Name: In Vitro Modelagem de Cancerous Neural Invasion: o gânglio Modelo de raiz dorsal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Aprenda a modelar a invasão neural cancerosa usando gânglios da raiz dorsal e células tumorais. Este método recria o microambiente neural para estudar interações célula-neurônio e desenvolver terapias direcionadas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Agradecemos a Edith Suss-Toby por sua ajuda na microscopia de lapso de tempo e análise de imagem. Nofar Rada é agradecido pelo trabalho artístico.

Quatro a seis semanas de idade C57BL feminino / camundongos CJ (Harlan, Jerusalém, Israel) foram usados ​​no experimento de acordo com a Associação de Avaliação e Acreditação de especificações Laboratory Animal Care. Todos os procedimentos experimentais foram realizados de acordo com o Animal Care Institucional e Comitê de Uso e do Departamento de Agricultura regulamentos. 1. colheita da Medula Espinhal <ol><li> Euthanize o rato usando uma câmara de CO 2. Evite deslocamento cervical, uma vez que pode causar danos às raízes ganglionares devido a forças de cisalhamento. Daqui em diante, executar todas as etapas sob condições estéreis. </li><li> Mergulhe animal para baixo, com 70% de etanol. Esta etapa é importante para a esterilização e para a prevenção do cabelo de arrastando através dos órgãos internos. </li><li> Deixar o mouse para secar a partir do etanol. Evitar qualquer contacto de etanol com os órgãos internos, devido à neurotoxicidade. </li><li> Após a secagem do rato, posicioná-lo utilizando os pinos na posição prona(Face para baixo). Coloque os pinos de cada membro posterior e membro anterior. </li><li> Usando fórceps, fazer uma incisão na linha média que se estende a partir do gargalo craniocaudal posterior à coluna lombar. Em seguida, levante retalhos cutâneos bilateralmente usando uma pinça e expor o tecido subcutâneo. </li><li> Palpar crânio mouse até chegar a junção crânio-cervical. Com uma tesoura perpendiculares ao animal, cortar os músculos cervicais e coluna na junção craniocervical (7ª vértebras cervicais), usando uma pinça pesados. Dissecar a espinha caudal e extirpar a coluna com uma pinça pesados ​​até atingir o nível lombar (traseira nível membros). </li><li> Executar uma transecção caudal completa ao nível da coluna lombar (5ª vértebras lombares) usando uma pinça pesados. </li><li> Passe o mouse sobre (voltada para cima). Não há necessidade de cobrir a incisão desde o DRG é extraído a partir de níveis vertebrais mais baixos e não o colo do útero. </li><li> Cortadas na linha média do pescoço até o abdômen, retrair opele lateralmente e, em seguida, cortado para abrir o peritoneu. </li><li> Remover os órgãos internos no interior do peritoneu (fígado, baço, pâncreas, estômago, intestino) e em bloco. Em seguida, remover os órgãos retroperitoneais (ou seja, rins e pâncreas). Cranial, abra a parede torácica. </li><li> Usando fórceps e uma lâmina cirúrgica, cortar as nervuras, deixando 5 mm de nervuras bilateralmente longe da coluna vertebral. Neste ponto, a coluna vertebral é separada do resto do corpo. </li><li> Lava-se a coluna vertebral de sangue com frio (4 ° C) fresco salina tamponada com fosfato (PBS) duas vezes. </li></ol> 2. Isolar o Root Ganglia dorsal (DRG) <ol><li> Use um estereomicroscópio com uma ampliação de 4X. </li><li> Posicionar a coluna vertebral em uma plataforma absorvente non non-aderente (Telfa / nylon). Posicione espinha enfrentam-se na mesma orientação crânio-caudal. </li><li> Remova todos os músculos da coluna vertebral e do tecido conjuntivo. Use as costelas como um marco para os nervos como elesdeixar a coluna vertebral. Costelas também protegem os nervos dos instrumentos cirúrgicos. O DRG estão localizados nas regiões cervical, torácica, lombar e locais das vértebras. </li><li> Em seguida, usando uma tesoura cortou o corpo vertebral na linha média e expor a espinal medula e raízes DRG por retracção suave de lateral do corpo vertebral. </li><li> No espaço intercostal, siga o nervo periférico medial ao longo da nervura lateral, para o DRG. </li><li> Identificar