Name: Um Modelo de acidente vascular cerebral trombótico Baseado em Transient isquemia-hipoxia cerebral (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Aprenda a estababelecer um modelo de acidente vascular cerebral trombótico em camundongos usando hipóxia-isquemia cerebral transitória. Este método permite avaliar a eficácia da terapia com tPA na recanalização vascular e redução do infarto cerebral.

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Este estudo foi apoiado pelo NS074559 de concessão do NIH (para C. K.). Agradecemos a todos os colaboradores que contribuíram para nossos artigos de pesquisa nos quais o presente relatório de metodologia se baseia.

Este protocolo é aprovado pelo cuidado e uso Comitê Institucional Animal (IACUC) da Universidade de Emory e segue os Institutos Nacionais de Saúde Guia para Cuidados e Uso de Animais de Laboratório. 1. Setup <ol><li> Prepare o leito cirúrgico na almofada de aquecimento ligado com bomba de calor a 37 ° C durante pelo menos 15 minutos antes da cirurgia. Coloque um rolo de pescoço usando o barril de 3 ml seringa no leito cirúrgico. Prepara-se o gás a anestesia com isoflurano a 2% em ar medicinal. </li><li> Prepare fórceps autoclavada, tesouras, porta-agulhas, micro pinça hemostática, cotonetes e suturas. Prepare a cola de tecido e pomada. </li><li> Configure o sistema de hipóxia e controladores de temperatura com lâmpada de aquecimento e sonda retal. Prepare gás hipoxia com 2% de isoflurano em 7,5% de O2 em relação 92,5% de N2. </li><li> Uma hora antes da cirurgia, os ratos são analgesized por injecção subcutânea de uma de libertação lenta O meloxicam (4,0 mg / kg). </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. Transient-hipoxia cerebral isquemia (Figura 1B) <ol><li> Anestesiar 10-13 semanas de idade C57BL masculino / 6 ratos pesando 22 a 30 g na câmara de indução anestésica com 3% de isoflurano até que o animal está respondendo a uma compressão de pé, e depois remover o cabelo no pescoço direita usando um barbeador eletrônico. </li><li> Coloque ratinhos no leito cirúrgico conectado com isoflurano a 2% em ar medicinal a um caudal de 2 L / min. Forelimbs seguros estendeu ao longo do rolo pescoço em lados usando fita adesiva médica. </li><li> Limpe o local da cirurgia para a incisão com betadine seguido de álcool e, em seguida, cotonetes. </li><li> Sob microscópio de dissecação, fazer uma incisão 0,5 centímetros direita-cervical utilizando uma pinça reta e uma tesoura micro cerca de 0,2 cm lateral da pele na linha média. </li><li> Utilizar um par de fórceps finos serrilhada para separar a fáscia e tecido para expor a artéria carótida comum direita (RCCA). Cuidadosamente separar a RCCA do nervo vagal, usando um par de fórceps finos lisas. </li><li> Vivo nó dois pré-cortada 5-0 sutura de seda (destacável) na RCCA, e depois costurar a pele usando 4-0 sutura de monofilamento de nylon (Figura 1C). </li><li> Aplicar pomada olho em ambos os olhos para prevenir o ressecamento. </li><li> Transferir rapidamente os ratos a hipoxia sistema e colocá nariz e boca na máscara facial com 2% de isoflurano em 7,5% de O 2 a uma taxa de fluxo de 0,5-1 L / min durante 30 min. <ol><li> Durante a hipóxia, utilizar controladores de temperatura com lâmpadas de aquecimento para controlar a temperatura rectal em 37,5 ± 0,5 ° C. Monitorar a freqüência respiratória em 80-120 ciclos / min. A manutenção da temperatura corporal acima de 37 ° C durante a hipóxia é importante para criar enfarte cerebral consistente. Frequência respiratória baixa geralmente acontece depois de 20 min hipóxia. Remova a máscara e permitir que o suprimento de ar normal se a freqüência respiratória cair abaixo de 40. Isso leva 1-2 min e não conta para a duração hipóxia 30 min. </li></ol></li><li> Depois de hipoxia, transferircamundongos para um leito cirúrgico e liberar as duas suturas de RCCA. Fechar a ferida usando cola de tecido e, em seguida, retornar os ratos para a jaula. Excluir os animais se ambos dois nós ao vivo são inesperadamente libertado depois hipoxia. </li><li> Monitorar os ratos para 5-10 min para se recuperar de hipóxia e anestesia. Coloque o alimento molhado na gaiola e devolvê-lo à facilidade de cuidado animal. Nota: Os animais que apresentem leve a grave comportamento circular às 24 h após Thi estão correlacionados com infração cérebro. A maioria dos animais com sintomas de apreensão morrer antes do ponto de tempo de 24 horas depois de Thi. </li></ol> 3. Laser Speckle Contrast Imaging Nota: Embora isso não é um processo essencial do modelo Thi, um salpico de laser sistema de imagiologia de contraste bidimensional 16 pode ser utilizado para caracterizar as alterações do fluxo sanguíneo cerebral (CBF) durante ou após a hipóxia-isquémia transiente. Para documentar as alterações da