Cardiac Pressão-Volume Análise loop usando Conductance Cateteres em Ratos

O objetivo geral deste procedimento é avaliar as medidas dependentes e independentes da carga da função ventricular, sistólica e diastólica. Isso é realizado primeiro pela colocação de um cateter de condutância no ventrículo esquerdo de um coração de camundongo. Na segunda etapa, a aorta é contraída para alterar a pós-carga, seguida da alteração da pré-carga através da constrição da veia inferior cva.

Na etapa final, o cateter de condutância é cuidadosamente calibrado para avaliar com precisão as alterações no volume da câmara cardíaca. Em última análise, a análise do volume da pressão cardíaca é usada para obter as medidas dependentes e independentes da carga da função cardíaca. As implicações dessa técnica se estendem para a terapia da disfunção cardíaca, pois permite uma avaliação rigorosa da função cardíaca e o potencial de mascaramento de fenótipos funcionais perdidos por testes não invasivos.

Demonstrando este procedimento estará o Dr. Lan Mao, um neurocirurgião de camundongos de nosso laboratório 30 minutos antes de colocar um cateter de condutância na câmara do ventrículo esquerdo. Mergulhe a ponta do cateter em solução salina morna enquanto a ponta está de molho. Raspe o pescoço e o peito de um camundongo adulto anestesiado e coloque o animal em uma almofada aquecida.

Depois de aplicar pomada nos olhos do animal, faça uma incisão na linha média do pescoço e disseque os músculos traqueais para expor a traqueia. Em seguida, coloque um tubo endotraqueal pela boca, visualizando a traqueia para o posicionamento correto do tubo, e conecte o tubo ao respirador. Defina as configurações do ventilador com base no peso do animal, conforme indicado.

Em seguida, para colocar o cateter por uma abordagem carotídea, faça uma incisão sobre a carótida direita da mandíbula ao esterno e disseque o tecido circundante para expor a carótida direita. Em seguida, corte o nervo vago que corre adjacente à carótida e prenda uma sutura de seda de seis oh ao redor da extremidade distal da artéria carótida. Coloque duas suturas adicionais abaixo da artéria carótida proximal à primeira sutura, amarrando frouxamente a sutura do meio.

Em seguida, puxe suavemente a sutura proximal e use uma pinça para prender a sutura à pele. Quando a artéria carótida foi pinçada, tanto proximal quanto distalmente fazem uma pequena incisão na artéria carótida direita proximal à primeira sutura e estendendo-se longitudinalmente em direção ao tórax. Agora insira a ponta do cateter de condutância embebida em solução salina no vaso através da incisão usando a sutura do meio para prender o cateter.

Em seguida, avance suavemente o cateter para o ventrículo esquerdo através da carótida. Observando o rastreamento do loop de volume de pressão para garantir um posicionamento correto, o posicionamento ideal do cateter produzirá loops de volume de pressão que parecem retangulares por cinco a 10 minutos após o registro de colocação Loops de volume de pressão basal até que um estado estacionário seja alcançado para colocar o cateter por uma abordagem apical. Faça a incisão inicial do processo xifóide através da parede torácica lateralmente até que o diafragma fique visível.

Corte o diafragma para visualizar o ápice do coração e use uma agulha de calibre 25 a 30 para fazer uma facada no ápice do ventrículo esquerdo. Em seguida, insira o cateter de condutância através da ferida por facada até que o eletrodo proximal esteja dentro do ventrículo. E registre os loops de volume de pressão basal como acabamos de demonstrar para variar a pós-carga com a oclusão aórtica transitória.

Comece fazendo uma pequena incisão horizontal na parte superior do tórax e disseque o tecido circundante para expor a aorta transversa. Coloque uma ligadura de seda 6.0 embaixo da aorta transversa. Então, quando os loops de volume de pressão retornarem à linha de base, coloque ambas as extremidades da ligadura em um pequeno segmento de classe de tubo PE 50 em ambas as extremidades da sutura com uma pinça de agulha e levante suave e lentamente a sutura por um período de um a dois segundos, seguido por uma liberação lenta da tensão no vaso.

Os registros ideais devem ter pelo menos cinco ciclos de loop de volume de pressão e exibir um aumento constante nas pressões sistólicas finais durante a aplicação da tensão na sutura. Variar a pré-carga com a oclusão transitória do AVC da veia inferior. Faça uma incisão vertical abaixo do processo xifóide e abaixo do diafragma para expor a veia inferior cva.

Coloque uma ligadura de seda de seis oh embaixo da veia inferior cva. Então, depois que os loops de volume de pressão retornarem à linha de base, aperte ambas as extremidades da sutura com uma pinça de agulha e levante a sutura suave e lentamente por um período de um a dois segundos, seguido por uma liberação lenta da tensão no vaso. Os registros ideais devem ter pelo menos cinco ciclos de loop de volume de pressão e exibir uma queda constante nas pressões ventricular esquerda e diastólica durante a aplicação da tensão na sutura para realizar uma calibração salina.

Na conclusão do estudo, injetar um bolus de 10 microlitros de solução salina hipertônica no animal através da veia jugular para obter um valor de condutância paralelo. Um aparente aumento no volume será observado sem alteração na pressão como resultado da mudança na condutância do pool sanguíneo. Para realizar uma calibração veterinária, aqueça um veterinário com poços de diâmetro conhecido a 37 graus Celsius e preencha os três primeiros orifícios com heparinizado fresco e quente.

O sangue de camundongos submetidos a avaliações hemodinâmicas encaixa um adaptador de plástico fornecido pelo fabricante ao veterinário. Isso manterá o cateter de condutância estacionário durante a calibração. Em seguida, insira o cateter de condutância no primeiro poço até que todos os eletrodos estejam submersos.

Finalmente, registre a condutância no canal de volume para testar se o ligante TR RV 1 2 0 0 2 3 da angiotensina com viés de beta-arrestina dois receptores TR RV 1 2 0 0 2 3 afeta a função cardíaca. A análise de alça de volume de pressão in vivo foi realizada em camundongos do tipo selvagem que receberam bloqueadores convencionais ou novos dos receptores da angiotensina. De fato, neste experimento, a infusão intravenosa de TR RV 1 2 0 0 2 3 aumentou significativamente a contratilidade cardíaca em comparação com os tratamentos convencionais e controle.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar a análise do loop de pressão volumétrica usando a constrição da veia cava aórtica e inferior para obter medidas dependentes e independentes da função cardíaca.