Name: Determinando Preferências Ultrasonic vocalização em ratos utilizando um teste de reprodução de dois escolha (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Aprenda a determinar preferências de vocalizações ultrassônicas em camundongos usando um teste de reprodução de duas escolhas. Este método permite analisar o reconhecimento e a resposta comportamental a diferentes características de USVs.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabalho foi apoiado por um Grant-in-Aid para JSPS Fellows para AA; por Grants-in-Aid para a Investigação Científica em áreas inovadoras para jsps Fellows (No. 4501 e nº 25132712) para TK; e por um subsídio concedido pelo projeto de pesquisa Azabu University. Figura 2 é reproduzido a partir de Kihara, T., Harada, T., &amp; Koshida, fabricação e características de silício nanocristalino emissores de ultra-som induzido termicamente compatível-Wafer N.. Em: sensores e atuadores A: físico, volume 125, Elsevier, p. 426, (2006), com a permissão da Elsevier.

<html> Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética da Universidade de Azabu o. Todas as experiências foram realizadas numa câmara à prova de som. 1. Preparação de animal <ol><li> Os machos para gravação <ol><li> Obter camundongos machos sexualmente maduros experientes no acasalamento. </li></ol></li><li> Indivíduos do sexo feminino <ol><li> Obter camundongos fêmeas virgens que foram alojados com 2 a 5 ninhada por gaiola (geralmente 8 - 12 semanas de idade). </li><li> Obter esfregaços vaginais diariamente para determinar a fase do ciclo estral antes do teste, de acordo com McLean 21. Cuidados devem ser tomados para minimizar a estimulação vaginal para evitar pseudogravidez. </li><li> Corar as manchas com Giemsa, e determinar a fase do ciclo estral com base na presença ou ausência de leucócitos, células epiteliais cornificadas e nucleadas células epiteliais, de acordo com Nelson 22. </li></ol></li></ol> 2. Dispositivos (Figura 1) _content &quot;&gt; <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53074/53074fig1.jpg" /> Figura 1. Esquema do teste de Box e dispositivos Two-escolha. Os ratos podem acessar salas A e B através das pequenas portas localizadas entre eles ea zona neutra. A caixa-dois e dois emissores escolha de ultra-som são colocados no chão de uma câmara à prova de som. O microfone está suspenso dentro da câmara à prova de som. Abreviatura:. PC, computador pessoal <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53074/53074fig1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <ol><li> Para Gravação <ol><li> Ligue um microfone condensador de ultra-som a um PC usando um conversor USB A / D. </li><li> Defina o nível de ganho do conversor A / D para &quot;7&quot;. </li><li> Dados acústicos, discos em arquivos de formato de 16 bits com uma taxa de amostragem de 400 kHz usando o software de captura de áudio. </li></ol></li><li> Para Reprodução <ol><li> Conecte um conversor D / A para o PC usandouma interface USB. </li><li> Conecte dois amplificadores para o conversor D / A através de um atenuador. (Este último dispositivo serve para evitar a sobrecarga.) </li><li> Conecte um emissor de ultra-som para cada amplificador. </li></ol></li></ol> 3. USV gravação <ol><li> Coloque um rato macho em uma pequena (17 x 10 x 11 cm) ou (21 x 14 x 13 cm) gaiola de tamanho médio com um buraco de seis centímetros de diâmetro na parede lateral eo buraco coberto com uma tela de arame de 0,5 centímetros. Quando se utiliza uma gaiola de tamanho médio, construir uma partição entre o centro da gaiola para reduzir a área. </li><li> Não use roupas de cama na gaiola para evitar ruídos sussurrantes que podem contaminar as gravações. </li><li> Coloque um microfone ao lado da malha. </li><li> Iniciar o monitoramento vocalização ultra-sônica com a configuração de gravação mostrado na etapa 2.1. </li><li> Coloque um rato fêmea sexualmente madura em qualquer metaestro ou diestro na gaiola com o rato macho. </li><li> USVs recorde para 3-5 min. </li></ol> 4. Test Box <ol><li> Construir caixa de teste usando a placa de acrílico (Figura 1). Nota: A caixa de teste (35 x 20 e 20 x cm de altura) é dividido em três compartimentos: a zona neutra (15 x 20 cm), e quartos A e B (20 x 10 cm, cada). Salas A e B cada um tem um buraco de 4 cm de diâmetro, que é coberta com uma malha de arame de 0,5 centímetros. Os buracos da malha e estão localizados em cada extremidade