Name: Condições que afetam Espaço Social em Drosophila melanogaster (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Aprenda a quantificar o espaço social preferido de Drosophila melanogaster usando uma câmara especializada. Este método permite analisar fatores genéticos e ambientais que influenciam o comportamento social das moscas.

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Os autores querem agradecer ao Dr. Tadmiri Venkatesh por seu incentivo para preparar este manuscrito, Dova Brenman e Selwyn Chui por seus comentários construtivos, Elyssa Burg e Wayne Rasband por projetar a macro em ImageJ para todas as distâncias de intervoo e para distâncias vizinhas mais próximas. Os autores também querem agradecer aos revisores por seus comentários construtivos.
A.A.A, M.C.C. e A.F.S foram responsáveis pelo desenho da pesquisa; S.N.J., A.A.A, M.N., Z.R. e A.J.M. realizaram os experimentos. A.A.A, M.N., A.J.M. e M.C.C. e A.F.S. analisaram os dados; A.R.M. e A.F.S. escreveram o manuscrito.
Este trabalho foi apoiado por prêmios de pesquisa PSC-CUNY, financiados conjuntamente pelo The Professional Staff Congress e pela The City University of New York para a A.F.S.; por financiamento interno da Western University para a A.F.S.; por uma bolsa de estudos de Matemática, Biologia, Química e Geologia para professores em treinamento e por uma bolsa de estudos da Louis Stokes Alliance for Minority Participation para a A.A.A.

