Name: Geomagnética Field (Gmf) and Plant Evolution: investigação dos efeitos dos Gmf Reversão sobre Arabidopsis thaliana Desenvolvimento e Expressão Gênica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-30T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 4 s
Description: Aprenda a reverter o campo geomagnético usando bobinas de Helmholtz para estudar Arabidopsis thaliana. Este método analisa morfologia e expressão gênica em condições controladas, revelando efeitos evolutivos.

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Este trabalho foi apoiado por uma bolsa para o MEM do Departamento de Ciências da Vida e Biologia de Sistemas da Universidade de Turim, Itália. Os autores agradecem a G. Gnavi pela assistência técnica durante alguns experimentos. O CTR é financiado pelo Wellcome Trust e pela Royal Society (número de concessão 098436/Z/12/Z).

1. Ajuste do Triaxial Bobinas NOTA: A Figura 1 mostra as bobinas triaxiais utilizados para inverter a GMF. <ol><li> Ligue o magnetômetro de três eixos, cuja sonda é inserida nas bobinas triaxiais. </li><li> Ligue o computador e iniciar o software magnetómetro que permite que dados sejam coletados de magnetômetro de três eixos. </li><li> Use os valores dos componentes relatados pela magnetómetro para calcular a magnitude da GMF. Por exemplo, com os valores magnetômetro: Bx = 6.39 microTesla, por = 36,08 microTesla, Bz = 20,40 microTesla calcular uma força de campo de 41,94 microTesla usando a seguinte equação: B = B GMF + B adicional, onde B adicional = (Bx 2 + por 2 + Bz 2) e meio (isto é, 41,9 mT no exemplo). </li><li> Ligue as três fontes de alimentação DC (dual range: 0-8V / 5A e 0-20V / 2.5A, 50W) cada um ligado a três couplES de bobinas de Helmholtz e ligado a um computador através de uma ligação GPIB (Figura 1B). </li><li> Conjunto de tensões das fontes de alimentação para gerar o campo magnético desejado com um vector de campo magnético invertida. Por exemplo, com B GMF como no passo 1.3 e com o tamanho da bobina da instrumentação descrita aqui, definir as voltagens para V x = 0,00 V, V Y = 30,52 V, V z = 0,00 V, a fim de gerar um novo resultante B = B + B GMF bobinas triaxiais = (6,38, -36,08, 20,39) microTesla. ie, um novo campo com a mesma magnitude B GMF, mas apontando para uma direção diferente. </li><li> Verificar o novo campo com o software magnetómetro usando o procedimento descrito em 1.3. </li><li> Expor plantas a normal e revertida condições GMF usando placas de Petri como descrito na seção 2. </li><li> Realizar experiências de exposição sham, mantendo a magnitude do campo igual a | B GMF | e manutençãoo componente vertical do campo igual ao da GMF, mas alterando a direcção (ou seja, &quot;do Norte, Este ou Oeste&quot;) da componente horizontal do campo com correntes iguais nas bobinas triaxiais, em comparação com a condição de inversão de campo. Para fazer isso, alterando a tensão dos rolos conforme descrito em 1.5. Nota: Esta exposição sham exclui potencial de aquecimento sutil ou efeitos vibracionais de ambos os rolos próprios ou dos equipamentos eletrônicos usados ​​para controlar as bobinas. </li><li> Executar experimentos duplo-cegos, aplicando condições de campo cego desde o pessoal que executa o restante dos experimentos e / ou interpretação dos dados. </li></ol> 2. Preparação de plantas Materiais e condições para o crescimento de plantas <ol><li> Use sementes de Arabidopsis thaliana, ecotipo Columbia 0 (Col 0), em seguida, colocar num tubo de 1,5 ml e esterilizar por tratamento da superfície com um 5% (w / v) de solução de hipoclorito de cálcio e 0,02% (v / v) de Triton X-100 em 80% de etanol (EtOH), para 10-12 min a 25-28 ° C, com agitação contínua. Em seguida, lavar duas vezes com 80% de EtOH, lavar com EtOH a 100% e, finalmente, enxaguar com água destilada estéril. </li><li> Prepare 1 L de Murashige e Skoog 22 (MS) modificado por adição de meio: 2,297 g de MS (0,5 x MS basal Mistura de sal), 10 g de sacarose, água desionizada até 1 litro, pH 5,8-6,0 ajustado com KOH. Adicionar 16 g de ágar e autoclave durante 20 min, 120 ° C. </li><li> Antes da solidificação, verter 80 mL de meio em cada um (120 x 120 mm 2) placas de Petri quadradas. Semeie trinta sementes estéreis na placa, em seguida, selar as placas com um filme ceroso. </li><li> Vernalize horizontalmente as placas no escuro a 4 ° C durante 2 dias para potenciar e sincronizar a germinação, e, em seguida, expor placas de Petri para normal ou invertida GMF. </li><li> Expor sementes num ambiente de clima controlado a 22 ° C numa posição vertical em experiências paralelas tanto no interior das bobinas triaxiais e fora das bobinas triaxiaissob uma programação fotoperíodo de 8 h escuridão e 16 horas de luz, utilizando lâmpadas de vapor de sódio (220 x 10 -6 E m -2 s -1). Use um filme de gelatina azul para holofotes para reduzir o componente vermelho de lâmpadas. </li><li> Expor as plantas por 10 dias antes da extração de RNA para ambos normal (controle) e inversão (tratamento) as condições GMF. </li><li> Após a exposição, tirar fotos de placas de Petri. </li><li> Use o software ImageJ para calcular áreas comprimento da raiz e da folha. <ol><li> Resumidamente, medir o lado da placa de Petri, em seguida, abra a imagem da placa de Petri e usando a opção de linha &quot;reta&quot; para desenhar uma linha que atravessa exatamente o lado da placa. </li><li> No menu &quot;analisar&quot;, selecione &quot;escala set&quot; e insira a distância real na caixa &quot;distância conhecida&quot; (por exemplo, 120 mm), em seguida, insira a unidade de comprimento (mm); finalmente, clique na opção &quot;global&quot; para fazer as configurações disponíveis para todas as medições. </li><li> Para roocomprimento t, siga atentamente a forma da raiz, usando a ferramenta à mão livre. Meça o comprimento usando a opção &quot;medida&quot; no menu &quot;analisar&quot;. Continue a medir todas as raízes na imagem e salve o arquivo para mais análises estatísticas. </li><li> Para a área foliar, a partir do menu &quot;Imagem&quot; usar a opção e, em seguida, &quot;limite de cor&quot; ajustar. Selecione a folha individual e no menu &quot;analisar&quot;, selecione &quot;analisar partículas&quot;. Salve as medições individuais para análises estatísticas. </li></ol></li></ol> 3. Extracção de RNA total de Arabidopsis, Quantitative PCR em Tempo Real (qPCR) As condições de reacção e os iniciadores para Arabidopsis <ol><li> Recolha separadamente 30 brotos e raízes 30 e congelar imediatamente em nitrogênio líquido. Então moer em nitrogênio líquido com almofariz e pilão. </li><li> Isolar o ARN total utilizando um kit de purificação e kit de tratamento de DNase isenta de RNase usando FABRICAÇÃOinstruções de pronto-socorro. </li><li> Verificação da qualidade e quantidade da amostra, utilizando um kit de ARN a electroforese capilar em gel nano e de acordo com as instruções do fabricante. Confirme a quantificação do RNA por espectrofotometria. </li><li> Use 2 ug de ARN total e iniciadores aleatórios, utilizando um kit de transcrição reversa para ADNc obter ADNc de primeira cadeia de acordo com as recomendações do fabricante. </li><li> Executar todas as experiências em um Real-Time System usando SYBR I verde com ROX como um padrão de carga interno. </li><li> Realizar a reacção com 25 ul de mistura que consiste em 12,5 ul de 2x SYBR Green qPCR Master Mix, 0,5 ul de ADNc e os iniciadores 100 nm. Use os iniciadores listados na Tabela 1. Inclua na controlos controlos não-RT usando RNA total (sem transcrição reversa para monitorizar a contaminação de ADN genómico) e controlos sem molde (molde em vez de água). </li><li> Calcular iniciador eficiência para todos os pares de iniciadores que utilizam a normamétodo da curva 23. </li><li> Use as seguintes condições de PCR: CRU3, COTP1, RRTF1. 