Name: Preparação fácil e eficiente de glicopolímeros fluorescentes Tri-componente via polimerização controlada pelo JANGADA (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 54 s
Description: Aprenda a síntese de glicopolímeros fluorescentes via polimerização RAFT controlada para pesquisa em glicobiologia. Este método permite obter polímeros com peso molecular definido e baixa dispersão, essenciais para estudos de interações carboidrato-proteína.

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Este trabalho foi apoiado pelos Laboratórios Químicos da Estação Experimental da Universidade de Missouri e pela Associação de Fibrose Cística do Missouri.

1. Síntese de 2-Glycomonomer Lactobionamidoethyl metacrilamida <ol><li> Dissolver 2 g de ácido lactobiónico em 3,0 ml de metanol anidro e lentamente adicionar etanol absoluto em uma gota forma prudente até que a solução apenas se transforma nublado, em seguida, remover os solventes via rotoevaporação. </li><li> Dissolve-se o resíduo, a partir do passo 1.1, em 3,0 ml de metanol anidro e, uma vez mais, adiciona-se lentamente etanol absoluto até pouco turvo, em seguida, evapora-se os solventes por meio de evaporação rotativa. Repetir esta etapa três vezes para se obter lactobiono-1,5-lactona (1,94 g, 98% de rendimento). Este produto tem pureza suficiente para ser utilizado nas reacções seguintes. </li><li> Adicionar 1,0 g de lactobionolactone em 3,0 ml de metanol a N - (2-aminoetil) metacrilamida (AEMA, 0,58 g) e éter monometílico de hidroquinona (MEHQ, 1,0 mg), um inibidor de auto-polimerização, em 2,0 ml de metanol, seguido em 1,0 ml de trietilamina. Agita-se à TA durante 48 h. </li><li> Adicionar 20 ml de H2O desionizada (2 dH </sub&gt; O) ao balão de reacção, em seguida, remover o metanol e trietilamina livre por evaporação até à secura por meio de evaporação rotativa. </li><li> Para remover qualquer ácido lactobiónico remanescente, adicionar 20 ml de dH 2 O, em seguida, passar a solução aquosa através de uma coluna de troca aniónica (forma OH -, em 10 mm x 20 mm) para uma proveta de recepção contendo 1,0 mg de MEHQ. </li><li> Remover trietilamina, produzido no Passo 1.5, por evaporação até à secura por meio de evaporação rotativa. </li><li> Adicionar 20 ml de dH2O e remover AEMA que não reagiu por adição lenta de 1 mg alíquotas de resina de permuta de catiões (forma H +) até que não ninidrina materiais reactivos são detectáveis. Monitorizar a eliminação, tomando aliquotas de 1 mL da solução após cada adição de resina, aplicando-a a uma placa de cromatografia em camada fina, em seguida, pulverizando a placa com um teste da ninidrina de 2% em solução de etanol. Quando nenhuma cor azul profundo é observado o desenvolvimento quando a chapa é aquecida a 90 ° C durante 1 min, o ponto final tenha sido atingido. </li><li&gt; Filtrar a solução através de um funil de vidro de frita, transferir o filtrado para um tubo de ensaio, congelar a amostra a -80 ° C, e, em seguida, liofilizar. </li><li> Remover MEHQ a partir da amostra através da dissolução do material seco por congelação em uma quantidade mínima de metanol (~ 0,5 ml), em seguida, adicionar acetona anidra fria (-20 ° C, 15 ml) para precipitar o produto. Recolhe-se o precipitado por filtração, utilizando um funil de frita de vidro, em seguida, secar-se o precipitado em um exsicador sob vácuo para se obter 2-metacrilamida lactobionamidoethyl (LAEMA) como um pó esbranquiçado (0,94 g, 68% de rendimento). Este produto tem pureza suficiente para ser utilizado nas reacções seguintes. </li></ol> 2. Síntese de monómero de 2-Gluconamidoethyl metacrilamida Nota: A preparação de 2-gluconamidoethyl metacrilamida (GAEMA), que não possui um açúcar pendente, foi adaptado a partir de um método publicado em 15. <ol><li> Adicionar 2,0 g de AEMA dissolvido em 10 ml de metanol a uma solução dede D-gliconolactona (1,6 g) em 30 ml de metanol e, sob agitação, adiciona-se lentamente 1,6 ml de trietilamina. </li><li> Agita-se a reacção à temperatura ambiente durante 24 h. </li><li> Filtra-se o produto precipitado através de um funil de frita de vidro e lavar o precipitado três vezes com 10 ml de cada vez de isopropanol, em seguida, lava-se com 10 ml de acetona seca. Seca-se o produto precipitado em um exsicador sob vácuo. </li></ol> 3. JANGADA glicopoliméricos Síntese <ol><li> Para remover o MEHQ inibidor presente em N comercial - (2-hidroxietil) acrilamida (HEAA), adicionar 1 ml de HEAA para um tubo de microcentrifugação de 2 ml, seguido pela adição de 0,5 g de nanopartículas de óxido de alumínio. Centrifuga-se o tubo a 300 xg durante 30 seg, e usar a camada de topo HEAA na reacção seguinte. </li><li> Adiciona-se cuidadosamente 32,8 mg de LAEMA (70,0 umol), 1,7 mg de AEMA (10,5 umol) e 27,5 uL de HEAA (270 umol), todos dissolvidos em 0,4 ml de dH 2 O, para um tubo de 1 ml de Schlenk bem limpo, assim tendo um Monomer razão molar de 20: 3: 77. </li><li> Numa reacção paralela, a fim de produzir polímeros de controlo que não possuem qualquer açúcar