1. Equipamentos e Reagentes Criado In-house (Veja a lista de materiais para outros) <ol><li> Prepare um aparelho de anestesia frio Drosophila como descrito anteriormente 8. </li><li> Preparar um aspirador de mosca como previamente descrito 13. </li><li> Prepare câmaras espaço social e titulares. <ol><li> Ordenar ou fazer painéis de vidro e espaçadores de acrílico para criar as câmaras espaço social. Cada câmara de espaço social consiste em dois painéis de vidro quadrados (17,6 cm por 17,6 cm, com uma espessura de 0,3 cm), dois espaçadores de acrílico triângulo direita (com uma altura de 16,5 cm, uma base de 8,9 cm, com uma espessura de 0,3 cm ), e dois espaços rectangulares (9 cm por 1,5 cm com uma espessura de 0,3 cm) (Figura 1A). </li><li> Montar o vidro e a câmara de espaço social acrílico de tal forma que ela é idêntica à câmara na Figura 1B. Para fazê-lo, começar por colocar um espaçador triangular plana no topo de um painel quadrado de vidro de tal modo que o ângulo rectodo espaçador triangular está alinhada com um dos cantos do painel quadrado. Em seguida, coloque o segundo espaçador triangular plana na parte superior do painel quadrado, espelhando o primeiro espaçador triangular. NOTA: Certifique-se de usar luvas para não contaminar as peças com óleos e aromas de suas mãos. </li><li> Colocar duas pequenas espaçadores rectangular plana no topo do painel quadrada, ao longo do lado do painel que não é coberta. Os espaçadores de acrílico na parte superior do avião quadrado deve agora formar uma arena triangular. </li><li> Coloque um segundo painel quadrado de vidro no topo dos espaçadores acrílicos de tal forma que ele está alinhado acima do painel de vidro originais abaixo. </li><li> Use quatro grampos da pasta para fixar os painéis e espaçadores em conjunto para formar a câmara de espaço social. Coloque um grampo próximo do canto, sobre o lado mais longo de cada um dos espaçadores triangulares, prendendo-os no interior das chapas de vidro. Em relação a estes mesmos lados, coloque um clipe no canto adjacente, sobre cada um dos espaçadores rectangulares, prendendo-os emno lado as vidraças. </li><li> Montar um cavalete de suporte, e um balão de braçadeira de tal modo que o grampo irá manter a câmara de espaço social numa posição vertical, como a câmara de espaço social repousa sobre o seu bordo na parte superior da superfície de trabalho. </li><li> Para cada repetição do experimento, montar uma câmara de espaço social e apoio de pé. </li></ol></li><li> Prepare um aparelho de resposta do ensaio escalada para verificar a capacidade de escalada das moscas testados. <ol><li> Usar um aparelho em contracorrente, como anteriormente descrito 14,15. </li></ol></li><li> Assegurar que as condições de iluminação homogénea, realizando a experiência com uma superfície de trabalho coberto com uma tampa de bancada branca e em frente de um fundo branco. </li></ol> 2. Preparar as moscas antes da Experiência <ol><li> Manter moscas em frascos contendo padrão mosca Drosophila alimentos. Mantenha-os numa câmara de incubação a 25 ° C num ciclo luz / escuro de 12 horas de luz. </li><li> Um a dois dias antes de a eXperiment, recolher e sexo voa sob anestesia frio, como descrito anteriormente 8. <ol><li> Resfriar o aparelho de anestesia frio de -4 ° C. Lugar voa para 50 ml tubos de plástico. Totalmente submergir os tubos de plástico contendo moscas em gelo em um balde de gelo isolado, aguarde pelo menos 5 minutos para moscas para se tornar imóvel. </li><li> Coloque as moscas na folha de polietileno do aparelho de anestesia frio. À TA, utilizar um estereomicroscópio para separar os machos das fêmeas. Manter moscas, em grupos, em frascos contendo padrão mosca Drosophila comida, não superior a 40 moscas por frasco. </li></ol></li><li> Duas horas antes do início da experiência, assegurar que a temperatura da sala onde a experiência é realizada será entre 24-25 ° C e com uma humidade de aproximadamente 50%. </li><li> Transferir as moscas em novos frascos contendo comida, e coloque-os durante 2 horas sobre a superfície de trabalho, onde a experiência será executada. NOTA: Para estas experiments, as linhagens de moscas utilizados foram estirpes de Drosophila melanogaster: Canton-especiais ou Canton-S (CS), w 1118 Cs 10 (ou W - w 1118 outcrossed 10 vezes a Canton-S), Oregon e Samarkand moscas foram todos do nosso laboratório stocks 16; Elwood moscas foram coletadas no Outono de 2011 no bairro de Elwood de Huntington, em Long Island, Nova York, EUA 8. Além quando especificado em contrário, os resultados apresentados foram obtidos com Canton-S moscas (em tons de vermelho). </li></ol> 3. a realização do experimento <ol><li> Realizar o experimento doze horas - três horas (tempo Zeitgeber - o tempo em horas após o início da luz - de ZT 4-7). </li><li> Prepare a câmara de espaço social para a transferência de moscas. <ol><li> Coloque um apartamento câmara espaço social em uma superfície de trabalho, com o lado que contém espaçadores rectangulares mais próximos ao seu corpo. </li><li> Remover one clipe mais próximo de seu corpo e deslizar um espaçador rectangular para o exterior, criando uma lacuna de cerca de 1 cm entre os espaçadores rectangulares. </li><li> Usando fita e um marcador, rotular a câmara de espaço social em um canto superior com o sexo, estirpe, e número de repetição. Tome cuidado para garantir a fita não cobre parte da arena triangular interior. </li></ol></li><li> Transferir as moscas na câmara espaço social. <ol><li> Transferência voa de seu frasco contendo alimentos em um novo frasco vazio. Aspirar voa do frasco vazio e transferi-los para a câmara de espaço social. <ol><li> Inalar para desenhar as moscas dentro da ponta do aspirador. Colocar a ponta no 1 cm lacuna entre os espaçadores rectangulares da câmara de espaço social e exalar, a uma taxa consistente para forçar as moscas para a arena triangular interna. </li><li> Deslize imediatamente o espaçador rectangular de volta no lugar, fechando a base da arena triangular interior, e coloque o grampo da pasta novamente. </li></ol></li&gt; </ol></li><li> Em uma almofada batendo, que está localizado no banco diferente de onde o trabalho experimental tem lugar, segurar a câmara de espaço social na posição vertical de modo a que os espaçadores são rectangulares na parte inferior. Libra três vezes para assegurar que todas as moscas ter caído para a parte inferior da arena. NOTA: Devido ao espaçador acrílico saindo do menor tamanho de câmara (Figura 1D), bang cotovelos na superfície de trabalho, mantendo uma fixação segura no aparelho, para garantir as moscas caíram para o fundo. </li><li> Iniciar um temporizador. </li><li> Coloque a câmara de espaço social na superfície de trabalho e usar o apoio e suporte de balão braçadeira para mantê-lo na posição vertical. Coloque uma régua ou uma etiqueta de comprimento conhecido plana contra a câmara de espaço