Name: Cardiac Pressão-Volume Análise loop usando Conductance Cateteres em Ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Aprenda a realizar análise de pressão-volume cardíaca em camundongos usando cateteres de condutância. Este método avalia função ventricular sistólica e diastólica, medidas dependentes e independentes de carga, auxiliando na pesquisa de disfunção cardíaca.

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Este trabalho é apoiado pela American Heart Association 14FTF20370058 (DMA) e NIH T32 HL007101-35 (DMA).

1. Preparações Conductance cateter e calibração de pressão <ol><li> Conectar cateter de condutância para o módulo de cateter hemodinâmica. Eletronicamente calibrar as medições de pressão e volume gravando pressão predefinida eo volume ajustado no módulo cateter. Grave um traçado de 0 mm Hg e 25 mm Hg (Figura 1A) e atribuir as voltagens para ambos os traçados de pressão (Figura 1B e 1C). Da mesma forma, gravar um rastreamento volume de 5 RVU e 25 RVU (Figura 1D) e atribuir as voltagens para ambos os traçados unidades (1E e 1F). </li><li> Confirme a calibração de pressão eletrônico com uma calibração de pressão manual, utilizando uma coluna de mercúrio. Montar a porta esfigmomanômetro manguito com uma torneira de 3 vias. Preencha um sistema de válvula hemostática de 3 portas, muitas vezes utilizados para angioplastia coronária, com água RT usando a porta lateral. <ol><li> Colocar a ponta de um cateter de condutância na válvula de hemostase cheia de fluido e garantir suavemente without torcer cateter. Ligue a válvula hemostática para o esfigmomanômetro e inflar a 200 mmHg e bloquear torneira de 3 vias. Examinar se a pressão medida corresponde com a pressão insuflado na esfigmomanômetro. </li></ol></li><li> Local cateter em soro fisiológico aquecido a 37 ° C, que é ao nível do campo operatório e pressão medida. Ajuste o controle de pressão até que as pressões registradas está em zero. </li></ol> 2. Anestesia / intubação <ol><li> Administrar cetamina / xilazina (80-100 / 10 mg kg -1) como uma injecção intraperitoneal. Nota: Os agentes anestésicos alternativos podem ser usados. Uma extensa lista de anestésicos são fornecidos em comentários anteriores desta técnica 11,12. Anestesiados apropriada pode ser confirmada por aperto suave da cauda. </li><li> Uma vez anestesiados, fazer a barba do pescoço e peito com máquinas de cortar cabelo e coloque em uma almofada aquecida. Manter a temperatura rectal do rato em 36,5-37,5 ºC. Baixas temperaturas corporaisirá resultar em taxas de coração deprimidos. Aplicar pomada para os olhos para prevenir a secura </li><li> Adicione uma incisão na linha média do pescoço e dissecar os músculos traqueais para expor a traqueia. Coloque um tubo endotraqueal através da boca, enquanto visualiza a traquéia para garantir a intubação, e conectar-se ao respirador. </li><li> Manter rato no ventilador durante o procedimento. Defina as configurações do ventilador com base no peso do animal, como descrito anteriormente 11. Volume corrente (ml) = 6,2 x (peso animal em quilogramas) 1.01 e freqüência respiratória = 53,5 x (peso animal em quilogramas) -0.26. </li></ol> 3. A colocação de cateter condutância na câmara LV <ol><li> Abordagem carótida <ol><li> Para garantir a esterilidade, dois conjuntos de instrumentos cirúrgicos estéreis são um utilizado- para incisão cutânea inicial e um para operar no toracotomia. Os instrumentos devem ser descontaminados utilizando um esterilizador seca entre os animais durante uma sessão de um indivíduo cirúrgicoND autoclavados no final de cada dia do procedimento. </li><li> Depois que a pele foi descontaminado com três ciclos de uma clorexidina + álcool esfoliação da pele (solução de álcool / 70% de clorexidina a 0,5%), fazer uma incisão através da carótida direita da mandíbula ao esterno. Dissecar tecido circundante para expor a carótida direita e cortar o nervo vago, que corre ao lado da carótida. </li><li> Coloque uma estéril sutura de seda 6-0 em torno da extremidade distal (afastado do peito) da artéria carótida, gravata e seguro. Coloque dois pontos adicionais sob o proximal da artéria carótida (mais perto do peito) para o primeiro de sutura, vagamente amarrar a sutura