de salas A e B. Adicione portões (5 x 5 cm cada) entre a zona neutra e salas A e B. </li><li> Para evitar fuga de som isolar cada emissor de ultra-sons, com excepção para o lado voltado para a malha, utilizando placas de borracha, selando-os para a caixa em torno do perímetro de cada malha. </li><li> Lugar de chumbo vedantes em ambos os lados da parede entre os quartos A e B para isolamento de som. </li></ol> 5. Preparação para a reprodução de som <ol><li> Criação de sons de reprodução <ol><li> Captar um segmento de 20 segundos de USV do arquivo gravado usando o software de edição de áudio digital. </li><li> Selecione e captar o fundo nãoise (0,35 seg) do arquivo de segmento 20 seg USV. Crie um arquivo de ruído de fundo 20 segundos, repetindo o segmento de ruído. </li><li> Para reproduzir os dois arquivos de som em simultâneo, exportá-los como um único arquivo de som estéreo, com um arquivo para a &quot;orelha esquerda&quot; e outro arquivo para a &quot;orelha direita.&quot; </li><li> Filtrar os arquivos de som usando como filtro passa-alta com um corte de 40 kHz. </li><li> Reduzir o ruído utilizando a ferramenta de redução de ruído no software de pós-processamento. Selecione e capturar um segmento do arquivo que não contém USVs como o perfil de redução de ruído, e executar a redução do ruído com nível 40. </li></ol></li><li> Calibragem dos Sons Reprodução <ol><li> Certifique-se de que o espaço entre os emissores de ultra-som e microfone é de 10 cm. </li><li> Para calibrar os níveis de pressão sonora de os emissores de ultra-som, realizar o monitoramento de ultra-som usando a configuração descrita no Passo 2.1. Medir o nível de pressão sonora pelo microfone em decibéis (dB). </li><li> Using do atenuador e amplificadores, ajustar o volume dos USVs geradas pelos emissores de ultra-sons para o mesmo nível de pressão do som como os USVs macho gravados no Passo 3. </li><li> Ao usar os dois emissores de ultra-som e um arquivo de som composto por USVs e ruído de fundo, confirmar que os dois emissores de ultra-som apresentar o mesmo nível de pressão sonora utilizando um som de calibração (por exemplo, um tom puro de 75 kHz), antes de realizar o teste comportamental. </li><li> Ao reproduzir um arquivo de som composto por duas correntes de USVs, ajuste os dois níveis de pressão sonora gerada para o mesmo nível, antes do teste. </li></ol></li></ol> 6. Teste Duas escolha <ol><li> Coloque os emissores de ultra-som por trás das malhas da caixa de teste. </li><li> Feche as portas para salas A e B com uma placa de acrílico, e habituar o assunto do sexo feminino para a zona neutra para 30 min. Cobrir a caixa com placa de acrílico para evitar que o rato pode escapar. </li><li> Iniciar a gravação de vídeo usando um CCD câmara montada por cima da caixa. A câmara (não mostrada na Figura 1) abrange a área de todos os três compartimentos. </li><li> Retire a tampa e porta-board e permitir que a fêmea para explorar livremente a caixa de teste, incluindo as zonas de som. </li><li> Uma vez que a fêmea tem investigado as duas malhas, e voltou para a zona neutra, começar a jogar um arquivo de som 20 seg repetidamente para 5 ou 10 min. </li><li> Realizar monitoramento comportamental para 5 ou 10 min. </li><li> Para reduzir pistas olfactivas indesejáveis ​​depositados a partir do objecto anterior, limpar as gaiolas de teste entre os testes com etanol a 70%. </li><li> Mude o local de emissores de ultra-som A e B aleatoriamente para evitar o efeito de viés lado inerente no sentido de quartos A ou B. </li></ol> 7. Análise estatística <ol><li> Usando o software evento de scoring comportamental, analisar os seguintes parâmetros: número total de entradas em cada quarto; duração total de permanência em cada zona intermediária; duração total de permanência em cada zona de som; eduração total de busca de cada malha em frente do emissor de ultra-som. A figura 1 ilustra o que se entende por &quot;zona central&quot; e &quot;zona de som.&quot; Nota: Nos casos em que o rato permanece na linha divisória entre as duas zonas (Figura 1, linha tracejada) determinar os locais pela direcção da cabeça. Quando a cabeça voltada para o lado da malha, ele é marcado como uma estadia na zona de som. </li><li> Para cada parâmetro comportamental, comparar as respostas para as salas A e B utilizando um teste de sinais com posto Wilcoxon, ou -Testes t pareado com nível de significância de 0,05. </li></ol>

