Avaliação da sensibilização comportamental induzida por cocaína e preferência por lugar condicionado em Ratos

O objetivo geral dessas tarefas comportamentais é permitir que os pesquisadores testem comportamentos relacionados a drogas, como recompensa e sensibilização. Esses métodos podem ajudar a responder a questões-chave no campo da dependência de drogas, como quais moléculas ou vias contribuem para a plasticidade induzida por drogas. A principal vantagem dessas técnicas é que elas são de alto rendimento e podem ser realizadas usando equipamentos caseiros ou comprados. Quando realizamos ensaios de preferência de local condicionado usando diferentes doses de medicamentos, essa abordagem pode descobrir diferenças resultantes de sensibilidade alterada a medicamentos e fornecer confiança adicional em suas descobertas. Este experimento faz uso de três caixas CPP com câmaras equipadas com feixes fotográficos para coleta automatizada de dados. Tenha quatro ou mais à mão. Este aparelho tem duas grandes câmaras, A e B, nas quais os ratos podem ser introduzidos através de uma tampa. Dentro de cada câmara há uma fonte de luz regulável. As câmaras A e B são visualmente distintas, por exemplo, branco versus preto, e também tactilmente distintas, como com diferentes texturas de piso. Entre as duas grandes câmaras há uma câmara neutra menor e interconectada, ou C, que é acessível por portas deslizantes. Para mais detalhes sobre as caixas CPP, incluindo informações importantes sobre como configurar um design equilibrado, consulte o protocolo de texto. Para esses experimentos, use camundongos que foram submetidos a manuseio regular para minimizar o impacto do manuseio variável dos animais nos resultados. Prepare a sala de teste, limpe bem as caixas CPP. Ligue o equipamento e diminua as luzes da sala. Em seguida, mova os ratos para a área de teste 60 a 90 minutos antes do teste. No primeiro dia de teste, faça um pré-teste. Prepare as câmaras abrindo as portas entre câmaras. Em seguida, abra o programa de computador. Carregue o programa de teste. Nele, insira os IDs dos animais e emita o comando start. Quando estiver pronto, coloque suavemente cada mouse na câmara do meio de seu aparelho designado. Após os pré-testes, devolva os ratos às suas gaiolas domésticas e exporte os dados. A partir dos resultados do pré-teste, determine a preferência de cada animal pelas câmaras A e B. Subtraia o tempo gasto em cada um do outro e use a diferença como índice. Dê especial atenção aos animais com fortes preferências pré-teste, mostradas aqui em vermelho, conforme descrito no protocolo de texto. Selecione a câmara emparelhada de medicamentos para cada mouse com base neste resultado. A soma das pontuações do índice para cada grupo de teste deve ser equivalente e próxima de zero. Em outras palavras, escolha o lado preferido para cerca de metade dos ratos. Além disso, atribua os animais uniformemente às câmaras A e B dentro de cada grupo. Se o condicionamento de vários grupos simultaneamente for desejável, tente atribuir animais que estão usando o mesmo aparelho a câmaras opostas. Para mais detalhes, consulte o protocolo de texto. Uma etapa crítica na preferência de local condicionada ao usar um projeto balanceado é a atribuição das câmaras pareadas de drogas para que as pontuações do pré-teste sejam quase iguais para todos os grupos de teste e o mais próximo possível de zero ou nenhuma preferência. Para começar, sempre pese cada mouse antes da fase de condicionamento. No primeiro dia de condicionamento, prepare seringas com cocaína ou a droga de teste escolhida de acordo com o peso corporal de cada animal. Em dias alternados, prepare seringas com soro fisiológico ou outro veículo apropriado. Prepare as caixas fechando as portas entre câmaras. Carregue o programa de condicionamento no computador, insira os IDs e inicie o programa. Em seguida, injete nos animais seu bolus de drogas ou veículos e carregue-os na caixa designada. É fundamental garantir que o condicionamento ocorra nas câmaras A ou B adequadas para cada camundongo, todos os dias, conforme atribuído, uma vez que erros nesta etapa podem forçar a remoção dos animais do estudo. Após não mais de 30 minutos de condicionamento, devolva os ratos