Name: Escleral reticulação Usando ultravioleta e riboflavina-A radiação de Prevenção de Axial Miopia em um modelo de coelho (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 56 s
Description: Aprenda a técnica de reticulação escleral com riboflavina e radiação UVA para prevenir miopia axial em coelhos. Este método demonstra a aplicação de radiação focada em áreas específicas da esclera.

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Os autores agradecem a Sra Dalia Sela eo Sr. Emi Sharon por seu trabalho técnico profissional e excelente no laboratório.

Os animais foram tratados de acordo com a resolução da ARVO sobre o uso de animais em pesquisa. O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê institucional para o Animal Research Laboratory (aprovação sem 022-4598-2;. 021.211). 1. Preparação para a cirurgia # 1 <ol><li> Pesar e anestesiar um coelho branco da Nova Zelândia 13 dias de idade, com uma injecção intramuscular de cloridrato de cetamina 100 mg / ml (100 mg / kg) e cloridrato de xilazina 25 mg / ml (12,5 mg / kg). Essas doses são utilizados devido à duração do processo cirúrgico. Assegurar nível adequado de anestesia com a falta de um reflexo dor. </li><li> Usando uma mecha de algodão estéril, aplicar uma pequena quantidade de pomada oftálmica para o olho não operado para impedir que a córnea de secar. Aplicar 0,9% de solução salina normal de gotas sobre a córnea do olho operado durante a operação para evitar que as córneas de secar. </li><li> Realizar três medições de comprimento axial em cada olho, após anestesia tópica (oxybuprocaine cloridrato de 0,4%) usando um ultra-som Um scanner e, em seguida, calcular a média das medições. Aplicar a sonda perpendicularmente à córnea central. </li></ol> 2. Cirurgia # 1 - Pré Cruz Passo Linking <ol><li> Utilizando uma pinça oftálmicos cirúrgicos e tesouras sob um microscópio cirúrgico oftálmico, fazer uma peritomia 360 ° conjuntival com uma pinça oftálmicos cirúrgicos e tesouras. </li><li> Usando uma pinça em ângulo ou um gancho muscular identificar os quatro músculos retos extra-oculares e isolá-los com um 2-0 trançado de seda suturas não agulhados. NOTA: As suturas de seda vai ajudar com mover o mundo em direção desejada. O globo ocular é dividido em quadrantes entre os quatro músculos retos (quatro quadrantes). <ol><li> Mark pele com um marcador de duas zonas, em cada quadrante, um na esclera equatorial e um na esclera posterior. Estas são as zonas de irradiação. </li></ol></li><li> Prepare de 3 ml a seringa de 5 ml contendo 0,1% de riboflavina-5-Phosphat livre de dextranoe. Ligar a seringa a uma cânula lacrimal 26 G ou 25 G hydrodelineator cônico. </li><li> Prepara-se o dispositivo de irradiação que inclui uma fonte de luz UV A (370 nm) ligado a um chanfrada para baixo feito por medida de fibra óptica. Após a medição da potência de energia e de calibração (ver nota abaixo), configurar o dispositivo para 57 mW / cm². NOTA: A calibração foi realizada comercialmente pelo fabricante. Este método fornece uma dose total de luz UVA de 57 J / cm². (57 mW / cm 2 em 0,2 cm 2 é de 11,4 mW / 0,2 cm 2 utilizando 11,4 mW / 0,2 cm 2 para 200 