o DRG. Parece que a gema de &quot;ovo frito&quot; deitado no nervo. </li><li> Cortar o distai do nervo intercostal para o DRG deixando 2-3 mm de nervo distal à gânglios, a ser utilizado para a retracção. Esta &quot;cauda&quot; será removido após a colheita. </li><li> Segure o nervo usando uma pinça. Comprimindo o próprio corpo DRG irá causar danos às células neurais e deve ser evitada. </li><li> Aproxime-se do DRG proximal ao longo do seu apego à medula espinhal, através da sua anterior e raízes posteriores. </li><li> Aplicar retração suave para a DRG puxando a efnervo dife- (coto do nervo intercostal) lateralmente, e cortar o anterior e raízes posteriores perto do DRG. </li><li> Manter o DRG em uma placa de Petri de 35 milímetros preenchido com DMEM fresco, arrefecido em gelo suplementado com 10% de soro fetal de vitelo (FCS), 1% de penicilina-estreptomicina, aminoácidos não essenciais a 1%, e 1% de piruvato de sódio. </li></ol> 3. Implantação na placa de Petri <ol><li> Execute os próximos passos no gelo utilizando pontas de pipeta pré-resfriado para evitar a ECM solidificação. </li><li> Sob um microscópio estereoscópico no 2-4X ampliação, coloque um copo placa de petri fundo 35 mm numa grade de papel. Importante: Trabalho em gelo, a fim de manter o ECM no estado líquido. Criar um ponto de diâmetro de 1 mm (aproximadamente 20 ul) de crescimento ECM empobrecido-fator no centro da grade. </li><li> Sob visualização directa, colocar o DRG no centro do ponto de ECM perto do fundo do prato. Nota: As células cancerosas utilizados neste protocolo são células de câncer pancreático murino (KPC) establisele tinha a partir de amostras de tumor isoladas de fresco de ratinhos KPC como descrito noutro local 19. </li><li> células de cancro da colheita a partir de culturas confluentes de 40.000, lavá-los uma vez com PBS, e ressuspender-los em 40 ul de ECM em gelo. </li><li> Sob visualização directa da rede usando um microscópio estereoscópico mm medida 500 em cada direção a partir do DRG. Neste ponto lentamente semear células 10.000 / 10 ul ECM. Use uma ponta prï¿½arrefecida 2-10 ul para injetar as células próximas ao fundo do prato, evitando a sua propagação na matriz ou descolamento da matriz. (Figura 1). </li><li> Deixe o prato dentro de uma câmara de fluxo laminar para 10-15 minutos para solidificar. Evitar a secagem ECM. </li><li> Lentamente adicionar DMEM, preparado tal como mencionado anteriormente, contra a parede lateral da placa. Adicionar meio suficiente para cobrir o ECM (cerca de 2 mL). </li><li> Coloque o prato de volta na incubadora a 37 ° C. </li><li> Substituir o meio com meio fresco no dia seguinte. </li><li> Substituir o meio a cada 2 dias. &lt;/ Li&gt; </ol> 4. Aquisição de Dados, Time-lapse Videomicroscopia <ol><li> No dia 7 após a implantação, levar o prato para a microscopia de lapso de tempo. Note-se que certas células pode exigir a aquisição anteriormente devido à migração mais rápida. </li><li> Durante a imagens ao vivo, colocar o prato num ambiente fechado, a uma temperatura média de 37 ± 0,1 ° C e 5% de CO 2. </li><li> Gravar as células utilizando uma câmara de carga acoplado dispositivo colocado sobre o microscópio. </li><li> Aqui imagens digitalizadas a cada 10 min até 72 h, para seguir a locomoção celular de três a seis células diferentes. </li><li> Substituir médio após 24 horas. </li><li> Executar aquisição de dados e análise simples usando o software microscópio. </li></ol> Análise 5. Os dados <ol><li> Para aplicações mais avançadas (ou seja, rastreamento de celular em 2D ou 3D) usar softwares especializados (como Imaris 4D). Nota: Este software determina as coordenadas xy de uma célula emqualquer momento dado, juntamente com a distância desde a origem, e a velocidade de movimento. </li><li> Calcula-se a velocidade média através da medição da distância de deslocamento entre as posições subsequentes em intervalos de 10 min. Calcular o Índice de migração para a frente (IMF), que é a distância da frente da célula a partir da neurite e descreve o movimento unidireccional das células para o DRG. </li></ol>