10 min a 95 ° C, 40 ciclos de 15 s a 95 ° C, 30 seg a 58 ° C, e 30 seg a 72 ° C; UBP6, eEF1Balpha2, ACT1, GAPC2, CAT3, TAPX, APX1, RbohD, FeSOD1 10 min a 95 ° C, 40 ciclos de 15 s a 95 ° C, 20 seg a 57 ° C, e 30 seg a 72 ° C. </li><li> Leia fluorescência após cada fase de hibridação e extensão. Para todas as corridas, executar uma análise de curva de fusão a partir de 55 até 95 ° C, incluindo o segmento de dissociação no perfil térmico. Use a tela curva de dissociação, acessado através da aba resultados para exibir o perfil de dissociação (enredo da fluorescência em função da temperatura). Certifique-se que o conjunto de dados recolhidos durante o segmento de dissociação do experimento é selecionado para análise utilizando o ecrã Análise / Setup. </li><li> Determinar a linear gama de concentração modelo de ciclo de valor limiar (valor Ct) através da realização de uma série de diluições de dez vezes (de 1 a 10 3 fold) utilizando cDNA de três extrações de RNA independentes analisadas em três repetições técnicas 24,25. </li><li> Analisar todas as parcelas de amplificação com o Real-Time PCR software instrumento para se obter valores Ct. Calibrar e normalizar os níveis de ARN em relação com o nível dos melhores genes de manutenção da seguinte forma: 3.11.1) Acesse a tela Amplification Plots através da guia Resultados, selecione a rampa ou planalto para o qual os dados devem ser analisados ​​por meio de tela / Configuração da Análise Seleção, e, em seguida, selecione o dRn (com correção de linha de base de fluorescência normalizada) a partir do menu de fluorescência no painel de comando. Acesse a placa da tela Valores de exemplo através da guia Resultados para exibir valores Ct para os poços amostrados. </li><li> Use quatro genes de referência diferentes [por exemplo, citoplasmática gliceraldeído-3-fosfato, (GAPC2), especi ubiquitinaIC protease 6 (UBP6), Actin1 (ACT1) e o factor de elongação 1B subunidade alfa-2 (eEF1Balpha2)] para normalizar os resultados da PCR em tempo real. Selecione o topo do ranking gene usando um software de análise de 26; e utilizar o gene mais estável para normalização. <ol><li> Resumidamente, organizar os dados de entrada em uma folha de Excel com a primeira coluna que contém os nomes de genes e primeira linha contendo os nomes de amostra. Em seguida, selecione o software de análise a partir do menu-bar. Use a caixa de diálogo para selecionar os dados introduzidos. </li><li> Em seguida, verifique os campos de nomes de exemplo, nomes de genes e saída simples apenas. Clique no botão Ir para realizar a análise. Escolha do topo gene classificados (que tem o valor menor estabilidade) como gene candidato mais estavelmente expressas. </li></ol></li><li> Os dados do gráfico, mostrando a expressão mudança vezes diferencial em ambos os brotos e raízes. </li></ol> 4. Análise estatística <ol><li> Expresse dados como valores médios ± erro padrão. Compare o control e os grupos de tratamento através da realização de análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey com Bonferroni e Dunn-Sidak teste Probabilidade Ajustado (0,95% de confiança). </li></ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Nós recentemente mostrou que existe uma correlação surpreendente entre reversões GMF eo momento em que o desvio da maior parte das linhagens familiares Angiospermas ocorreu 2. No entanto, apesar das hipóteses estimulante e a pletora de estudos sobre o efeito de intensidades variadas GMF, a hipótese de que a inversão GMF pode-se induzir mudanças significativas na expressão de genes de plantas e morfologia nunca foi demonstrada. Aqui mostramos pela primeira vez, um método que utiliza uma bobina de Helmholtz octogonal triaxial para inverter GMF no nosso laboratório, e que a reversão do campo magnético ambiente pode causar mudanças fenotípicas e modulação da expressão génica em plantas. A fim de obter reversão GMF (ou modificação) ao longo de um volume suficiente para as experiências de crescimento de plantas (2 x 2 x 2 m 3), foi construído um sistema de bobinas de Helmholtz octogonal. Este sistema não está disponível comercialmente (bobinas de Helmholtz são geralmente em forma de anel e menor)e os custos de construção foram consideráveis. É importante ressaltar que este sistema oferece robusta modificação campo, com excepcional tempo estabilidade e homogeneidade nos campos magnéticos modificados. O sistema é concebido e construído para reduzir o valor da GMF a um milésimo de as condições normais ou para reverter qualquer das três dimensões do campo magnético. No entanto, o desenho das bobinas não permite gerar uma força de campo magnético de alta. Portanto, este instrumento, na presente forma não é adequado para experiências concebidas para avaliar os efeitos de alta intensidade de campo magnético sobre as plantas ou outros organismos. No laboratório, a alteração da GMF semelhantes aos descritos neste método foi obtido por métodos diferentes, incluindo blindagem por em torno da zona experimental por meio de placas metálicas ferromagnéticas com elevada permeabilidade magnética, que se desviem campos magnéticos e concentrá-las dentro do próprio metal. ºe vantagem do uso de bobinas de Helmholtz é que o sistema permite que as plantas a ser exposto a condições mais naturais (luz, a circulação do ar, etc), tornando-o ideal não só para os estudos in vitro (tal como com a utilização de pratos de Petri) mas também in vivo para o crescimento das plantas e as experiências de desenvolvimento. As dimensões do nosso sistema de criar um espaço que permite uma supressão até &lt;1/1000 da GMF natural, ao longo de um 25 x 25 x 25 cm 3 de volume esférico (ver Figura 1A), permitindo assim a realização de vários placas de Petri ou algum pequeno potes para o crescimento das plantas. O método aqui apresentado foi aplicada ao estudo da biologia das plantas; No entanto, o sistema permite que uma vasta gama de experimentação, incluindo microbiologia e virologia, bem como estudos sobre nematóides (por exemplo, Caenorhabditis elegans), artrópodes e pequenos animais (incluindo ratinhos e ratos). Por conseguinte, os testes de hipótese de que a inversão da GMF é capazpara induzir alterações morfológicas e de transcrição também poderia ser estendida a muitos outros sistemas vivos, em última análise, talvez até mesmo para as células humanas. A GMF está mudando constantemente e flutuante. Portanto, nas nossas experiências é um desafio importante para proporcionar uma compensação constante da GMF, a fim de obter os novos valores GMF desejados. Isso só pode ser alcançado por um controle contínuo de valores de campos magnéticos através da leitura de valores magnetômetro e compensação de tensão. Portanto, o sistema pode compensar a parte de variação lenta do GMF, mas ele não faz nada para flutuações de frequência mais elevada. Em conclusão, a utilização de bobinas triaxial para inverter o vector GMF foi fundamental para demonstrar que esta inversão do vector GMF é capaz de induzir modificações morfológicas das plantas e expressão diferencial de genes. Os resultados obtidos com o método apresentado proporcionar uma evidência convincente em suporte da hipótese de que a re GMFversals poderia ter sido uma das forças motrizes para a evolução das plantas em escalas de tempo geológicas 2.