meio. Com cuidado, puxe o fio de sutura proximal e garantir apertando-o para a pele. Certifique-se que a artéria carótida foi preso tanto proximal e distal antes de prosseguir. </li><li> Fazer uma pequena incisão na artéria carótida R., proximal em relação ao primeiro fio de sutura, e estendem-se longitudinalmente para o peito. </li><li> Insira a ponta do cateter condutância,previamente embebidas em solução salina quente durante 30 min, para dentro do recipiente através da incisão e fixar o cateter utilizando o meio de sutura. </li><li> Gentilmente avançar o cateter no ventrículo esquerdo através da carótida, enquanto assistia a pressão-volume circuito de rastreamento para assegurar a colocação correta. Nota: a colocação óptima do cateter deve produzir laçadas de pressão e volume que aparecem rectangular (Ver Figura 2). Se alguma resistência à passagem do cateter é encontrado, puxe de volta e avançar novamente com uma leve pressão. Uma rotação suave do cateter pode ajudar no posicionamento para o ventrículo esquerdo. Forçar o cateter condutância pode levar a complicações cardiovasculares ou danos graves para o cateter. </li><li> Ficha de linha de base de pressão-volume circula ~ 10 minutos após a colocação do cateter e alcançar um estado estável (Figura 2). </li></ol></li><li> Abordagem apical <ol><li> Em um rato anestesiado e ventilado, fazer uma incisão from o processo xifóide e corte através da parede torácica lateralmente até que o diafragma é visível. </li><li> Cortar embora o diafragma e visualizar o vértice do coração. </li><li> Inserção do cateter de condutância para o vértice do ventrículo esquerdo através de uma ferida facada agulha (utilizando uma agulha de 25-30 G), até que o eléctrodo proximal é apenas dentro do ventrículo. </li><li> Ficha de linha de base de pressão-volume loops de ~ 10 min após a colocação do cateter e alcançar um estado de equilíbrio. </li></ol></li></ol> 4. Varying pós-carga Usando Transient aórtica Oclusão <ol><li> Para realizar a oclusão da aorta transitória, fazer uma pequena incisão horizontal na parte superior do tórax e dissecar tecido circundante para expor a aorta transversa. </li><li> Coloque uma ligadura de seda 6-0 sob a aorta transversal. Depois de loops de pressão-volume voltaram à linha de base, apertar ambas as extremidades da sutura com a fixação da agulha, suave e lentamente levantar a sutura mais de 1-2 segundos e solte lentamente a tensão. </li&gt; <li> Repetir este procedimento até três gravações separadas óptimas são feitas a partir do mesmo animal. Nota: gravações Optimal deve ter pelo menos 5 ciclos de loop de volume pressão e um aumento constante das pressões sistólica finais durante a aplicação da tensão na sutura (Figura 3A e 3C). </li></ol> 5. Variando Preload Usando Transient Veia Cava Inferior Oclusão (IVC) <ol><li> Para realizar a oclusão da veia cava inferior transitória, fazer uma incisão horizontal abaixo do processo xifóide, sob o diafragma para expor o IVC. </li><li> Coloque uma ligadura de seda 6-0 debaixo do IVC. Depois de loops de pressão-volume voltaram à linha de base, apertar ambas as extremidades da sutura com a fixação da agulha; devagar e com cuidado levantar a sutura sobre 1-2 segundos e solte lentamente a tensão. Oclusão VCI também pode ser realizada pela aplicação de pressão suave usando um cotonete de algodão com ponta. </li><li> Repita este procedimento até três gravações separadas são ideais made do mesmo animal. Nota: gravações Optimal deve ter pelo menos 5 ciclos de loop de volume pressão e uma diminuição constante do diastólica final do ventrículo esquerdo durante a aplicação da tensão na sutura (Figura 4A e 4B). </li></ol> 6. Calibração Saline <ol><li> Na conclusão do estudo, uma (V P) valor de condutância paralela pode ser obter através da injecção de um bolus de 10 ul de solução salina hipertónica (15%) no animal, através da veia jugular (Figura 5A e 5B). Nota: O bólus vai causar um aumento no volume aparente, sem qualquer alteração na pressão. Esta alteração resulta em volume é o resultado de uma alteração na condutância arterial piscina e não devido a um aumento no volume real. Uma diminuição transitória na dP / dt max pode ser observada, como uma solução