<ol><li>Carter, R. L., Foster, C. S., Dinsdale, E. A., Pittam, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perineural+spread+by+squamous+carcinomas+of+the+head+and+neck%2C+a+morphological+study+using+antiaxonal+and+antimyelin+monoclonal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Perineural spread by squamous carcinomas of the head and neck, a morphological study using antiaxonal and antimyelin monoclonal antibodies.</a> J Clin Pathol. 36, 269-275 (1983).</li>
<li>Beard, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perineural+invasion+is+associated+with+increased+relapse+after+external+beam+radiotherapy+for+men+with+low-risk+prostate+cancer+and+may+be+a+marker+for+occult%2C+high-grade+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">Perineural invasion is associated with increased relapse after external beam radiotherapy for men with low-risk prostate cancer and may be a marker for occult, high-grade cancer.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 58, 19-24 (2004).</li>
<li>Maru, N., Ohori, M., Kattan, M. W., Scardino, P. T., Wheeler, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+significance+of+the+diameter+of+perineural+invasion+in+radical+prostatectomy+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Pathol%22%5BJournal%5D)">Prognostic significance of the diameter of perineural invasion in radical prostatectomy specimens.</a> Hum Pathol. 32, 828-833 (2001).</li>
<li>Ceyhan, G. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+neuropathy+and+neuropathic+pain--a+comprehensive+pathomorphological+study+of+546+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Pancreatic neuropathy and neuropathic pain--a comprehensive pathomorphological study of 546 cases.</a> Gastroenterology. 136, 177-186 (2009).</li>
<li>Ceyhan, G. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurotrophic+factor+artemin+promotes+pancreatic+cancer+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">The neurotrophic factor artemin promotes pancreatic cancer invasion.</a> Ann Surg. 244, 274-281 (2006).</li>
<li>Takahashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perineural+invasion+by+ductal+adenocarcinoma+of+the+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Perineural invasion by ductal adenocarcinoma of the pancreas.</a> J Surg Oncol. 65, 164-170 (1997).</li>
<li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+growth+factor+expression+correlates+with+perineural+invasion+and+pain+in+human+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Nerve growth factor expression correlates with perineural invasion and pain in human pancreatic cancer.</a> J Clin Oncol. 17, 2419-2428 (1999).</li>
<li>Hirai, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perineural+invasion+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Perineural invasion in pancreatic cancer.</a> Pancreas. 24, 15-25 (2005).</li>
<li>Mitchem, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+tumor-infiltrating+macrophages+decreases+tumor-initiating+cells%2C+relieves+immunosuppression%2C+and+improves+chemotherapeutic+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Targeting tumor-infiltrating macrophages decreases tumor-initiating cells, relieves immunosuppression, and improves chemotherapeutic responses.</a> Cancer Res. 73, 1128-1141 (2013).</li>
<li>Kelly, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+multimutated+herpes+simplex+virus-1+effectively+treats+prostate+carcinomas+with+neural+invasion+while+preserving+nerve+function%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Attenuated multimutated herpes simplex virus-1 effectively treats prostate carcinomas with neural invasion while preserving nerve function.</a> FASEB J. 22, 1839-1848 (2008).</li>
<li>Dai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+survival+in+perineural+invasion+of+pancreatic+cancer%2C+an+in+vitro+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Pathol%22%5BJournal%5D)">Enhanced survival in perineural invasion of pancreatic cancer, an in vitro approach.</a> Hum Pathol. 38, 299-307 (2007).</li>
<li>Ayala, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-related+axonogenesis+and+neurogenesis+in+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Cancer-related axonogenesis and neurogenesis in prostate cancer.</a> Clin Cancer Res. 14, 7593-7603 (2008).</li>
<li>Ayala, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+antiapoptotic+paracrine+loop+in+perineural+invasion+of+prostatic+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Stromal antiapoptotic paracrine loop in perineural invasion of prostatic carcinoma.</a> Cancer Res. 66, 5159-5164 (2006).</li>
<li>Ceyhan, G. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+invasion+in+pancreatic+cancer%2C+a+mutual+tropism+between+neurons+and+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Neural invasion in pancreatic cancer, a mutual tropism between neurons and cancer cells.</a> Biochem Biophys Res Commun. 374, 442-447 (2008).</li>
<li>Bapat, A. A., Hostetter, G., Von Hoff, D. D., Han, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perineural+invasion+and+associated+pain+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Perineural invasion and associated pain in pancreatic cancer.</a> Nat Rev Cancer. 11, 695-707 (2011).</li>
<li>Ketterer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+transcription-PCR+analysis+of+laser-captured+cells+points+to+potential+paracrine+and+autocrine+actions+of+neurotrophins+in+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Reverse transcription-PCR analysis of laser-captured cells points to potential paracrine and autocrine actions of neurotrophins in pancreatic cancer.</a> Clin Cancer Res. 9, 5127-5136 (2003).</li>
<li>Gil, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve-sparing+therapy+with+oncolytic+herpes+virus+for+cancers+with+neural+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Nerve-sparing therapy with oncolytic herpes virus for cancers with neural invasion.</a> Clin Cancer Res. 13, 6479-6485 (2007).</li>
<li>Gil, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracrine+regulation+of+pancreatic+cancer+cell+invasion+by+peripheral+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Paracrine regulation of pancreatic cancer cell invasion by peripheral nerves.</a> J Natl Cancer Inst. 102, 107-118 (2010).</li>
<li>Weizman, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+mediate+gemcitabine+resistance+of+pancreatic+adenocarcinoma+by+upregulating+cytidinedeaminase%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Macrophages mediate gemcitabine resistance of pancreatic adenocarcinoma by upregulating cytidinedeaminase.</a> Oncogene. 33, 3812-3819 (2014).</li>
</ol>

