Protocolos para Robust Teste de resistência a herbicidas em diferentes espécies de plantas daninhas

O objetivo geral deste procedimento é testar e confirmar a resistência a herbicidas em uma ampla gama de espécies de ervas daninhas e herbicidas, bem como inferir os níveis de resistência a herbicidas. Isso é feito primeiro quebrando a dormência das sementes coletadas de plantas que sobreviveram a um tratamento com herbicida para obter germinação simultânea e emergência de plântulas. É necessário um período de vernalização das sementes de alguns dias a mais de uma semana.

O segundo passo é despejar um meio helicoidal com nitrato de potássio em pratos de plástico. As sementes de Vern são então colocadas no sem-fim solidificado e os pratos são transferidos para um armário de germinação com as condições ideais para cada espécie de erva daninha. Em seguida, 15 a 20 mudas são transplantadas para bandejas plásticas preenchidas com uma mistura de envasamento padrão.

Um código de barras é atribuído a cada bandeja, incluindo todas as informações para sua identificação única, e as bandejas são colocadas em uma estufa aquecida até que as mudas atinjam o estágio de duas a três folhas. A etapa final é o tratamento com herbicida utilizando pulverizador de bancada de precisão, todos os herbicidas são aplicados como formulações comerciais com surfactantes recomendados em duas doses de dose de campo recomendadas, e três vezes que três a quatro semanas após o tratamento, a avaliação final é feita. Um leitor de código de barras é usado para registrar o número de plantas sobreviventes e a biomassa visual estimada por unidade experimental.

Os dados são então baixados em um computador e analisados para determinar o status de resistência ao herbicida. A principal vantagem deste método em relação aos testes de triagem diagnóstica in vivo ou in vitro está relacionada à sua robustez e flexibilidade. Em outras palavras, o método é confiável e pode ser facilmente adaptado a uma ampla gama de espécies por meio de pequenas adaptações.

Este método ajuda a responder a questões-chave relacionadas ao estudo e manejo de populações de ervas daninhas resistentes a herbicidas em campos de CRO, como o padrão e o nível de resistência. Também permite que outras etapas experimentais, como esses experimentos de resposta, sejam planejadas adequadamente. Geralmente, os pesquisadores novos em testes de resistência a herbicidas terão dificuldades devido às muitas etapas e aspectos que precisam ser considerados e adaptados às condições experimentais específicas.

Comece coletando uma amostra de semente de uma espécie de cada vez e atribuindo um código exclusivo. Limpe as sementes removendo o joio e transportando as sementes. Preencha um formulário para cada amostra indicando o código exclusivo atribuído.

Nome da espécie, data de coleta, coordenadas GPS, município, nome do agricultor, tamanho do campo, nível de infestação, herbicidas da cultura utilizados durante a estação e registros históricos do campo. Armazene as sementes em sacos de papel não lacrados rotulados com o código exclusivo atribuído. Deixe a umidade evaporar, mas não exponha as sementes a altas temperaturas ou flutuações extremas de temperatura.

Para evitar a indução de dormência secundária. Armazene as sementes limpas a quatro graus Celsius em uma sala escura para permitir a vernalização. Coloque um pouco de água deionizada em pratos de plástico.

Corte dois discos e uma tira de papel de filtro, que através do capilar formará uma ponte entre a água e os dois discos. Mergulhe o papel de filtro em água e coloque-os nos pratos de plástico. Em seguida, coloque as sementes secas ao ar no papel.

Transfira os pratos de plástico a quatro graus Celsius pelo período de tempo necessário, dependendo da espécie. Em seguida, prepare uma solução de trado a 0,6% contendo 0,1% de nitrato de potássio usando água deionizada, dissolva o trado em um forno de micro-ondas e despeje a solução do sem-fim em pratos de plástico. Assim que o substrato esfriar, coloque as sementes de Vern a serem germinadas na broca solidificada.

Coloque os pratos de plástico em um gabinete de germinação durante a vernalização, bem como as condições de luz e temperatura variam dependendo da espécie de erva daninha. O transplante em vez da costura direta permite obter um estande uniforme de plantas no mesmo estágio de crescimento, o que é uma pré-condição importante para otimizar o desempenho do tratamento com herbicida Transplante 15 a 20 mudas em bandejas plásticas preenchidas com uma mistura de envasamento padrão de 60% de argila siltosa, solo, 15% de areia, 15% de perlita agrícola, e 10% de turfa. Identifique cada bandeja com um código de barras, incluindo todas as informações para o herbicida de código populacional de identificação exclusiva que está sendo testado, número de réplica e número de bandeja progressiva.