segundos é uma carga acumulada de 2,2 J por 0,2 cm 2 spot) </li></ol> 3. Cirurgia # 1 - Cross Linking <ol><li> Mover o globo ocular, puxando as suturas de seda no sentido oposto do quadrante escolhido para ser tratada (por exemplo, Pull-se e quando o tratamento nasal quadrante temporal inferior). Realize o movimento do globo ocular usando uma sutura de seda 2-0 trançado não-needled que isolates cada músculo reto. </li><li> Aplicar a solução fotossensibilizador contendo 0,1% de riboflavina-5-fosfato livre de dextrano para a zona de irradiação de 20 segundos antes de iniciar a irradiação. </li><li> Irradiar o zona de irradiação usando um chanfrado para baixo feita sob encomenda da fibra óptica por um período de irradiação de 200 seg. Medir a área de cada uma das zonas de 0,2 cm com um raio de 4 mm. </li><li> Aplicar a solução fotossensibilizador contendo 0,1% de riboflavina-5-fosfato livre de dextrano para a zona de irradiação cada 20 seg durante o período de irradiação de 200 seg. NOTA: Executar a irradiação e o lançamento de riboflavina simultaneamente por dois cirurgiões. </li><li> Repita os passos de 3,1-3,4 para cada um dos quatro quadrantes do globo ocular. </li></ol> 4. Cirurgia # 1 - Post Cruz Passo Linking <ol><li> Raspar a pele ao redor dos olhos. Aparar as margens da pálpebra com uma tesoura oftálmicos cirúrgicos e em seguida, delicadamente suturar a parte superior e as pálpebras inferiores usando 4-0 trançado cor marfim de seda - 3/8 círculo recomprimento 13 milímetros verso cutting- C-3 de agulha (tarsorrafia). Aplicar uma pequena quantidade de pomada oftálmica na margem da pálpebra, no final do procedimento (cloranfenicol 5%). </li></ol> 5. Cirurgia # 1 - Cuidados pós-operativo <ol><li> Mantenha os animais sob uma lâmpada de aquecimento durante a recuperação. Não deixe um animal sem supervisão até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter decúbito esternal. </li><li> Colocar o animal em uma gaiola limpa com novas roupas até que esteja totalmente recuperado. Após a recuperação, o animal será devolvido para a sala de animal. Devolver o animal para sua mãe apenas quando acordado. </li><li> Durante as primeiras 48 horas, examinar os animais relativas ao estado geral e sinais de doença ou infecções. Administrar analgesia conforme a secção 1. analgesia Administrar conforme necessário, se uma mudança no comportamento do coelho é observado. (Metamisole cai 50 mg / kg a cada 6 horas). </li></ol> 6. Cirurgia # 2 <ol><li> Cinquenta e cinco dias após surgery # 1, pesar e anestesiar o coelho com uma injecção intramuscular de cloridrato de cetamina 100 mg / ml (100 mg / kg) e cloridrato de xilazina 25 mg / ml (12,5 mg / kg). </li><li> Com uma tesoura oftalmológicas cirúrgicas sob um microscópio cirúrgico oftálmico, remover a tarsorrafia. Realizar três medições de comprimento axial em cada olho após anestesia tópica (cloridrato oxibuprocaína 0,4%) usando um ultra-som A-scanner e, em seguida, calcular a média das medições. Aplicar a sonda perpendicularmente à córnea central. </li><li> Eutanásia dos coelhos com fenobarbital de sódio intraperitoneal (200 mg / 1,5 kg de peso corporal). </li></ol>

