Um sistema de pontuação neurológica rápida fenotípica para a Avaliação de progressão da doença na SOD1 G93A-Rato modelo de ALS

O objetivo geral deste procedimento é avaliar de forma rápida e confiável a função neuromuscular de camundongos SOD one G 93a por meio da avaliação diária de sua função nos membros posteriores usando um sistema de pontuação neurológica fenotípica simples. Isso é feito observando primeiro os membros posteriores dos camundongos enquanto os suspende pela cauda. O segundo passo é permitir que os ratos andem enquanto observam sua marcha.

Em seguida, os ratos são colocados de lado para testar a presença ou ausência do reflexo de escrita. A etapa final é realizar a análise de dados ajustando os dados de pontuação neurológica de coortes de camundongos em um modelo de regressão logística ordinal. Em última análise, nosso sistema de pontuação neurológica fenotípica é usado para avaliar a progressão da doença no SOD one G 93, um modelo de camundongo de um LS com o objetivo de discernir a eficácia das intervenções terapêuticas.

A principal vantagem desse método sobre todas as outras técnicas existentes é que ele é rápido, simples, confiável e minimamente estressante para os camundongos. As implicações deste método se estendem a uma terapia de esclerose lateral neotrópica ou LS porque permite a avaliação rápida de intervenções terapêuticas no modelo de camundongo mais comum da doença. A demonstração visual é crítica, pois o método de pontuação neurológica é difícil de aprender porque as diferenças neurológicas podem ser sutis.

Comece abrigando camundongos SOD machos um G 93 A para que haja um camundongo por gaiola, SOD fêmea um camundongo G 93 A até dois por gaiola. Fornecer enriquecimento ambiental para os ratos na forma de cabanas de plástico. Forneça comida e água aos ratos no registro Lido.

Pesos corporais para todos os camundongos e estudos ao mesmo tempo. O peso corporal diário é um indicador sensível da progressão da doença e de qualquer mal-estar que possa resultar do tratamento medicamentoso crônico. Durante o estudo, avalie a pontuação neurológica de cada camundongo diariamente por meio de um regime de três testes realizados sequencialmente.

Observe com atenção, pois delinear pontuações em pontos de transição fenotípica é muito difícil no primeiro teste. O teste de suspensão da cauda, segure o mouse a aproximadamente 1.5 polegadas da base da cauda sobre a parte superior do fio da gaiola doméstica. Observe a função dos membros posteriores por um período de um a dois segundos e repita o teste três vezes.

Para o teste de caminhada. Coloque o mouse em uma superfície limpa que forneça alguma tração e tenha uma distância de caminhada de pelo menos 25 centímetros. Permita que o mouse ande até 75 centímetros enquanto observa seu ga.

Para o teste de reflexo de escrita, coloque o mouse de lado e use um cronômetro para medir o tempo que leva para se escrever sem ajuda de ambos os lados. Apenas uma tentativa deste teste é necessária. Pontue cada membro posterior esquerdo ou direito independentemente em uma escala de zero a quatro com base no resultado coletivo dos três testes de observação fenotípica.

Um escore sinusal de zero indicando que o camundongo é pré-sintomático. Quando durante o teste de suspensão, os membros posteriores são totalmente estendidos para longe da linha média lateral e permanecem nessa posição por dois segundos ou mais. Além disso, durante o teste de caminhada, observa-se uma marcha normal.

Atribua uma pontuação de um indicando o aparecimento dos primeiros sintomas. Se, durante o ensaio de suspensão, o membro posterior estiver colapsado em direção à linha média lateral, parcialmente colapsado em direção à linha média lateral tremendo ou anormalmente espalhado de alguma outra forma. Além dos sintomas do teste de suspensão que acabamos de mostrar, a marcha de um camundongo que deve receber uma pontuação de um ainda deve parecer normal ou um pouco mais baixa.

Atribua uma pontuação de dois indicando o início de Parsis. Se durante o teste de suspensão, o membro posterior estiver parcial ou completamente colapsado e, além disso, durante o teste de caminhada, os membros posteriores são usados para o movimento para frente. No entanto, os dedos dos pés se curvam para baixo pelo menos duas vezes durante uma caminhada de 75 centímetros ou qualquer parte do pé se arrasta para obter uma pontuação de dois.

O mouse também deve ser capaz de escrever a si mesmo depois de ser colocado em ambos os lados em 10 segundos. Um escore sinusal de três indicando paralisia. Se durante o teste de suspensão o camundongo mostrar paralisia rígida no membro posterior ou tiver movimento articular mínimo, o camundongo ainda pode mostrar movimento para frente durante o teste de caminhada, no entanto, não usando seus membros posteriores.

Além de uma pontuação sinusal de três, o mouse ainda deve ser capaz de escrever a si mesmo depois de ser colocado em ambos os lados em 10 segundos. Finalmente, uma pontuação de quatro, definindo o ponto final humano sempre que o camundongo apresentar paralisia rígida durante a suspensão. O teste não mostra nenhum movimento para frente durante o teste de caminhada usando os membros posteriores e também é incapaz de se escrever dentro de 10 segundos após ser colocado em ambos os lados.

Os camundongos machos geralmente têm uma progressão da doença mais agressiva do que os camundongos fêmeas, como evidenciado por uma maior proporção de sua expectativa de vida exibindo sintomas que podem ser classificados com uma pontuação neurológica de um em comparação com as fêmeas. À medida que os sintomas aumentam para a faixa de uma pontuação neurológica de dois ou três, o número de dias gastos em cada pontuação é igual em frequência entre os gêneros. Aqui são mostrados gráficos de logística ordinal, análise estatística gerados usando o protocolo neuroco que acabamos de descrever.

Esses dados são de um estudo farmacológico de eficácia de medicamentos no qual uma coorte de camundongos SOD um G 93 que recebeu o composto de teste TDI 1 73 é comparada a uma coorte de camundongos que receberam veículo. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas quando os gêneros foram analisados separadamente, mas a significância estatística foi alcançada quando os gêneros foram mesclados. Embora mostrando tendências semelhantes, a análise de sobrevivência de Kaplan Meyer não foi sensível o suficiente para revelar diferenças significativas, mesmo quando os gêneros foram mesclados.

Uma vez dominado, o sistema de pontuação pode ser aplicado em menos de um minuto por mouse se for executado corretamente. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como avaliar a progressão da doença no SOD one G 93, um modelo de camundongo de um LS usando o sistema Neuroco.