veia renal a garantir uma descarga óptima do rim. </li><li> Depois de um flush completa do rim direito, recuperar o enxerto com um segmento da aorta. Cortar a veia renal e deixar o ureter longo. </li></ol></li><li> Voltar Tabela Preparação do enxerto de rim para a perfusão <ol><li> Livre o rim a partir de tecido aderente. Feche a parte cranial da aorta com um laço de umnd canular a parte inferior com um &quot;x 3/8&quot; redutor 1/4. Amarrar ramos arteriais menores provenientes da aorta. </li><li> Canular a veia renal com um &quot;x 3/8&quot; redutor directamente 1/4. Entubar o ureter com um 8 Fr. tubo de alimentação. </li><li> Inserir o rim em gelo até ao início da NEVKP. </li></ol></li></ol> 3. Normotérmica Ex vivo rim Perfusão (NEVKP) <ol><li> Preparação do circuito de perfusão O circuito de perfusão neonatal consiste em equipamento de circulação extracorpórea (Figura 2). <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig2.jpg" /> Figura 2. Desenho esquemático do circuito de perfusão. O circuito é composto por neonatal tecnologia de circulação extracorpórea. A solução de perfusão é recolhido no reservatório venoso. Uma bomba centrífuga impele a solução para o oxigenador, onde é enriquecido com oxigénio e aquecida a 37 ° C. Depois passing bolha do filtro arterial, o perfusado é conduzido com uma pressão de 60-80 mm Hg através da artéria renal no rim. O fluxo venoso (0-3 mmHg) leva o perfusato de volta para o reservatório venoso. As bombas de infusão de seringa e garantir o fornecimento de compostos adicionais. A urina é recolhida em toda a perfusão. Características do circuito de perfusão são registrados continuamente. Amostras de gás venoso e arterial de hora em hora, e marcadores de lesão renal são analisados. <ol> <li> Ligue o circuito de perfusão feitos para o dispositivo de perfusão renal. </li><li> Conecte a tubulação ao reservatório venoso e oxigenador. Conecte o tubo de linha arterial para a saída arterial do oxigenador e posicionar o filtro de espuma em seu titular. Ligue a linha de purga. Ligar o tubo de cateter venoso para a entrada do reservatório venoso. </li><li> Para a avaliação durante a perfusão, conecte a sonda de temperatura na tomada arterial, conectar o medidor de vazão e do busensor de Bble ao tubo da linha arterial, e conectar as linhas de pressão. Conecte o sensor de nível. </li><li> Ligue as linhas de amostra venosa e arterial para os portos de amostras venosas e arteriais. </li><li> Posicione a câmara de órgão em um carrinho e introduzir o tubo venoso e arterial através dos buracos preparados. Fixe a tubulação para a mesa e câmara com firmeza. </li><li> Inserir o tubo de sucção para a bomba de roletes e posicionar uma ponta na câmara para recolher os fluidos. </li><li> Ligar o tubo de oxigénio para o tanque de gás contendo 95% de O2 / 5% de CO 2 e o oxigenador. Ligar o tubo de unidade de aquecimento para o oxigenador e a câmara de órgão. </li><li> Use tubulação grampos para fechar as linhas de fluxo venoso e arterial. Aplique outra braçadeira tubulação para o escoamento do reservatório venoso. </li></ol></li><li> Preparação da solução de perfusão, suplementos adicionais, e Injeção do Circuito <ol><li> Usar uma bomba de infusão para substituir a urina produzida comRinger lactato. </li><li> Usar uma bomba de seringa para administrar a nutrição (glicose 0,5 ml / h, aminoácidos 0,5 ml / h) e insulina (5 UI / h) para o reservatório venoso. Utilizar uma segunda bomba de seringa para infundir um vasodilatador (verapamil, 0,25 mg / h) directamente na linha arterial. </li><li> Encha o reservatório venoso com a solução de perfusão. Portanto, derrame Lactato de Ringer (175 ml), solução STEEN (200 ml), dro (27 ml), heparina (1000 IU), bicarbonato de sódio para ajustar o pH, e o gluconato de cálcio para dentro do reservatório venoso. Finalmente, adicionar eritrócitos lavados (125 mL). </li><li> Ligue a máquina coração pulmão (HLM). Ative os painéis de pressão, temperatura, nível e sensores de bolha. Ative o Sistema de Gestão de Dados (DMS) para gravar os dados em toda a perfusão. Activar a unidade de aquecimento para aquecer a solução de perfusão e a câmara de órgãos a 37 ° C. Abra o fornecimento de O 2. </li><li> Abra a braçadeira de tubulação atrás do reservatório venoso e libertar a centrifugal cabeça da bomba de ar completamente. Iniciar a bomba centrífuga a 1000 rpm e permitir que a solução a ser impelido ao longo do circuito. Prender o tubo contornando o filtro arterial e liberar o ar do filtro arterial. </li><li> Zero as linhas de pressão. Activa as