social, mas não abrangendo qualquer parte da arena triangular interior. <ol><li> Para experiências posicionadas horizontalmente, não coloque a câmara de espaço social no stand de apoio; em vez colocar a câmara plana espaço social na superfície de trabalho. </li></ol&gt; </li><li> Quando as moscas se instalaram, geralmente após cerca de 30 minutos, tirar uma foto da câmara de espaço social. Certifique-se que o quadro contém toda a arena interior triangular, o governante, eo rótulo. </li><li> Repita a experiência de cada genótipo e da condição (idealmente 3 repetições internas e 3 repetições independentes). </li></ol> 4. Analisando os Dados Espaço Social <ol><li> Importe os seguintes Macros em ImageJ 17 <ol><li> ImageJ está disponível aqui: http://rsbweb.nih.gov/ij/. </li><li> Você pode criar um comando &#39;Distâncias Medidas &quot;no menu Plugins, salvando as macros abaixo em um arquivo chamado&#39; Measure_Distances.txt &#39;na pasta ImageJ / plugins, na subpasta macro, e usando Ajuda&gt; comando Menus Update&#39;. </li><li> Cópia em um arquivo .txt as macros que são fornecidos em dados suplementares e foram originalmente publicados em três. </li></ol></li><li> Upload de imagens para um computador, e abra um picture usando ImageJ. <ol><li> Criar uma escala desenhando uma linha a partir dos 0 cm a 1 cm de marcas na régua na imagem, e sob a guia Analisar, escolha o recurso Escala Definir para definir uma escala de 1 cm para que a distância (mesma abordagem para o adesivo de comprimento conhecido). Escolha a opção global antes de aplicar a escala para a imagem. </li><li> Recortar a imagem usando a função Corte sob a guia Imagem de tal forma que inclui todas as moscas, ao remover tanto quanto do resto da imagem possível. </li><li> Fazer o retrato preto e branco, escolhendo 8-bit a partir da opção Tipo na guia Imagem. </li><li> Remova todo o ruído de fundo da imagem, indo para o recurso Threshold sob a opção de Ajuste da guia Imagem. Arraste as barras deslizantes para melhorar ou remover o contraste para que o corpo de cada mosca pode ser visto claramente, sem quaisquer outras marcações na imagem. Se houver marcas que não são moscas, capturá-los com a ferramenta rectangular e excluí-los. </li><li> Colocou omedições usando a ferramenta Definir Medidas sob a guia Analisar. Selecione Area, Centro de Massa, Centroid, e Rótulo de Exibição. Em seguida, escolha as partículas Analisar apresentam sob a guia Analisar para criar uma lista numerada de todos os pontos negros representam moscas. <ol><li> Ao utilizar partículas Analise; set tamanho 0,01-0,1 (não escolher unidade pixel); circularidade 0,00-1,00; mostrar contornos; apresentar resultados, e adicionar a gerente. </li><li> Certifique-se de que cada mancha preta (cada partícula) é uma representação precisa das moscas que estão na imagem original, através da comparação da lista numerada para a imagem original. NOTA: Se algumas moscas que estão muito perto em conjunto que está sendo contado como uma partícula, desenhar manualmente uma linha em branco para separar as duas moscas na imagem binária. </li></ol></li><li> Enquanto a lista está seleccionada, utilize o vizinho mais próximo - Lista Distâncias macro sob a segunda opção Macros na aba Plug-ins para criar uma nova lista contendo as distâncias, em centímetros, a partir da EAch voar para o seu vizinho mais próximo. </li></ol></li><li> Copie as distâncias vizinhos mais próximos de ImageJ e colar em uma coluna de um programa de planilha. <ol><li> Compilar todos os dados de cada repetição na mesma planilha e organizar pelo genótipo e condição. </li></ol></li><li> Executar análise de dados usando o software estatístico. Neste experimento, Graph Pad Prism (versão 6 para MacOSX, GraphPad Software, San Diego, Califórnia, EUA, www.graphpad.com) foi utilizado para realizar one-way ANOVA e testes de Kruskal-Wallis, Tukey e de post-hoc testes de Dunnet. </li><li> A distribuição das distâncias segue uma distribuição não paramétrica 1, e os dados estão representados como a caixa de bigodes e Tukey (para eliminar valores extremos). </li></ol> 5. Escalada Assay (Comportamento de Controle) <ol><li> Use um ensaio escalada como um controle para moscas de teste de escalada capacidade 14,15,18. <ol><li> Use o aparelho em contracorrente de tal forma que três ensaios cum ser executado em paralelo. </li></ol></li><li> Transferência de 50 a 100 moscas virgens de tratamento (moscas que não tenham sido testadas antes) em três frascos de ensaio diferentes, e encaixá-los no 1º, 3º e último ranhuras na parte inferior do aparelho em contracorrente, com frescos frascos vazios nos locais opostos. </li><li> Coloque fresco, em frascos vazios os espaços vazios na parte inferior do aparelho. </li><li> Toque para baixo do aparelho de três vezes, de modo a que todas as moscas estão na parte inferior de cada tubo, para iniciar a experiência. </li><li> Inicie o cronômetro para 15 segundos (tempo suficiente para ~ 100% de 3-7 dias de idade Canton-S para chegar ao topo vial - veja a Figura 3F). </li><li> Deslize a porção superior do dispositivo de contra-corrente, para deslocar os melhores frascos por uma ranhura. </li><li> Recolha moscas tocando no aparelho para baixo, para trazer todas as moscas nos frascos de fundo. <ol><li> 1º e 2 tubos nd (ou 3º e 4º, 5º </sup&gt; e 6º) correspondem, respectivamente, as moscas que não atingiram a parte superior e as moscas que atingiram o topo do frasco. </li></ol></li><li> Calcule o Índice de Desempenho (PI). <ol><li> Contar o número de moscas em cada frasco. </li><li> O PI é a percentagem de moscas capaz de subir no tubo superior. </li><li> Os meios de PI seguem uma distribuição normal 1, e os dados são representados como gráficos de coluna de média mais ou menos o erro padrão da média (SEM). NOTA: Como alternativa, o PI pode ser calculada como a percentagem de moscas que possam atingir a parte superior do frasco inferior (por moscas mais velhos, 5 segundos é o tempo suficiente para quantificar a diferença na escalada capacidade entre infectado e não infectado 12 dias de idade Canton-S quantificados a partir de uma imagem estática: ver resultados). Outros usaram diferentes medidas de desempenho em geotaxis negativos induzida por sobressalto, que também são apropriados para quantificar escalada capacidade 19-22. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Neste protocolo, um procedimento detalhado para a quantificação do espaço social foi descrita. Alguns passos cruciais para garantir o experimento for bem-sucedida são: 1) usar sempre luvas durante a limpeza e configuração do aparelho, para manter seus próprios óleos e aromas fora da câmara interna do aparelho, 2) garantir moscas são coletadas, pelo menos, um dia antes o experimento para reduzir os efeitos potenciais da anestesia frio, 3) 2 horas antes do experimento fornecer novos frascos contendo alimentos frescos para...