CBF sob Thi, ficha imediatamente após a step 2.6. Alternativamente, para comparar a recuperação CBF após insulto Thi, estes procedimentos podem ser realizados seguindo o passo 2.10. <ol><li> Inserir um rato anestesiado em decúbito ventral e executar a 1 cm de comprimento incisão na linha média no couro cabeludo com o crânio exposto, mas sem abrir. </li><li> Monitorar CBF em ambos os hemisférios cerebrais sob um imager fluxo de sangue de acordo com o protocolo do fabricante e começar a gravar o fluxo sanguíneo cerebral imediatamente após a cirurgia CCAO (passo 2.6). Continue por 50 min. </li><li> Mostrar imagem CBF com unidades arbitrárias em uma paleta de 16 cores e analisar em tempo real as regiões selecionadas usando o software MoorFLPI seguindo as instruções do fabricante (Figura 2). </li><li> Depois de gravar a imagem CBF, feche o couro cabeludo com cola de tecido e devolver o animal para a jaula. </li></ol> Administração 4. tPA <ol><li> Injectar animais na veia da cauda com o solvente ou 10 mg / kg de tPA recombinante (220-300 &amp;# 956; ul de 1 mg / m tPA) a 0,5, 1, 4 ou mais horas após tCCAo hipoxia (Figura 4). </li></ol> 5. Dano Cerebral Detecção com vários diferentes opções Nota: Para a coleta de amostras de cérebro, eutanásia os ratos de 1, 4 ou 24 horas após Thi. <ol><li> Execute quantificação do volume de enfarte in vivo por cloreto de 2,3,5-Trifeniltetrazólio método (TTC) em 24 horas após Thi insulto como descrito anterior. 17 <ol><li> Injectar animais por via intraperitoneal com solução de manitol 1,4 M (~ 0,1 ml / g de peso corporal) 30 min antes da perfusão transcardial. Ratinhos perfundir transcardial com PBS, seguido por 10 ml de 2% de TTC. </li><li> Remover o cérebro de animais com instrumentos cirúrgicos, depois de 10 minutos e colocar em paraformaldeído a 4% para a fixação durante a noite e em secção de 1 mm de espessura com um vibratome. </li><li> Tire uma série de quatro lâminas do cérebro segmentado por microscópio digital e quantify o volume de enfarte como a razão da área de enfarte (área branca do lado direito) para a área do hemisfério não danificado, contralateral utilizando o software ImageJ. </li></ol></li><li> Como alternativa, realizar a formação de trombose por imunofluorescência em 1 hora após Thi insulto. <ol><li> Congelar o cérebro fixado em composto outubro e os cérebros na seção 12 mm de espessura utilizando um criostato. </li><li> Incubar as lâminas do cérebro com anticorpo de coelho anti-f ibrinogénio (1: 100) seguido de anticorpo de cabra anti-coelho Alexa Fluro 488 corante (1: 200) para observar a fluorescência num microscópio fluorescente. </li></ol></li><li> Como alternativa, executar obstrução do vaso por injecção na veia da cauda de 100 ul 2% corante azul de Evans às 4 horas após Thi insulto. <ol><li> Euthanize os ratos e rapidamente cortar a cabeça para remover cérebros em paraformaldeído a 4% após injeção de azul de Evans. Nota: Demora 5-10 min para Evans azul circulação com cor azul de ambos previsão e pélvicos. </li><li> Sectiem cérebros fixados a espessura de 100 um utilizando um micrótomo deslizante e observar a fluorescência usando um filtro de emissão de 680 nm num microscópio fluorescente. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Broderick, J. P., Hacke, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+acute+ischemic+stroke%3A+Part+I%3A+recanalization+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Treatment of acute ischemic stroke: Part I: recanalization strategies.</a> Circulation. 106 (12), 1563-1569 (2002).</li>
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<li>Dirnagl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+concerted+appeal+for+international+cooperation+in+preclinical+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research.</a> Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).</li>
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<li>Rosenberg, R. D., Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular-bed--specific+hemostasis+and+hypercoagulable+states%5BTitle%5D)+AND+%22New+Eng.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Vascular-bed--specific hemostasis and hypercoagulable states.</a> New Eng. J. Med. 340 (20), 1555-1564 (1999).</li>
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O AVC é um importante problema de saúde de crescente importância para qualquer sociedade com o envelhecimento da população. Globalmente, o AVC é a segunda principal causa de morte com um número estimado de 5,9 milhões de eventos fatais em 2010, o equivalente a 11,1% de todas as mortes 18. O AVC é também a terceira maior causa de anos de vida ajustados por incapacidade (DALYs) perdidos globalmente em 2010, elevando-se a partir da quinta posição em 1990 19. Esses dados epidemiológicos apontam para a ...