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Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Apresenta-se o primeiro estudo in vivo da prevenção da miopia axial num modelo de coelho utilizando a tecnologia de ligação cruzada com riboflavina e irradiação UVA. Embora diferentes animais de laboratório pode ser usado neste tipo de estudo, escolhemos coelhos principalmente devido ao tamanho dos olhos e a necessidade de realizar a reticulação na superfície escleral. Descobrimos que a exposição da esclera de coelhos e suturando as pálpebras superior e inferior para ser processos d...

Miopia é a mais comum das desordens de refracção. A prevalência de miopia nos EUA e na Europa é relatado para ser em torno de 30%, e em países asiáticos que afeta até 60% da população em geral 1,2. Progressão da miopia ocorre em até 50% dos míopes, geralmente a uma taxa de cerca de -0,5 dioptrias ao longo de um intervalo de dois anos 3. Os custos de saúde impostas por miopia são consideráveis, incluindo as despesas para óculos, lentes de contato e cirurgia refrativa e custos relacionados com o aumento dos riscos para a saúde de glaucoma, catarata, descolamento de retina e deficiência visual 4-6. Em estudos com animais de miopia, a redução da visão é induzida por sutura pálpebra 7-10, a colocação de um oclusor a uma curta distância a partir do olho e tatuagem da córnea 11. No entanto, para a miopia artificial para ocorrer nestes estudos, o processo de oclusão tem de ser realizado em animais muito jovens, como não há experiências de privação de vista carrIED para fora em espécimes adultos têm tido êxito. Uma das características importantes da miopia grave é uma alteração patológica da esclerótica com adelgaçamento progressivo da esclera, provavelmente devido a um mecanismo de feedback perturbado de emetropizaï¿½o após privação visuais 12 ou devido a alguma perturbação metabólica da esclerótica, tal como em Ehlers Danlos 13. Em última análise, ambos os mecanismos levam ao estiramento e afinamento da esclera, retina e coróide devido a anomalias estruturais da esclera míope como a diminuição do colágeno diâmetro da fibra 14,15 e os distúrbios fibrilogênese 16. Vários estudos têm mostrado que prejudicada reticulação do colagénio é um factor importante para o processo de enfraquecimento da esclera míope 17-18. Wollensak et ai. 19-21 induzida colagénio de ligação cruzada através da aplicação do fotossensibilizador riboflavina e irradiação ultravioleta-A (UVA) (370 nm)e observou um aumento significativo de 157%, na rigidez de porcino e humano in vitro esclera 19, e um aumento de 465% em rigidez escleral coelho in vivo (módulo de Young) 20. A reticulação também teve um efeito a longo prazo sobre esclera coelho in vivo: rigidez aumentada em 320,4% após 3 dias, 277,6% depois de 4 meses, e 502% após 8 meses (módulo de Young) 22. Tentativas terapêuticas para deter a progressão da miopia foram publicados 23-26 mas o sucesso destes métodos é controversa. Não há meios eficazes de prevenir a miopia progressiva foi encontrado até o momento. A etiologia da miopia ainda é controversa, e seu tratamento representa um desafio. Com base nestes resultados, é a hipótese de que a reticulação da esclerótica pode servir como um meio para o tratamento à base de esclerótica de progressão da miopia. O objetivo deste estudo é examinar a crosslinki colágeno escleralng efeito sobre o desenvolvimento da miopia axial induzida por oclusão visual.

<table><tbody><tr><td>Suturas de seda trançada 2-0 sem agulhas&nbsp;</td><td>ETHICON</td><td>W193</td><td></td></tr><tr><td>4-0 seda trançada cor marfim</td><td>ETHICON</td><td>W816</td><td></td></tr><tr><td>0.1% riboflavina-5-fosfato livre de dextrana 1 mg:1 ml</td> Fonte de luz UV A (370 nm) <td>da Concept for Pharmacy Ltd</td><td>D2-5025</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>O/E LAND Inc</td><td>NCSU033B</td><td></td></tr><tr><td>Fibra óptica feita sob medida&nbsp;</td><td>Prizmatix Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>26 G cânula lacrimal&nbsp;</td><td>Beaver-visitec International Ltd.&nbsp;</td><td></td><td></td>REF581276</tr><tr><td>hidrodelineador cônico de 25 G [Blumenthal]&nbsp;</td><td>Beaver-visitec International Ltd.&nbsp;</td><td></td><td></td>REF585107</tr><tr><td>coelhos de 13 dias de idade</td><td>Harlan&nbsp;</td><td>1NZWR40</td><td></td></tr><tr><td>Biômetro ultrassônico</td><td>Allergan-Humphrey</td><td>820-519</td><td></td></tr><tr><td>Marcador de pele</td><td>Devon</td><td>4237101664X</td><td></td></tr></tbody></table>

escleral reticulação usando ultravioleta e riboflavina-a radiação de prevenção de axial miopia em um modelo de coelho

Scleral Cross-linking Using Riboflavin and Ultraviolet-A Radiation for Prevention of Axial Myopia in a Rabbit Model

indivíduos míopes, especialmente aqueles com miopia severa, apresentam risco mais elevado do que o normal de catarata, glaucoma, descolamento de retina e alterações coriorretinianas. Além disso, miopia patológica é uma causa irreversível comum de deficiência visual e cegueira 1-3. O nosso estudo demonstra o efeito de reticulação escleral utilizando riboflavina e ultravioleta A radiação sobre o desenvolvimento da miopia axial num modelo de coelho. O comprimento axial do globo ocular foi medida por A-scan de ultra-sons em coelhos brancos New Zealand com idade de 13 dias (macho e fêmea). O olho, em seguida, foram submetidos a 360 ° peritomia conjuntival com reticulação escleral, seguido por tarsorrafia. alongamento axial foi induzida em 13 dias de idade coelhos Nova Zelândia por sutura as pálpebras do olho direito (tarsorrafia). Os olhos foram divididos em quadrantes e cada quadrante tinha duas zonas de irradiação esclerais, cada um com uma área de 0,2 cm² e um raio de 4 mm. A ligação cruzada foi realizada pela queda de 0,1%riboflavina-5-fosfato para a zonas de irradiação de 20 segundos antes de ultravioleta-A irradiação e a cada 20 segundos durante o tempo de irradiação de 200 seg-dextrano livre. A radiação UVA (370 nm) foi aplicado perpendicularmente à esclerótica a 57 mW / cm² (dose total de luz UVA, 57 J / cm). Tarsorrhaphies foram removidos no dia 55, seguida de medições repetidas comprimento axial. Este estudo demonstra que a reticulação escleral com ultravioleta e riboflavina-A radiação impede eficazmente induzida por oclusão alongamento axial em um modelo de coelho.