As interações sociais são cruciais para o bom desenvolvimento e saúde dos indivíduos dentro de um grupo como um todo, e pode ser observado através de numerosas espécies, a partir de seres humanos (Homo sapiens) para os organismos mais simples, como as moscas da fruta (Drosophila melanogaster) 5,6. Uma mosca da fruta indivíduo ou meios comuns de compartilhamento humano para processar a informação sensorial durante essas interações, quer seja: auditiva, visual, olfativa, tátil, ou gustação. Nós e outros a hipótese de que há uma neurocircuitry potencialmente compartilhada subjacente respostas comportamentais a interações sociais e que as células neuronais e genes envolvidos pode ser conservada evolutiva 7. Uma vez que a interação inicial ocorreu, o espaço social entre os indivíduos que interagem vão quer aumento (evitação social 8) ou diminua (formação de grupos / agregação 5). Interações mais complexas, como agressividade ou namoro, pode então ter lugar. <p cmoça = &quot;jove_content&quot;&gt; Nem ferramentas e métodos sofisticados, nem grandes investimentos em tempo e treinamento são necessários para quantificar esta forma simples de comportamento social, tornando-se uma poderosa ferramenta analítica. Aqui, nós explicar um protocolo simples que quantifica distância inter-fly, ou espaço social, para avaliar a interacção social em grupos estáveis ​​de Drosophila melanogaster, como usado nos seguintes estudos 1-4,9. O espaço social refere-se a uma medida da distância entre uma mosca e seu vizinho mais próximo 10. O espaço social é consistente para uma dada população de D. melanogaster, quando as condições experimentais são preservadas (média de aproximadamente 1-2 comprimentos dentro do corpo), e varia em relação à experiência social das moscas, aumentando, se o indivíduo tenha sido mantidos em isolamento 1. Visão adequada é necessária para manter a distância social normal, mas não odorants clássicos ou CVA percepção 1. Medida do espaço social pode, portanto, serutilizado como uma ferramenta de diagnóstico para analisar as interacções sociais e quantificar o comportamento social em D. melanogaster 1. Nós descrevemos aqui em detalhes como realizar essa quantificação, e em que medida variáveis ​​experimentais comuns afeta este comportamento. Mostra-se que a orientação da câmara em que o ensaio é realizado, bem como o número de moscas - a uma extensão - fazer afecta espaço social. Foi previamente mostrado que a geometria da câmara afeta o movimento espontâneo exploratório de moscas 11,12, e este fenômeno pode vir a ter impacto sempre que decidam estabelecer. No entanto, desde que a densidade de mosca (mosca / cm 2) e a orientação da câmara é mantida a mesma, o espaço social das moscas também permanece constante. A robustez do presente ensaio é ilustrada pelo facto de que os laboratórios independentes utilizando diferentes tamanhos de câmara, forma e orientação pode replicar o resultado apresentado por mutantes do whgene ite (que afectam a pigmentação dos olhos), que é um espaço social aumento (triângulo vertical ou horizontal em um círculo, quadrado horizontal com o fluxo de ar em 3). Nossos resultados também indicam que a manutenção do momento em que o experimento espaço social é realizada é fundamental para a consistência dos resultados, como mostramos que machos, mas não fêmeas, são mais distantes à noite. No entanto, as diferenças observadas entre diurnas e noturnas horas não são devidas às diferenças das moscas de atividade, e discutimos argumentos indicando que os níveis de atividade não são correlacionados com o espaço social. Finalmente, existem bases genéticas para a determinação do espaço social, como indicado pelo mutante branco já descrito 1,3, e as diferenças entre várias estirpes puras e selvagens capturados de moscas que apresentamos aqui. Por isso, este ensaio é uma excelente ferramenta fou estudando os efeitos da genética, bem como fatores ambientais.