salina hipertónica tem um efeito inotrópico negativo 13. O calculada V p pode ser inserido em volume de pressão software de análise de ciclo ao longocom os parâmetros de calibração para cuvete e converter de RVUs em microlitros. </li></ol> 7. Calibração Cuvette <ol><li> Para realizar uma calibração cuvete, coloque uma cuvete com poços de diâmetros conhecidos fornecidos pelo fabricante numa almofada de aquecimento ou de um banho de água aquecido a 37 ° C. Preencha os primeiros 4-5 furos com sangue heparinizado fresco quente de ratos submetidos a avaliação hemodinâmica. Nota: A calibração tina permite a avaliação precisa da piscina de sangue do ventrículo esquerdo usando o sangue do mouse e permite a conversão de dados de volume de RVUs para microlitros. </li><li> Inserção do cateter de condutância para o primeiro poço, até que todos os eléctrodos estão submersos. Suavemente mover o cateter dentro do poço, o que irá gerar RVUs variando. </li><li> Grave as alterações de condutância do canal de volume, em RVUs. Seleccionar o maior RVU para a calibração. Nota: O volume dos poços pode ser calculado por 1) usando a equação para o volume de um cilindro, em que o raio é que o poço de cuvete e o comprimento é baseada no comprimento entre os dois eléctrodos de detecção internas ou 2) verificar nas instruções do fabricante. A condutância de saída pode ser correlacionada com os volumes conhecidos para desenvolver uma equação de calibração que converte os dados de RVUs em 11 microlitros. </li></ol> 8. A eutanásia <ol><li> Na conclusão do protocolo, os ratos são sacrificados usando deslocamento cervical sob anestesia. </li><li> A fim de garantir a morte, os ratinhos que têm sido submetidos a deslocação cervical deve ser submetido a um método secundário de eutanásia. Nós usamos sangria sob anestesia, com a colheita de tecido cardíaco para a experimentação, ou toracotomia bilateral sob anestesia. </li></ol> 9. Análise de Dados usando Volume Pressão laço Analysis Software <ol><li> Calcule V p de Calibração Saline <ol><li> Selecionar pressão e volume laços obtido durante a ejecção de uma solução salina hipertónica (Figura 5A e 5B) </li><li> Exportação dos ciclos para o volume de pressão de software de análise. Escolha a opção para a calibração Saline (Figura 5C) </li><li> Grave o valor V p calculado (Figura 5D). Nota: O valor de p V é calculado por meio da identificação do cruzamento do volume 1) Fim-diastólica vs. volume sistólico final da calibração salina e 2) linha de volume volume = End-End-sistólica diastólica. O cruzamento destas linhas fornece a V P, o qual é calculado o volume por pressão do software de análise de ciclo. </li></ol></li><li> Digite condutância ao volume (RVU) em relação opções de canais de volume (Figura 1F) </li><li> Linha de Base relação ciclo pressão-volume Meça <ol><li> Selecione 8-10 ciclos cardíacos de canais de pressão e volume uma vez atingido o estado estacionário (Figura 2A) ea exportação para a análise suaveware. Identificar 5-6 laços expiratória final (Figura 2B) </li><li> Use o valor p V para corrigir a condutância paralela. Escolha a opção &quot;estado estacionário&quot; e gerar uma tabela de resumo hemodinâmico (Figura 2C) </li></ol></li><li> Medida Relação ciclo pressão-volume durante a constrição aórtica <ol><li> Selecione 8-10 ciclos cardíacos de canais de pressão e volume que correspondem a constrição aórtica antes do aumento de diastólica final (Figura 3A) e exportação de software de análise. Identificar 5-6 laços expiratória final (Figura 3C) </li><li> Selecione análise &quot;Contractilidade&quot; (Figura 3B), que irá calcular o volume Pressão Relação sistólico final (ESPVR) </li></ol></li><li> Medida Relação ciclo pressão-volume durante IVC constrição <ol><li> Selecione 8-10 ciclos cardíacos de canais de pressão e volume que correspondem a IVC constrição (Figure 4A) e exportação de software de análise. Identificar 5-6 laços expiratória final (Figura 4B) </li><li> Selecione análise &quot;Contractilidade&quot; (Figura 3B), que irá calcular Preload recrutável Trabalho Curso (PRSW) (Figura 4C), máxima dP / dt vs EDV (Figura 4D), bem como a ESPVR e relação do volume a pressão diastólica final (Figura 4E) </li></ol></li></ol>