pendente, em vez de utilizar LAEMA na etapa 3.2, 21,4 mg de substituir GAEMA (70,0 umol) na reacção. </li><li> Para o respectivo tubo de Schlenk (isto é, 3,2 ou 3,3), adiciona-se sequencialmente 50 ul de DMF contendo 0,53 mg de (ácido 4-cianopentanóico) -4-dithiobenzoate (1,9 umol, agente RAFT), e 50 ul de DMF contendo 250 mg de 4,4&#39;-azobis- (ácido 4-cianovalérico) (0,9 umol, iniciador). Misture delicadamente com o dedo tocando. </li><li> Congelar os conteúdos contidos no tubo de Schlenk empregando um banho de gelo seco: banho de etanol (75 g de gelo seco em 100 ml de etanol), para aplicar um vácuo dentro de 10-50 mTorr, em seguida, fechar a válvula de Schlenk e permitir que a solução a descongelar lentamente à temperatura ambiente . Repita este ciclo de congelamento-descongelamento evacuar mais duas vezes. Certifique-se de que todos os reagentes são dissolvidos após o último degelo. </li><li> Coloque o tubo de Schlenk em um ba plástico lacradog, evacuar o ar do saco, e, em seguida, feche-o. Transferir o saco que contém o tubo de Schlenk a um banho de água pré-aquecido a 70 ° C e incubar durante 24 horas. </li><li> Transferir cuidadosamente a solução no tubo de Schlenk a um saco de diálise preparada (MWCO = 3,500), e dializar contra dH2O (10 x 2 L) durante 24 horas, mudando o dH2O a cada hora durante as primeiras 8 horas. Após a diálise, a transferência da amostra do tubo de diálise para um tubo de ensaio, congelar a amostra a -80 ° C, e, em seguida, liofilizar-lo. </li></ol> Nota: A estatística resultante poli-metacrilamida / acrilamida (PMA) copolímeros que contêm 4-O pingente -β-D-galactopiranosil-D-gluconamide (lactobionamide) (a partir do Passo 3,2) ou D-gluconamide (do Passo 3.3), respectivamente, são obtida. Por conveniência de discussão, estas duas glicopolímeros são abreviados como PMA-LAEMA e PMA-GAEMA, respectivamente. 4. Pós-modificação de glicopolímeros com fluoróforos </p&gt; <ol><li> Dissolve-se 5,0 mg de glicopoliméricos-LAEMA PMA ou PMA-GAEMA contendo ~ 0,9 mole de grupos funcionais de amina primária em 0,9 ml de solução salina de fosfato tamponada (PBS, fosfato de sódio 0,1 M, NaCl 0,15 M, pH 7,5), respectivamente. </li><li> Adiciona-se lentamente 0,6 mg de éster de succinimidilo de carboxifluoresceína em 100 ul de DMF para as soluções com agitação rápida. Agitar suavemente as reacções durante 16 horas no escuro à temperatura ambiente. </li><li> Enquanto protegido da luz, carregar a amostra para um tubo de diálise preparada (MWCO = 3,500) e dializar contra dH2O (2 L) durante 16 horas, trocando a solução de diálise a cada hora durante as primeiras 8 horas. Após a diálise, a transferência da amostra do tubo de diálise para um tubo de ensaio, congelar a amostra a -80 ° C, e, em seguida, liofilizar-lo. </li></ol> Nota: Após a liofilização, glicopolímeros fluorescentes PMA-LAEMA-fluoresceína e PMA-GAEMA-fluoresceína, respectivamente, são obtidos. 5. Caracterização do Glicopolímeros <ol><li> Determinar o número médio de peso molecular (Mn), o peso médio de peso molecular (M w) e a dispersibilidade (M w / M n) dos glicopolímeros num sistema de HPLC comercial equipado com software de cromatografia de permeação em gel (GPC), um GPC coluna adequada para o peso molecular de interesse, e um detector de índice de refracção, utilizando Tris a 0,1 M / tampão de cloreto de sódio 0,1 M (pH 7) como eluente a um caudal de 0,6 ml / min 14. Use padrões de polietileno glicol como padrões de peso molecular (MW: 200-1,200,000 g / mol). </li><li> Quantificar as concentrações reais de grupos funcionais de aminas primárias dentro dos glicopolímeros 16. Analisar o teor total de hidratos de carbono das glicopolímeros sintetizados de acordo com um método publicado em 17. </li><li> Realizar testes de composição estrutural e pureza do LAEMA glycomonomers, GAEMA e glicopolímeros PMA-LAEMA, PMA-GAEMA em D 2 O por espectroscopia de RMN de 14. </li></ol> 6. Os ensaios de ligação da glicopolímeros sintéticas com Lectin revestido contas de agarose <ol><li> Adicionar 1,5 ml de PBS a 50 ul de suspensão de corticeira lectina (ECL) esferas de agarose -Revestido, centrifugar a 300 xg por 1 min, e remova cuidadosamente e elimine o sobrenadante. Repetir este passo duas vezes, e, em seguida, voltar a suspender as pérolas em 0,5 ml de PBS. </li><li> Adiciona-se 3 ng de PMA-LAEMA-fluoresceína ou PMA-GAEMA-fluoresceína (controlo negativo) em 6 mL de PBS para a suspensão de pérolas, e incuba-se as misturas, no escuro, à temperatura ambiente durante 1 h. </li><li> Lavam-se as misturas com 1,5 ml de PBS três vezes, e os grânulos ressuspender em 0,2 mL de PBS. Coloque uma alíquota (4 ul) em um poço em um slide de microscópio de imunofluorescência (teflon), cubra com uma tampa de deslizamento, e observar por microscopia de fluorescência usando um filtro FITC (comprimento de onda de excitação: 467-498 nm, comprimento de onda de emissão: 513- 566 nm) e uma objectiva de 10X a examinar a ligação de tele fluorescentes glicopolímeros com as esferas 