Esta pesquisa foi apoiada pelo prêmio de desenvolvimento de carreira em pesquisa dotado de Barbara S. Goodman do ICRF (2011-601-BGPC) e uma bolsa da Fundação Binacional de Ciências EUA-Israel. Nenhuma outra divulgação financeira dos autores deve ser feita.

Este artigo apresenta um modelo in vitro que recapitula o microambiente canceroso no nicho neural, o modelo DRG. O vídeo demonstra todos os passos a partir de reconhecer marcos anatômicos, tais como o DRG no ratinho, a sua extracção e, finalmente, a sua cultura em ECM. Co-cultura de DRG juntamente com as células cancerosas, também é apresentado. Não há outros modelos para a investigação in vitro de invasão perineural descritos na literatura tornando este modelo essencial para estudar o nicho p...

tumores sólidos divulgação de três maneiras principais: invasão direta, disseminação linfática e disseminação hematogênica. No entanto, há um quarto meio de disseminação do câncer que é frequentemente ignoradas, disseminação ao longo dos nervos. Invasão cancerosa neural (CNI) é um percurso bem conhecido de disseminação do cancro, especialmente em tipos de cancro da cabeça e do pescoço, um de próstata 2, 3 e pâncreas. 4-8 CNI ocorre em mais de 80% dos indivíduos com adenocarcinoma do pâncreas, levando a tumor retroperitonial espalhar através dos nervos gânglio celíaco. Estas células cancerosas neurotrópico têm uma capacidade única para migrar unidireccionalmente ao longo dos nervos em relação ao sistema nervoso central (SNC). 9 Esta descoberta sugere que o microambiente perineural pode ser explorada por células cancerosas, proporcionando factores que suportam o crescimento maligno. Um dos poucos modelos in vitro para a pesquisa CNI é o gânglio da raiz dorsal (DRG) / modelo de células de cancro. este modEL é frequentemente utilizado para estudar a interacção entre as células do estroma parácrina e cancerosas neurais. 10-18 Neste modelo, rato ou linhas celulares de cancro humano são cultivadas em matriz extracelular (ECM) adjacente às preparações de DRG dissociados cultivadas de fresco. Este artigo vídeo mostra a aplicação do in vitro CNI em adenocarcinoma ductal pancreático.