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Os autores não têm nada a revelar.

Nós descrevemos um método para perfoming análise do lacete pressão-volume usando um cateter de condutância em camundongos, para derivar análises abrangentes, tanto a contratilidade cardíaca e relaxamento. Suga, Sagawa e seus colegas utilizaram pressão-volume loops para definir medidas de contratilidade cardíaca, especificamente a inclinação da ESPVR, ou a elastância sistólica final (es E), e E max. Elastância, definida pela relação de pressão para o volume (P / V), varia ao longo da duração da síst...

Análise de ciclo de volume pressão cardíaca fornece informações detalhadas da função cardíaca e são o padrão ouro para avaliação funcional 1. Embora as técnicas de imagem, como a ecocardiografia ou a ressonância magnética cardíaca fornecer medidas funcionais, estas medidas são altamente dependentes de condições de carga. Medidas independentes de Carga, de contratilidade cardíaca e relaxamento requerem medições dinâmicas da pressão ventricular e relação do volume em um intervalo de pré-carga e pós-carga. Esta compreensão da relação pressão-volume decorre do trabalho inovador de Sagawa e colegas 2,3. Eles demonstraram em ex vivo corações caninos perfundidos que o loop de pressão-volume derivados medidas de contratilidade foram independentes de condições de carga 4. Na aplicação in vivo destas análises tornou-se possível, com o desenvolvimento de cateteres de condutância na década de 1980. Este avanço técnico permitiu Kass e colegas para realizar a análise de ciclo de pressão-volume em humanos 5,6. Miniaturização dos cateteres de condutância e melhorias nas técnicas cirúrgicas no final de 1990 de 7 feita a análise da função cardíaca roedor viável, permitindo estudos genéticos e farmacológicos para ser realizado. Este avanço, desde então, levar ao uso generalizado de análise de ciclo de pressão-volume e tem gerado uma grande quantidade de conhecimento sobre fisiologia cardíaca mamíferos. Um conceito fundamental na utilização de cateteres de condutância e a interpretação dos dados obtidos a partir dele, é a relação entre o volume e a condutância. A condutância é inversamente relacionada com a tensão, que é medida através de um cateter com eléctrodos colocados proximal, geralmente colocada por baixo da válvula aórtica, e distalmente, no apex LV 8. Alterações na tensão ou condutância são medidos por mudanças na corrente que flui de proximal para distal do eletrodo. Embora a piscina de sangue contribuems significativamente a condutância, a contribuição da parede ventricular, denominado condutância paralela (V P), a condutância medido deve ser subtraído para se obter medições do volume do VE absolutos. Os métodos para efectuar esta correcção, chamado de calibração solução salina, são discutidos no protocolo abaixo. A relação matemática entre a condutância e de volume, descrito por Baan e colegas, é que o volume = 1 / α; (ρ L 2) (GG p), onde fator de correção α = campo uniforme, ρ = resistividade sangue, L = distância entre os eletrodos, G = condutância e G p = condutância não-sangue 9. De nota, o fator de correção de campo uniforme em camundongos aproxima de 1,0 devido a pequenos volumes de câmara 10. Juntamente com transdutores de pressão, o cateter condutância fornece dados de pressão e volume simultânea em tempo real. Pressu cardíacare-análise do volume apresenta determinadas vantagens sobre outras medidas da função cardíaca, já que permitem a medição da função ventricular independente das condições de carga e de frequência cardíaca. Índices cardíacos independente de carregamento específicos de contratilidade incluem: sistólico final do volume de relação de pressão (ESPVR), d P / d t max relação volume de -end-diastólica, elastância máxima (E máx) e pré-carga de trabalho do curso recrutável (PRSW). Uma medida independente de carga da função diastólica é a relação do volume a pressão diastólica final (EDPVR) 11. O protocolo a seguir descreve o comportamento de análise de ciclo de volume pressão cardíaca, usando tanto um carótida e uma abordagem apical. Embora a metodologia para executar estes estudos foram descritas em pormenor anteriormente 8,11, iremos analisar os passos chave para obter medições de pressão-volume preciso, incluindo tanto a correcção de solução salina e de calibração cuvete, e fornecer uma demonstração visual de Tsprocedimentos e. Pesquisas com animais realizados para este estudo foi tratado de acordo com os protocolos aprovados e os regulamentos de protecção dos animais do Comité de Conservação e Uso do Duke University Medical Center animal Institucional.