14. </li></ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Um protocolo fácil e eficiente para glicopolímeros fluorescentes baseados em RAFT tri-componente, com e sem um hidrato de carbono pendente, e a sua utilização num teste de ligação a lectina, é demonstrado no presente relatório. O protocolo começa com a preparação de glycomonomers LAEMA e GAEMA. Através de um controlo-RAFT copolimerização de um só passo, com rendimento glicopolímeros reprodutível, composição de monómero previsível e baixa dispersividade, são obtidos. Seguindo pós-modificação de glicopolímeros com éster de succinimidilo de carboxifluoresceína, a ligação do respectivo glicopoliméricos marcado com fluorescência resultante é facilmente verificável para a sua especificidade de ligação a lectina. Nos passos preparativos iniciais dos glycomonomers que são para ser empregues nas sínteses glicopoliméricos subsequentes, foram utilizados ácido lactobiónico prontamente disponível e a gluconolactona. Em teoria, quaisquer hidratos de carbono de interesse a partir de monossacáridos, oligossacáridos complexos para, pode ser Converted para glycomonomers por conjugação do açúcar alvo para o grupo hidroxilo primário em C6 de glucose. Após a oxidação do resíduo de glucose redutores, e a sua desidratação subsequente a uma lactona, o produto pode então ser facilmente feito reagir com a amina primária em AEMA para formar o correspondente glycomonomer. Outros exemplos desta via pode ser visto em um relatório recente 14. Deve notar-se que antes de iniciar qualquer passo de polimerização, de MEHQ, um potente inibidor de polimerização, deve ser removido a partir de todas as preparações de monómeros e glycomonomer imediatamente antes da utilização. Isto é facilmente conseguido através da utilização da quantidade mínima de metanol para dissolver o glycomonomer que possui MEHQ seguida tratá-la imediatamente com acetona à temperatura de -20 ° C para precipitar o produto isento de inibidor, com elevado rendimento. Essencial em qualquer esquema de polimerização radical, atenção aos detalhes e de monômero purezas são enfatizados. Como é típico de um sistema de polimerização RAFT, que consiste deuma fonte de radicais, um reagente RAFT, um monómero e solvente. Nesta apresentação visualizada, um sistema de polimerização TRAF de um só passo é descrito que incide sobre a produção de copolímeros estatísticos gerados a partir de uma mistura de reacção que possua três monómeros diferentes em uma solução aquosa. Duas reacções mediadas por RAFT separadas são apresentados no qual se utiliza um glycomonomer que possui um pendente, não redutor do hidrato de carbono terminal (isto é, β-D-galactose), e o outro, possuindo um poliol, sem resíduo de hidrato de carbono ligado. Comum a ambas as reacções mediadas por RAFT foram monómeros que possuem um grupo hidroxilo singular que serve como uma molécula separadora, e uma outra que possua uma amina livre de pós-modificação com um fluoróforo amino-reactivo. Uma vez que a presença de oxigénio na mistura de reacção e do ambiente é prejudicial para a polimerização TRAF-mediada, a sua remoção para níveis vestigiais é prontamente conseguida através de vários congelamento-evaciclos cuate-descongelação, mantendo o recipiente de reacção de tubo de Schlenk sob alto vácuo. Deve notar-se que a razão molar de diferentes monómeros na reacção pode ser ajustada conforme necessário. Além disso, fazendo variar a quantidade de agente RAFT usado, o comprimento dos polímeros resultantes pode ser controlada 18. No entanto, a proporção molar do agente de TRAF para iniciador deve ser sempre superior a dois para assegurar a baixa dispersibilidade do produto. Sob estas condições, a evolução da copolimerização é constante, e a reprodutibilidade da reacção é muito alta. Dito isto, é pouco provável que se obtém uma distribuição totalmente uniforme de todos os monómeros participantes dentro de um copolímero estatístico, devido às suas velocidades de polimerização diferentes. Caracterizar a distribuição de diferentes monómeros dentro do polímero ainda é muito difícil. O método de pós-modificação, aqui apresentado, é ao mesmo tempo mais simples e mais amenable para a utilização de uma vasta selecção de marcadores fluorescentes, em comparação com outros protocolos aplicados para glicopolímeros etiqueta 2,11. Estes incluem muitos dos fluoróforos reactivos com aminas solúveis em água, quantum dots, biotinas, e outros. As especificidades de ligação dos sintetizados, glicopolímeros marcadas são prontamente verificáveis ​​utilizando lectinas com afinidades de ligação conhecidas. PMA-GAEMA possuir nenhum açúcar pingente é um controle negativo apropriado. Glicopolímeros com diferentes etiquetas fluorescentes preparados por esta via tem sido utilizada com sucesso em investigações de lectina bacteriana mediada por ligação 14. Como apresentado, esta preparação fácil e eficiente de glicopolímeros fluorescentes estatísticos deve fornecer um grande potencial para uma ampla variedade de pesquisa glycobiological.