bombas de seringa e de infusão. </li></ol></li><li> Kidney Graft Perfusão <ol><li> Remover o rim a partir do gelo, e posicionar o rim no fundamento na câmara de órgão. Coloque o cateter de urina para o coletor de urina. Depois de garantir que o venoso e arterial da tubulação estão livres de ar, conecte os conectores para a tubulação. </li><li> Feche o atalho entre o arterial e linhas de tubos venosos. Definir a pressão arterial para 75 mmHg através da regulação da velocidade da bomba centrífuga. </li><li> Pressões de registro, fluxo arterial, temperatura e presença de bolhas continuamente com a DMS. Observar os valores cuidadosamente ao longo da perfusão. Durante a perfusão, vazamento de sangue para dentro da câmara é Collected através do tubo de sucção de volta para o reservatório venoso. </li><li> Anotar a quantidade de urina produzida. Recolha de sangue e urina amostras venosas horária. Monitorar a perfusão venosa e tomando amostras de gases no sangue arterial e aspartato aminotransferase (AST), e análise de lactato. </li><li> No final da perfusão, desconecte a tubulação da artéria e veia renal, lave o enxerto com frio HTK, e armazená-lo no gelo em um saco órgão estéril até o transplante. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Este estudo demonstra que NEVKP com uma solução baseada em eritrócitos pode ser realizada com excelentes resultados para um período de tempo prolongado num modelo suíno. Durante as 10 horas de perfusão ex vivo os rins demonstraram parâmetros estáveis ​​de perfusão, metabolismo renal activa, homeostase e lesão renal mínima. A produção de urina e a lesão renal dependerá da composição da solução de perfusão. É importante manter a pressão oncótica e osmolaridade do perfusato no intervalo fisiológico. Em particular, uma baixa pressão oncótica resultará numa produção unphysiologically alta urina com edema renal significativa e marcadores crescentes de lesão renal. STEEN solução contendo albumina é escolhido neste modelo para regular a pressão oncótica e para simular condições fisiológicas para o rim. O bicarbonato de sódio e gluconato de cálcio são adicionados ao sistema para conseguir valores fisiológicos de pH, HCO3 </sub&gt;, sódio, potássio, cálcio, cloreto e. A seleção e dosagem do vasodilatador é importante para garantir o fluxo de sangue suficiente e suprimento de oxigênio. A técnica de normotérmica ex vivo perfusão renal tem várias limitações. Ex vivo de perfusão não está associado com suporte hormonal do rim, o que poderia afectar negativamente os períodos mais longos de perfusão. Além disso, a nova tecnologia, neste ponto em tempo, está associada a um aumento dos custos. Futuras melhorias poderia simplificar a tecnologia e reduzir os custos. O desenvolvimento de um dispositivo de perfusão renal portátil pode permitir evitar completamente armazenamento frio renal no futuro. A escassez de órgãos grave e persistente leva a um aumento do uso de órgãos marginais (ECD ou DCD renais enxertos) 7. Atualmente, preservação de órgãos é baseado em armazenamento a frio estático ou máquina de perfusão hipotérmica. Como um tempo de isquemia fria prolongada tem um imp significativaagir sobre o resultado da função renal de critérios padrão 15 e enxertos marginais 8,9, novas técnicas de preservação minimizando armazenamento a frio são de particular interesse 16-19. Um dos principais obstáculos para usar enxertos marginais mais extensivamente é a incapacidade para avaliar a qualidade e a viabilidade de órgãos antes do transplante. Actualmente, somente parâmetros clínicos tais como a idade do dador, doenças relacionadas com doadores, e tempo de isquemia quente dos enxertos são utilizados para a decisão de um órgão é aceite ou recusado para transplante. Ao preservar o enxerto sob condições normotérmicas, a avaliação do enxerto com base nas características de perfusão e de dados é possível. Parâmetros em tempo real, tais como fluxo renal vascular, a pressão, a resistência intra-renal, a produção de urina, consumo de oxigênio e parâmetros de lesão renal (como AST e lactato) é suposto ser parâmetros úteis para avaliar a viabilidade do enxerto. Em additião, o metabolismo activo durante NEVKP permite a aplicação de estratégias para melhorar a reparação de enxertos renais marginais antes do transplante. Por exemplo, a inibição das vias pró-inflamatórias, imunomodulação, de transferência de genes, bem como a administração de células-tronco pode ser futuras técnicas para modificar enxertos renais, durante o tempo de preservação e melhorar resultado destinatário.