<table><tbody><tr><td>Microscópio Zoom Estéreo&nbsp;</td><td>Nikon&nbsp; &nbsp;</td><td>SMZ-645</td><td>Qualquer outro escopo padrão para manuseio de moscas funcionaria</td></tr><tr><td>Pincéis pequenos&nbsp;</td><td></td><td></td><td>para empurrar moscas</td></tr><tr><td>Jazz-mix</td><td>Fisher</td><td>33545</td><td>qualquer outro alimento padrão de drosófila funcionaria</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mini-Alarme Temporizador/Cronômetro</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Canetas</td><td></td><td></td><td></td>Sharpie</tr><tr><td>Fita Adesiva</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Clipes de fichário de tamanho médio</td><td>Grampos</td><td></td><td>para manter as câmaras juntas: clipes médios de 1-1/4" (32mm) com capacidade de 5/8"</td></tr><tr><td>pequenos suportes</td><td>Carolina&nbsp;</td><td>707161</td><td>para segurar as câmaras em uma orientação vertical</td></tr><tr><td>Bureta aperta</td><td>Carolina</td><td>707362</td><td></td></tr><tr><td>Câmera Digital</td><td>Nikon</td><td>&nbsp; Coolpix S8000</td><td>para tirar as fotos estáticas</td></tr><tr><td>Régua</td><td></td><td></td> pequena <td>para poder dimensionar a placa de três</td></tr><tr><td>dobras da imagem e a tampa</td><td></td><td></td> do banco branco <td>para fornecer um fundo branco e uma luz homogênea.</td></tr><tr><td>batendo pad</td><td></td><td></td><td>qualquer mouse pad funciona.</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prisma 6</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td>Prism 6 para Mac OS X</td><td>Qualquer software de análise estatística com teste t, unidirecional e dois ANOVA funcionaria</td></tr></tbody></table>