<table><tbody><tr><td>AnaSed (xilazina)&nbsp;</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>NADA no. 139-236</td><td>Anestésico</td></tr><tr><td>Ketaset (cetamina)</td><td>Pfizer</td><td>440842</td><td>Anestésico</td></tr><tr><td>VIP3000</td><td>Matrx Medical Inc.</td><td></td><td>Máquina de anestesia</td></tr><tr><td>Ventilador</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Modelo 683</td><td>Equipamento cirúrgico</td></tr><tr><td>Kit de tubulação</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-1049</td><td>Equipamento cirúrgico</td></tr><tr><td>Homeotérmico Cobertor&nbsp;</td><td>Kaz Inc.</td><td>5628</td><td>Equipamento cirúrgico</td></tr><tr><td>Microscópio estéreo</td><td>Carl Zeiss Optical Inc.</td><td>Stemi 2000</td><td>Equipamento Cirúrgico</td></tr><tr><td>Iluminador</td><td>Cole&ndash; Parmer</td><td>41720</td><td>Equipamento Cirúrgico</td></tr><tr><td>Dumont no. 55 Fórceps Dumostar&nbsp;</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>11295-51</td><td>Instrumentos Cirúrgicos</td></tr><tr><td>Graefe fórceps, curvado&nbsp;</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>11052-10</td><td>Instrumentos Cirúrgicos</td></tr><tr><td>Pinça Moria MC31&nbsp;</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>11370-31</td><td>Instrumentos</td></tr><tr><td>Cirúrgicos Mayo tesouras&nbsp;</td>Instrumentos <td>Cirúrgicos</td> <td>Fine Science Tools Inc</td><td>14512-15</td></tr><tr><td>Tesouras de íris&nbsp;</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>14041-10</td><td>Instrumentos Cirúrgicos</td></tr><tr><td>Halsey porta-agulhas&nbsp;</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>12501-13</td><td>Instrumentos Cirúrgicos</td></tr><tr><td>Olsen&ndash; Porta-agulhas Hegar&nbsp;</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>12002-12</td><td>Instrumentos Cirúrgicos</td></tr><tr><td>Tesoura de mola</td><td>Fine Science Tools Inc</td><td>15610-08</td><td>Instrumentos</td></tr><tr><td>Cirúrgicos underpads descartáveis</td><td>Kendall/Tyco Healthcare</td><td>1038</td><td>Suprimentos Cirúrgicos</td></tr><tr><td>Esponjas de gaze estéreis, estéreis&nbsp;</td><td>Suprimentos Cirúrgicos</td> <td>Dukal</td><td>62208</td></tr><tr><td>Aplicadores com ponta de algodão, estéreis&nbsp;</td><td>Solon</td><td>368</td><td>Suprimentos Cirúrgicos</td></tr><tr><td>Sutura cirúrgica,&nbsp; seda, 6-0&nbsp;</td><td>DemeTECH</td><td>FT-639-1</td><td>Suprimentos Cirúrgicos</td></tr><tr><td>1 cc Seringas de insulina&nbsp;</td><td>Becton Dickenson</td><td>329412</td><td>Suprimentos Cirúrgicos</td></tr><tr><td>Access 9 Válvula de Hemostasia</td><td>Merit Medical&nbsp;</td><td>MAP111</td><td>Equipamento hemodinâmico</td></tr><tr><td>Esfigmomanômetro</td><td>Bamanômetro</td><td>320</td><td>Equipamento hemodinâmico</td></tr><tr><td>Sistema Millar PV MPVS-300/400 ou MPVS Ultra (inclui cubeta de calibração)</td> <td>ADInstruments Inc</td><td></td><td>Equipamento hemodinâmico</td></tr><tr><td>1.4F cateter de condutância&nbsp;</td><td>ADInstruments Inc</td><td>SPR-839</td><td>Equipamento hemodinâmico</td></tr><tr><td>PowerLab 4/30 com Chart Pro</td><td>ADInstruments Inc.</td><td>ML866/P</td><td>Tosquiadeira para animais de software hemodinâmico</td></tr><tr><td></td><td>Wahl</td><td>8787-450A</td><td></td></tr><tr><td>Tubos intradérmicos diversos PE-10 Tubos intradérmicos</td><td>diversos 427401</td><td></td><td>Becton Dickenson</td></tr><tr><td></td><td>427411</td><td></td><td>Diversos</td></tr><tr><td>Variedade de agulhas (calibre 18, 25 e 30; Thomas Scientific)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Diversos 0,9% (peso / vol) injeção de cloreto de sódio, USP)</td> <td>Hospira</td><td>NDC no. 0409-4888-50</td><td>Diversos</td></tr><tr><td>Fita</td><td></td><td></td> cirúrgica <td>Diversos</td></tr><tr><td>Alconox (Alconox Inc.) para limpeza de cateteres</td><td>ADInstruments Inc.</td><td></td><td>variado</td></tr></tbody></table>