Os rins são os órgãos sólidos transplantados com mais freqüência. Para os pacientes que sofrem de doença renal em estágio final, o transplante renal oferece uma melhor expectativa de vida e melhoria da qualidade de vida quando comparado à diálise 1-4. A falta de órgãos persistindo representa um problema grave no campo da medicina de transplantes (Tabela 1) 5. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> Estados Unidos * </td><td> Região Eurotransplant ** </td></tr><tr><td> Os pacientes em lista de espera de transplante de rim </td><td> 101.563 (fevereiro de 2015) </td><td> 10.689 (dezembro de 2014) </td></tr><tr><td> Rins de doadores falecidos transplantado em 2014 </td><td> 10.650 </td><td> 3119 </td></tr><tr><td> A mediana do tempo de espera para transplante de doador de rim falecido (em anos) </td><td> Até 5 anos * </td><td> Até 4 anos ** </td></tr></tbody></table> Tabela 1. rimEscassez de enxerto nos EUA e Eurotransplant Região. O resultado do transplante renal é negativamente afetada pelo tempo de espera, com pior prognóstico para pacientes submetidos a diálise prolongada 6. Isso provocou interesse em enxertos renais marginais como uma fonte adicional de doadores, como rins de doadores mais velhos, doadores com múltiplas comorbidades (Extended critérios doadores (DPI) e rins doados após a morte cardíaca (DCD). Rins de doadores marginais que teriam sido recusou no passado agora são considerados para o transplante 7. Um dos principais obstáculos para a utilização de enxertos de rim marginais, é a técnica de preservação de armazenamento anóxica frio. Actualmente, os enxertos de rim são armazenados estaticamente em gelo ou perfundido a 4 ° C sem oxigénio. A técnica de conservação anóxica fria está associado com a lesão permanente do enxerto durante a preservação renal e não permite a avaliação do enxerto por causa da falta de metabolism e a produção de urina. Em particular, os enxertos de rim marginais tolerar armazenamento a frio mal, resultando em lesão renal significativa, e altos índices de função tardia do enxerto (DGF) 8,9. DGF é um fator prognóstico para a função do enxerto a longo prazo pobre. Extracorpórea perfusão renal é um método alternativo para a preservação, avaliação e reparação de órgãos. Em um modelo suíno, resultados benéficos foram apresentados para os rins perfundidos ex vivo em condições normotérmicas 10,11. O primeiro ensaio clínico realizado em 2013 demonstrou uma menor taxa de função tardia do enxerto quando rins recuperados de critérios estendidos doadores foram perfundidos por 1 hora imediatamente antes do transplante 12. Este artigo apresenta um modelo de normothermic ex vivo de perfusão renal (NEVKP). O objetivo deste estudo é a redução do tempo de isquemia fria aplicado ao mínimo e prorrogar o período de NEVKP. NEVKPé um método de conservação alternativa que tem por objectivo reduzir os danos que podem ser causados ​​por técnicas de armazenamento a frio.