condições que afetam espaço social em<em&gt; drosophila melanogaster</em

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

O ensaio aqui descrito espaço social pode ser utilizado para quantificar interacções sociais de Drosophila melanogaste R - ou outros insectos pequenas - de uma maneira simples. Como já foi previamente demonstrada 1, numa câmara de bi-dimensional, que primeiro forçar as moscas para formar um grupo compacto, subsequentemente, o que lhes permite levar a sua distância preferida entre si. Depois de ter resolvido as moscas, medimos a distância para o vizinho mais próximo (ou espaço social), o processamento de uma imagem estática com o software on-line gratuito (ImageJ). A análise da distância para o vizinho mais próximo permite aos pesquisadores determinar os efeitos de fatores genéticos e ambientais sobre a interação social, enquanto controlando para possíveis fatores de confusão. Diversos fatores, como capacidade de subida, hora do dia, sexo e número de moscas, pode modificar o espaçamento social das moscas. Nós, assim, propor uma série de controlos experimentais para mitigar esses efeitos de confusão. Este ensaio podeser utilizado para, pelo menos, duas finalidades. Primeiro, os pesquisadores podem determinar a forma como a sua mudança ambiental favorito (como o isolamento, temperatura, estresse ou toxinas) terá impacto social, espaçamento 1,2. Em segundo lugar, os pesquisadores podem dissecar as bases genéticas e neurais desta forma básica de comportamento social 1,3. Especificamente, ele foi usado como uma ferramenta de diagnóstico para estudar o papel de genes ortólogos que estariam envolvidas no comportamento social em outros organismos, tais como genes candidatos para o autismo em humanos 4.

A câmara de espaço social pode ser usado como uma ferramenta para quantificar o comportamento social de Drosophila melanogaster. Espaçadores acrílico e chapas de vidro são cortadas em conjunto para formar uma arena triangular interna que proporciona uma área bidimensional em que voa podem formar grupos estáveis ​​sem a presença de diversos estímulos potencialmente de confusão. Quando as moscas são transferidos para a arena vertical, eles são surpreendidos por ser batido para baixo, e eles respondem por um compo...

O efeito dos genes e do ambiente no espaço social de Drosophila melanogaster pode ser quantificado por meio de um paradigma analítico poderoso, mas direto. Mostramos aqui diferentes fatores que podem afetar esse espaço social e, portanto, precisam ser levados em consideração ao projetar experimentos nesse paradigma.

Condições que afetam Espaço Social em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