<ol><li>Panksepp, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affiliative+behavior%2C+ultrasonic+communication+and+social+reward+are+influenced+by+genetic+variation+in+adolescent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Affiliative behavior, ultrasonic communication and social reward are influenced by genetic variation in adolescent mice.</a> PLoS One. 2 (4), e351(2007).</li>
<li>Scattoni, M. L., Ricceri, L., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unusual+repertoire+of+vocalizations+in+adult+BTBR+T%2Btf%2FJ+mice+during+three+types+of+social+encounters%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Unusual repertoire of vocalizations in adult BTBR T+tf/J mice during three types of social encounters.</a> Genes Brain Behav. 10 (1), 44-56 (2010).</li>
<li>Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+and+usage+of+female+and+male+mouse+ultrasonic+vocalizations+reveal+only+minor+differences%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The structure and usage of female and male mouse ultrasonic vocalizations reveal only minor differences.</a> PLoS One. 7 (7), e41133(2012).</li>
<li>Merten, S., Hoier, S., Pfeifle, C., Tautz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+ultrasonic+vocalisation+in+social+communication+and+divergence+of+natural+populations+of+the+house+mouse+%28Mus+musculus+domesticus%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A role for ultrasonic vocalisation in social communication and divergence of natural populations of the house mouse (Mus musculus domesticus).</a> PLoS One. 9 (5), e97244(2014).</li>
<li>Amato, F. R., Moles, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+vocalizations+as+an+index+of+social+memory+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic vocalizations as an index of social memory in female mice.</a> Behav. Neurosci. 115 (4), 834-840 (2001).</li>
<li>Chabout, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+male+mice+emit+context-specific+ultrasonic+vocalizations+that+are+modulated+by+prior+isolation+or+group+rearing+environment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Adult male mice emit context-specific ultrasonic vocalizations that are modulated by prior isolation or group rearing environment.</a> PLoS One. 7 (1), e29401(2012).</li>
<li>Ehret, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infant+rodent+ultrasounds%E2%80%93a+gate+to+the+understanding+of+sound+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Genet%22%5BJournal%5D)">Infant rodent ultrasounds–a gate to the understanding of sound communication.</a> Behav. Genet. 35 (1), 19-29 (2005).</li>
<li>Holy, T. E., Guo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+songs+of+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic songs of male mice.</a> PLoS Biol. 3 (1), e386(2005).</li>
<li>Portfors, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Types+and+functions+of+ultrasonic+vocalizations+in+laboratory+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Assoc.+Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Types and functions of ultrasonic vocalizations in laboratory rats and mice.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 46 (1), 28-34 (2007).</li>
<li>Holfoth, D. P., Neilans, E. G., Dent, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrimination+of+partial+from+whole+ultrasonic+vocalizations+using+a+go%2Fno-go+task+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Acoust.+Soc.+Am%22%5BJournal%5D)">Discrimination of partial from whole ultrasonic vocalizations using a go/no-go task in mice.</a> J. Acoust. Soc. Am. 136 (6), 3401(2014).</li>
<li>Neilans, E. G., Holfoth, D. P., Radziwon, K. E., Portfors, C. V., Dent, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrimination+of+ultrasonic+vocalizations+by+CBA%2FCaJ+mice+%28Mus+musculus%29+is+related+to+spectrotemporal+dissimilarity+of+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Discrimination of ultrasonic vocalizations by CBA/CaJ mice (Mus musculus) is related to spectrotemporal dissimilarity of vocalizations.</a> PLoS One. 9 (1), e85405(2014).</li>
<li>Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+mice+respond+to+male+ultrasonic+%E2%80%98songs%E2%80%99+with+approach+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Female mice respond to male ultrasonic ‘songs’ with approach behaviour.</a> Biol. Lett. 5 (5), 589-592 (2009).</li>
<li>Musolf, K., Hoffmann, F., Penn, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+courtship+vocalizations+in+wild+house+mice%2C+Mus+musculus+musculus%5BTitle%5D)+AND+%22Anim.+Behav%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic courtship vocalizations in wild house mice, Mus musculus musculus.</a> Anim. Behav. 79 (3), 757-764 (2010).</li>
<li>Asaba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+social+environment+imprints+female+preference+for+male+song+in+iice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Developmental social environment imprints female preference for male song in iice.</a> PloS one. 9 (2), e87186(2014).</li>
<li>Uematsu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+approaches+to+pup+ultrasonic+vocalizations+produced+by+a+nanocrystalline+silicon+thermo-acoustic+emitter%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Maternal approaches to pup ultrasonic vocalizations produced by a nanocrystalline silicon thermo-acoustic emitter.</a> Brain Res. 1163, 91-99 (2007).</li>
<li>Okabe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+social+experience+and+gonadal+hormones+on+retrieving+behavior+of+mice+and+their+responses+to+pup+ultrasonic+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22Zoolog.+Sci%22%5BJournal%5D)">The effects of social experience and gonadal hormones on retrieving behavior of mice and their responses to pup ultrasonic vocalizations.</a> Zoolog. Sci. 27 (10), 790-795 (2010).</li>