<table><tbody><tr><td>Tecnologia de circulação extracorpórea neonatal</td><td>SORIN GROUP Canada Inc (Markham, Canadá)</td><td>Reservatório</td><td>venoso neonatal personalizado D100 (500 ml, 1/16" de entrada e saída), oxigenador neonatal D100, cabeça de bomba centrífuga (Revolution), filtro de bolhas arterial (D130)</td></tr><tr><td>Máquina de coração-pulmão, St&ouml; ckert S3</td><td>SORIN GROUP Canada Inc (Markham, Canadá)</td>Bomba centrífuga <td>feita sob medida</td><td>, bomba de rolo, painel de controle (sensores de pressão, fluxo, temperatura, bolhas e nível), misturador de oxigênio, unidade de aquecimento</td></tr><tr><td>Tubulação</td><td>SORIN GROUP Canada Inc (Markham, Canadá)</td><td>01906BPC SG XS</td><td>3/16" x 1/16"</td></tr><tr><td></td><td></td><td>019071PC SG XS</td><td>1/4" x 1/16"</td></tr><tr><td></td><td></td><td>019060PC SG XH</td><td>Conectores de tubulação de 3/8" x 1/16"</td></tr> <tr><td></td><td>SORIN GROUP Canada Inc (Markham, Canadá)</td><td></td><td>Vários tamanhos</td></tr><tr><td>Solução STEEN</td><td>XVIVO (G&ouml; teborg, SWE)</td><td>19004</td><td>200 ml</td></tr><tr><td>de lactato de Ringer</td><td>Baxter (Mississauga, ON, CAN)</td><td>JB2324</td><td>175 ml</td></tr><tr><td>de bicarbonato de sódio</td><td>Hospira (Montr&eacute; al, QC, CAN)</td><td>6625050</td> gluconato <td>de cálcio dependente de pH</td></tr><tr><td></td><td>Pharmaceutical Partners of Canada (Richmond Hill, ON)</td><td>C31110</td> Heparina <td>dependente de cálcio</td></tr><tr><td></td><td>Sandoz Canada Inc (Toronto, ON, CAN)</td><td>10750</td><td>1.000 UI</td></tr><tr><td>Aminoácido e glicose, Travasol 10%</td><td>Baxter (Mississauga, ON, CAN)</td><td>JB6760</td><td>1 ml/h</td></tr><tr><td>Insulina de ação rápida, Novorapid</td><td>Novo Nordisk Canada Inc (Mississauga, ON, CAN)</td><td>DS6H748</td><td>5 IE/h</td></tr><tr><td>Verapamil</td><td>Sandoz Canada Inc (Quebec, QC, CAN)</td><td>52216</td><td>0,25 mg/h</td></tr></tbody></table>