Nas últimas duas décadas, as investigações com glicopolímeros sintéticos tenham sido submetidos a um desenvolvimento lento, mas contínuo, demonstrando potencial significativo no exame infecciosas mecanismos que incluam actividades de investigação que incide sobre lectina reconhecimento processa 1-3. Desde glicopolímeros sintéticos possuindo porções de açúcar multivalentes exibem eficácias de ligação a lectina muito mais elevadas, em comparação com os hidratos de carbono monovalentes, eles são de grande procura no campo Glycobiology 3. De particular interesse na investigação clínica é a utilização de glicopolímeros fluorescentes para caracterizar a ligação com hidratos de carbono disponíveis na superfície das células do aparelho respiratório humano e glicoproteína mucosa bacteriana mediada por lectinas. No início de estudos in vitro empregues glicopolímeros baseados em poliacrilamida disponíveis comercialmente em testes de ligação bacterianas. Várias dessas sondas mostraram resultados promissores, mas levantou preocupações a respeito, variâncias obtainability, e de lote para lote, tanto polpeso molecular Ymer e conteúdo glycoepitope. Um protocolo econômico em laboratório foi desenvolvido o que proporcionaria para um controle satisfatório de conteúdo estrutura, tamanho e pureza de glicopolímeros sintéticos visando lectinas bacterianas. Em busca de uma abordagem sintética adequada para glicopolímeros, uma técnica relativamente nova de polimerização foi testada usando um tipo de polimerização radical controlada que empregue reversível adição-fragmentação da cadeia de transferência (RAFT) agentes 4. Tais reagentes RAFT foram recentemente utilizados em algumas preparações glicopoliméricos 5-7. Em comparação com outros protocolos de preparação glicopoliméricos, polimerizações mediada por RAFT demonstrar várias vantagens, incluindo a tolerância a uma variedade de estruturas de monómeros e as condições de reacção, a compatibilidade potencial com soluções aquosas, e baixa dispersividade de tamanhos dos produtos poliméricos desejados 8,9. De notável interesse são protocolos para a preparação de JANGADA-baglicopolímeros tri-componente sed, permitindo o controlo de composições de monómeros diferentes, cada um dos quais podem ter funções distintas 10-13. No entanto, a maioria dos esforços de pesquisas anteriores ou faltava anomï¿½icos carboidratos pingente 10, ou empregada entrou polimerização, resultando em copolímeros tri-bloco, que consistem em homopolimeros covalente, que muitas vezes servem a propósitos diferentes do que os polímeros estatísticos que são copolímeros em que a sequência de monômero resíduos de seguir uma regra estatística 9-13. Recentemente, empregando o composto RAFT thiocarbonylthio (ácido 4-cianopentanóico) -4-dithiobenzoate num ambiente aquoso, a preparação de um grupo de TRAF baseado no glicopolímeros estatísticos tri-componente lineares contendo pendentes açúcares específicos e a sua aplicação em ligação bacteriana mediada por lectina testes foi relatado 14. O objetivo geral deste método, apresentadas de forma visual, é preparar tri-componenteglicopolímeros fluorescentes estatísticos por copolimerização controlado-jangada. Devido à facilidade de o protocolo de polimerização de uma etapa, o controlo fino sobre o comprimento de polímeros e composições, e a elevada reprodutibilidade da reacção, este protocolo pode ser facilmente aplicado para outras sínteses à base de conjunto de glicopolímeros com estruturas desejadas.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagente</td></tr><tr><td>Ácido lactobiônico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>153516</td><td></td></tr><tr><td>D-Gluconolactona&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G2164</td><td></td></tr><tr><td>N-(2-hidroxietil) acrilamida (HEAA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>697931</td><td></td></tr><tr><td>Orange II sal de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O8126</td><td></td></tr><tr><td>Éter monometílico de hidroquinona (MEHQ)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>54050</td><td>Inibidor de polimerização</td></tr><tr><td>N-(2-aminoetil) cloridrato de metacrilamida (AEMA)</td><td>Polysciences, Inc</td><td>24833-5</td><td></td></tr><tr><td>Trietilamina</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP-616</td><td></td></tr><tr><td>Resina de troca aniônica IRN-78 forma de hidróxido, 80 mesh</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10343-U</td><td></td></tr><tr><td>Resina de troca catiônica 50Wx8, 200 mesh</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>217514</td><td></td></tr><tr><td>Óxido de alumínio, ~150 mesh&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1522</td><td>Tipo WN-6, Neutro, Grau de Atividade Super I</td></tr><tr><td>Ninidrina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4876</td><td>Uma solução de etanol de ninidrina a 0,2% foi usada no teste</td></tr><tr><td>Ácido 4-Ciano-4- (fenilcarbonotiotiltio) pentanóico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>722995</td><td>agente RAFT</td></tr><tr><td>4,4&prime;-Azobis (ácido 4-cianovalérico)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11588</td><td>Iniciador de polimerização</td></tr><tr><td>Carboxifluoresceína éster succinimidílico&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>C1157</td><td></td></tr><tr><td>Erythrina Cristagalli lectina revestida com grânulo de agarose</td><td>Vector Laboratories</td><td>AL-1143&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Solvente</td></tr><tr><td>dH2O</td><td></td><td></td><td>Produzido pelo sistema de purificação de água Barnstead, 18 megOhm-cm</td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A461-4</td><td>grau ACS ou melhor</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A454-4</td><td>grau ACS ou melhor</td></tr><tr><td>Etanol absoluto</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-100</td><td>ACS grau ou melhor</td></tr><tr><td>Dimetilformamida</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22705</td><td>grau ACS ou melhor</td></tr><tr><td>Acetona</td><td>Fisher Scientific</td><td>A929-4</td><td>grau ACS ou melhor</td></tr><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr><tr><td>Membrana de diálise (MWCO: 3.500)</td><td>Spectrum Labs</td><td>132720</td><td></td></tr><tr><td>Padrão analítico de polietilenoglicol padrão</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Tubo Schlenk O2393</td><td></td></tr><tr><td>, 1 ml</td><td>Quark Glass</td><td></td><td>Personalizado</td></tr><tr><td>TSK-GEL G4000 PWxl&nbsp;</td><td>Tosoh Biociência&nbsp;</td><td>8022</td><td>Usado para análise GPC dos glicopolímeros</td></tr><tr><td>Empower 3 com pacote GPC/SEC</td><td>Sistema HPLC Waters Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Waters Alliance</td><td>Waters Corporation</td><td></td><td>Equipado com detector de índice de refração (Waters 2414) e detector de fluorescência (Waters 2475)</td></tr><tr><td>Avance III 800 MHz NMR Espectrômetro</td><td>Bruker Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BX43 microscópio de fluorescência</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td>Usado com filtro FITC no teste de ligação de glicopolímero</td></tr><tr><td>Rotavap / Rotoevaporador</td><td>Heidolph</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fritted funil de disco</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-310-109</td><td></td></tr><tr><td>Liofilizador</td><td>Labconco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lâmina de microscópio de imunofluorescência</td><td>Polysciences</td><td>18357-1</td><td></td></tr><tr><td>Revco Ultima Plus -80&nbsp; &#176; C Freezer</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Saco de Vácuo de Plástico e Bomba de Mão</td><td>Ziploc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bomba de Vácuo, Acionamento Direto, Maxima C Plus</td> Medidor de Vácuo <td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sargent-Welch</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