O campo magnético da Terra (ou equivalente, o campo geomagnético, GMF) é um fator ambiental inescapável para todos os organismos vivos no planeta, incluindo plantas. A GMF sempre foi uma característica natural da Terra, assim que durante a evolução, todos os organismos vivos teve a sua ação. Um crescente corpo de evidências mostra que o GMF é capaz de influenciar muitos processos biológicos 1. A GMF não é uniforme e existem diferenças locais significativas na sua magnitude e direcção à superfície da Terra. A GMF na superfície da Terra mostra uma ampla gama de amplitudes, que vão desde menos de 30 a cerca de 70 mT mT. A GMF protege a Terra e sua biosfera dos efeitos letais do vento solar, desviando a maioria de suas partículas carregadas através da magnetosfera 2. As plantas respondem aos estímulos do ambiente; e as respostas clássicas a fatores abióticos, como luz e gravidade ter sido thoroughly descrito, definindo as ditas respostas fototrópicos e gravitrópico. Muito pouco, ou nada, se sabe sobre os mecanismos de percepção e de respostas de plantas a campos magnéticos, apesar do grande número de trabalhos publicados sobre este tema e recentemente revisados ​​1. Ao contrário do campo gravitacional, a GMF mudou de forma consistente durante a evolução de plantas representando, assim, um importante fator de estresse abiótico que tem sido considerado recentemente um potencial força motriz, eventualmente, contribuir para a diversificação plantar e especiação 2. Inversões geomagnéticas (ou excursões) são alterações na polaridade da GMF. Durante a história da vida da Terra, reversões GMF ocorreu várias vezes. Estes exposto do planeta para períodos de redução da força GMF durante cada transição de polaridade. Alguns autores levantaram a hipótese de que essas transições períodos de baixa resistência GMF poderiam ter permitido radiação ionizante do vento solar para atingir a superfície da Terra, induzindo assim umestresse consistente para os organismos vivos, o que poderia ter sido forte o suficiente para induzir alterações genéticas acabou levando a plantar evolução 2. Uma análise detalhada das experiências que descrevem os efeitos dos campos magnéticos sobre plantas mostra um grande número de relatos conflitantes, caracterizados por uma escassez de mecanismos de interação biofísicos plausíveis. Muitas experiências são simplesmente irrealista, enquanto outros carecem de uma hipótese testável e, em última análise, não são convincentes 3. Nos últimos anos, a evolução eo estado da investigação sobre o efeito de campos magnéticos na planta foi revisto 2,4-11. Recentemente, o efeito de ambos campo magnético de baixa e alta tem sido exaustivamente discutido 1, com um foco particular sobre o envolvimento de eventos de reversão GMF sobre evolução das plantas 2. O meio mais direto para fundamentar a hipótese de que a inversão GMF afetar a evolução das plantas é sintetizar um GMFreversão no laboratório testando a resposta das plantas à condições do campo magnético normais e inversas. Para testar a hipótese, que, por conseguinte, construída uma bobina de Helmholtz octogonal pares de campo magnético do sistema de compensação (triaxial triaxiais bobinas), que é capaz de reverter com precisão as condições GMF normais. Utilizou-se de Arabidopsis thaliana como planta modelo e testou-se o efeito de revertida GMF na expressão do gene de alguns genes importantes: cruciferina 3 (CRU3), que codifica uma proteína de armazenagem 12S semente que é tirosina-fosforilada e o seu estado de fosforilação é modulado em resposta a ABA em sementes de Arabidopsis thaliana 12,13; Transportes protein1 Copper (COTP1), que codifica uma proteína superfamília transporte heavy metal / desintoxicação com a função predominante na aquisição Cu do solo e desenvolvimento do pólen 14; e Redox Responsive Factor1 Transcrição (RRTF1),que codifica um membro do FER (fator de resposta de etileno) da subfamília B-3 do FER / AP2 família fator de transcrição que contém um domínio AP2 que facilitar a co-activação sinérgica da expressão gênica vias e conferem tolerância cruzada para abióticos e bióticos salienta 15. Além disso, também analisadas cinco genes envolvidos na resposta ao stress oxidativo: Fe superóxido dismutase1, (FSD1), que codifica uma enzima citoplasmática que enzimaticamente e rapidamente converte o anião superóxido (O2 -) e água (H2O) de peróxido de hidrogénio (H 2 O 2) e o oxigénio molecular (O2) 16; Catalase3 (CAT3), que codifica e que a enzima que catalisa a decomposição de H 2 O 2 em água e oxigénio 17,18; Thylakoidal ascorbato peroxidase (TAPX), que codifica para uma peroxidase thylakoid cloroplasmático que elimina H2O2 19; Ascorbato Peroxidase1 (APX1), que codifica uma peroxidase citosólica que elimina H 2 O 2 e representa um dos alvos potenciais de modificações pós-translacionais mediadas por moléculas de derivados NO-20; e NADPH-oxidase explosão respiratória proteína D (RbohD) que codifica uma enzima que gera O2 - e desempenha um papel central na regulação do crescimento, desenvolvimento e respostas de stress em Arabidopsis 21. Nossa metodologia de reversão de campo fornece a primeira evidência de que a reversão GMF pode induzir uma mudança significativa na expressão gênica de morfologia e A. raízes e parte aérea thaliana. Este protocolo proporciona um meio inovador para avaliar o efeito de inversão GMF na morfologia da planta e a expressão de genes e pode ser usado para avaliar o efeito potencial de reversão GMF em outros aspectos do comportamento das plantas, e, assim, conduzir a discussão do role de reversão GMF sobre evolução das plantas.