<table><tbody><tr><td><forte>Equipamento:</forte></td>Microscópio operacional Sistema de lapso de <td></td><td></td><td></td></tr> tempo <tr><td></td><td>Leica</td><td>M205</td><td></td></tr> Pinça <tr><td></td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lâmina cirúrgica</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z309036</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3271</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Placas de Petri, fundo</td><td>de vidro de groot</td><td>60-627860</td><td></td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa&nbsp; </td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Materiais:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% etanol</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cold PBS</td><td>Indústrias biológicas</td><td>02-023-1A</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Indústrias biológicas</td><td>01-055-1A</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Rênio</td><td>10108165</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina e estreptomicina</td><td>Indústrias biológicas</td><td>01-031-1B</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato de sódio</td><td>Indústrias biológicas</td><td>03-042-1B</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamina</td><td>Indústrias biológicas</td><td>03-020-1B</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel Empobrecido com fator de crescimento</td><td>Trevigen</td><td>3433-005-01</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro modelagem de cancerous neural invasion: o gânglio modelo de raiz dorsal

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

Uma maneira pela qual os tumores sólidos se disseminam é por meio da invasão neural. Esta rota é bem conhecida em cânceres de cabeça e pescoço, próstata e pâncreas. Essas células cancerígenas neurotrópicas têm uma capacidade única de migrar unidirecionalmente ao longo dos nervos em direção ao sistema nervoso central (SNC). O modelo de células cancerígenas (DRG) é um modelo tridimensional (3D) in vitro frequentemente usado para estudar a interação entre o estroma neural e as células cancerígenas. Neste modelo, linhagens de células cancerígenas de camundongos ou humanos são cultivadas em ECM adjacentes a preparações de DRG cultivado recém-dissociado. Neste artigo, o protocolo de isolamento de DRG de camundongos e implantação em placas de Petri para co-cultura com células cancerígenas pancreáticas são demonstrados. Cinco dias após a implantação, as células cancerígenas entraram em contato com os neuritos DRG. Mais tarde, essas células formaram cabeças de ponte para facilitar a migração neurotrópica polarizada mais extensa de células cancerígenas.

<html> Usando imagens de microscopia de vídeo, o DRG pode ser visto brotando neurites 5-7 dias após o implante, enquanto as células cancerosas migrar longe de suas colônias em direção ao DRG. No 7 ° dia após a implantação, as células cancerosas entrem em contacto com as neurites (Figura 2). O índice de migração para a frente das células de cancro do pâncreas utilizados no protocolo é 3-4 vezes mais e...

Este artigo em vídeo mostra o uso do modelo de células cancerígenas (DRG)/gânglios da raiz dorsal no adenocarcinoma ductal pancreático.

In Vitro Modelagem de Cancerous Neural Invasion: o gânglio Modelo de raiz dorsal

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These ...

O objetivo geral deste modelo é recapitular o microambiente neural canceroso. Isso permite a exploração das interações entre células cancerígenas e neurônios. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área do microambiente tumoral, como a interação entre células tumorais e neurônios e a influência mútua de cada um desses componentes.A principal vantagem desta técnica é que ela é confiável, fácil de realizar e aborda tanto fatores celulares quanto cerebrais no nicho neural. As implicações desta técnica estendem-se ao desenvolvimento terapêutico e ao direcionamento farmacológico de fatores-chave no remodelamento neural e no processo de invasão durante o desenvolvimento do câncer. Após a eutanásia do animal em uma câmara de CO2, umedecer o pêlo com etanol a 70% e deixar secar.Posicione o camundongo em posição prona e, em seguida, faça uma incisão mediana estendendo-se craniocaudalmente desde a nuca até a coluna lombar. Em seguida, use pinças para levantar bilateralmente os retalhos dérmicos e expor o tecido subcutâneo. Palpe o crânio do camundongo até identificar a junção craniocervical.Use uma tesoura posicionada perpendicularmente ao animal para cortar os músculo

in-vitro-modeling-cancerous-neural-invasion-dorsal-root-ganglion

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Neste vídeo, descrevemos o método de co-cultura de gânglios da raiz dorsal e células cancerígenas na membrana corioalantóide de pintinho ou CAM para estudar a invasão perineural.