normotérmica<em&gt; ex vivo</em&gt; perfusão rim para a preservação do rim os enxertos antes do transplante

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

O transplante renal tornou-se uma opção de tratamento bem estabelecida para pacientes com insuficiência renal em estágio terminal. A persistente escassez de órgãos continua sendo um problema sério. Portanto, os critérios de aceitação para doadores de órgãos foram estendidos, levando ao uso de enxertos renais marginais. Esses órgãos marginais toleram mal o armazenamento refrigerado, resultando em aumento da lesão de preservação e taxas mais altas de função retardada do enxerto. Para superar as limitações do armazenamento a frio, uma extensa pesquisa é focada em métodos alternativos de preservação normotérmica.
A perfusão normotérmica de órgãos ex vivo é uma técnica inovadora de preservação. Os primeiros ensaios experimentais e clínicos para perfusões pulmonares, hepáticas e renais ex vivo demonstraram resultados favoráveis.
Além da redução da lesão isquêmica pelo frio, o método de armazenamento renal normotérmico oferece a oportunidade de avaliação e reparo de órgãos. Este manuscrito fornece informações sobre recuperação renal, técnicas de preservação de órgãos e perfusão renal normotérmica ex vivo isolada (NEVKP) em um modelo suíno. Técnicas cirúrgicas, configuradas para a solução de perfusão e o circuito, opções de avaliação potencial e resultados representativos são demonstrados.