Coloque as bandejas em uma estufa aquecida e regue as plantas conforme necessário para manter o substrato na capacidade de campo ou próximo a ela. A temperatura de crescimento varia dependendo da espécie de erva daninha para herbicidas pós-emergência. As plantas de pulverização, quando atingem o estágio de duas a três folhas, preparam a solução de surfactante a granel de acordo com as instruções do rótulo, a concentração final é geralmente expressa como uma porcentagem do volume final ou o volume deve ser distribuído por unidade de área?

Calcular a quantidade de produto comercial a dissolver na solução de tensioactivo. Usando esta equação, a dose do herbicida é calculada multiplicando a dose de campo recomendada pela dose máxima testada e o volume final da solução dividido pelo volume fornecido pelo pulverizador de bancada. Prepare a solução herbicida mais concentrada Primeiro, dilua a solução herbicida três vezes para preparar a solução menos concentrada.

Este procedimento reduz a chance de cometer erros ao pesar ou pipetar os herbicidas. Solução herbicida. A concentração é expressa em volume a distribuir por unidade de área.

Inicie a sequência de tratamento com uma dose menor de herbicida. Desta forma, não há necessidade de lavar o gabinete de pulverização entre dois tratamentos com o mesmo herbicida. Distribuir a solução herbicida usando um pulverizador de bancada de precisão, entregando 300 litros por hectare a uma pressão de 215 quilo pascals e uma velocidade de 0,75 metros por segundo com uma barra equipada com três bicos hidráulicos em leque plano.

Lave o armário de pulverização duas vezes quando o herbicida for trocado, usando alvejante a 1% e depois enxágue. Faça a avaliação três ou quatro semanas após o tratamento, dependendo do registro dos herbicidas testados, do número de plantas que sobrevivem ao tratamento, bem como da biomassa visual estimada ou VEB usando um leitor de código de barras, que identifica automaticamente cada bandeja. As plantas são avaliadas como mortas se não apresentarem crescimento ativo, independentemente da cor ou outra aparência.

O VEB é obtido através de uma comparação visual da biomassa vegetal entre tratada e não tratada da mesma população. Uma pontuação variando de 10 para plantas não afetadas pelo herbicida a zero quando as plantas estão claramente mortas é dada a cada bandeja tratada. Avaliar a eficácia geral do tratamento incluindo uma população suscetível em todos os experimentos, como uma população coletada em um local que nunca ou raramente foi tratado com herbicidas.

Expresse a sobrevivência das plantas em porcentagem do número de plantas tratadas contadas imediatamente antes do tratamento com herbicida e calcule o erro padrão. O valor de perme atribui populações a quatro categorias com base nos resultados obtidos de tratamentos com duas doses de herbicidas suscetíveis quando menos de 5% das plantas sobrevivem à dose de herbicida. Um x levemente resistente quando os sobreviventes variaram de 5% a 20% na dose do herbicida.

Um x resistente quando mais de 20% das plantas sobrevivem à dose do herbicida. Um x e altamente resistente quando os sobreviventes são mais de 20% na dose de herbicida um x e mais de 10% na dose de herbicida. Três x resultados representativos de um tratamento com herbicida com panolam em quatro populações de iopa são mostrados.

A testemunha suscetível foi completamente controlada, enquanto a população 1410 foi categorizada como ligeiramente resistente porque menos de 20% das plantas sobreviveram. A população 1411 foi controlada na dose três x, mas a sobrevivência das plantas na dose um x resultou superior a 20% e, portanto, foi atribuída ao nosso status. Finalmente, a população 1412 não foi controlada com a dose de campo recomendada uma x ou três vezes mais, por isso foi atribuída à categoria altamente resistente.

Um segundo exemplo de estimativa visual de biomassa em plantas pop ou rehas tratadas com trien Ron metil é mostrado aqui. Uma pontuação de 10 é atribuída ao controle não tratado, enquanto as bandejas com plantas completamente controladas têm um VEB de zero. Uma pontuação intermediária de cinco é atribuída às bandejas.

Ter uma biomassa vegetal total, que é metade das bandejas de plantas não tratadas com plantas com uma biomassa comparável ao controle não tratado, onde as plantas não foram afetadas por tratamentos com herbicidas e, portanto, resultaram como altamente resistentes, têm um VEB de 10. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar que a qualidade das sementes de ervas daninhas, que deveriam ter sido coletadas quando maduras e depois restauradas, tem um forte impacto no sucesso dos experimentos após este procedimento. Outros métodos, como os de resposta byas, podem ser realizados para responder com precisão a perguntas adicionais relacionadas ao nível de resistência.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como abordar os testes de resistência a herbicidas e como adaptar diferentes etapas a diferentes espécies de ervas daninhas. Em particular, a frenagem CY da semente e a germinação da semente. Não se esqueça de que trabalhar com herbicidas ou ácidos concentrados pode ser extremamente perigoso, precauções como o uso de máscaras, luvas e outros equipamentos de proteção individual devem sempre ser tomados durante a realização deste procedimento.