preparação fácil e eficiente de glicopolímeros fluorescentes tri-componente via polimerização controlada pelo jangada

Facile and Efficient Preparation of Tri-component Fluorescent Glycopolymers via RAFT-controlled Polymerization

Glicopolímeros sintéticos são ferramentas instrumentais e versáteis utilizados em vários campos de pesquisa bioquímicos e biomédicos. Um exemplo de uma síntese fácil e eficiente de glicopolímeros estatísticos fluorescentes bem controlados usando reversível adição-fragmentação de transferência de cadeia (RAFT) polimerização baseados é demonstrada. A síntese inicia-se com a preparação de 2-metacrilamida glycomonomer lactobionamidoethyl contendo β-galactose obtido por reacção de lactobionolactone e N - (2-aminoetil) metacrilamida (AEMA). 2-Gluconamidoethyl metacrilamida (GAEMA) é usado como um análogo estrutural falta um β-galactósido terminal. A seguinte reacção de copolimerização mediada por RAFT envolve três monómeros diferentes: N - (2-hidroxietil) acrilamida como espaçador, AEMA como alvo para posterior marcação por fluorescência, e os glycomonomers. Tolerante de sistemas aquosos, o agente RAFT usado na reacção é (ácido 4-cianopentanóico) -4-dithiobenzoate.Low dispersities (≤1.32), composições de copolímeros previsíveis e alta reprodutibilidade das polimerizações foram observadas entre os produtos. Polímeros fluorescentes são obtidas através da modificação das glicopolímeros carboxifluoresceína com éster de succinimidilo alvejando os grupos funcionais de amina primária em AEMA. Especificidades de ligação de lectina das glicopolímeros resultantes são verificados por meio de testes com esferas de agarose correspondentes revestidos com glycoepitope reconhecendo lectinas específicas. Devido à facilidade de síntese, o apertado controlo das composições e produtos da boa reprodutibilidade da reacção, este protocolo pode ser traduzido no sentido preparação de outros glicopolímeros à base de balsa com estruturas e composições específicos, se o desejar.

Síntese de glycomonomer Ácido lactobiónico foi aqui utilizado como um exemplo para a preparação de glycomonomers. Usando métodos no relatório inicial sobre a síntese de LAEMA 11, foram observadas produções variadas na preparação com pureza insatisfatórias. O método de purificação modificadas utilizando resinas catiónica e de permuta aniónica para remover o material de partida que não reagiu, o rendimento do produto oferecido estável e de elevada pureza, que é confirmada por 1 H e 13 C espectroscopia de RMN (Figura 1). JANGADA síntese glicopoliméricos e pós-modificação de glicopolímeros com fluoróforos Em contraste com o bloco-glicopolímeros preparados através de polimerizações RAFT escalonados, este protocolo de copolimerização de um passo proporciona uma distribuição glycomonomer uniforme ao longo da estrutura do polímero. Os glicopolímeros mostrados aqui conter 20% em mol de glycomonomer, 77 mol% de HEAA como um espaçador, e 3% molar de AEMA como alvo para modificações pós-(ver Figura 2). 1 H- e 13 C-rmn confirmou as estruturas de PMA-LAEMA e PMA-GAEMA (Figuras 3 e 4). Como mostrado na Figura 5, quando representada graficamente contra os perfis de eluição de GPC do glicopoliméricos sintetizado sem RAFT, tanto PMA-LAEMA e PMA-GAEMA têm baixos dispersities, provando a eficácia da abordagem jangada. Como esperado, PMA-GAEMA tem um Mn menor do que a de PMA-LAEMA devido à falta de um açúcar pingente de PMA-GAEMA. Análise de hidratos de carbono e os grupos funcionais de amina primária conteúdo das glicopolímeros RAFT revelou que a proporção de monómeros na glicopolímeros produto é consistente com a relação estequiométrica dos monómeros de arranque utilizados na reacção de polimerização mediada por TRAF (Tabela 1). Isso significa um controlo apertado do compositio monômerons nos glicopolímeros sintetizados, como projetado. A reacção de grupos funcionais de amina primária com fluoróforos activadas é uma técnica amplamente utilizada na marcação de proteínas. Esta técnica foi empregada aqui para rotular glicopolímeros purificados com carboxifluoresceï¿½a. Na sequência de pós-modificação, polímeros fluorescentes foram obtidos (Figura 6). Nenhuma degradação dos polímeros marcados com fluoresceína da reacção foi detectado por análise de GPC (dados não mostrados). Encadernação testes dos glicopolímeros sintéticos com pérolas de agarose revestidas com lectina Para avaliar a especificidade de ligação a lectina das glicopolímeros sintetizados, foi utilizada pérolas de agarose revestidas com lectina-hidrato de carbono conhecida especificidade de ligação crista-galli lectina. Erythrina (ECL), empregadas nas experiências, tem uma especificidade de ligação para com β-D-galactósido. A Figura 7A mostra claramente que PMA-LAEMA-Fluorescein, que contém β-D-galactósido como um hidrato de carbono pendente, exibiram forte ligação com a lectina de ECL. Em contraste, a ligação para a ECL do glicopoliméricos PMA-GAEMA-fluoresceina, que não possuem um açúcar pingente negativo, é mostrado na Figura 7B. Este resultado exemplifica a eficácia de ligação e afinidade do glicopoliméricos fluorescente sintetizada. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig1.jpg" /> Figura 1. Atribuído 1 H- (a) e 13 C-NMR (b) os espectros (D 2 O) para LAEMA. (Esta figura foi modificado de Wang et al 14.) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig1large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> &lt;p class = &quot;jove_content&quot; fo: manter-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig2.jpg" /> Figura 2. Ilustração esquemática da síntese de glicopoliméricos fluorescente PMA-LAEMA contendo β-galactoside como o açúcar pingente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig2large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig3.jpg" /> Figura 3. afectadas 1 H- (A) e 13 C-RMN (B) os espectros (D 2 O) para PMA-LAEMA glicopoliméricos. (Esta figura foi modificado a partir de 14 de Wang et al.) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig3large.jpg" target="_blank">Fundamento</a>se, clique aqui para ver uma versão maior desta figura. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig4.jpg" /> Figura 4. Assigned 1 H- (A) e 13 C-NMR (B) espectros (D 2 O) para PMA-GAEMA. (Esta figura foi modificado de Wang et al 14.) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig4large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig5.jpg" /> Figura 5. Gel vestígios de cromatografia de permeação de base-RAFT PMA-GAEMA e PMA-LAEMA preparados com e sem a utilização de agente de TRAF. Em contraste com o PMA-LAEMA preparada sem agente RAFT (azul), RAFT-<html> baseada PMA-LAEMA (verde) tem uma dispersividade muito inferior (M w / M n). Baseado no JANGADA PMA-GAEMA (vermelho) e PMA-LAEMA têm perfis semelhantes GPC, mas o primeiro tem um menor M n, devido à ausência de quaisquer açúcares pingente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig4large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig6.jpg" /> Figura 6. PMA-LAEMA antes e depois pós-modificação com fluoróforo. (A) Em comparação com glicopoliméricos não marcado branco (tubo de esquerda), marcado com fluoresceína PMA-LAEMA mostra uma cor amarela forte (tubo direita). (B) De acordo com UV, não marcado PMA-LAEMA (tubo esquerda, 1 mg / ml em PBS) é escuro e apresenta-se com ausência de fluorescência, enquanto que a fluoresceína marcado com PMA-LAEMA (tubo direito, a 1 mg / ml em PBS) mostra forte fluorescência verde.: &quot;Target =&quot; _ blank //www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig4large.jpg &quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. <img alt="Figura 7" src="/files/ftp_upload/52922/52922fig7.jpg" /> Figura 7. corticeira lectina (ECL) esferas de agarose -Revestido ligar β-D-galactósido contendo glicopolímeros, e não os que não possuem um açúcar pendente. (A) PMA-LAEMA-fluoresceína (3 ug) demonstraram forte ligação com ECL , enquanto que em (B) PMA-GAEMA-fluoresceina, que possui nenhum resíduo pendentes β-D-galactósido, não mostraram nenhuma ligação com as esferas revestidas com lectina. Barra de escala = 100 pm. Tabela 1. Valores alvo um dos parâmetros sintéticos e composições reais dos glicopolímeros. A) Segmentação valores, valores quesão desejadas dos produtos; b) DP, grau de polimerização; c) NA, não disponível. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52922/52922fig4large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody style="vertical-align:middle;text-align:center"><tr><td style="width:120px"></td><td style="width:40px"> DP b </td><td style="width:70px"> Dispersity </td><td style="width:120px"> Conteúdo real do glycomonomers mol% </td><td> Conteúdo real da amina primária mol% </td></tr><tr><td> Segmentação valores </td><td> 100 </td><td> &lt;1,3 </td><td> 20 </td><td> 3 </td></tr><tr><td> PMA-LAEMA </td><td> 99 </td><td> 1.26 </td><td> 19 </td><td> 3.2 </td></tr><tr><td> PMA-GAEMA </td><td> 89 </td><td> 1.32 </td><td> NA c </td><td> 2.7 </td></tr></tbody></table>