cardiac pressão-volume análise loop usando conductance cateteres em ratos

Cardiac Pressure-Volume Loop Analysis Using Conductance Catheters in Mice

A análise da alça pressão-volume cardíaco é o "padrão-ouro" na avaliação de medidas dependentes e independentes de carga da função sistólica e diastólica ventricular. As medidas de contratilidade e complacência ventricular são obtidas por meio do exame da resposta cardíaca às alterações na pós-carga e pré-carga. Essas técnicas foram originalmente desenvolvidas há quase três décadas para medir a função cardíaca em grandes mamíferos e humanos. A aplicação dessas análises em pequenos mamíferos, como camundongos, tem sido realizada por meio da otimização de técnicas microcirúrgicas e criação de cateteres de condutância. Os cateteres de condutância permitem estimar o pool de sangue explorando a relação entre a condutância elétrica e o volume. Quando realizadas corretamente, essas técnicas permitem testar a função cardíaca em modelos genéticos de camundongos mutantes ou em estudos de tratamento medicamentoso. A exatidão e a precisão desses estudos dependem de atenção cuidadosa à calibração dos instrumentos, à realização sistemática de medidas hemodinâmicas e à análise dos dados. Revisaremos os métodos de realização de experimentos de loop de pressão-volume usando um cateter de condutância em camundongos.

Análise de ciclo de pressão-volume pode ser usado para medir a função cardíaca em camundongos geneticamente modificados 14,15 ou camundongos submetidos a estudos de drogas 16. Lacetes de volume pressão representativos são fornecidos a partir de trabalhos publicados anteriormente 16 investigar o efeito de beta-arrestina inclinado AT1R ligando, TRV120023. Para testar se TRV120023 afeta a função cardíaca in vivo, análise do lacete pressão-volume foi realizada em camundongos selvage...

A análise de loop de pressão-volume cardíaco é a maneira mais abrangente de medir a função cardíaca no coração intacto. Descrevemos uma técnica para realizar e analisar loops de volume da pressão cardíaca, utilizando cateteres de condutância.

Cardiac Pressão-Volume Análise loop usando Conductance Cateteres em Ratos

Cardiac pressure-volume loop analysis is the &#8220;gold-standard&#8221; in the assessment of load-dependent and load-independent measures of ventricular ...