Na sequência dos resultados de seis experimentos utilizando um modelo de recuperação de rim-coração batendo são apresentados. Depois de descarga situ e recuperação do rim, os enxertos foram armazenadas em gelo durante 3 h (SCS), enquanto que os eritrócitos foram preparados. Para a definição clínica, este simula o tempo necessário para a recuperação e a preparação da tabela de volta. NEVKP foi realizada durante 10 h. Para manter as condições fisiológicas e simular uma in vivo circundante, para o rim, a câmara de órgãos devem ser aquecidos e selados. Perfusão e solução de substituição de urina deve representar valores fisiológicos para análise de gás no sangue, pressão oncótica, e osmolaridade. Os valores normais (valores basais) obtidos a partir de porcos Yorkshire in situ, estão localizados em cada descrição da figura, respectivamente (Figuras 3-13). O objectivo da NEVKP é para assegurar que o enxerto é fornecido com oxigénio e de nutrição suficientes. Como isquemia cAusa vasoconstrição, aumentando assim a resistência intra-renal, alcançando um fluxo constante, com uma pressão estável é um bom indicador para a oxigenação adequada. Depois de a temperatura alvo de enxerto de 37 ° C, é alcançado através de reaquecimento do órgão após SCS, os valores de fluxo e resistência intra-renal permanecem estável, com uma pressão constante fisiológico de cerca de 60-80 mm Hg ao longo de toda a perfusão (Figuras 3 e 4). A quantidade de produção de urina depende principalmente da composição da solução de perfusão (Figura 5). Medições horárias de venosa e arterial pO 2 revelam a actividade metabólica do rins. O consumo de oxigênio foi calculada usando a equação ((pO 2 arte - pO 2 ven) x fluxo / peso) (Figura 6) 14. Durante a perfusão o pH, HCO 3, e electrólitos são estáveis ​​sem a necessidade de intervenções (Figuras 7-10). Em tempo real AST e medições de lactato servir para monitorar danos celulares. Não foi detectada nenhuma aumento dos parâmetros de danos nas células durante o período NEVKP (Figuras 11 e 12). A osmolaridade da solução de perfusão é estável (Figura 13). A avaliação histológica revela alterações menores (Figura 14-16). <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig3.jpg" /> Figura 3. fluxo arterial média com desvio padrão (ml / min). Durante a perfusão o fluxo continua numa gama fisiológica. Valores fisiológicos de suíno, medidas in situ: significa art. fluxo: 170 ± 57 ml / min (intervalo 83-325 ml / min). <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig4.jpg" /> Figura 4. resistência intrarrenal (TIR), média e desvio padrão (mmHg / </strong&gt; Ml / min). A pressão arterial média (MAP) permanece constante entre 60 e 80 mmHg. A resistência intra-renal é abaixo de 0,5 mm Hg / ml / min constantemente. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig5.jpg" /> Figura 5. O volume total de urina, média e desvio padrão (ml). O volume total de urina depende principalmente da composição da solução de perfusão. Quanto maior for a pressão oncótica e a osmolaridade, menor a produção de urina. <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig6.jpg" /> Figura 6. consumo de oxigênio, média e desvio padrão (ml / min / g). <img alt="Figura 7" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig7.jpg" /> Figura 7. venosa pH, média e desvio padrão. A rema pHins constante em uma faixa fisiológica sem a administração de bicarbonatos. Suínos valores fisiológicos, medidas in situ: pH 7,46 ± 0,06 (faixa de 7,34-7,63). <img alt="Figura 8" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig8.jpg" /> Figura 8. HCO 3 venosa, média e desvio padrão (mmol / l). O HCO 3 permanece numa gama fisiológica, sem administração de bicarbonatos. Suínos valores fisiológicos, medidos in situ: HCO 3 30,3 ± 2,4 mmol / L (intervalo 21,6-35,8 mmol / L). <img alt="Figura 9" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig9.jpg" /> Figura 9. concentração de sódio venoso, média e desvio padrão (mmol / L). O sódio permanece numa gama fisiológica. Valores fisiológicos de suíno, medidas in situ: 137,1 &amp;# 177; 3,8 mmol / L (gama 118,7-140,9 mmol / L). <img alt="Figura 10" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig10.jpg" /> Figura 10. concentração de potássio venosa, média e desvio padrão (mmol / L). O potássio permanece constante numa gama fisiológica. Suínos valores fisiológicos, medidos in situ: 3,85 ± 0,46 mmol / L (gama 3,5-5,36 mmol / L). <img alt="Figura 11" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig11.jpg" /> Figura 11. venoso aspartato aminotransferase, média e desvio padrão. (AST; U / L) Na ex vivo de perfusão renal normotérmica, AST demonstra um marcador de lesão celular. Valores AST são baixos em toda a perfusão. <img alt="Figura 12" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig12.jpg" /> Figura 12: Lactato<html> , Média e desvio padrão (mmol / L). No ex vivo perfusão renal normotérmica, lactato representa um marcador de lesão celular. Os valores são estáveis ​​durante a perfusão. <img alt="Figura 13" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig13.jpg" /> Figura 13:. Osmolaridade do soro, média e desvio padrão (mOsm / L) Uma osmolaridade constante na solução de perfusão assegura produção baixa, mas constante de urina. Suínos valores fisiológicos, medidos in situ: 282 ± 1,7 mOsm / L (intervalo de 279-283 mOsm / l). <img alt="Figura 14" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig14.jpg" /> Figura 14:. Histologia (H &amp; E) 50X / 200X ampliação da junção corticomedular mostrando vacuolização tubular leve. Não havia sinais de necrose.arget = &quot;_ blank&quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. <img alt="Figura 15" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig15.jpg" /> Figura 15: Histologia (PAS) 50X / 200X ampliação da junção corticomedular mostrando vacuolização tubular leve.. Sem sinais de necrose. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig15large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 16" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig16.jpg" /> 25X / 200X ampliação Histologia (TUNEL coloração): Figura 16.. Muito ocasionalmente núcleos são corados demonstrando taxas muito baixas de apoptose. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig16large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