Uma síntese eficiente de três etapas de glicopolímeros fluorescentes à base de RAFT, consistindo em preparação de glicomonômeros, copolimerização e pós-modificação, é demonstrada. Este protocolo pode ser usado para preparar glicopolímeros estatísticos baseados em RAFT com estruturas desejadas.

Preparação fácil e eficiente de glicopolímeros fluorescentes Tri-componente via polimerização controlada pelo JANGADA

Synthetic glycopolymers are instrumental and versatile tools used in various biochemical and biomedical research fields. An example of a facile and ...

O objetivo geral deste procedimento é a síntese bem controlada de polímeros glicossilares lineares estatísticos fluorescentes utilizando a polimerização por transferência de fragmentação com adição reversível, ou polimerização por raft. Isso é realizado primeiramente pela síntese do monômero glicossilado dois lacto bio etil metacrilamida, ou L-A-E-M-A. O segundo passo consiste em utilizar a polimerização por raft de L-A-E-M-A-N duas etil metacrilamidas amino, ou A EMA, e N duas acrilamidas hidroxietílicas ou a GAA para sintetizar o polímero glicossilado correspondente com baixa dispersidade.Em seguida, o glicopolímero é modificado em uma de suas aminas primárias por reação com o éster intermediário do ácido carboxifluoresceína, produzindo um glicopolímero marcado com fluoresceína. O passo final consiste em ligar o glicopolímero marcado com fluoresceína a microesferas revestidas com lectina, com especificidade conhecida de ligação a carboidratos. Por fim, utiliza-se microscopia de fluorescência para analisar a ligação dos glicopolímeros às microesferas, confirmando que o glicopolímero possui o carboidrato de interesse e está marcado com uma etiqueta fluorescente.A vantagem da polimerização RAF em relação aos métodos existentes que empregam polimerizações livres convencionais é que o processo wrath é uma técnica de polimerização controlada que minimiza o número de cadeias derivadas do iniciador. Isso resulta em polímeros com massas moleculares predeterminadas e uma dispersão muito estreita. As polimerizações podem ser aplicadas a uma mistura definida de monômeros para a preparação de glicopolímeros fluorescentes específicos.Esses glicopolímeros possuem capacidades de ligação definidas que podem ser verificadas pelo uso de microesferas revestidas com lectina. A preparação eficiente de glicopolímeros fluorescentes deverá revelar-se de grande valor para a pesquisa em glicobiologia no futuro. Para começar, dissolva dois gramas de ácido lactobiónico em três mililitros de metanol anidro.Em seguida, adicione etanol absoluto gota a gota à solução lentamente até que ela fique levemente turva. Utilize um evaporador rotativo para remover todos os solventes. Repita este processo três vezes para produzir 1,94 gramas de lacto bioo um cinco lactona com rendimento de 98%.Adicione uma solução de um grama de lacto bio lactona em três mililitros de metanol a uma solução de A EMA e MEHQ em dois mililitros de metanol. Em seguida, adicione um mililitro de trietilamina e agite a mistura à temperatura ambiente. Após 48 horas, adicione 20 mililitros de água desionizada à mistura e transfira-a para um evaporador rotativo.Evapore até completa secagem. Dissolva o resíduo em 20 mililitros de água deionizada e aplique a solução sobre a parte superior de uma coluna de troca aniônica de 10 por 20 milímetros. Posicione um béquer contendo um miligrama de MEHQ sob a saída e elua a coluna para dentro do béquer.Após evaporar a solução em evaporador rotativo, dissolva o resíduo em 20 mililitros de água desionizada e adicione alíquotas de um miligrama de resina de troca iônica. Prossiga até que o teste de hidrante seja negativo, realizado em testes de hidrante removendo-se um microlitro da solução e aplicando-o em uma placa de cromatografia em camada delgada. Pulverize a placa com uma solução de 2% de anidrina em etanol e aqueça a 90 graus Celsius por um minuto em uma placa aquecedora.O ponto final é atingido quando nenhuma cor azul se forma. Em seguida, filtre a solução através de um funil de vidro sinterizado em um tubo de ensaio. Congele a solução a menos 80 graus Celsius e, depois, transfira-a para um liofilizador para ser liofilizada.Dissolva o resíduo em uma quantidade mínima de metanol e precipite o produto adicionando acetona anidra a menos 20 graus Celsius. Colete o L-A-E-M-A precipitado por filtração através de um funil de vidro sinterizado. Transfira o funil e o precipitado para um dessecador a vácuo para secagem, adicionando inicialmente 0,5 gramas de nanopartículas de óxido de alumínio de aproximadamente 150 mesh a um mililitro de HEAA de grau comercial em um tubo de ensaio de dois mililitros.Centrifugue o tubo a 300 vezes G durante 30 segundos e utilize a camada superior como HEAA livre de inibidor. Dissolva cuidadosamente 32,8 miligramas de L-A-E-M-A, 1,7 miligramas de a EMA e 27,5 microlitros de HEAA livre de inibidor e 0,4 mililitros de água desionizada e transfira a solução para um tubo