O objetivo geral deste procedimento é avaliar as medidas dependentes e independentes da carga da função ventricular, sistólica e diastólica. Isso é realizado primeiramente pela inserção de um cateter de condutância no ventrículo esquerdo do coração de um camundongo. Na segunda etapa, a aorta é constringida para alterar a pós-carga, seguida pela alteração da pré-carga por meio da constrição da veia cava inferior.No passo final, o cateter de condutância é cuidadosamente calibrado para avaliar com precisão as alterações no volume da câmara cardíaca. Por fim, a análise de pressão-volume cardíaca é utilizada para obter medidas dependentes e independentes da carga da função cardíaca. As implicações dessa técnica estendem-se ao tratamento da disfunção cardíaca, pois permitem tanto uma avaliação rigorosa da função cardíaca quanto a detecção potencial de fenótipos funcionais não identificados por testes não invasivos.Dr. Lan Mao, um neurocirurgião de camundongos do nosso laboratório, demonstrará este procedimento 30 minutos antes de inserir um cateter de condutância na câmara do ventrículo esquerdo. Mergulhe a ponta do cateter em soro fisiológico morno enquanto a ponta estiver em imersão. Retire o pêlo do pescoço e do tórax de um camundongo adulto anestesiado e posicione o animal sobre uma placa aquecida.Após aplicar pomada nos olhos do animal, faça uma incisão mediana no pescoço e dissecção dos músculos traqueais para expor a traqueia. Em seguida, introduza um tubo endotraqueal pela boca, visualizando a traqueia para garantir a colocação correta do tubo, e conecte o tubo ao respirador. Ajuste as configurações do ventilador com base no peso do animal, conforme indicado.Em seguida, para posicionar o cateter por abordagem carotídea, faça uma incisão sobre a carótida direita, da mandíbula até o esterno, e dissecione o tecido circundante para expor a carótida direita. A seguir, corte o nervo vago que corre adjacente à carótida e prenda um fio de seda 6-0 ao redor da extremidade distal da artéria carótida. Coloque dois fios adicionais sob a artéria carótida, próximos ao primeiro fio, amarrando frouxamente o fio médio.Em seguida, puxe suavemente o ponto proximal e use uma pinça para fixar o ponto à pele. Quando a artéria carótida tiver sido clampada, tanto proximal quanto distalmente, faça uma pequena incisão na artéria carótida direita proximal ao primeiro ponto e estendendo-se longitudinalmente em direção ao tórax. Agora, insira a ponta do cateter de condutância embebido em solução salina no vaso através da incisão, utilizando o ponto médio para fixar o cateter.Em seguida, avance suavemente o cateter até o ventrículo esquerdo através da carótida. Observe o traçado do laço pressão-volume para garantir uma colocação correta; a posição ideal do cateter produzirá laços pressão-volume com aparência retangular durante cinco a dez minutos após a colocação. Registre os laços pressão-volume de linha de base até que um estado estável seja alcançado para posicionar o cateter por uma abordagem apical. Faça a incisão inicial a partir do processo xifoide através da parede torácica, lateralmente, até que o diafragma fique visível.Corte o diafragma para visualizar o ápice do coração e use uma agulha de 25 a 30 para fazer uma punção no ápice do ventrículo esquerdo. Em seguida, insira o cateter de condutância através da punção até que o eletrodo proximal esteja logo dentro do ventrículo. E registre os laços de pressão-volume de linha de base conforme acabou de ser demonstrado, variando a pós-carga com a oclusão aórtica transitória.Inicie fazendo uma pequena incisão horizontal no tórax superior e dissecando o tecido circundante para expor a aorta transversa. Posicione um laço de seda 6.0 sob a aorta transversa. Em seguida, quando os laços de pressão-volume tiverem retornado à linha de base, insira ambas as extremidades do laço em um pequeno segmento de tubo PE 50, prenda ambas as extremidades da sutura com uma pinça para agulha e eleve suave e lentamente a sutura ao longo de um período de um a dois segundos, seguido por uma liberação lenta da tensão no vaso.Os registros ideais devem apresentar pelo menos cinco ciclos de laços de pressão-volume e exibir um aumento constante das pressões sistólicas finais durante a aplicação da tensão no fio cirúrgico. Para variar a pré-carga com a oclusão transitória da veia cava inferior, faça uma incisão vertical abaixo do processo xifoide e por baixo do diafragma para expor a veia cava inferior.Posicione uma ligadura de seda 6-0 sob a veia cava inferior. Em seguida, após os laços de pressão-volume terem retornado à linha de base, prenda ambas as extremidades da sutura com uma pinça para agulha e levante suave e lentamente a sutura ao longo de um período de um a dois segundos, seguido por uma liberação lenta da tensão sobre o vaso. Os registros ideais devem apresentar pelo menos cinco ciclos de laços de pressão-volume e exibir uma queda constante nas pressões ventricular esquerda e diastólica durante a aplicação da tensão sobre a sutura para realizar a calibração com solução salina.No final do estudo, injete um bolo de 10 microlitros de solução salina hipertônica no animal através da veia jugular para obter um valor de condutância paralela. Um aumento aparente no volume será observado sem alteração na pressão, como resultado da mudança na condutância da massa sanguínea. Para realizar uma calibração com vete, aqueça um vete com poços de diâmetro conhecido a 37 graus Celsius e preencha os três primeiros orifícios com heparinizada fresca e aquecida.Sangue de camundongos submetidos a avaliações hemodinâmicas adapta-se a um adaptador plástico fornecido pelo fabricante ao vete. Isso manterá o cateter de condutância estacionário durante a calibração. Em seguida, insira o cateter de condutância no primeiro poço até que todos os eletrodos estejam submersos.Por fim, registre a condutância no canal de volume para testar se o ligante do receptor tipo um da angiotensina dois com viés para a beta-arrestina TR RV 1 2 0 0 2 3 afeta a função cardíaca. A análise in vivo de laços de pressão-volume foi realizada em camundongos selvagens que receberam bloqueadores convencionais ou novos dos receptores da angiotensina. De fato, neste experimento, a infusão intravenosa de TR RV 1 2 0 0 2 3 aumentou significativamente a contratilidade cardíaca em comparação com os tratamentos convencional e controle.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como realizar a análise de loops de pressão-volume utilizando a constrição da aorta e da veia cava inferior para obter medidas dependentes e independentes da carga da função cardíaca.