Membrana corioalantóide de pintinho ou modelo de tumor CAM: um método in ovo para simular a invasão perineural de células tumorais

Neste vídeo, demonstramos o procedimento para desenvolver um modelo de invasão de células cancerígenas perineurais in vitro por co-cultura de gânglio da raiz dorsal de camundongos e células cancerígenas neurotrópicas. O modelo pode ser utilizado para realizar ensaios de câncer, produzindo resultados rápidos e reprodutíveis.

Estabelecendo um modelo tridimensional de co-cultura de gânglios da raiz dorsal murina e células cancerígenas: um modelo in vitro para estudar a invasão de células cancerígenas perineurais

Neste vídeo, demonstramos um método in vitro para co-cultura de DRG e células cancerígenas para estudar neurotropismo e invasão neural.

Modelagem de invasão neural cancerígena in vitro: um método para co-cultura de gânglios da raiz dorsal e células cancerígenas

Neste vídeo, desenvolvemos um modelo de camundongo in vivo para invasão perineural injetando células cancerígenas pancreáticas no nervo ciático. Este modelo ajuda a quantificar a extensão da invasão e estudar as interações entre células cancerígenas e nervos.

Modelo de Invasão Perineural Murina: Gerando um Modelo In Vivo para Simular a Invasão Perineural no Nervo Ciático de Camundongo

Este vídeo demonstra um método para desenvolver gânglios da raiz dorsal ou cultura de explante DRG e modelos de células dissociadas em DRG usando tecidos isolados de DRG de camundongo. Esses modelos ajudam a estudar vários mecanismos com interações neurônio-glial em um ambiente controlado.

Gerando explante de gânglio da raiz dorsal e cultura de células dissociadas

A invasão perineural (PNI) é uma característica comum do carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (CECP), conferindo menores taxas de sobrevida. Seus mecanismos são mal compreendidos. Utilizando neuritos gerados a partir de gânglios murinos da raiz dorsal confinados a uma matriz semissólida, as vias envolvidas no PNI de linhagens celulares de CECP podem ser investigadas.

Um Modelo para Perineural Invasion em cabeça e pescoço carcinoma espinocelular

Descrevemos no vivo modelo murino de invasão perineural injetando células de câncer pancreático syngeneic no nervo ciático. O modelo permite a quantificação da extensão da invasão do nervo e apoia a investigação dos mecanismos celulares e moleculares de invasão perineural.

Um modelo murino de nervo ciático na Vivo de invasão Perineural

A invasão perineural é um phenotype agressivo para carcinomas de pilha Squamous da cabeça e da garganta e outros tumores. O modelo de membrana corioalantoica de pintinho tem sido usado para estudar angiogênese, invasão de câncer e metástase. Aqui nós demonstramos como este modelo pode ser utilizado para avaliar a invasão perineural in vivo.

A membrana Chorioalantoica Chick in vivo modelo para avaliar invasão perineural em câncer de cabeça e pescoço

Este protocolo fornece uma técnica para colher e cultivar gânglio da raiz dorsal (DRG) explantado de ratos Sprague Dawley adultos em um dispositivo multicompartimental (MC).

Coleta, incorporação e cultura de gânglios da raiz dorsal em dispositivos multicompartimentais para estudar características neuronais periféricas

Este protocolo descreve métodos para estabelecer culturas de montagem inteira e dissociadas de gânglios da raiz dorsal de camundongos (DRG) e seu uso para avaliar as interações tumor-nervo.

Estabelecendo modelos in vitro de cultura de gânglios da raiz dorsal: abordagens complementares para investigar a diafonia câncer-nervo

Aprenda a modelar a invasão neural cancerosa usando gânglios da raiz dorsal e células tumorais. Este método recria o microambiente neural para estudar interações célula-neurônio e desenvolver terapias direcionadas.

In Vitro Modelagem de Cancerous Neural Invasion: o gânglio Modelo de raiz dorsal

Explorar mais vídeos