As Figuras 1 e 2 mostram graficamente as medições de comprimento axial de dois grupos. Grupo 1 coelhos foram submetidos a ligação cruzada de esclerótica e tarsorrafia no olho direito, enquanto o olho esquerdo não foi operado (Figura 1). Grupo 2 coelhos foram submetidos somente peritomia e tarsorrafia no olho direito, enquanto o olho esquerdo não foi operado (Figura 2). <p class="jove_content" fo:keep-together.within-...

Nós demonstramos o efeito de reticulação escleral com riboflavina e UVA em um olho alongamento coelho axial. alongamento axial foi induzida em coelhos 13 dias de idade Nova Zelândia (masculino e feminino) suturando as pálpebras do olho direito (tarsorrafia).

Escleral reticulação Usando ultravioleta e riboflavina-A radiação de Prevenção de Axial Miopia em um modelo de coelho

Myopic individuals, especially those with severe myopia, are at higher-than-normal risk of cataract, glaucoma, retinal detachment and chorioretinal ...

O objetivo geral deste procedimento é observar os efeitos do cruzamento escleral com riboflavina e radiação ultravioleta-A para induzir miopia axial em um modelo de coelho. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área do cruzamento escleral, como, por exemplo, como a radiação UVA pode ser direcionada a áreas esclerais específicas. A principal vantagem desta técnica é que utiliza radiação UVA, fibras ópticas e cirurgia para alcançar áreas esclerais de interesse.Assistirá no procedimento cirúrgico Orly Gal-Or, residente do Departamento de Oftalmologia do Centro Médico Rabin. Antes de iniciar o procedimento, confirme a ausência de resposta ao reflexo da dor e use um cotonete estéril para aplicar uma pequena quantidade de pomada oftálmica no olho não operado. Em seguida, aplique anestesia tópica em cada olho.E posicionando a sonda perpendicularmente à córnea central, utilize um escâner de ultrassom modo A para realizar três medições do comprimento axial dos olhos. Em seguida, sob microscópio cirúrgico oftálmico, utilize pinças e tesouras cirúrgicas oftálmicas para realizar uma peritomia conjuntival de 360 graus. Utilize um gancho muscular para localizar os quatro músculos retos extraoculares.Em seguida, isole os músculos com dois fios de seda trançada zero sem agulha para criar quatro quadrantes. Usando um marcador dermatológico, delimite uma zona de irradiação na esclera equatorial e uma zona de irradiação na esclera posterior em cada quadrante. Em seguida, carregue uma seringa de três a cinco mililitros com solução sensibilizadora fotodinâmica de riboflavina 5 fosfato sem dextrana a 0,1 por cento e acople uma cânula lacrimal de calibre 26.Agora, ligue um dispositivo de irradiação com uma fonte de luz UVA de 370 nanômetros conectada a uma fibra óptica personalizada com ponta chanfrada e configure o dispositivo para 57 miliwatts por centímetro quadrado. Vinte segundos antes de iniciar a irradiação, movimente o globo ocular puxando as suturas de seda na direção oposta ao quadrante a ser tratado e aplique a solução de foto-sensibilizador na zona de irradiação. Em seguida, utilize a fibra óptica personalizada para irradiar a zona selecionada durante 200 segundos, aplicando a solução de foto-sensibilizador na zona a cada 20 segundos.Após os quatro quadrantes terem sido irradiados, corte as margens da pálpebra com uma tesoura. Em seguida, utilize quatro fios de seda trançada cor marfim zero para suturar suavemente as pálpebras superior e inferior. Aplique uma pequena quantidade de pomada oftálmica na margem da pálpebra e coloque o coelho sob uma lâmpada de calor.Quando o animal estiver totalmente recuperado, coloque-o em uma gaiola limpa com nova cama. Cinquenta e cinco dias após a reticulação, use tesoura cirúrgica oftálmica para remover a tarsorrafia. Em seguida, realize três medições do comprimento axial de cada olho conforme acabou de ser demonstrado.Em animais que passaram por cross-linking escleral e tarsorrafia, o comprimento axial médio diminuiu após a sutura das pálpebras, em comparação com o olho não operado. Em animais que passaram apenas por peritomia e tarsorrafia, no entanto, o comprimento axial médio aumentou no olho experimental. De fato, olhos que passaram por cross-linking escleral apresentaram um aumento menor no comprimento axial no geral, em comparação com olhos que foram submetidos apenas à peritomia.Embora a diferença entre grupos no comprimento axial médio dos olhos que não foram submetidos à cirurgia não tenha sido estatisticamente significativa. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar-se de preparar todo o equipamento necessário com antecedência. Após seu desenvolvimento, esta técnica abriu caminho para pesquisadores na área da miopia, que exploraram os efeitos da riboflavina e da radiação UVA na retina, coroide e esclera.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como visualizar áreas esclerais específicas de interesse e aplicar tratamentos focados com radiação UVA. Não se esqueça de que realizar cirurgias em olhos tão pequenos com músculos retos delicados pode ser extremamente desafiador e de que a curva de aprendizado para aperfeiçoar a técnica deve ser aceita. As implicações desta técnica estendem-se para a prevenção de complicações patológicas da miopia.Embora este método possa fornecer informações sobre a prevenção da miopia axial, ele também pode ser aplicado a outras condições, como áreas esclerais finas.