<table><tbody><tr><td>Magnetômetro de três eixos</td><td>Bartington&nbsp;</td><td>Magnetômetro de fluxo triaxial</td> <td>Mag-03MC</td></tr><tr><td>Fonte de alimentação do magnetômetro</td><td>Bartington&nbsp;</td><td>Mag-03PSU</td><td>magnetômetro de fluxo triaxial</td></tr><tr><td>Software de magnetômetro</td><td>Bartington&nbsp;</td>Fonte de alimentação DC <td>do magnetômetro de fluxo triaxial</td> <td>Mag03DAM</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Agilent Technologies</td><td>E3642A</td><td></td></tr><tr><td>Hipoclorito de cálcio&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>211389</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>Etanol&nbsp;</td><td>Lâmpadas de</td> vapor de sódio Sigma <td>2860</td><td></td></tr><tr><td>GroLux</td>Kit de RNA para Plantas RNA <td>OSRAM Sylvania</td><td>600W</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>74903</td><td></td></tr><tr><td>DNase livre de RNase&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td></td></tr><tr><td>Agilent 2100 Bioanalisador</td><td>Agilent Technologies</td><td>G2938B</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop ND-1000&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>não disponível</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Transcrição Reversa de cDNA de Alta Capacidade&nbsp;</td><td>Applied Biosystems</td><td>4368813</td><td></td></tr><tr><td>Mx3000P</td><td>Agilent Technologies</td><td>401512</td><td></td></tr><tr><td>2x MaximaTM SYBR Green qPCR Master Mix&nbsp;</td><td>Fermentas International, Inc</td><td>K0221</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma</td><td>P7793-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Murashige e Skoog Basal Medium</td><td>Sigma</td><td>M5519&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri quadrada (120 x120 mm2)</td><td>Sigma</td><td>Z692344&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

geomagnética field (gmf) and plant evolution: investigação dos efeitos dos gmf reversão sobre<em&gt; arabidopsis thaliana</em&gt; desenvolvimento e expressão gênica

Geomagnetic Field (Gmf) and Plant Evolution: Investigating the Effects of Gmf Reversal on Arabidopsis thaliana Development and Gene Expression

Uma das observações mais estimulantes em evolução das plantas é uma correlação entre a ocorrência de campo geomagnético (GMF) reversões (ou excursões) eo momento da radiação de Angiospermas. Isto levou à hipótese de que as alterações no GMF polaridade pode desempenhar um papel importante na evolução da planta. Aqui, descrevemos um método para testar esta hipótese, expondo Arabidopsis thaliana para revertida artificialmente condições GMF. Foi utilizado um magnetómetro de três eixos e os dados obtidos foram utilizados para calcular a magnitude da GMF. Três fontes de alimentação DC foram conectados a três pares de bobinas de Helmholtz e foi controlada por um computador para alterar as condições GMF. As plantas cultivadas em placas de Petri foram expostas a ambos normal e invertida condições GMF. Experiências de exposição Sham também foram realizadas. Plantas expostas foram fotografados durante a experiência e as imagens foram analisadas para calcular o comprimento das raízes e área foliar. ARN total foi extraído de Arabidopsis e quantitativaTime-PCR real (qPCR) foram realizadas análises sobre a expressão gênica de cruciferina 3 (CRU3), protein1 transporte de cobre (COTP1), Redox Responsive Transcrição Factor1 (RRTF1), Fe superóxido dismutase 1, (FSD1), Catalase3 (CAT3), Thylakoidal ascorbato peroxidase (TAPX), um ascorbato cytosolic Peroxidase1 (APX1) e NADPH / respiratória proteína explosão oxidase D (RbohD). Quatro genes de referência diferentes foram analisadas para normalizar os resultados da qPCR. O melhor dos quatro genes foi seleccionado e o gene mais estável para a normalização foi usada. Os nossos dados demonstram, pela primeira vez que a inversão da polaridade GMF utilizando bobinas triaxiais tem efeitos significativos sobre o crescimento da planta e a expressão do gene. Isso apóia a hipótese de que a reversão GMF contribui para induzir mudanças no desenvolvimento das plantas que possam justificar uma maior pressão seletiva, levando à plant evolução.