cardiac-pressure-volume-loop-analysis-using-conductance-catheters

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este artigo descreve a medição da função ventricular esquerda murina por meio da análise de pressão/volume em diferentes frequências cardíacas.

O cateterismo cardíaco em camundongos para medir o volume Pressão do relacionamento: Investigando o efeito Bowditch

Este manuscrito descreve um protocolo detalhado para a recolha de dados de pressão-volume do mouse.

Medição do volume Pressão Loops no mouse

Apresentamos um protocolo para avaliar a função cardíaca biventricular em camundongos por meio da geração de alças pressão-volume (VP) do ventrículo direito e esquerdo no mesmo animal por meio de cateterismo torácico fechado. O foco está no aspecto técnico da cirurgia e na aquisição de dados.

Avaliação Biventricular da Função Cardíaca e Alças Pressão-Volume por Cateterismo Fechado de Tórax em Camundongos

Aqui descrevemos uma análise de loop de volume de pressão cardíaca sob doses crescentes de isoproterenol infundido por via intravenosa para determinar a função cardíaca intrínseca e a reserva β-adrenérgica em camundongos. Utilizamos uma abordagem de peito aberto modificada para as medições de loop de volume de pressão, nas quais incluímos ventilação com pressão final-expiratória positiva.

Resposta cardíaca à estimulação β-adrenérgica determinada pela análise do loop de pressão-volume

Aqui apresentamos uma abordagem tórax fechada para gravações de loop bi-ventricular de volume de pressão em suínos com disfunção ventricular direita aguda.

Gravações de loop de volume de pressão biventricular fechadas com cateteres de admissão em um modelo suíno

O presente protocolo descreve a obtenção da relação pressão-volume por meio da estimulação transesofágica, que serve como uma ferramenta valiosa na avaliação da função diastólica em modelos murinos de insuficiência cardíaca.

Um procedimento de estimulação cardíaca controlada para avaliação das funções diastólicas dependentes da frequência cardíaca em modelos murinos de insuficiência cardíaca

Este protocolo descreve um método de medida da pressão e volume do ventrículo esquerdo utilizando a técnica de condutância pressão-volume. Este método permite o monitoramento contínuo em tempo real dos efeitos das drogas sobre o coração.

Detecção em Tempo Real dos Efeitos do Ácido Ferúlico no Ventrículo Esquerdo de Rato Usando Cateter de Condutividade Pressão-Volume

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Aqui, descrevemos uma metodologia para entregar cabo de sangue humano derivado do endotélio formadoras de colônias de células (ECFCs) e derivadas da medula óssea de células-tronco mesenquimais (CTMs), incorporado em um gel de colágeno / fibronectina, por via subcutânea em ratos imunodeficientes. Esta combinação de células / gel gera uma rede vascular humano que se conecta com a vasculatura mouse.

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Tentativas para expressam a fibrose cística reguladora da condutância transmembrana (CFTR)...

Expressão e purificação do Fibrose Cística proteína transmembranar regulador da condutância na Saccharomyces cerevisiae

Aprenda a realizar análise de pressão-volume cardíaca em camundongos usando cateteres de condutância. Este método avalia função ventricular sistólica e diastólica, medidas dependentes e independentes de carga, auxiliando na pesquisa de disfunção cardíaca.

Cardiac Pressão-Volume Análise loop usando Conductance Cateteres em Ratos

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