às gaiolas de origem. Quando todos os testes estiverem concluídos, exporte os dados e devolva os camundongos à colônia. Este ensaio faz uso de matrizes de feixes fotográficos de quatro por oito que são de 20 polegadas por 11,5 polegadas. Tenha entre quatro e 16 em mãos. Alojar cada matriz em uma câmara de acrílico preto aberta. Na sala de testes, prepare uma luz vermelha para iluminar as câmaras. No software, prepare as sessões do programa para testes diários de habituação e injeção. Primeiro, defina a duração do teste de habituação para 30 a 60 minutos. Uma hora é um bom ponto de partida. Tenha as quebras de feixe registradas em caixas de cinco minutos ou menos. Em segundo lugar, defina o horário do teste em cada câmara para começar quando o primeiro feixe de fotos for acionado, o que ocorre após o teste ter sido iniciado com um sinal de início. Terceiro, defina a duração do teste de injeção para 60 a 120 minutos. Se possível, para testes de injeção, opte por iniciar os sinais de partida dos feixes fotográficos individualmente e não em uníssono. A sensibilização locomotora requer um teste inicial de 10 ou 11 dias consecutivos. Em cada dia, traga os camundongos para a antessala comportamental 30 a 60 minutos antes do teste. Agora, coloque uma nova gaiola de rato translúcida em cada câmara. Certifique-se de que os feixes fotográficos estejam centralizados no eixo longo de cada gaiola. Quando estiver pronto, remova os ratos em ordem aleatória de suas gaiolas domésticas. Primeiro, raspe e pese-os. Em seguida, coloque cada um em sua gaiola de teste locomotor designada para o teste de habituação e cubra com uma tampa. Cada dia envolve um teste de habituação sem injeção, seguido por um teste de injeção. Durante o teste de habituação, prepare seringas com base no peso corporal atual de cada camundongo. Depois que todos os testes de habituação terminarem, carregue o programa de teste de injeção e entre silenciosamente na sala de testes. Depois de injetar um mouse, emita rapidamente o sinal de início da gaiola no software e, em seguida, retorne o mouse à gaiola de teste. Nos primeiros três a quatro dias de teste, administre solução salina ou outro veículo apropriado. Nos próximos sete dias, administre cocaína ou a droga de teste escolhida. Depois que todos os testes de injeção terminarem, devolva os camundongos ao seu alojamento. No ensaio CPP, camundongos 6n pretos do tipo C57 selvagem foram condicionados apenas com solução salina ou duas concentrações diferentes de cocaína. O grupo apenas com solução salina não mostrou mudança na preferência após o condicionamento, como esperado, enquanto as preferências aumentadas foram observadas nos grupos tratados com cocaína. O tempo gasto em diferentes câmaras pré e pós-teste demonstrou que mais tempo foi gasto na câmara emparelhada com cocaína pelos camundongos tratados com cocaína do que em qualquer outra câmara. Os camundongos que receberam apenas solução salina não mostraram diferenças marcantes na preferência pela câmara, como esperado. Em seguida, o ensaio locomotor foi realizado em camundongos C67 pretos 6n. Injeções de solução salina foram administradas por três a quatro dias, seguidas por injeções de cocaína em quatro doses diferentes por sete dias. Como esperado, mudanças mais pronunciadas no comportamento foram observadas com doses crescentes de cocaína. Para um desafio, após uma a duas semanas de abstinência, cada grupo recebeu a dose original de cocaína. Desafios adicionais foram então administrados com períodos de retirada e doses variáveis. Embora este vídeo tenha demonstrado essas técnicas usando equipamentos adquiridos comercialmente, muitos laboratórios as executaram com sucesso usando dispositivos construídos em casa. Ao tentar esses procedimentos, é importante garantir que todos os animais recebam tratamento igual, a fim de reduzir o estresse, os erros e a variabilidade entre os experimentos. As variáveis a serem consideradas incluem o tempo de manuseio e o tempo gasto na sala de testes e na câmara. Extensões desses ensaios, incluindo extinção e reintegração para CPP e desafios de sensibilização cruzada ou de longo prazo para sensibilização locomotora, podem ser desejáveis. Além disso, é importante usar drogas na