O objectivo do presente protocolo é o de proporcionar um método para avaliar se a inversão do campo geomagnético (GMF) pode afectar o desenvolvimento da planta e a expressão de genes de Arabidopsis thaliana ecotipo Col 0. bobinas triaxiais, como mostrado na Figura 1A são usados ​​para reverter a GMF quando conjunto com as tensões de accionamento apropriados (Figura 1B), obtido como descrito no passo 1.5 do protocolo. As dimensões das bobinas são triaxiais ~ 2 x 2 x 2 m 3, o que permitiu que o espaço suficiente com condições GMF invertidas para acolher várias placas de Petri. Os controlos foram cultivadas nas mesmas condições ambientais e em valores GMF normais. Após 10 dias de exposição ao normal e invertida condições GMF, o fenótipo de plantas apresentaram alterações morfológicas evidentes. Como mostrado na Figura 2, as plantas de controlo (isto é, cultivadas em condições normais GMF) mostrou significativamente com comprimentos de raiz (Dunn-Bonferroni Sidak e ajustado Prob &lt;0,001;T de Student = 10,68, df = 31) os valores mais elevados (29,41 mm; EPM = 1,04; N = 32) no que diz respeito às plantas expostas à invertida GMF (17,53 mm; EPM = 0,58; N = 36). Em plantas GMF-invertidas, a morfologia dos rebentos também foi alterada, mostrando um desenvolvimento reduzido de expansão folheto. Plantas expostas a condições normais mostrou uma área foliar média de 4,95 mm2 (SEM 0,025, N = 54), enquanto as plantas expostas a condições GMF invertidas mostraram significativamente (Dunn-Sidak e Bonferroni ajustado Prob = &lt;0,001; t de Student = 31,32, df = 53) inferior da folha valores de área (3,71 milímetros 2; SEM = 0,032; N = 54). Portanto, a exposição de Arabidopsis a condições GMF invertidas induziu uma redução no comprimento de raiz e área foliar. Expansão foliar e crescimento da raiz são dependentes ambos da divisão eo alongamento das células 27. Portanto, o desenvolvimento da planta, produtividade e condicionamento físico geral são dependentes de uma shoot- e sistema radicular arquitetura ideal &lt;sup&gt; 28. O tamanho reduzido comprimento das raízes e folhas das plantas expostos a condições GMF invertidas indicar a presença de um sistema de detecção capaz de não só perceber variações na intensidade de campo magnético, mas também para responder a alterações do campo magnético &quot;sentido&quot; em comparação com a gravidade. A hipótese de que a reversão GMF pode afetar o crescimento da planta encontra provas convincentes em nossos experimentos, que demonstram que as condições de reversão GMF pode afetar significativamente o desenvolvimento da planta. As alterações morfológicas foram também acompanhada por alterações na expressão de genes. Entre os genes de manutenção, o gene mais estável foi o factor de alongamento 1B subunidade alfa-2. O primeiro grupo de genes (CRU3, COTP1, RRTF1) mostrou uma alteração dramática na expressão do gene (Figura 3). Disparar expressão de todas as três genes foi significativamente aumentada (P &lt;0,05) por cerca de 2.5 vezes, em plantas expostas a reservad condições GMF. Raiz de expressão CRU3 foi regulada positivamente nas raízes em plantas expostas a condições GMF normais, mas foi significativamente (P &lt;0,05) regulada negativamente em condições GMF invertidas. O oposto foi encontrado para COTP1 e RRTF1, que foram regulados negativamente em condições normais e regulada positivamente na presença de reversão GMF (Figura 3). Cruciferina (uma globulina 12 S) é a proteína mais abundante no armazenamento das sementes de A. thaliana e outras crucíferas e é sintetizada como um precursor no retículo endoplasmático rugoso. Em seguida, é transportada para os vacúolos de armazenamento 13 proteína. Germinação de plântulas requer a ruptura da cruciferina, que é utilizado como uma primeira fonte de azoto. Down-regulação da cruciferina degradação reduz o desenvolvimento de embriões, ao alterar as estruturas celulares ou componentes celulares de desenvolvimento 29,30. Nossos resultados mostram que a regulação alta de CRU3 correlaciona-se comuma folha inferior de expansão e um comprimento de raiz reduzida, indicando, assim, que este gene é sensível à reversão GMF e que a sua sobreexpressão pode contribuir para a redução do desenvolvimento da planta. Além disso, a reversão GMF induz uma regulação negativa significativa de CRU3 em raízes, o que se correlaciona com um comprimento de raiz reduzida. O cobre é um co-fator essencial para os processos-chave em plantas, mas exerce efeitos prejudiciais quando em excesso; assim, superexpressão de transporte cobre compromete o crescimento da planta. O efeito da reversão GMF era uma superexpressão significativa de COTP1 em ambos os brotos e raízes, o que explica o baixo crescimento da planta. Ion estresse prejudica o metabolismo dos cloroplastos, que está firmemente ligada ao estado redox da célula. Na Arabidopsis o factor de transcrição RRTF1 é importante para a expressão de genes associados à capacidade para se adaptarem às alterações redox 31. Por isso, quando as plantas são expostas aos estímulos externos capazes de alterar o seu desenvolvimento fisiológico eprogramas de al uma superexpressão deste fator de transcrição importante é esperado. Reversão da GMF induziu uma superexpressão significativa de RRTF1 em ambos os brotos e raízes, indicando, assim, maiores respostas ao estresse oxidativo de plantas a condições GMF invertidas. Resultados