Trombólise e recanalização é a terapia mais eficaz de AVC isquêmico agudo na prática clínica 1. No entanto, a maioria da investigação pré-clínica foi realizada a neuroprotecção num modelo transiente mecânico obstrução (oclusão da artéria cerebral média sutura intraluminal) que produz uma recuperação rápida de fluxo sanguíneo cerebral após a remoção da oclusão vascular e mostra pouca ou nenhuma benefícios por tPA trombólise. Tem sido sugerido que a escolha duvidosa de modelos de acidente vascular cerebral contribui, pelo menos em parte, da dificuldade em traduzir terapia neuroprotectora para pacientes 2,3. Assim, há um crescente apelo para o emprego de modelos de AVC tromboembólica tPA-responsivos em pesquisa pré-clínica, mas tais modelos também têm problemas técnicos (ver Discussão) 4-7. Aqui nós descrevemos um novo modelo de acidente vascular cerebral trombótico com base em (ITU) insulto hipóxico-isquêmica transitória unilateral e suas respostas à terapia tPA intravenosa 8. O modelo de acidente vascular cerebral Thi foi desenvolvido com base no procedimento de Levine (ligadura permanente da artéria carótida comum unilateral seguida por exposição a hipoxia transitória numa câmara) que foi inventado para experiências com ratos adultos em 1960 9. O procedimento Levine inicial desapareceu na obscuridade porque ele só produziu danos cerebrais variável, mas o mesmo insulto causado neuropatologia consistente em filhotes de roedores quando foi re-introduzido por Robert Vannucci e seus colegas como um modelo de neonatal encefalopatia hipóxico-isquêmica (HIE) em 1981 10. Nos últimos anos, alguns investigadores re-adaptado ao modelo Levine-Vannucci para ratinhos adultos por ajustamento da temperatura na câmara hipóxica 11. É plausível que as lesões cerebrais inconsistentes no procedimento Levine original pode surgir a partir de temperaturas flutuantes do corpo de roedores adultos na câmara hipóxica. Para testar esta hipótese, nós modificamos o procedimento Levine pela administração de gás hipóxicoatravés de uma máscara facial, enquanto se mantinha a temperatura interna a 37 ° roedor C na mesa cirúrgica 12. Como esperado, o controlo rigoroso da temperatura corporal aumentou significativamente a reprodutibilidade da patologia cerebral induzida por HI. O insulto HI também provoca a coagulação, a autofagia, e grisalhos e branco-matéria lesão 13. Outros pesquisadores também usaram o modelo HI para investigar pós-AVC respostas inflamatórias 14. Uma característica única do modelo de acidente vascular cerebral HI é que ele segue de perto tríade de Virchow de formação de trombos, incluindo a estase do fluxo de sangue, lesão endotelial (por exemplo, devido ao estresse oxidativo induzido por HI), e hipercoagulabilidade (ativação plaquetária induzida pelo HI) ( Figura 1A) 15. Como tal, o modelo HI pode capturar alguns mecanismos fisiopatológicos relevantes para AVC isquêmico no mundo real. Com esta ideia em mente, nós refinou ainda mais o modelo HI com ligadura reversível da ONUartéria carótida comum ilateral (portanto, para criar um insulto HI transitória), e testou suas respostas ao tPA trombólise com ou sem edaravona. Edaravona é um captador de radicais livres já aprovado no Japão para tratar AVC isquêmico dentro de 24 horas do início 9. As nossas experiências mostraram que tão breve quanto 30 min transiente HI desencadeia enfarte trombótico, e que o tratamento com tPA-edaravona combinada confere benefícios sinérgicos 8. Aqui nós descrevemos os procedimentos cirúrgicos detalhadas e considerações metodológicas do modelo Thi, que podem ser utilizados para otimizar tratamentos reperfusão de AVC isquêmico agudo.