cônico bem limpo de um mililitro. Em seguida, adicione 50 microlitros do reagente raft e 50 microlitros do reagente iniciador ao tubo e misture batendo suavemente na lateral do tubo com a válvula fechada. Conecte o tubo a uma linha de vácuo e congele o conteúdo utilizando um banho de etanol com gelo seco.Em seguida, reduza a pressão do tubo até atingir aproximadamente 50 militorr com uma bomba e feche a válvula. Remova o banho de gelo seco e deixe o conteúdo descongelar. Repita cuidadosamente o ciclo de congelamento, vácuo e descongelamento mais duas vezes.Inspecione o tubo para garantir que o conteúdo esteja completamente dissolvido e vortexe suavemente, se necessário. Antes de selar, remova o tubo fechado da linha de vácuo e coloque-o em um saco plástico transparente para vácuo. Remova o ar do saco com uma bomba de plástico manual.Em seguida, coloque o saco em um banho-maria coberto a 70 graus Celsius por 24 horas. Depois, retire o tubo do saco e transfira o seu conteúdo para um saco de diálise com corte de peso molecular de 3.500 Daltons. Coloque o saco de diálise em um béquer e realize a diálise contra dois litros de água deionizada por 24 horas.Transfira o conteúdo do saco de diálise para um tubo de ensaio e coloque-o em um congelador a 80 graus Celsius negativos. Após congelamento, transfira para um liofilizador e liofilize. Para obter o glicopolímero branco esbranquiçado PMA LA EMA, primeiro prepare uma solução de cinco miligramas de PMA LA EMA em 0,9 mililitros de PBS.Em seguida, adicione lentamente 0,6 miligramas de carboxi-fluoresceína cin, éter médio em 100 microlitros de dimetilformamida à solução rapidamente agitada no tubo de microcentrífuga e com folha de alumínio, e agite lentamente por 16 horas à temperatura ambiente. Transfira a solução para uma bolsa de diálise com limite de peso molecular de 3.500 Daltons. Coloque a bolsa em um béquer e realize a diálise contra dois litros de água deionizada por 16 horas, mantendo-a protegida da luz. Transfira o conteúdo da bolsa de diálise para um tubo de ensaio.Após congelar a solução a menos 80 graus Celsius, liofilize. Para obter o polímero glicosilado P-M-A-L-A-E-M-A marcado com fluoresceína amarela esponjosa, determine o peso molecular médio numérico, o peso molecular médio ponderal e a dispersidade dos polímeros glicosilados com um sistema de HPLC. Primeiro, adicione 1,5 mililitros de PBS a uma suspensão de 50 microlitros de microesferas revestidas com lectina de Erythrina cristagalli em um tubo de centrífuga.Em seguida, centrifugue o tubo a 300 vezes G durante um minuto. Depois, descarte o sobrenadante e repita a lavagem mais duas vezes antes de, finalmente, adicionar 0,5 mililitros de PBS. Adicione uma solução de três microgramas de PMA LA EMA marcada com fluoresceína em seis microlitros de PBS ao tubo contendo as microesferas revestidas com lectina.Utilize P-M-A-G-A-E-M-A marcado com fluoresceína como controle negativo. Em seguida, enrole os tubos com papel alumínio e incube-os à temperatura ambiente por uma hora. Centrifugue o tubo por um minuto e descarte o sobrenadante.Em seguida, re-suspenda as microesferas em 1,5 mililitros de PBS fresco e repita a lavagem três vezes. Por fim, re-suspenda as microesferas em 0,2 mililitros de PBS. Transfira quatro microlitros das microesferas suspensas para um poço de uma lâmina para microscopia de imunofluorescência, cubra com uma lamínula de vidro e registre.Imagens do lâmina utilizando um microscópio fluorescente equipado com filtro FITC de objetiva 10x e câmera. Os glicopolímeros foram analisados por cromatografia de permeação em gel. Os polímeros sintetizados sem o uso de raft apresentam dispersidade muito maior do que aqueles produzidos com o uso de raft.Quando marcado com fluoresceína, a aparência física do glicopolímero muda de branca para uma cor amarela intensa, visível sob luz ultravioleta. Uma solução de polímero não marcado permanece escura, enquanto o polímero marcado com fluoresceína emite uma luz verde brilhante, confirmando a presença da marcação. A ligação específica aos microesferas revestidas com lectina ocorre apenas com polímeros que possuem resíduos açucarados pendentes; as microesferas brilham em verde ao se ligarem, enquanto permanecem escuras quando tratadas com polímeros que não possuem resíduos açucarados pendentes. Essa técnica de polimerização baseada em "raft" permite grande flexibilidade no tipo de glicopolímeros que podem ser sintetizados.A marcação subsequente dos glicopolímeros também pode ser realizada com uma grande variedade de reagentes fluorescentes, capazes de reagir com aminas primárias em ambiente aquoso. Pesquisadores na área de glicobiologia podem utilizar esta técnica para obter prontamente glicopolímeros altamente versáteis e definidos. Esses glicopolímeros podem ser usados como ferramentas para explorar as especificidades de ligação a carboidratos, como as observadas na via respiratória de pacientes com fibrose cística ou aquelas envolvidas em muitos tipos de cânceres humanos.