interessantes são obtidos através da análise dos cinco genes envolvidos no stress oxidativo. Em geral, todos os genes extraídos e analisados ​​na parte aérea não apresentou diferenças significativas (P&gt; 0,05) quando as plantas foram cultivadas em condições normais ou revertidas GMF (Figura 4 e Figura 5). No entanto, uma regulação negativa significativa foi sempre observada em raízes de plantas expostas a condições GMF invertidas. Em particular, mostrou CAT3 a regulação negativa mais elevada (Figura 5), seguido em ordem de regulação negativa por APX1, FSD1, RBOHD e TAPX (Figura 4). Tolerância cruzada a umstress biótico e biótico é fornecido pela activação de diferentes genes envolvidos em várias vias bioquímicas. factor de transcrição RRTF1 facilita a co-activação sinérgica da expressão de genes destas vias de 15,31, e pode ser potencialmente envolvidos no stress oxidativo 32. Portanto, a regulação positiva de RRTF1 é esperado quando a eliminação de oxigénio é reduzida. Regulação negativa de enzimas eliminadoras de raiz correlaciona-se com a regulação positiva de RRTF1, que age em resposta ao aumento do estresse oxidativo. A regulação baixa dramática da raiz CAT3, APX1 e TAPX indica a capacidade reduzida de células das raízes para limpar H 2 O 2, que é acompanhado pela redução da capacidade para dismutar o ânion superóxido por regulação negativa da FSD1. As respostas ao estresse oxidativo é maior nas raízes, que parecem ser o principal sítio de percepção GMF revertida. Figura 1. Geomagnetic sistema de campo de Compensação. (A) (triaxiais bobinas que compreendem um par de bobinas para cada octogonais de três eixos perpendiculares) usado para inverter o vector de campo geomagnético. (B) Uma fonte de alimentação controlado por computador é ligado a cada par de bobinas de Helmholtz. (As tensões estes números são arbitrários) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53286/53286fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53286/53286fig2.jpg" /> Figura 2. Efeito da inversão geomagnética em Arabidopsis campo morfologia. Após dez dias de exposição, as plantas de controlo (ou seja, aqueles expostos a condições normais GMF) mostram uma significativamente maior comprimento de raiz e mais expanfolhetos ded em comparação com as plantas que foram expostos a condições GMF invertidas. Bar Metric = 18 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53286/53286fig2large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/53286/53286fig3.jpg" /> Figura 3. Efeitos da reversão campo geomagnético na expressão do gene Arabidopsis. Depois de dez dias de exposição, o RNA total de controlo e as plantas tratadas foi extraído e analisado por PCR em Tempo Real para análise de expressão. O efeito da reversão da GMF era induzir uma mudança drástica na expressão gênica de todos os genes que foram testados CRU3, cruciferina 3;. COTP1, Cobre Transportes protein1; RRTF1, Redox Responsive Factor1 Transcrição. As barras indicam o erro padrão; asteriscos indica (P &lt;0,05) diferenças significativas entre plformigas expostas a condições GMF revertida e normais. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53286/53286fig3large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/53286/53286fig4.jpg" /> Figura 4. Efeito da reversão campo geomagnético sobre a expressão gênica relacionados com antioxidante Arabidopsis. Depois de dez dias de exposição, o RNA total de controlo e as plantas tratadas são isolados e utilizados para análise de expressão de genes utilizando PCR em tempo real. O efeito da reversão da GMF era induzir alterações significativas na expressão gênica filmagem; no entanto, uma regulação baixa drástica foi observada na expressão gênica radicular das plantas cultivadas sob condições GMF invertidas TAPX, Thylakoidal peroxidase do ascorbato;. APX1, Ascorbate Peroxidase1; FSD1, Fe Superoxide dismutase1; RbohD, NA. DPH / Respiratory explosão oxidase proteína D barras indicam o erro padrão; asteriscos indica (P &lt;0,05) diferenças significativas entre as plantas expostas a condições GMF invertidas e normais. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53286/53286fig4large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/53286/53286fig5.jpg" /> Figura 5. Efeitos da inversão geomagnética em Arabidopsis campo catalase 3 (CAT3) a expressão do gene. Depois de dez dias de exposição, o RNA total de controlo e as plantas tratadas são isolados e utilizados para análise de expressão de genes utilizando PCR em tempo real. O efeito da reversão da GMF era induzir alterações significativas na expressão gênica filmagem; No entanto, uma regulação negativa drástica foi observada na expressão do gene da raiz de plantas crescidas sob condições GMF invertidas. As barras indicam Erro padrãor; asteriscos indica (P &lt;0,05) diferenças significativas entre as plantas expostas a condições GMF invertidas e normais. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53286/53286fig5large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Este protocolo descreve um método para testar a hipótese de que a reversão do campo geomagnético efetivo (GMF) induz expressão gênica diferencial e altera a morfologia de Arabidopsis thaliana. Um sistema octogonal triaxial de pares de bobinas de Helmholtz foi usado para gerar artificialmente condições de GMF invertidas na câmara de crescimento da planta.