<table><tbody><tr><td>camundongos machos adultos</td><td>Charles River</td><td>C57BL/6&nbsp;</td><td>10-13 semanas de idade (22-30 g)</td></tr><tr><td>Sistema móvel da anestesia animal do laboratório</td><td>VetEquip</td><td>anestesia 901807</td><td></td></tr><tr><td>Tanque de ar médico (comprimido) Anestesia</td><td>de Airgas</td><td>UN1002</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-013-25</td><td>anestesia</td></tr><tr><td>Multi-Station Laboratório Animal AnesthesiaSystem</td><td>Surgivet</td><td>V703501</td><td>sistema</td></tr> <tr><td>da hipóxia7,5% O2 balanceado por 92,5% N2 tanque Controlador de</td> temperatura <td>do sistema de hipóxia</td><td>Airgas</td><td>UN1956</td></tr><tr><td>com lâmpada de aquecimento&nbsp;</td><td>Cole Parmer&nbsp;</td><td>Controladores de temperatura EW-89000-10</td><td></td></tr><tr><td>Sonda retal</td><td>Cole Parmer&nbsp;</td><td>Controladores de temperatura NCI-00141PG</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de dissecação&nbsp;</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>Configuração cirúrgica</td> <td>SZ40</td></tr><tr><td>Bomba de calor com almofada de aquecimento</td><td>Gaymar&nbsp;</td>Configuração <td>cirúrgica</td> <td>TP700</td></tr><tr><td>Pinça curva fina (serrilhada)</td><td>FST</td><td>11370-31</td><td>instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Pinça curva fina (lisa)</td><td>FST</td><td>11373-12</td><td>instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>micro tesoura</td><td>FST</td><td>15000-03</td><td>instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>micro porta-agulhas</td><td>FST</td><td>12060-01</td><td>instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito hemostáticos</td><td>FST</td><td>13008-12</td><td>instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>5-0 sutura de seda&nbsp;</td><td>Harvard Apparatus</td><td>624143</td><td>suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>4-0 Sutura de monofilamento de nylon</td><td>LOOK</td><td>766B</td><td>suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Cola de tecido</td><td>Abbott Laboratories</td><td>NC9855218</td><td>suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Pomada veterinária Puralube</td><td>Fisher</td><td>NC0138063&nbsp;</td><td>prevenção de secura ocular</td></tr><tr><td>Gerador de imagens de fluxo sanguíneo MoorFLPI-2</td> Fonte de laser <td>Moor</td><td>780-nm</td><td>Laser Speckle Contrast</td></tr><tr><td>Imaging Manitol</td><td>Sigma</td><td>M4125</td><td>in vivo TTC</td></tr><tr><td>2,3,5-trifeniltetrazólio cloreto (TTC)&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td>in vivo TTC</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Stoelting</td><td>51425</td><td>seção cerebral para in vivo TTC&nbsp;</td></tr><tr><td>Microscópio digital</td><td>Dino-Lite</td><td>AM2111</td><td>imagem de todo o cérebro</td></tr><tr><td>O.C.T composto</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>cabra anti-coelho Alexa Fluro 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>Imuno-histoquímica</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Vibratome</td><td>ultrapro 5000</td><td>seção cerebral para IHC</td></tr><tr><td>Evans azul</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td>Detecção vascular micrótomo de perfusão</td></tr><tr><td></td><td>Microscopia eletrônica Ciências</td><td>5000</td><td>seção cerebral para histologia</td></tr><tr><td>Avertin (2, 2, 2-Tribromoetanol)</td> <td>Sigma</td><td>T48402</td><td>eutanásia</td></tr><tr><td>Microscópio fluorescente</td><td>Olympus</td><td>DP73</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam SR</td><td>ZooPharm</td><td></td><td>AINE analgesia</td></tr></tbody></table>