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A reticulação do colágeno da córnea (CXL) é o único tratamento conservador atualmente disponível para interromper a progressão do ceratocone, melhorando a rigidez biomecânica do estroma da córnea. O objetivo deste manuscrito é destacar os métodos de três diferentes protocolos de CXL: CXL convencional (C-CXL), CXL acelerado (A-CXL) e ICXL de iontoforese (I-CXL).

Três diferentes protocolos de Corneal Collagen reticulação em Ceratocone: convencional, com aceleração e Iontoforese

Retina epitélio pigmentar (RPE) estratégias de substituição e terapia baseada em gene são considerados para várias condições degenerativas da retina. Para a tradução clínica, o olho dos modelos animais de grande porte são obrigados a estudar técnicas cirúrgicas aplicáveis ​​em pacientes. Aqui nós apresentamos um modelo de coelho para a cirurgia sub-retiniana voltada para o transplante de EPR, que é versátil e eficiente.

A Passo a Passo Protocolo de Cirurgia sub-retiniana em Coelhos

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Segunda geração harmônica sinais na esclera coelho como uma ferramenta para avaliação do tecido terapêutico do cross-linking (TXL) para miopia

Células epiteliais de pigmento retinal podem servir como uma terapia de reposição celular para a forma avançada de degeneration macular age-related seco. Este protocolo descreve a geração de um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica e o subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal embrionárias humanas células-tronco derivadas para este modelo de doença.

Subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal derivado de células-tronco embrionárias humanas em um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica

Este manuscrito descreve o romance de configuração e funcionamento interno de um fotoacústico microscopia e sistema de dual-modalidade de tomografia computadorizada de coerência óptica para a imagem latente de choriorétiniennes não-invasivo, livre de rótulo de animais maiores, tais como coelhos.

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Este protocolo descreve um método confiável para obter criosseções de alta qualidade de olhos inteiros de coelho. Ele detalha os procedimentos de dissecção, fixação, incorporação e seccionamento do olho do coelho, que podem ser facilmente adaptados para uso em qualquer estudo que utilize imuno-histoquímica em olhos maiores.

Obtenção de criosecções de alta qualidade de olho de coelho inteiro 

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Um protocolo reprodutível é apresentado para a preparação, enriquecimento e aplicação de um hidrogel in situ de luz azul e reticulável gelatina–riboflavina para reparo de feridas estromais corneanas em coelhos, incluindo etapas procedimentais para manuseio cirúrgico, tarsórrafia parcial e cuidados pós-operatórios.

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Implantação estereotáxica intracraniana e<em&gt; Em vivo</em&gt; Imaging Bioluminescent de xenoenxertos de tumores em um Sistema Modelo de Rato Glioblastoma Multiforme

Aprenda a técnica de reticulação escleral com riboflavina e radiação UVA para prevenir miopia axial em coelhos. Este método demonstra a aplicação de radiação focada em áreas específicas da esclera.

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