Geomagnética Field (Gmf) and Plant Evolution: investigação dos efeitos dos Gmf Reversão sobre<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Desenvolvimento e Expressão Gênica

One of the most stimulating observations in plant evolution is a correlation between the occurrence of geomagnetic field (GMF) reversals (or excursions) ...

O objetivo geral deste procedimento é produzir a inversão do campo magnético terrestre, ou CMT, com bobinas de Helmholtz controladas por uma fonte de alimentação. Em última análise, demonstra-se que a inversão do CMT afeta a morfologia e a expressão gênica de plantas. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área de evolução de plantas, como, por exemplo, se a inversão do campo magnético da Terra pode ter desempenhado um papel na evolução e adaptação das plantas.A principal vantagem desta técnica é que ela pode ser usada para testar possíveis efeitos biológicos de campos magnéticos fracos em um organismo modelo simples que pode ser cultivado com muitas réplicas, todas sob condições rigorosamente controladas. A demonstração deste procedimento será feita por Alberto Bocco e um aluno orientado do meu laboratório, além de Kiara aa. Ela é estudante de doutorado no meu laboratório e CIA Bertea, que é professora associada no meu grupo.Para começar, ligue as três fontes de alimentação CC conectadas aos três pares de pares de bobinas de Helm Holtz e ligue o magnetômetro de três eixos cuja sonda está inserida nas bobinas triaxiais. Ligue o computador e inicie o software do magnetômetro, que permite coletar dados do magnetômetro de três eixos. As fontes de alimentação também estão conectadas a um computador por meio de conexão A-G-P-I-B para controle.Defina as tensões das fontes de alimentação para gerar o campo magnético desejado com um vetor de campos magnéticos invertido, conforme descrito no protocolo textual. Coloque as sementes de Arabidopsis Aliana ecótipo Columbia, zero, em um tubo de 1,5 mililitro, superficialmente esterilizadas por tratamento com uma solução de hipoclorito de cálcio por 10 a 12 minutos a 25 a 28 graus Celsius com agitação contínua. Em seguida, enxágue as sementes duas vezes com etanol a 80%, seguido por uma lavagem com etanol a cem por cento.E, finalmente, uma lavagem com água destilada estéril. Prepare um litro do meio Murrah Shiga e SCOG modificado conforme descrito no protocolo textual antes da solidificação. Despeje 80 mililitros de meio em cada placa de Petri quadrada, colocando 30 sementes estéreis em cada placa.Em seguida, feche as placas com uma película cerosa. Incube as placas horizontalmente no escuro a quatro graus Celsius por dois dias para potencializar e sincronizar a germinação. Prepare as lâmpadas de vapor de sódio cobrindo o foco com um filme de gelatina azul para reduzir a componente vermelha das lâmpadas após a vernalização.Prepare-se para expor as placas de Petri ao GMF normal ou invertido. Exponha as sementes em um ambiente com controle climático a 22 graus Celsius, em posição vertical. Em experimentos paralelos, tanto fora quanto dentro das bobinas triaxiais.Sob um regime fotoperiódico de oito horas de escuro e 16 horas de luz. Após a exposição, tire fotos das placas de Petri para calcular o comprimento das raízes e as áreas foliares. Primeiro, meça o lado da placa de Petri.Em seguida, abra a imagem da placa de Petri no software ImageJ e use a opção de linha reta para desenhar uma linha que cruze exatamente o lado da placa. No menu analisar, selecione definir escala e insira a distância real na caixa de distância conhecida. Em seguida, insira a unidade de comprimento.E, finalmente, clique na opção global para tornar as configurações disponíveis para todas as medições de comprimento de raiz. Siga cuidadosamente o formato da raiz utilizando a ferramenta de desenho livre. Meça o comprimento utilizando a opção de medição no menu analisar.Continue a medir todas as raízes na imagem e salve o arquivo para análise estatística posterior. Para a área foliar, no menu de imagem, utilize a opção ajustar, seguida de limiar de cor, selecione a folha individual e, no menu analisar, selecione analisar partículas, salvando as medições individuais para análise estatística. Colete 30 brotos e 30 raízes separadamente e congele-os imediatamente em nitrogênio líquido.Em seguida, moa em nitrogênio líquido com almofariz e pistilo antes de isolar o RNA total conforme descrito no protocolo textual, realize todos os experimentos em um sistema em tempo real usando cyber green um com ROX como padrão interno de carregamento, realize a reação com uma mistura de 25 microlitros. Utilizando os iniciadores listados no protocolo textual, inclua controles sem transcriptase reversa para monitorar contaminação por DNA genômico, bem como controles sem molde. Leia a fluorescência após cada fase de anelamento e extensão.Os dois ícones de lupa representam os dados coletados, incluindo as curvas de ligação e dissociação. Navegue até a tela de análise e configuração e certifique-se de que o conjunto de dados coletado durante o segmento de dissociação do experimento esteja selecionado. Para análise de todos os ensaios, realize uma análise de curva de fusão de 55 a 95 graus Celsius incluindo o segmento de dissociação no perfil térmico.Utilize a tela de curva de dissociação acessada pela guia de resultados. Para visualizar o perfil de dissociação. Analise todos os gráficos de amplificação com o software do instrumento de PCR em tempo real.Para obter os valores de CT, calibre e normalize os níveis relativos de RNA com o nível dos melhores genes de referência. Acesse a tela de gráficos de amplificação através da guia resultados. Selecione a rampa ou a fase de platô para a qual os dados devem ser analisados usando a tela de análise, seleção e configuração.Em seguida, selecione a fluorescência normalizada corrigida para a linha de base no menu de fluorescência no painel de comandos. Acesse a tela de valores das amostras da placa através da guia de resultados. Para exibir os valores de CT das poças amostradas.Utilize quatro genes de referência diferentes para normalizar os resultados da PCR em tempo real. Selecione o gene com a classificação mais alta usando o software de análise e utilize o gene mais estável para normalização. Organize brevemente os dados de entrada em uma planilha do Excel, com a primeira coluna contendo os nomes dos genes e a primeira linha contendo os nomes das amostras.Em seguida, selecione o software de análise na barra de menus. Utilize a caixa de diálogo para selecionar os dados de entrada. Depois, verifique os nomes das amostras, os nomes dos genes e marque somente saída simples.Clique no botão ir para realizar a análise, selecione o gene com a classificação mais alta como o gene candidato com expressão mais estável. Após 10 dias de exposição, as plantas controle apresentam um comprimento de raiz significativamente maior e folíolos mais desenvolvidos em comparação com as plantas expostas a condições de GMF invertido após 10 dias de exposição. O efeito da inversão do GMF foi uma alteração drástica na expressão gênica de todos os genes testados, incluindo crucífera na proteína transportadora de cobre um e no fator de transcrição um, responsivo à redox. As barras indicam o erro padrão; asteriscos indicam diferenças significativas entre plantas expostas a condições de GMF invertido e normal.O efeito da inversão do GMF não induziu mudanças significativas na expressão gênica da parte aérea. No entanto, observou-se uma drástica subregulação na expressão gênica da raiz de plantas cultivadas. Em condições de GMF invertido, esses genes incluem thal, peroxidase aate, peroxidase aate, uma superóxido dismutase de ferro, uma N-A-D-P-H, oxidase de explosão respiratória, proteína e catalisador três.Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em minutos até hoje, dependendo do experimento necessário, se for executada corretamente. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa ideia de como inverter ou alterar o campo geomagnético e realizar estudos morfológicos e genéticos em plantas expostas. Ao tentar este procedimento, é importante remover todas as fontes de campo magnético da região cercada pelas bobinas em forma de capacete.É importante que as bobinas do capacete e seus geradores não gerem calor nem vibrações. O pesquisador deve permanecer cego quanto à condição de exposição ao campo magnético até que os dados finais tenham sido registrados. Esta técnica permitiu que pesquisadores na área de magnetopercepção explorassem o efeito de campos magnéticos na evolução de plantas, no comportamento e na navegação animal, e em linhagens celulares humanas.No futuro, esperamos realizar estudos semelhantes em microgravidade, a fim de avaliar como a alteração do campo magnético impactará, em condições espaciais, o crescimento de plantas. Trabalhar com sistemas que geram campos magnéticos fracos não é considerado perigoso. No entanto, você deve tomar as precauções normais e deve procurar o aconselhamento de um eletricista qualificado antes de trabalhar com equipamentos como as fontes de alimentação para os pares de bobinas de Helm.