<li>Okabe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pup+odor+and+ultrasonic+vocalizations+synergistically+stimulate+maternal+attention+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Pup odor and ultrasonic vocalizations synergistically stimulate maternal attention in mice.</a> Behav. Neurosci. 127 (3), 432-438 (2013).</li>
<li>Shinoda, H., Nakajima, T., Ueno, K., Koshida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermally+induced+ultrasonic+emission+from+porous+silicon%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Thermally induced ultrasonic emission from porous silicon.</a> Nature. 400 (6747), 853-855 (1999).</li>
<li>Kihara, T., Harada, T., Koshida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wafer-compatible+fabrication+and+characteristics+of+nanocrystalline+silicon+thermally+induced+ultrasound+emitters%5BTitle%5D)+AND+%22Sensor.+Actuat.+A-Phys%22%5BJournal%5D)">Wafer-compatible fabrication and characteristics of nanocrystalline silicon thermally induced ultrasound emitters.</a> Sensor. Actuat. A-Phys. 125 (2), 422-428 (2006).</li>
<li>Kikusui, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross+fostering+experiments+suggest+that+mice+songs+are+innate%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Cross fostering experiments suggest that mice songs are innate.</a> PloS One. 6 (3), e17721(2011).</li>
<li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+Vaginal+Lavage%2C+Crystal+Violet+Staining%2C+and+Vaginal+Cytological+Evaluation+for+Mouse+Estrous+Cycle+Staging+Identification%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification.</a> J. Vis. Exp. (67), e4389(2012).</li>
<li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL%2F6J+mice%3A+I.+Cycle+frequency%2C+length+and+vaginal+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li>
<li>Tomihara, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+ER-beta+gene+disruption+on+estrogenic+regulation+of+anxiety+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Effect of ER-beta gene disruption on estrogenic regulation of anxiety in female mice.</a> Physiol. Behav. 96 (2), 300-306 (2009).</li>
<li>Zheng, Q. Y., Johnson, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+loss+associated+with+the+modifier+of+deaf+waddler+%28mdfw%29+locus+corresponds+with+age-related+hearing+loss+in+12+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hear.+Res%22%5BJournal%5D)">Hearing loss associated with the modifier of deaf waddler (mdfw) locus corresponds with age-related hearing loss in 12 inbred strains of mice.</a> Hear. Res. 154 (1-2), 45-53 (2001).</li>
<li>Haga, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+male+mouse+pheromone+ESP1+enhances+female+sexual+receptive+behaviour+through+a+specific+vomeronasal+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The male mouse pheromone ESP1 enhances female sexual receptive behaviour through a specific vomeronasal receptor.</a> Nature. 466 (7302), 118-122 (2010).</li>
<li>Grimsley, J. M., Monaghan, J. J., Wenstrup, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+social+vocalizations+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of social vocalizations in mice.</a> PLoS One. 6 (3), e17460(2011).</li>
<li>Sugimoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+strain+differences+in+waveforms+of+ultrasonic+vocalizations+during+male-female+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A role for strain differences in waveforms of ultrasonic vocalizations during male-female interaction.</a> PLoS ONE. 6 (7), (2011).</li>
<li>Hanson, J. L., Hurley, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+presence+and+estrous+state+influence+mouse+ultrasonic+courtship+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Female presence and estrous state influence mouse ultrasonic courtship vocalizations.</a> PLoS One. 7 (7), e40782(2012).</li>
<li>Wang, H., Liang, S., Burgdorf, J., Wess, J., Yeomans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+vocalizations+induced+by+sex+and+amphetamine+in+M2%2C+M4%2C+M5+muscarinic+and+D2+dopamine+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic vocalizations induced by sex and amphetamine in M2, M4, M5 muscarinic and D2 dopamine receptor knockout mice.</a> PLoS One. 3 (4), (2008).</li>
<li>Moles, A., Kieffer, B. L., D'Amato, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficit+in+attachment+behavior+in+mice+lacking+the+mu-opioid+receptor+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Deficit in attachment behavior in mice lacking the mu-opioid receptor gene.</a> Science. 304 (5679), 1983-1986 (2004).</li>
<li>Hiramoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tbx1%3A+identification+of+a+22q11.2+gene+as+a+risk+factor+for+autism+spectrum+disorder+in+a+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Tbx1: identification of a 22q11.2 gene as a risk factor for autism spectrum disorder in a mouse.</a> Hum. Mol. Genet. 20 (24), 4775-4785 (2011).</li>
<li>Ey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+deficits+in+social+behaviors+and+ultrasonic+vocalizations+in+later+generations+of+mice+lacking+neuroligin4%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Absence of deficits in social behaviors and ultrasonic vocalizations in later generations of mice lacking neuroligin4.</a> Genes Brain Behav. , (2012).</li>
<li>Roy, S., Watkins, N., Heck, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+analysis+of+ultrasonic+vocalizations+in+a+mouse+model+of+fragile+X+syndrome+reveals+limited%2C+call+type+specific+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comprehensive analysis of ultrasonic vocalizations in a mouse model of fragile X syndrome reveals limited, call type specific deficits.</a> PLoS One. 7 (9), e44816(2012).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses conflitantes.

