A High Yield e custo-eficiente sistema de expressão de Granzimas Humanos em células de mamíferos

O objetivo geral deste procedimento é produzir altos rendimentos de granzimas glicosiladas fólicos e enzimaticamente ativas em células T 2 93 do rim embrionário humano. Isso é feito expandindo primeiro as células T HEC 2 93 em placas de cultura de tecidos apropriadas. O tamanho normal da preparação após a expansão consiste em 20 a 25 placas de cultura.

O segundo passo é transfectar transitoriamente as células expandidas com um plasmídeo de expressão de granzima usando o método eficiente de fosfato de cálcio. Em seguida, o supernat celular é colhido e as grandes enzimas secretadas são purificadas por cromatografia de afinidade de metal imobilizado. As etapas finais são ativar as grandes enzimas por meio do tratamento com quinase e purificar ainda mais as proteases por cromatografia de troca catiônica.