Uma crônica Protocolo de estresse leve Imprevisível para sintomas depressivos Instigando, mudanças de comportamento e resultados negativos de saúde em Roedores

O objetivo geral do experimento a seguir é expor uma linhagem de roedor a uma série de estressores crônicos e imprevisíveis, determinados aleatoriamente, de modo que o animal não consiga se adaptar efetivamente à medida que a gravidade dos sintomas depressivos aumenta. Isso é alcançado pela exposição diária a um dos estímulos possíveis, planejados para serem estressantes, mas sem causar danos ou lesões ao animal. Os animais são expostos aos estressores de cinco a seis dias por semana durante oito semanas em intervalos regulares, sendo monitorados quanto ao desenvolvimento de sintomas depressivos por meio da avaliação do estado clínico e das respostas dos animais a estímulos impostos, como o teste de pulverização de sacarose.

Os resultados mostram que a imposição de estressores crônicos, aleatórios e irresolvíveis ao ambiente do animal impede a capacidade do animal de se adaptar e provoca o desenvolvimento de sintomas depressivos ao longo de várias semanas. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área de doenças crônicas, como a forma pela qual sintomas depressivos crônicos podem levar a desfechos negativos para a saúde em outros tecidos ou sistemas orgânicos. Tivemos inicialmente a ideia de utilizar este método quando tomamos conhecimento das profundas relações comórbidas entre doenças cardiovasculares avançadas e risco de doenças em nossas populações clínicas, bem como da apresentação concomitante de doenças depressivas graves.

Os responsáveis por demonstrar este procedimento serão o Sr. Steven Brooks e a Sra. Kayla Brannon, estudantes de doutorado de nossos laboratórios. Para induzir estresse leve, aloje os camundongos domésticos em gaiolas separadas e exponha-os a um ou dois estressores por dia, durante um mínimo de três a quatro horas para cada estressor. A seguinte lista de estressores deve ser realizada em uma ordem aleatória. Para o estressor de cama úmida, umedeça a cama adicionando de 10 a 20 onças de água limpa em uma gaiola padrão.

Mantenha o camundongo na gaiola úmida por três a quatro horas. Remova a cama da gaiola por três a quatro horas, após as quais transfira o camundongo para outro estressor que exija uma gaiola vazia, ou coloque-o em uma gaiola limpa com cama nova. Incline as gaiolas sem cama em aproximadamente 45 graus por três a quatro horas, utilizando um objeto resistente que permanecerá no lugar enquanto o camundongo se movimenta dentro da gaiola. Para este estressor, altere os ciclos normais de 12 horas de luz e 12 horas de escuro para sucessões de períodos de 30 minutos, totalizando oito horas.

Transfira o camundongo de sua gaiola de origem para a gaiola de um camundongo vizinho que foi removido para o período de estresse de três horas. Remova a cama da gaiola e adicione água até uma profundidade de aproximadamente 0,25 polegadas para camundongos, e deixe o camundongo por cerca de quatro horas. Ao final da exposição à água, seque brevemente o camundongo com uma toalha macia.

Exponha camundongos a predadores, odores ou sons, adicionando tufos distribuídos aleatoriamente ou de 10 a 20 mililitros de urina de uma espécie predadora natural à gaiola, e deixe o camundongo por três a quatro horas. Alternativamente, reproduza sons de rosnado ou predatórios de espécies predadoras naturais próximo às gaiolas por três horas ao final de cada período diário de estresse. Coloque os camundongos em gaiolas limpas e devolva-os diariamente ao ambiente de criação.

Examine cada animal semanalmente quanto ao desenvolvimento de feridas ou úlceras que possam necessitar de tratamento veterinário, contando com dois pesquisadores treinados na avaliação da escala de alopelagem. Examine cada animal e atribua uma pontuação semanal de código em uma escala de zero a um. Calcule a pontuação individual total atribuindo pontuações individuais de zero, significando limpo, ou um, significando sujo, a cada uma das oito regiões corporais.

A cabeça, o pescoço, o dorso, o ventre, a cauda, os quatro membros, os membros posteriores e a região genital. Coloque o animal em uma gaiola limpa forrada com um disco de algodão ou toalha para evitar que a cama adira ao seu pelo. Em seguida, pulverize uma solução de sacarose a 10% sobre a cabeça e o dorso de cada animal e registre o comportamento total de alisamento por cinco minutos.

Meça a latência e a frequência da atividade de limpeza facial durante este período. A latência é o tempo entre a primeira pulverização e o início da limpeza facial, e a frequência deve ser medida pelo número de vezes que o rosto é limpo. Após oito semanas de estresse leve crônico imprevisível, houve alterações significativas nos desfechos comportamentais e fisiológicos em roedores estressados cronicamente em comparação com suas linhagens controle não estressadas.

Camundongos desenvolveram sintomas semelhantes à depressão após estresse leve crônico imprevisível e apresentaram uma diminuição progressiva nos escores de alisamento do pelo. Essa degradação acentuada no estado físico do pelo sugere uma atividade reduzida de alisamento e pode refletir uma falta de motivação. Evidências recentes sugerem que existe uma divergência quantitativa substancial nas respostas ao estresse leve crônico imprevisível entre camundongos machos e fêmeas.

Particularmente, os dados indicam que camundongos fêmeas expostos ao mesmo protocolo de estresse que machos de idade correspondente desenvolvem respostas comportamentais mais graves ao protocolo do que os machos. Após este procedimento, outros métodos apropriados para a função específica do órgão podem ser facilmente realizados para responder perguntas adicionais, como a forma pela qual a presença de sintomas depressivos crônicos pode impactar o funcionamento normal no sistema orgânico de interesse. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como utilizar as diferentes etapas e procedimentos do protocolo UCMS para criar progressivamente as condições de agravamento dos sintomas depressivos em seu modelo roedor.