Aqui, os resultados de um teste representativo mostraram que camundongos fêmeas podem discriminar entre USVs machos artificiais e ruído de fundo (Figura 3). A conclusão a ser tirada desses resultados é que o sinal de discriminação se reflete no tempo de permanência na sala e na zona sonora e na duração da busca na tela nos primeiros 5 minutos de teste, mas não nos segundos 5 minutos (Figura 3C, E e F). Esses dados indicam que os camundongos se habituam aos sons de reprodução, possivelmen...

Muitos animais usam vocalizações para a comunicação intra-específica. No musculus rato Mus, um importante tipo de sinal de comunicação é vocalizações ultra-sônicas (USVs), que têm frequências superiores a 20 kHz. USVs emitidos pelos ratos são considerados um componente de reconhecimento social em masculino-feminino 1-4, fêmea-fêmea 1, 5, e macho-macho 1, 6 interações. USVs também são emitidos por filhotes quando eles são isolados a partir de sua mãe, o que aumenta o seu comportamento de recuperação de cachorro, e, portanto, a sobrevivência dos cachorros 7. Embora muitos relatórios analisados ​​e categorizados USVs rato 8, 9, as respostas comportamentais e mecanismos neurais do animal que recebeu foram documentados menos 10, 11. O último é necessário clarificar o significado biológico das várias características de USVs. Para revelar destes mecanismos, o experimento de reprodução é um método eficiente. Estudos recentes revelaram que a reprodução femininaratos são atraídos para USVs 12, e que eles preferem USVs de homens que são diferentes de seus pais 13, 14. Este artigo explica o ensaio utilizado para avaliar a reprodução preferência USV em ratinhos. Uma caixa de teste de dois escolha foi desenvolvido no qual dois USVs diferentes podem ser reproduzidos simultaneamente em dois compartimentos de uma câmara de ensaio, como se mostra na Figura 1. Este tipo de caixa de teste evita a contaminação do som através da divisão da área de teste em três sub-câmaras , usando paredes de chumbo. Os emissores de ultra-som estão localizados fora cada quarto. Na parede entre os quartos e emissores de ultra-som são buracos cobertos com malha de arame. Ratos podem circular livremente nos três quartos, e mostrar uma &quot;busca da malha&quot; comportamento, como se para responder a USVs reproduzidos pelos emissores de ultra-som. Neste teste, os ratos permanecer por períodos de duração diferente perto de um emissor de som ou de outro. Estes parâmetros podem estar logado para obter uma sensível measu<html> re de preferências de som. Para reproduzir as USVs volta, silício nanocristalino emissores termo-acústicos (ie, &quot;emissor nc-Si&quot;) foram utilizados como em estudos anteriores 15-17. Estes dispositivos são constituídos por um eléctrodo de película fina aquecedor, uma camada de silício nanoporoso, e uma pastilha de silício monocristalino. O ficheiro de som digital é convertido para um sinal analógico e, em seguida, passado através do aquecedor de eléctrodo. O dispositivo converte os sinais térmicos dependentes da voltagem, resultando em pressão sonora significativa com baixa distorção. Este dispositivo é único na medida em que, ao contrário de geradores de som comuns que dependem de vibrações mecânicas, ele pode reproduzir som sem a necessidade de um diafragma. O emissor apresenta um nível de pressão sonora plana a frequências de 20 a 160 kHz (Figura 2), e pode reproduzir USVs murino gravados digitalmente de forma muito precisa em termos de duração, freqüência e nível de pressão sonora de 15, 18, ​​19. ve_content &quot;&gt; Em uma experiência representativa mostrada na Figura 3, C57BL / 6 (B6) fêmeas foram autorizados a escolher entre BALB / c (BALB) USVs macho e ruído de fundo. Além disso, a Figura 4 mostra a escolha das fêmeas B6 e BALB entre playbacks USV simultâneas de um BALB e um macho B6, conforme relatado em um estudo anterior 14. As características dos USVs masculinos diferem entre B6 e BALB estirpes 20. Como mostrado por estes resultados, a atratividade de USVs pode ser avaliada com o presente protocolo, em que os sons são gravados a partir de um indivíduo vivo, acústico analisado, e jogou de volta para outros indivíduos.

<table><tbody><tr><td>Câmara à prova de som</td><td>Muromachi Kikai</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gaiola pequena</td><td>CLEA Japão</td><td>CL-0113-1</td><td></td></tr><tr><td>Gaiola média</td><td>CLEA Japão</td><td>CL-0103-1</td><td></td></tr><tr><td>Microfones condensadores ultrassônicos</td><td>Avisoft Bioacoustics</td><td>CM16/CMPA</td><td></td></tr><tr><td>Conversor A/D</td><td>Avisoft Bioacoustics</td><td>UltraSoundGate116H</td><td></td></tr><tr><td>Áudio software</td><td>Avisoft Bioacoustics</td><td>RECORDER USGH</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Audition 3.0 / Software de edição de áudio</td><td>Adobe Systems</td><td>Adobe Audition 3.0</td><td></td></tr><tr><td>Nc-Si emissor</td><td>Original</td><td></td><td>não disponível comercialmente, mas está planejado para ser assim em um futuro próximo</td></tr><tr><td>Conversor D/A</td><td>National Instruments</td><td>NI USB-6251 BNC</td><td></td></tr><tr><td>Atenuador</td><td>Original</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amplificador</td><td>Yamatake</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PC</td><td>Windows 7 profissional</td><td></td><td>Intel&reg; core i7-2600K CPU @ 3,4 GHz, 8 GB de RAM, sistema operacional de 64 bits</td></tr><tr><td>Gravador de eventos Excel-macro / Software de pontuação de eventos</td><td>original</td><td></td><td>Programado por Naoto Akagawa & Placas</td></tr> de borracha da <tr><td>câmera</td><td></td><td></td><td></td>CCD</tr> Takeru Yamamoto <tr><td>(feitas de resina de elastômero)</td> <td>Tokyo bouon</td><td>TI-75BK B4</td><td>Corte-as no tamanho adequado http://www.piano-bouon.jp/shopping/?pid=1329272401-447630&ca=6&p=3</td></tr><tr><td>solução de azul de metileno de eosina azur de Giemsa</td><td>Merck Millipore</td><td>1.09204.0500</td><td></td></tr></tbody></table>

