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DOI: 10.3791/53262-v
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A cultura de gotículas verticais ex vivo é uma alternativa às técnicas experimentais atuais in vitro e in vivo. Este protocolo é fácil de executar e requer quantidades menores de reagente, ao mesmo tempo em que permite a capacidade de manipular e estudar a vascularização, morfogênese e organogênese fetal.
O objetivo geral deste procedimento é examinar os efeitos de inibidores de pequenas moléculas no desenvolvimento de órgãos fetais usando uma técnica de cultura de gotículas ex vivo. Isso é feito abrindo primeiro o peritônio de uma rata grávida e removendo o embrião contendo o útero. Em seguida, os embriões são removidos do útero e liberados da gema e dos sacos amnióticos.
Em seguida, o complexo de incitação é dissecado e isolado do embrião. Finalmente, o complexo Meris agudo é cultivado em uma gota com ou sem um inibidor de molécula pequena. Em última análise, a microscopia de imunofluorescência é usada para mostrar mudanças na arquitetura do órgão usando anticorpos específicos do tipo de célula.
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