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

A base molecular do espaço-respostas específicas fitocromo está sendo investigado o uso de plantas transgênicas que apresentam tecidos e órgãos específicos deficiências fitocromo. O isolamento de células específicas exibindo esgotamento cromóforo fitocromo induzida por fluorescência-Activated Celular classificação seguido por análises de microarray está sendo utilizada para identificar genes envolvidos em respostas espaciais específicos fitocromo.

Investigando Tecido e órgãos específicos Responses Fitocromo usando FACS assistida Célula tipo Profiling expressão específica no Arabidopsis thaliana</em

Uma busca fundamentais em biologia celular é definir os mecanismos subjacentes à identidade dos organelos que tornam as células eucarióticas. Aqui é proposto um método para identificar os genes responsáveis ​​pela integridade morfológica e funcional de organelas vegetais utilizando microscopia de fluorescência e as ferramentas a próxima geração de sequenciação.

Microscopia de fluorescência de Triagem e seqüenciamento da próxima geração: Ferramentas úteis para a identificação de genes envolvidos na integridade das Organelas

Nós descrevemos um protocolo com lâminas de câmara e de mídia para imobilizar cotilédones de plantas para imagem confocal da epiderme durante vários dias de desenvolvimento, documentação diferenciação estomática. Proteínas fluoróforo com a tag pode ser monitorado de forma dinâmica por expressão e localização subcelular, aumentando a compreensão de seus possíveis papéis durante a divisão celular e diferenciação do tipo de célula.

Longo prazo, de alta resolução de imagem Lapse Confocal Tempo de<em&gt; Cotilédone Arabidopsis</em&gt; Epiderme durante a germinação

Nós apresentamos o procedimento para montar um ensaio da cama tegumento (SCBA) de Arabidopsis thaliana sementes. O ARA foi demonstrado ser uma ferramenta poderosa para explorar geneticamente e in vitro como a germinação de sementes de controlo do endosperma de sementes de dormentes e em resposta a sinais de luz. O SCBA é, em princípio, aplicável em qualquer situação em que se suspeita que o endosperma para influenciar o crescimento embrionário.

A Brasão Cama Ensaio de Sementes para explorar Geneticamente<em&gt; In Vitro</em&gt; Como a germinação Controles do endosperma das sementes em<em&gt; Arabidopsis thaliana</em

Cromatina imunoprecipitação é uma técnica poderosa para a identificação de locais de Arabidopsis proteínas de ligação ao ADN in vivo. Este procedimento inclui a ligação cruzada da cromatina e fragmentação, imunoprecipitação com anticorpos selectivos contra a proteína de interesse, e análise de qPCR de DNA ligado. Nós descrevemos um ensaio ChIP simples otimizado para plantas de Arabidopsis.

Ensaio para imunoprecipitação da cromatina a identificação de Arabidopsis interações proteína-ADN<em&gt; In Vivo</em

O objetivo deste protocolo é demonstrar a aceleração da taxa de crescimento inicial das plantas aplicando campos magnéticos estáticos sem energia externa.

Aperfeiçoamento da taxa de crescimento inicial das plantas agrícolas usando campos magnéticos estáticos

Este protocolo descreve um método para observar a embriogênese em Arabidopsis através do apuramento ovule, seguido de inspeção de formação padrão de embrião sob um microscópio.

Um método para caracterizar a embriogênese em Arabidopsis

Este protocolo descreve um método simples para análise de sinais de cálcio em plantas geradas pela alimentação hemipteran insetos, como pulgões. Arabidopsis thaliana transformada com o biosensor de cálcio GFP GCaMP3 permitem a imagem em tempo real na vivo da dinâmica de cálcio com alta resolução temporal e espacial.

Gravação em tempo real na Vivo de Arabidopsis sinais de cálcio durante a alimentação de insetos usando um biossensor fluorescente

Percepção de Giberelina Sensor 1 (GPS1) é o primeiro Förster ressonância energética baseada em transferência biosensor para medir os níveis celulares de fitohormônios Giberelina com uma alta resolução spatiotemporal. Este protocolo informa o método para visualizar e quantificar os níveis de Giberelina celular usando o biosensor nlsGPS1 geneticamente codificado em Arabidopsis hipocótilo e dicas de raiz.

Níveis de Giberelina celular visualização usando a energia de ressonância de Förster NlsGPS1 transferir Biosensor (FRET)

Uma máquina de carregamento suave de força de toque é construída a partir de escovas de cabelo humano, braços robóticos e um controlador. As escovas do cabelo são conduzidas por braços robóticos instalados na máquina e movem-se periodicamente para aplicar a toque-força em plantas. A força dos toques de cabelo acionado por máquina é comparável à dos toques aplicados manualmente.

Um trabalho-economia e repetível Touch-Force sinalização mutante Screen Protocol para o estudo de Thigmomorphogenesis de uma planta modelo Arabidopsis Arabidopsis thaliana

A sinalização sistêmica de cálcio acionada por glutamato extracelular é fundamental para a indução de respostas de defesa vegetal a ferimentos mecânicos e ataque herbívoro em plantas. Este artigo descreve um método para visualizar a dinâmica espacial e temporal de ambos os fatores usando plantas arabidopsis thaliana expressando biosensores fluorescentes sensíveis ao cálcio e glutamato.

Imagens em campo amplo e em tempo real de sinais de feridas locais e sistêmicas em Arabidopsis

Aprenda a reverter o campo geomagnético usando bobinas de Helmholtz para estudar Arabidopsis thaliana. Este método analisa morfologia e expressão gênica em condições controladas, revelando efeitos evolutivos.

Geomagnética Field (Gmf) and Plant Evolution: investigação dos efeitos dos Gmf Reversão sobre Arabidopsis thaliana Desenvolvimento e Expressão Gênica (Vídeo) | JoVE Journal

Geomagnética Field (Gmf) and Plant Evolution: investigação dos efeitos dos Gmf Reversão sobre

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