determinando preferências ultrasonic vocalização em ratos utilizando um teste de reprodução de dois escolha

Determining Ultrasonic Vocalization Preferences in Mice using a Two-choice Playback Test

Os camundongos emitem vocalizações ultrassônicas (USVs) durante uma variedade de condições, como isolamento de filhotes e interações sociais adultas. Esses USVs diferem com idade, sexo, condição e histórico genético do animal emissor. Embora muitos estudos tenham caracterizado essas diferenças, ainda não foi elucidado se os camundongos receptores podem discriminar entre USVs objetivamente diferentes e mostrar preferências por características sonoras específicas. Para determinar se os camundongos podem discriminar entre diferentes características dos USVs, um experimento de reprodução foi desenvolvido recentemente, no qual as respostas de preferência dos camundongos a dois USVs diferentes podem ser avaliadas na forma de uma preferência de local.
Primeiro, USVs de camundongos foram registrados. Em seguida, os USVs gravados foram editados, cortados de acordo e exportados como arquivos de som estereofônico. Em seguida, as amplitudes de USV geradas pelos dois emissores de ultrassom utilizados no experimento foram ajustadas para o mesmo nível de pressão sonora. Emissores termoacústicos de silício nanocristalino foram usados para reproduzir os USVs. Finalmente, para investigar a preferência dos camundongos sujeitos a USVs selecionados, pares de dois sinais USV diferentes foram reproduzidos simultaneamente em uma caixa de teste de duas escolhas. Ao entrar repetidamente em uma zona definida perto de um emissor de ultrassom e pesquisar a tela de arame na frente do emissor, o mouse revela sua preferência por um som em detrimento de outro. Este modelo permite comparar a atratividade das várias características dos USVs de mouse, em vários contextos.

Os USVs gravado a partir de um ratinho BALB-macho (161 sílabas por 20 seg), bem como o ruído de fundo foram usadas como a reprodução de sons na experiência representativa mostrada na Figura 3. Nesta experiência, 7 ratinhos B6 fêmeas foram usadas às 9 semanas de idade . Para determinar a melhor duração de teste de resposta feminina para reproduzir sons, os parâmetros comportamentais foram analisados ​​separadamente para as primeira e a última de cinco minutos de tempo total de ensaio de 10 min. <p cl...

As vocalizações ultrassônicas (USVs) em camundongos diferem dependendo da idade, sexo, condição e histórico genético. Usando dois emissores de ultrassom transmitindo simultaneamente em locais diferentes, este teste de duas opções pode avaliar o reconhecimento murino e as respostas de preferência a diferentes características dos USVs.

Determinando Preferências Ultrasonic vocalização em ratos utilizando um teste de reprodução de dois escolha

Mice emit ultrasonic vocalizations (USVs) during a variety of conditions, such as pup isolation and adult social interactions. These USVs differ with age, ...