O objetivo geral deste procedimento é quantificar um aspecto do comportamento social de moscas, a distância social preferida delas. Isso é realizado primeiramente montando a câmara de espaço social. Enquanto isso, um grupo de moscas é habituado à sala do ensaio com controle ambiental sendo transferido para um novo frasco nesse local.Após duas horas, o grupo de moscas é transferido para a câmara do espaço social. As moscas são batidas levemente para baixo e então posicionadas verticalmente com um suporte de prendedor. Assim que as moscas se acomodam, suas posições são registradas e as distâncias entre elas são calculadas a partir dessa imagem por meio de um software.No fim das contas, o ensaio de espaço social quantifica uma forma de comportamento social, que pode ser usado para estudar os fatores ambientais influentes e a neurogenética desse comportamento. A principal vantagem dessa técnica para quantificar comportamento social em comparação com métodos existentes, como o rastreamento automatizado por vídeo, é que ela não exige ferramentas ou métodos sofisticados, nem grandes investimentos de tempo e treinamento. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área de comportamento social.Utilizamos este método como uma ferramenta diagnóstica para estudar o papel de genes autólogos que se acredita estarem envolvidos no comportamento social e em outros organismos, como genes candidatos ao transtorno do espectro autista em humanos. Tive a ideia inicial para este método quando observei na UCLA que, no nosso estoque, as moscas em seus frascos não apresentavam uma distribuição aleatória, mas formavam agregados com intervalos rasgados entre eles. Este procedimento descreve a montagem das câmaras de espaço social para iniciar, utilizando luvas.Coloque um espaçador triangular sobre uma placa quadrada, alinhando seus cantos em um ponto, em seguida posicione um segundo espaçador triangular para espelhar o primeiro. Depois, coloque os dois espaçadores retangulares menores sobre a placa quadrada ao longo das duas bordas descobertas, de modo que os quatro espaçadores formem uma arena triangular. Em seguida, monte os espaçadores com outra placa quadrada e use quatro grampos para fixar o conjunto.Colocou clipes nos quatro cantos, começando pelos cantos com espaçadores triangulares, para garantir a montagem adequada. Oriente a câmara verticalmente com a borda inferior apoiada na bancada. A temperatura ambiente também deve ser igual à temperatura de criação das moscas e com umidade semelhante. As moscas utilizadas neste experimento devem ser mantidas em frascos sob condições padrão um ou dois dias antes do experimento, coletadas e separadas por sexo sob anestesia fria.Populações experimentais de 40 moscas em novos tubos para moscas. Posteriormente, duas horas antes do experimento, transfira as moscas para novos tubos e coloque-os sobre a bancada onde as arenas serão carregadas duas horas depois. Inicie o experimento.Remova o clipe mais próximo e deslize para fora o espaçador retangular para criar uma lacuna de um centímetro entre os espaçadores. O canto superior esquerdo da câmara pode ser usado para identificar o grupo de moscas em teste com uma etiqueta. Apenas não cubra nenhuma parte da arena de teste.Agora, transfira a coorte para um novo tubo vazio e aspire as moscas do tubo. Em seguida, insira a ponta do aspirador na abertura e expire suavemente com força constante. As moscas devem ser expelidas para dentro da arena.Imediatamente deslize o espaçador retangular de volta para a posição inicial e recoloque o clipe. Bata três vezes para fazer todas as moscas caírem até o fundo da arena. Inicie o cronômetro e leve a arena para a câmara controlada.Fixe o arena verticalmente ao frasco. Prenda na câmara controlada ao longo da borda da câmara, mas não sobre o arena. Fixe uma régua ou um adesivo de comprimento conhecido após as moscas.Deixe repousar cerca de 30 minutos. Tire uma foto, documentando toda a arena com a régua visível. Isso conclui o ensaio.Devem ser realizadas três réplicas para cada condição. Para esvaziar a arena, coloque a arena no congelador por cinco a dez minutos e despeje as moscas congeladas em um criadouro de moscas. No ImageJ, abra todas as fotos necessárias para a análise.Usando a régua, crie uma escala a partir das marcas de centímetro abaixo da aba analisar. Escolha definir, escala, e siga as instruções. Mas antes de aplicar a escala, certifique-se de selecionar a opção global.Usando o recurso de corte, ajuste as imagens para incluir apenas o espaço da arena. Em seguida, selecione a opção tipo e escolha oito bits para renderizar as imagens em preto e branco. Depois, remova o ruído de fundo utilizando o recurso de limiar na opção ajustar da guia imagem.Arraste os controles deslizantes até que o corpo de cada mosca seja claramente visível, sem criar marcas no fundo. Para remover marcas que não sejam de moscas, capture-as com a ferramenta de retângulo e exclua-as. Agora, configure a ferramenta de medição na guia analisar.Selecione centro de massa da área Centro e exibir rótulo nas opções disponíveis. Em seguida, escolha a função analisar partículas na guia analisar. Isso cria uma lista numerada de todas as moscas.Certifique-se de que esta ferramenta está funcionando corretamente comparando a lista numerada com a foto original. Agora, selecione a lista. Em seguida, vá até a guia plugins e selecione a opção macros.Em seguida, selecione a macro chamada distâncias da lista de vizinhos mais próximos. Analise esses valores em uma planilha ou pacote estatístico utilizando o protocolo descrito. A linhagem selvagem recentemente estabelecida Elwood foi comparada com as linhagens endogâmicas de laboratório, Canton S, e o espaçamento social variou entre as linhagens de moscas, sugerindo um componente genético para o comportamento.Embora eu estivesse realizando este procedimento, é importante lembrar de manter condições ambientais controladas antes e durante todo o experimento. No entanto, uma vez alcançada a orientação, o tamanho e a forma da arena não importam e não afetarão o comportamento, desde que sejam mantidos constantes após o seu desenvolvimento. Esta técnica abriu caminho para pesquisadores na área de neurociência comportamental explorarem o efeito de fatores ambientais no espaço social.Em Joseph La Melanogaster, após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como realizar o ensaio de espaço social, começando desde a preparação das moscas até a montagem e utilização da arena de espaço social, bem como a análise de imagens.

conditions-affecting-social-space-in-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Drosophila melanogaster é um sistema modelo de genética e comportamentalmente tratável que tem sido usada para compreender a base molecular e celular de muitos processos biológicos importantes para mais de um século 1. Drosophila tem sido bem explorado para obter insights sobre a base genética do comportamento da mosca.