um modelo de acidente vascular cerebral trombótico baseado em transient isquemia-hipoxia cerebral

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

Pesquisa derrame tem sofrido muitos contratempos em traduzir terapias neuroprotetoras para a prática clínica. Em contraste, a terapia do mundo real (tPA trombólise) raramente produz benefícios em modelos experimentais à base de oclusão mecânica, os quais dominam a investigação pré-clínica acidente vascular cerebral. Esta divisão entre o banco e cabeceira sugere a necessidade de empregar modelos tPA-responsivos em pesquisa pré-clínica acidente vascular cerebral. Para este fim, um modelo de acidente vascular cerebral trombótico simples e de tPA-reactivo é inventado e descrito aqui. Este modelo consiste de oclusão transiente da artéria carótida comum unilateral e entrega de 7,5% de oxigénio através de uma máscara facial em ratos adultos, durante 30 min, enquanto se mantinha a temperatura rectal dos animais a 37,5 ± 0,5 ° C. A ligadura reversível da artéria carótida unilateral ou hipóxia cada suprimido o fluxo sanguíneo cerebral apenas transitoriamente, a combinação de ambos os insultos causada duradoura défices de reperfusão, a fibrina e a deposição de plaquetas, e grande INFARCT no território fornecido pelo artéria cerebral média. Importante, a injecção de tPA recombinante a 0,5, 1, ou 4 h pós-THI (10 mg / kg) da veia da cauda proporcionou uma redução tempo-dependente do tamanho do enfarte e mortalidade. Este novo modelo de acidente vascular cerebral é simples e pode ser padronizado em laboratórios para comparar os resultados experimentais. Além disso, induz a trombose sem craniectomia ou a introdução de êmbolos pré-formadas. Tendo em conta estes méritos exclusivos, o modelo Thi é uma adição útil para o repertório de pesquisa do curso pré-clínico.

Bidimensional imagiologia de contraste salpico do laser (LSCI) 16 foi utilizado para comparar as alterações do fluxo sanguíneo cerebral (CBF) por oclusão da carótida 30 minutos transiente unilateral (tCCAO), 30 min de exposição a hipoxia (7,5% de oxigénio), e 30 min unilateral carótida ligadura sob hipóxia (ITU). Esta experiência revelou que tCCAO sob normoxia suprimiu a CBF no hemisfério carótida ligado a ~ 50% do valor da linha de base, o qual se recuperou rapidamente para acima de 85% após a libertação da ...

Os modelos de AVC tromboembólico são ferramentas vitais para otimizar a terapia de recanalização. Aqui relatamos um modelo de AVC trombótico murino baseado em insulto hipóxico-isquêmico cerebral transitório (tHI), que desencadeia trombose e infarto e responde favoravelmente à fibrinólise mediada pelo ativador de plasminogênio tecidual (tPA) em uma janela terapêutica semelhante à de pacientes com AVC.

Um Modelo de acidente vascular cerebral trombótico Baseado em Transient isquemia-hipoxia cerebral