O objetivo geral deste procedimento é determinar as preferências por vocalizações ultrassônicas ou USVs em camundongos utilizando um teste de reprodução com duas opções. Isso é realizado primeiramente gravando USVs de um indivíduo vivo. O segundo passo consiste em editar e recortar adequadamente as USVs gravadas e gerar arquivos sonoros estereofônicos.Em seguida, os emissores de ultrassom são calibrados e o volume do USV é ajustado. Usando o atenuador e os amplificadores, o passo final é introduzir o camundongo experimental na caixa de teste e iniciar a reprodução simultânea dos dois arquivos sonoros. Em última análise, o monitoramento comportamental pode revelar se o camundongo demonstra preferência por um som em relação ao outro.Os emissores de USV que desenvolvemos podem nos ajudar a responder perguntas fundamentais sobre as minhas comunicações acústicas, como partes envolvidas e significado biológico de diferentes tipos de USV. A principal vantagem do nosso emissor em relação a dispositivos existentes, como os transdutores piezoelétricos, é que a resposta em frequência não apresenta picos ressonantes. A emissão ampla no espectro de ultrassom, sem distorções harmônicas, torna possível utilizar o emissor para reproduzir cursos complexos de comunicação acústica.Este método pode fornecer informações sobre a resposta feminina frente a machos ou espermatozoides. Também pode ser aplicado a outros tipos de interação social, como entre mãe e filhotes, entre machos adultos e entre fêmeas adultas. Para começar, obtenha camundongos machos com experiência sexual e camundongos fêmeas vírginas, e acompanhe o ciclo de estro realizando esfregaços vaginais diariamente.Coloque as extensões com Giemsa e determine a fase do ciclo estral de acordo com os procedimentos padrão. Para registrar vocalizações ultrassônicas ou USVs, conecte um microfone condensador ultrassônico a um PC usando um conversor analógico-digital USB.Defina o nível de ganho no conversor AD para sete e grave os dados acústicos em 16 bits. Formate os arquivos com uma taxa de amostragem de 400 quilohertz usando software de captura de áudio para reprodução sonora, conecte um conversor DA ao PC e, em seguida, conecte dois amplificadores ao conversor DA por meio de um atenuador. Repare uma pequena gaiola com um orifício na parede lateral com seis centímetros de diâmetro. Cubra o orifício com uma malha de arame de 0,5 centímetro.Evite usar cama ou qualquer outro material que possa produzir ruídos de farfalhar e contaminar a gravação. Posicione o microfone de ultrassom ao lado do orifício coberto com malha. Quando estiver pronto.Coloque um camundongo macho e uma camundongo fêmea sexualmente madura em estro ou diestro na gaiola. Registre os comportamentos por três a cinco minutos.A caixa de teste é dividida em três compartimentos: uma zona neutra e os cômodos A e B, cada um com portas. Separe a zona neutra dos outros cômodos. Os cômodos A e B possuem cada um um orifício de quatro centímetros coberto com tela de arame na extremidade.Coloque o emissor de ultrassom contra a malha e rodeie-o com placas de borracha para evitar vazamento sonoro. Coloque selos de chumbo em ambos os lados da parede entre os ambientes A e B para isolamento acústico, a fim de criar os sons de reprodução. Capture um segmento de 22 segundos dos USBs a partir do arquivo previamente gravado.Utilizando software de edição de áudio digital, selecione e capture o ruído de fundo deste segmento e crie um arquivo de ruído de fundo de 22 segundos repetindo o segmento de ruído para reproduzir simultaneamente os dois arquivos sonoros. Exporte-os simultaneamente como um único arquivo sonoro estéreo, com um arquivo para o ouvido esquerdo e outro para o ouvido direito. Filtre os arquivos sonoros utilizando um filtro passa-alta com frequência de corte de 40 quilohertz.Reduza o ruído utilizando a ferramenta de redução de ruído. No software de pós-processamento, selecione e capture um segmento do arquivo que não contenha VS.UA como perfil de redução de ruído e execute a redução de ruído com nível 40 para calibrar os níveis de áudio durante a reprodução. Primeiro, posicione o microfone a 10 centímetros de distância dos emissores de ultrassom.Inicie a reprodução e meça o nível de pressão sonora em decibéis. Use o atenuador e os amplificadores para ajustar o volume dos USv gerados pelos emissores de ultrassom ao mesmo nível de pressão sonora dos USv masculinos.Registrado anteriormente. Confirme que os dois emissores de ultrassom exibem o mesmo nível de pressão sonora utilizando um som de calibração ao reproduzir um arquivo sonoro composto por dois fluxos de us. Ajuste os dois níveis de pressão sonora gerados para o mesmo nível.Para iniciar o teste de escolha dupla, feche as comportas dos compartimentos A e B e habitue o sujeito fêmea à zona neutra. Por 30 minutos, cubra a caixa com uma placa de acrílico para evitar a fuga. Após 30 minutos, grave todo o procedimento usando uma câmera de vídeo montada acima da caixa.Remova o portão e permita que a fêmea explore livremente o restante da caixa de teste, incluindo as zonas sonoras. Após a fêmea investigar ambos os círculos de tela e retornar à zona neutra, comece a reproduzir o 22º arquivo de som preparado anteriormente. Monitore o comportamento do animal por cinco a 10 minutos enquanto reproduz repetidamente o arquivo de som.Altere aleatoriamente a localização dos emissores de ultrassom para evitar criar um viés lateral entre os dois ambientes. Camundongos fêmeas não demonstraram preferência entre os ambientes A e B quando permitidos explorar as câmaras antes da reprodução do som. O número de entradas nos ambientes foi semelhante entre as câmaras contendo ruído de fundo ou US masculino versus.No entanto, os indivíduos passaram um tempo significativamente maior na câmara em que us vs foram regenerados, especialmente nos primeiros cinco minutos. A exploração da zona central não foi alterada pela reprodução do som.Fêmeas passaram significativamente mais tempo na zona sonora e procurando na tela de arame na câmara reproduzindo US masculino em comparação com. Especialmente nos primeiros cinco minutos, tanto B seis quanto bub. Fêmeas passaram mais tempo investigando o lado associado aos machos s vs de outra linhagem.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como determinar a preferência por spray em camundongos utilizando um teste de sabor com duas opções após o seu desenvolvimento. Esta técnica abriu caminho para pesquisadores da área ou da pesquisa com marca para explorar a interação humano-som. Os USV em camundongos diferem dependendo da idade, condição sexual e fundo genético.Após este procedimento, os perfis USB de massas transgênicas podem ser medidos para determinar se os USBs de envio e salvamento estão alterados.