Métodos de Ensaio para Drosophila Comportamento

Drosophila melanogaster são úteis no estudo de manipulações genéticas ou ambientais que afetam comportamentos, como a atividade locomotora espontânea. Aqui nós descrevemos um protocolo que utiliza monitores com raios infravermelhos e software de análise de dados para quantificar a atividade locomotora espontânea.

Determinação da atividade locomotora espontânea em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aqui, apresentamos um protocolo para quantificar a evitação de indivíduos estressados. Este paradigma é poderoso, mas fácil de usar, e pode ser usado para avaliar a influência de genes e ambiente em um tipo de interação social em Drosophila melanogaster.

Ensaio simples para Quantificação de Prevenção Social Drosophila melanogaster

Durante mosca de fruta lutas, os padrões comportamentais observados, luta dinâmica e aprendizagem e memória associada são influenciadas pelas condições experimentais. O protocolo aqui apresentado descreve um novo procedimento que elimina totalmente a manipulação de moscas durante as experiências. Isso melhora a dinâmica de luta e permite a formação de efeitos fortes "loser".

Uma nova abordagem que elimina a manipulação de Estudos de Agressão e Efeito &quot;perdedor&quot; em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Um método para a criação de Drosophila melanogaster sob condições axénicas e gnotobióticos é apresentada. embriões voam são dechorionated em hipoclorito de sódio, transferidos assepticamente à dieta estéril, e criados em recipientes fechados. Inoculando dieta e embriões com bactérias leva a associações gnotobióticos e presença de bactérias é confirmada por plaqueamento de corpo inteiro de Drosophila homogeneizados.

Elevando a mosca da fruta<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sob axênicas e gnotobióticos Condições

Demonstramos um ensaio para analisar as pistas ambientais e genéticas que influenciam o comportamento de acasalamento na mosca da fruta Drosophila melanogaster .

Um método para testar o efeito de sugestões ambientais no comportamento de acoplamento em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aqui nós apresentamos um protocolo para determinar automaticamente o desempenho locomotor de Drosophila em mudança de temperaturas usando uma arena programável de temperatura controlada que produz mudanças de temperatura rápidas e precisas no tempo e no espaço.

Um método automatizado para determinar o desempenho de Drosophila em resposta às mudanças de temperatura no espaço e no tempo

Os produtos químicos do disruptor da glândula endócrina (EDCs) representam um problema sério para organismos e para ambientes naturais. A Drosophila melanogaster representa um modelo ideal para estudar os efeitos da EdC in vivo. Aqui, nós apresentamos métodos para investigar o rompimento da glândula endócrina em Drosophila, abordando efeitos de EDC na fecundidade, na fertilidade, no sincronismo desenvolvente, e no tempo da mosca.

Métodos para testar a perturbação endócrina na Drosophila melanogaster

O Transtorno do Espectro do Autismo (TEA) está associado ao comportamento social e comunicativo prejudicado e ao surgimento de comportamento repetitivo. Para estudar a inter-relação entre genes de TEA e déficits comportamentais no modelo de Drosophila , cinco paradigmas comportamentais são descritos neste artigo para testar o espaçamento social, agressão, namoro, aliciamento e comportamento de habituação.

Paradigmas para Avaliação Comportamental no Modelo de Drosophila de Transtorno do Espectro do Autismo

O protocolo apresenta um método de alto rendimento e custo-benefício para avaliar a neurotoxicidade na mosca-da-fruta por meio da quantificação da disfunção locomotora como alternativa aos modelos tradicionais de mamíferos. Tem como objetivo avaliar os efeitos neurotóxicos de compostos farmacêuticos, agentes ambientais ou modificações genéticas usando um modelo sensível, reprodutível e eticamente favorável.

Análise comportamental da disfunção locomotora em Drosophila melanogaster como leitura de neurotoxicidade

Aprenda a quantificar o espaço social preferido de Drosophila melanogaster usando uma câmara especializada. Este método permite analisar fatores genéticos e ambientais que influenciam o comportamento social das moscas.

Condições que afetam Espaço Social em

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