facile-efficient-preparation-tri-component-fluorescent-glycopolymers

Research

JoVE Journal

Chemistry

Química

Aqui descrevemos uma estratégia única para a criação de biocompatíveis, matrizes em camadas com interfaces contínuas entre camadas distintas para engenharia de tecidos. Tal um andaime poderia proporcionar um ambiente ideal para modular o comportamento personalizável célula por vários estímulos químicos, biológicos ou...

Gradiente de densidade de várias camadas de polimerização (DGMP): uma nova técnica para a criação de multi-compartimento, Andaimes customizáveis ​​para Engenharia de Tecidos

O nosso laboratório desenvolveu hidrogéis de poliacrilamida reticulada-ADN, um sistema dinâmico de hidrogel, para compreender melhor os efeitos da modulação da rigidez do tecido sobre a função das células. Aqui, nós fornecemos esquemas, descrições e protocolos para preparar estes hidrogéis.

Preparação de ADN de poliacrilamida reticulada-hidrogéis

Apresentamos um protocolo para formar rapidamente vesículas poliméricas gigantes (pGVs). Resumidamente, as soluções poliméricas são desidratadas em filmes secos de agarose aderidos a lamínulas. A reidratação dos filmes poliméricos resulta na rápida formação de pGVs. Este método avança muito na preparação de vesículas gigantes sintéticas para aplicações diretas em estudos biomiméticos.

Formando polymersomes de tamanho gigante usando hidratação Gel-assistida

Este artigo descreve um processo de produção de nanopartículas poliméricas automontadas usando polimerização por dispersão mediada por luz visível. O uso de luz visível de baixa energia para controlar a polimerização permite a formação reprodutível de micelas semelhantes a vermes automontadas com alto teor de sólidos.

Síntese Facile de micelas Worm-like por luz visível Mediated Dispersão Polimerização Usando Photoredox Catalisador

Não agitada polimerização precipitação fornece uma abordagem de prototipagem rápida, reprodutível para a síntese de estímulos-Sensitive poli (N -isopropylacrylamide) microgéis de distribuição de tamanhos estreita. Nesta síntese protocolo, luz caracterização dispersão e rastreamento de partículas de fluorescência única dessas microgï¿½s em uma configuração de microscopia de campo amplo são demonstrados.

Síntese controlada e Fluorescência de rastreamento de Poly altamente uniforme (<em&gt; N</em&gt; -isopropylacrylamide) microgéis

Apresentamos um protocolo para a síntese de hidrogéis funcionalizados com RGD como dispositivos para liberação de células e fármacos. O procedimento envolve cicloadição de alcino-azida catalisada por cobre (CuAAC) entre ácido poliacrílico modificado com alcino (PAA) e um derivado RGD-azida. Os hidrogéis são formados por policondensação assistida por micro-ondas e suas propriedades físico-químicas são investigadas.

A Síntese de hidrogéis RGD-funcionalizado como uma ferramenta para aplicações terapêuticas

Os protocolos são descritos para a fabricação de hidrogel degradáveis thermoresponsive baseado no hidrazona cross-linking de oligômeros polímeros na escala a granel, microescala e escala nanométrica, último para preparação do gel de nanopartículas e nanofibras.

Fabricando degradáveis hidrogel de Thermoresponsive em várias escalas de comprimento através da extrusão reativa, microfluídica, auto-montagem e eletrofiação

Um protocolo para a síntese e caracterização de movimento difusivo de polímeros cíclicos no único nível molécula é apresentado.

Síntese de polímeros cíclicos e Caracterização do seu movimento difusivo no estado fundido na molécula de nível único

Aqui, apresentamos um protocolo para preparar e visualizar estruturas secundárias (por exemplo, fibras, arquiteturas toroidal, e nano-esferas) derivados de policarbodiimidas helicoidais. A morfologia caracterizado por, tanto a microscopia de força atómica (AFM) e microscopia electrónica de varrimento (SEM) foi demonstrado que depende da estrutura molecular, concentração, e o solvente de escolha.

Morfologias de auto-montagem Obtidos a partir helicoidais policarbodiimida copolímeros e seus derivados triazólicos

Hastes de microgel com grupos reativos complementares são produzidas via microfluídica com a capacidade de se interligar em solução aquosa. Os microgéis anisométricos encravam e se interligam em construções estáveis com poros maiores em comparação com sistemas baseados em esféricos. Microgéis modificados com GRGDS-PC formam construções 3D macroporosas que podem ser usadas para cultura celular.

Andaimes 3D macroporosos interligados de hastes de microgel

Aprenda a síntese de glicopolímeros fluorescentes via polimerização RAFT controlada para pesquisa em glicobiologia. Este método permite obter polímeros com peso molecular definido e baixa dispersão, essenciais para estudos de interações carboidrato-proteína.

Preparação fácil e eficiente de glicopolímeros fluorescentes Tri-componente via polimerização controlada pelo JANGADA

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