Preparação e caracterização de Individual e Multi-carregadas com droga Fisicamente Entrapped poliméricos Micelles

O objetivo geral do experimento a seguir é delinear um processo passo a passo de preparação e caracterização de células carregadas com drogas antes de avaliá-las em estados de doença de interesse. Isso é conseguido preparando as células My pelo método de fundição por solvente para gerar células my reprodutíveis para o estudo. Como segundo passo, a estabilidade e o tamanho da carga celular são avaliados, o que determina a capacidade das células de carregar e reter concentrações clinicamente relevantes.

Em seguida, a taxa de liberação do medicamento das células My é determinada para garantir que minhas células tenham características apropriadas de liberação in vitro antes de avaliar a estabilidade in vivo. Os resultados mostram que as células my estáveis geradas de forma reprodutível podem fornecer uma plataforma para buscar a entrega de medicamentos em vários estados de doença com base nas técnicas de avaliação apresentadas aqui. A principal vantagem desta técnica ou de métodos existentes, como carga de equilíbrio ou métodos de diálise, é que as miosinas podem ser preparadas muito mais rapidamente com carga e tamanho de drogas reprodutíveis.

As implicações desta técnica se estendem para a terapia ou diagnóstico de vários estados de doença porque os medicamentos em nanoescala oferecem oportunidades além das formas convencionais, geralmente os indivíduos que estão apenas começando podem lutar com essas técnicas, embora sejam simples, porque você ainda pode fazer os estudos de liberação, você não pode realmente avaliar o efeito de explosão. Demonstrando esses procedimentos estarão Shaman Duke, meu aluno de pós-graduação, e Deepa, minha colaboradora, primeiro pesar um miligrama de DTX, um miligrama de EVR e 15 miligramas de Peg 4, 000 bloco PLA 2200 para a droga dupla minhas células ou DDM. Após a pesagem, dissolva os medicamentos e o polímero em 0,5 mililitros de aceto nitrilo e, em seguida, transfira a solução para um frasco de fundo redondo de cinco mililitros para formar um filme fino de polímero distribuído por medicamento, evaporando a solução de aceto de polímero de medicamento sob pressão reduzida usando um evaporador rotativo.

Em seguida, reidratar o filme de polímero do medicamento com 0,5 mililitros de água deionizada pré-aquecida a 50 graus Celsius e agitar suavemente o frasco em banho-maria a 50 graus Celsius para formar as células dos camundongos. Adicione a solução a um tubo de centrífuga e gire a 7.200 vezes G por três minutos. Retire a solução com uma agulha e filtre a solução de Micella resultante em um novo tubo de centrífuga de 1,5 mililitro usando um filtro de náilon de 0,2 mícron para remover qualquer medicamento ou contaminantes não resolvidos Neste ponto, execute a análise de HPLC de fase reversa com uma coluna C oito equilibrada a 40 graus Celsius em um modo socrático com uma fase móvel de teste de acetil I e dilua em água as mycells recém-preparadas em um teste de olho ace em uma proporção de um para 100 antes da análise por HPLC de fase reversa para determinar a carga inicial do medicamento.

Depois de armazenar minhas células não diluídas em temperatura ambiente por 48 horas, prepare amostras diluídas frescas para reavaliar por HPLC de fase reversa e determinar a estabilidade do medicamento em minhas células ao longo de 48 horas. Monitore os picos de DTX e DVR em 227 e 279 nanômetros com tempos de retenção de 1,7 e 5,7 minutos, respectivamente. Apresente os dados como a média mais ou menos desvio padrão da carga do medicamento.

Em seguida, dilua as células recém-preparadas e a água deionizada na proporção de um para 20 na concentração final de polímero de 1,5 miligramas por mililitro. Transfira a solução para um veterinário para medição dinâmica de dispersão de luz. Meça a intensidade do laser de néon de hélio a 173 graus para determinar a dispersão.

Apresente os dados como o tamanho médio Z mais ou menos desvio padrão, juntamente com o índice de polidispersidade ou PDI da distribuição. Depois de preparar o DDM conforme descrito anteriormente, carregue 2,5 mililitros das células my em um de diálise de três mililitros com um corte de peso molecular de 7.000 gramas por mol. Coloque o em 2.5 litros de tampão fosfato de pH 10 milimolar 7.4 durante os intervalos seguintes.

Retire 150 microlitros da solução e substitua por 150 microlitros de tampão novo. Altere o buffer a cada três horas para garantir as condições de sincronização. Analise as amostras usando HPLC de fase reversa para determinar a curva de concentração do medicamento.

Ajustou os dados de liberação do medicamento com base em um modelo de difusão simples com uma associação exponencial de uma fase usando o software estatístico D-T-X-E-V-R e o DDM mostrou estabilidade semelhante no bloco PEG 2000 PLA 1800 ou PEG 2000 bloco PLA 2200 ao longo de 48 horas. Todas as minhas células retiveram 97% ou mais da carga inicial em 48 horas em temperatura ambiente. Com base nos resultados dinâmicos de espalhamento de luz, todas as minhas células mostraram uma distribuição unimodal com valores de PDI inferiores a 0,2.

Com base nos dados, a liberação de DTX de mycells individuais e DDM foi de aproximadamente 60% em 48 horas. A liberação de EVR de células individuais my e DDM foi de 60% e 50%, respectivamente. O tempo necessário para a liberação de 50% do medicamento de células individuais e DDM e os dados de qualidade de ajuste são apresentados aqui.

A bondade do ajuste da curva para todas as minhas células, exceto EVR individual, minhas células está acima de 0,950, o que significa que a suposição de liberação de primeira ordem é uma boa aproximação para explicar a liberação de drogas de minhas células individuais e DDM Uma vez dominadas, essas técnicas podem ser feitas rotineiramente em uma biblioteca de drogas e polímeros como minhas células em questão de horas a semana. Ao participar deste procedimento, é importante lembrar de caracterizar completamente as células my antes de acessar a cultura de células ou os modelos animais seguindo esses procedimentos. Outros sistemas de entrega, como o sistema de liberação lipossomal, também podem ser avaliados ou caracterizados para responder à pergunta sobre o papel do sistema de liberação de medicamentos na eficácia do tratamento.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como preparar e caracterizar o carregamento de drogas em minhas células antes de avaliá-las na doença. Estado de interesse.