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um modelo simples de acidente vascular cerebral trombótico com infarto cerebral estável e avaliar os efeitos protetores da terapia com ativador do plasminogênio tecidual, ou TPA. Primeiro, a indução de hipóxia-isquemia cerebral transitória ou THI é demonstrada por meio da dupla ligadura da artéria carótida comum direita ou RCCA e da exposição do animal ligado a condições hipóxicas para indução de trombose. Após 30 minutos de condição hipóxica, os dois nós na artéria carótida são soltos.No passo final, são demonstradas a administração e a avaliação dos efeitos da terapia com TPA. Alternativamente, pode-se investigar a gravação em tempo real do fluxo sanguíneo cerebral, a formação da trombose e o grau de obstrução do vaso. Este modelo pode induzir acidente vascular cerebral trombótico em camundongos adultos e recorrer ao seu próprio sistema de coagulação.Queremos usar este modelo para estudar como o cérebro regula seu próprio fluxo sanguíneo sob condições de isquemia hipotética. Também utilizá-lo para investigar como podemos melhorar a terapia trombolítica. A demonstração visual deste método é fundamental, pois pode ser difícil manter a temperatura corporal adequada e a respiração estável durante a infecção cerebral.Passos da indução: pelo menos 15 minutos antes de iniciar o procedimento. Coloque a mesa cirúrgica sobre um aquecedor, ajuste para 37 graus Celsius e posicione um rolo cervical feito a partir do corpo de uma seringa de três mililitros sobre a mesa. Configure o sistema de hipóxia para fornecer 2% de isoflurano em 7,5% de oxigênio, equilibrado com 92,5% de nitrogênio, e ajuste os controladores de temperatura.Coloque um camundongo macho C57 black six, com 10 a 13 semanas de idade e pesando de 22 a 30 gramas, sobre a mesa cirúrgica. Após confirmar a anestesia por meio do aperto dos dedos dos pés, aplique pomada nos olhos do animal. Estique os quatro membros ao longo do pescoço, enrole-os e fixe-os com fita adesiva médica.Em seguida, utilizando um creme depilatório, remova os pelos do pescoço do animal e limpe o local cirúrgico. Agora, posicione a mesa cirúrgica sob um microscópio estereoscópico e faça uma incisão cervical direita de 0,5 centímetro na pele ao longo da linha média. Usando uma pinça fina, afaste a traqueia e o músculo para expor a artéria carótida comum direita e posicione duas suturas de seda 5-0 previamente cortadas sob a artéria.Tenha cuidado para separar a artéria carótida do nervo vago em tempo real, não utilizando dois fios de seda 5-0 pré-cortados e liberáveis na ACCD. Em seguida, use fios de náilon monofilamento 4-0 para fechar a pele e transfira rapidamente o camundongo para o sistema de hipóxia. Coloque a máscara facial sobre o nariz e a boca do animal e um sensor retal para manter a temperatura corporal em 37,5 graus Celsius durante toda a administração da hipóxia.Ajuste as lâmpadas de aquecimento após 30 minutos. Retorne o camundongo à mesa cirúrgica e solte os dois pontos. Em seguida, feche a ferida com cola tecidual e devolva o camundongo à sua gaiola, monitorando o animal até que esteja completamente recuperado.Alternativamente, a imagem de contraste de speckle a laser pode ser utilizada para examinar o fluxo sanguíneo cerebral durante e após a hipóxia-isquemia. Posicione o animal em posição prona. Em seguida, abra o couro cabeludo com uma incisão mediana de um centímetro de comprimento para expor, mas não abrir, o crânio.Em seguida, transfira imediatamente o animal para o equipamento de imagem de fluxo sanguíneo e inicie o registro do fluxo sanguíneo cerebral. Visualize as imagens de fluxo sanguíneo cerebral de acordo com as instruções do fabricante, utilizando o software FLPI para analisar as regiões selecionadas em tempo real. Para avaliar os efeitos da terapia com TPA, injete os animais por via intravenosa na veia da cauda no momento apropriado, após a oclusão carotídea unilateral transitória e hipóxia.Em seguida, quantifique o volume do infarto por meio de TTC in vivo 24 horas após a isquemia hipóxica cerebral transitória. No dia seguinte, utilize um vibrom para obter cortes com espessura de um milímetro. Finalmente, obtenha uma série de quatro imagens cerebrais seccionadas por microscopia digital e utilize o software de imagem apropriado para quantificar o volume do infarto como a razão entre a área branca infartada e a área do hemisfério contralateral não danificado.Além deste procedimento, outros métodos de trombólise podem ser utilizados para avaliar seus efeitos e potencial clínico. Esta técnica abriu caminho para pesquisadores na área do acidente vascular cerebral isquêmico explorarem a terapia trombolítica no cérebro.