determining-ultrasonic-vocalization-preferences-mice-using-two-choice

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

As vocalizações ultrassônicas de camundongos são usadas como proxies para modelar as bases genéticas dos déficits de comunicação vocal em modelos de camundongos para distúrbios neuropsiquiátricos. O presente protocolo descreve três contextos experimentais que provocam vocalizações ultrassônicas de forma confiável de filhotes (ao longo do desenvolvimento) e camundongos adultos (interações entre pessoas do mesmo sexo, interações macho-estro feminino).

Gravação mouse ultra-som vocalizações para avaliar Comunicação Social

Os ratos produzem um complexo repertório multisilábico de vocalizações ultra-sônicas (USVs). Estes USVs são amplamente utilizados como leituras para transtornos neuropsiquiátricos. Este protocolo descreve algumas das práticas que aprendemos e desenvolvemos para consistentemente induzir, coletar e analisar as características acústicas e sintaxe de canções de mouse.

Eliciando e Analisando Canções de Vocalização Ultrassônica de Rato Masculino (USV)

As medidas labirinto ansiedade-como o comportamento em roedores. Existem dois oposta fechada e dois braços abertos opostos; roedores ansiosas evitar os braços abertos. A área central é nem completamente aberta nem fechada, assim que o tempo gasto aqui é ambígua e difícil de interpretar. Aqui uma modificação do protocolo de labirinto eliminar esta área é descrito.

O Becos Teste sucessiva de ansiedade em camundongos e ratos

Este artigo apresenta um protocolo para um teste de condicionamento do medo contextual e cued usando um sistema de vídeo de análise para avaliar o medo de aprendizagem e memória em camundongos.

Contextual e Cued Medo Condicionado Teste Usando um sistema de análise de vídeo em Ratos

Este protocolo descreve a placa de furo modificada, que é uma configuração de teste comportamental que compreende as características de um campo aberto e uma placa de furo tradicional. Essa configuração permite a análise diferencial do comportamento incondicionado de pequenos mamíferos de laboratório, bem como a análise das habilidades cognitivas.

The Hole Board Modificado - Medir Comportamento, Cognição e Interação Social em camundongos e ratos

Pesquisas anteriores sobre a dimensão social do estresse se concentraram em duas variáveis importantes: identidade social e suporte social. Este protocolo introduz uma manipulação experimental eficaz dessas duas variáveis sociais e descreve sua implementação em um paradigma padrão de indução de estresse (Teste de Estresse Social de Trier).

A Dimensão Social do Stress: Manipulações experimentais de apoio social e de identidade social no Trier Social Stress Teste

O sabor doce tem um poderoso apelo hedônico entre pessoas de todas as idades, principalmente crianças. Aqui está descrito um método confiável e válido que pode ser usado para determinar o nível de doçura mais preferido, tornando-o uma ferramenta psicofísica valiosa para os cientistas.

Psicofísica Rastreamento método para medir preferências alimentares nas crianças e adultos

Uma versão rato da Vigilância testes psicomotores humana (PVT) é descrito que mede aspectos de atenção semelhantes aos medido com o PVT humano, incluindo os aspectos da vigilância humana, tais como a precisão do desempenho, velocidade do motor, respondendo prematuro e lapsos de atenção.

O psicomotora Teste Rodent Vigilância (rPVT): um método para avaliar Neurobehavioral Desempenho em ratos e camundongos

O teste de reconhecimento de objeto (ORT) é um ensaio simples e eficiente para a avaliação da aprendizagem e memória em camundongos. A metodologia é descrita abaixo.

Teste de reconhecimento de objeto romance para a investigação da aprendizagem e memória em ratos

Este protocolo descreve a preferência de lugar condicionado (CPP) como um modelo de recaída. Este procedimento permite a medição de recaída em animais de laboratório, considerando o impacto das drogas associadas Dicas ambientais como desejo e recaída em viciados em ausência é, atualmente, o foco dos programas de tratamento do abuso de drogas.

Reintegração de busca de drogas em ratos utilizando o paradigma de preferência lugar condicionado

Aprenda a determinar preferências de vocalizações ultrassônicas em camundongos usando um teste de reprodução de duas escolhas. Este método permite analisar o reconhecimento e a resposta comportamental a diferentes características de USVs.

Determinando Preferências Ultrasonic vocalização em ratos utilizando um teste de reprodução de dois escolha

Explorar mais vídeos