A escassez de órgãos grave resultou em aumento do uso de enxertos de rim marginais para transplante. Isso provocou interesse em métodos alternativos de armazenamento, uma vez que os enxertos marginais especialmente tolerar armazenamento a frio mal. A técnica de normothermic ex vivo de perfusão renal (NEVKP) representa um método de conservação de enxertos de rim romance antes do transplante.

Normotérmica<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusão rim para a Preservação do rim Os enxertos antes do transplante

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

O objetivo geral deste procedimento é preservar um enxerto renal em condições fisiológicas térmicas normais, ex vivo, antes do transplante. Isso é realizado primeiramente por meio da cânula das veias renais do rim doador. Em seguida, o enxerto é conectado ao circuito e perfundido em condições normotérmicas.No final, parâmetros funcionais de lesão e histologia do rim são monitorados para determinar a adequação do enxerto para transplante. A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos de preservação existentes, como o armazenamento ou a perfusão por máquina hipotérmica, é que a perfusão normotérmica com XVE evita a lesão isquêmica a frio de enxertos de doadores com critérios padrão ou expandidos antes do transplante, não, não, não, não, Não, não. Após dissecar completamente a aorta e a veia cava do doador, passe uma ligadura ao redor da aorta cranial aos ramos renais, seguida pela colocação de duas ligaduras cranial à bifurcação ilíaca.Passe uma ligadura ao redor da veia cava distalmente acima da bifurcação ilíaca e coloque um laço ao redor da artéria renal esquerda. Em seguida, solte o rim direito do tecido aderente e dissecção da veia renal, artéria e ureter. A seguir, abra o diafragma e administre 1000 unidades internacionais de heparina por quilograma de peso do doador no coração.Para coletar o sangue, conecte as linhas das bolsas de CPDA ao cateter da veia jugular esquerda superior. Amarre os ligamentos na artéria renal esquerda, na aorta e na veia cava, e posicione uma cânula aórtica acima da bifurcação ilíaca para lavagem. Lave imediatamente o rim com solução HTK a uma pressão de 100 centímetros de H2O, cortando a veia cava abdominal abaixo da veia renal para garantir uma lavagem ideal.Simultaneamente, prenda a veia cava torácica e colete o sangue através do cateter jugular. Quando o rim tiver sido completamente lavado, retire o enxerto com um segmento da aorta, seccionando a veia renal e deixando o ureter longo. Em seguida, feche a extremidade cranial da aorta com um laço e canule a extremidade inferior com um redutor de um quarto de polegada por três oitavos de polegada.Em seguida, cânule diretamente a veia renal com um redutor de um quarto de polegada por três oitavos de polegada. Intube o ureter com uma sonda de alimentação de oito milímetros French e coloque o rim sobre gelo. Antes de iniciar a perfusão, conecte o circuito de perfusão personalizado ao dispositivo de perfusão renal.Em seguida, posicione a câmara orgânica sobre um suporte e introduza os tubos venoso e arterial através dos orifícios preparados. Após fixar os tubos, conecte o tubo de sucção ao reservatório venoso e posicione a outra extremidade dentro da câmara para coletar a solução de perfusão que vazar. Utilizando grampos para tubos, feche as linhas de saída venosa e arterial e a saída do reservatório venoso.Utilize uma bomba de infusão para substituir a urina produzida pela solução de Ringer lactato. Durante a perfusão, dependendo da quantidade de urina produzida, utilize uma bomba de seringa para administrar a nutrição e a insulina no reservatório venoso e outra para infundir um vasodilatador diretamente na linha arterial nove. Encha o reservatório venoso com a solução de perfusão neste momento também.Em seguida, para preparar o circuito, ligue a máquina de coração e pulmão e ative os painéis de pressão, temperatura, nível e sensores de bolhas. Ative o sistema de gerenciamento de dados para registrar os dados durante toda a perfusão e a unidade de aquecimento, a fim de aquecer a solução de perfusão e a câmara do órgão até 37 graus Celsius.Abra o suprimento de oxigênio e a braçadeira do tubo localizada atrás do reservatório venoso para remover completamente o ar da cabeça da bomba centrífuga. Em seguida, inicie a bomba centrífuga em 1000 rotações por minuto e circule a solução por todo o circuito. Feche o tubo, desviando o filtro arterial, para liberar o ar do filtro arterial.Por fim, zere as linhas de pressão com 125 mililitros de eritrócitos lavados e ative as bombas de seringa e de infusão quando o circuito estiver escorvado. Transfira o rim do gelo para o leito da câmara de órgão e posicione o cateter urinário no coletor de urina. Após garantir que os tubos venoso e arterial estejam livres de ar, conecte os conectores à tubulação.Em seguida, feche o atalho entre as linhas de tubos arterial e venoso e ajuste a pressão arterial para 75 milímetros de mercúrio. Registre continuamente as pressões, fluxo arterial, temperatura e presença de bolhas por meio de um sistema de gerenciamento de dados, observando cuidadosamente os valores durante toda a perfusão. Registre a quantidade de urina produzida e colete amostras de sangue venoso e urina a cada hora para monitorar a função do órgão durante a perfusão; obtenha também amostras de sangue venoso e arterial para análise de gases, aspartato aminotransferase e lactato.No final da perfusão, desconecte o tubo da artéria e da veia renais. Lave o enxerto com HTK frio e armazene o rim sobre gelo em uma bolsa estéril para órgãos até o transplante. O objetivo da perfus inflammatória ex vivo em temperatura normal é garantir que o enxerto receba oxigênio e nutrição suficientes durante a perfusão.De fato, após o enxerto atingir a temperatura-alvo de 37 graus Celsius por meio do reaquecimento do órgão. Após três horas de armazenamento em gelo, os valores de fluxo e a resistência intrarrenal permanecem estáveis com uma pressão fisiológica constante de cerca de 70 milímetros de mercúrio durante toda a perfusão. A quantidade de produção de urina depende principalmente da composição da solução de perfusão.Embora as medições horárias da pressão parcial de oxigênio venoso e arterial confirmem a atividade metabólica do rim durante a perfusão, o pH, o bicarbonato e os eletrólitos também permanecem estáveis e não requerem intervenções. Medições em tempo real de aspartato, aminotransferase e lactato servem para monitorar os danos celulares. Com nenhum aumento desses parâmetros de lesão celular observado durante o período normal de perfusão renal ex vivo em temperatura fisiológica, a osmolaridade da solução de perfusão também permanece estável.Além disso, a histologia demonstra alterações mínimas no tecido, com leve inflamação e taxas muito baixas de apoptose. Uma vez dominada, esta técnica pode ser utilizada como um método alternativo de preservação de órgãos para enxertos renais, oferecendo mais opções para avaliação e reparo do órgão antes do transplante.

normothermic-ex-vivo-kidney-perfusion-for-preservation-kidney-grafts

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Modelagem de Lesão de Preservação em Rim de Doador Suíno: Um Procedimento para Induzir a Disfunção do Enxerto Submetendo o Rim a Isquemia Fria Prolongada

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Ex Situ Normotérmica máquina de perfusão de fígados doados

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