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Medicine

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O modelo de ratos pós-natal para hipóxico-isquêmica lesão cerebral é um modelo bem estabelecido de humanos encefalopatia hipóxico isquêmica neonatal (HIE). Neste artigo, descrevemos o modelo de HIE em filhotes de ratos pós-natal.

O Modelo de encefalopatia hipóxico isquêmica Perinatal da Isquemia

Este vídeo demonstra o procedimento de replicação de um acidente vascular cerebral trombótico em um modelo de camundongo, bloqueando a artéria carótida comum direita e expondo o camundongo a um ambiente com baixo teor de oxigênio. Esse processo reduz o fluxo de sangue e oxigênio para o cérebro, causando a formação de coágulos sanguíneos e danos cerebrais.

Induzindo AVC trombótico por hipóxia e isquemia em um modelo de camundongo

Fototrombose é uma técnica rápida, minimamente invasiva para induzir pequena e bem delimitada infarto em áreas de interesse de maneira altamente reprodutível. É particularmente adequado para o estudo de respostas celulares e moleculares subjacentes plasticidade cerebral em ratinhos transgénicos.

Isquemia Photothrombotic: Um Modelo de lesão cortical fotoquímica Minimamente Invasiva e reprodutível para mouse Estudos curso

Vários modelos murinos de oclusão da artéria cerebral média (MCAO) são amplamente utilizados em pesquisas sobre o cérebro experimental. Aqui, demonstramos o modelo de transcraniana permanente distal MCAO que produz enfarte cortical consistente de um tamanho correspondente ao dano imposto pela maioria dos acidentes vasculares cerebrais isquémicos humanos.

Curso de modelagem em Ratos: Coagulação permanente da artéria distal Cerebral Média

O AVC neonatal é uma causa significativa de lesão cerebral precoce, exigindo um modelo translacional com padrões consistentes de lesão focal e alta reprodutibilidade para permitir o estudo. Este estudo descreve o procedimento cirúrgico detalhado para a criação de uma lesão de isquemia-reperfusão focal unilateral não hemorrágica em roedores equivalentes a termo.

Transiente Artéria Cerebral Média Oclusão Modelo de AVC neonatal em ratos P10

Descrito aqui é o modelo de derrame fototrombótico, onde um derrame é produzido através do crânio intacto induzindo a oclusão microvascular permanente usando iluminação laser após a administração de um corante fotossensível.

Modelagem de AVC em Camundongos: Lesões Corticais Focais por Fototrombose

Diferentes modelos de oclusão da artéria cerebral média (MCAo) são usados em pesquisas experimentais de derrame. Aqui, é descrito um modelo experimental de AVC de MCAo transitório através da artéria carótida externa (ECA), que visa imitar o AVC humano, no qual o trombo cerebrovascular é removido devido à lise espontânea de coágulo ou terapia.

Modelagem de AVC em Camundongos: Oclusão da Artéria Cerebral Média Transitória através da Artéria Carótida Externa

Este protocolo descreve o modelo de isquemia cerebral focal transitória em camundongos através da oclusão intraluminal da artéria cerebral média. Além disso, exemplos de avaliação de resultados são mostrados usando ressonância magnética e testes comportamentais.

Modelo de Oclusão Transitória da Artéria Cerebral Média do Acidente Vascular Encefálico

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de oclusão da artéria cerebral média distal (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6J e avaliar o comportamento neurológico subsequente e as características histopatológicas.

Indução de AVC Isquêmico Agudo em Camundongos Usando a Técnica de Oclusão Distal da Artéria Média

Este estudo apresenta um protocolo para o estabelecimento de um modelo animal altamente reprodutível de transformação hemorrágica (TH) usando oclusão/reperfusão da artéria cerebral média (MCAO/R) em camundongos C57BL/6 com hiperglicemia aguda.

Um modelo de camundongo de transformação hemorrágica induzida por hiperglicemia aguda combinada com isquemia focal transitória

Aprenda a estababelecer um modelo de acidente vascular cerebral trombótico em camundongos usando hipóxia-isquemia cerebral transitória. Este método permite avaliar a eficácia da terapia com tPA na recanalização vascular e redução do infarto cerebral.

Um Modelo de acidente vascular cerebral trombótico Baseado em Transient isquemia-hipoxia cerebral

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