Name: Um modelo de celular endotelial Planar for Imaging imunológica Synapse Dynamics (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Aprenda a utilizar células endoteliais como modelo planar de células apresentadoras de antígeno para investigar processos de sinalização antigênica. Este método permite imagem de alta resolução da sinapse imunológica e ativação de células T.

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Agradecemos ao Dr. Peter T. Sage por sua ajuda na geração de algumas das imagens representativas. Este trabalho foi apoiado por uma bolsa NIH R01 para C.V.C. (HL104006).

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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

No geral, este protocolo descreve métodos para a investigação de células endoteliais como i) APCs fisiológicos pouco estudado e ii) como um novo tipo de &quot;modelo APC celular planar&quot;. Com relação ao primeiro, tornou-se cada vez mais apreciado que APCs não hematopoiéticas periférica (ou &#39;estromais&#39;) desempenham papéis, não redundantes críticos (ou seja, em comparação com hematopoiéticas APCs) na formulação de respostas imunes adaptativas 16-18. Entre tais &quot;semi-profissional&quot; ...

Os linfócitos T são um ramo do sistema imunitário adaptativo, caracterizado por a capacidade de reconhecer eficientemente antigénio peptídico (Ag) ligado ao complexo principal de histocompatibilidade (MHC) através dos seus receptores de células T (TCRs) 1. Linfócitos naive constitutivamente migrar e digitalizar &#39;Ag células apresentadoras de profissionais &quot;(APCs; por exemplo, células dendríticas) dentro de gânglios linfáticos, enquanto as células de memória / T efetoras precisa fazer um levantamento efetivamente uma gama extremamente ampla de APCs e células alvo em potencial dentro tecidos periféricos. Na min após o reconhecimento inicial de cognato Ag em um APC, linfócitos prender sua migração e começam a formar uma interface célula-célula íntimo especializado denominado &quot;sinapse imunológica&quot; (IS). Sustentada (ie, 30-60 min) É contatos são necessários para ampliar e sustentar a sinalização 2-7. Estudos emergentes identificar que no seja, é a formação contínua e rápida remodeling de micro-aglomerados discretos sinalização sub-celular (ou seja, contendo MHC / Ag-TCR, F-actina, adesão e moléculas de sinalização) que determinam a força e qualidade dos resultando respostas imunes 2-7. No entanto, detalhes dinâmicos e mecanismo de regulação deste processo são completamente compreendidas 8,9. Isso decorre, em grande parte dos desafios técnicos associados com topologias de superfícies irregulares APC e orientação mal controlada dos planos de interação célula-célula, as questões que limitam profundamente a imagem espaço-temporal requisito aproxima 8-10 (Figura 1A). <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/53288/53288fig1.jpg" /> Figura 1. Um Fisiológica Planar Modelo APC celular for Imaging imunológica Synapse Dynamics. O esquema ilustra imagem tradicional da sinapse imunológica entre uma célula T e um professio<html> nal APC (A) e de células T e um lipídicas planas modelo tradicional bicamada APC (B) em comparação com este modelo planar APC endotelial novel (C). APCs profissionais fornecer sinapses imunológicos fisiológicos, mas oferecem interface de mal orientadas célula-célula (isto é, em relação ao plano de imagem XY óptima; resolução ~ 0,2 ^ M), o que compromete dramaticamente espacial (plano de imagem z resolução ~ 1 mm) e temporal (isto é, devido à necessidade de digitalizar repetidamente através de todos os planos de imagem z) resolução de imagem. Modelos de duas camadas tem uma topologia plana que fornece melhor resolução de imagem espaço-temporal, mas também são altamente simplificado, não-fisiológica e rígida. Este modelo combina células endoteliais a topologia planar de camadas duplas lipídicas com o substrato fisiológico de um APC clássico para oferecer resolução de imagem espacial e temporal ideal em um ambiente fisiológico.m / files / ftp_upload / 53288 / &quot;target =&quot; _ blank 53288fig1large.jpg &quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. Trabalhos anteriores contornada parcialmente estes obstáculos através do desenvolvimento de modelos de substrato planar (isto é, as bicamadas lipídicas e das superfícies revestidas com anticorpo) que fornecem resolução espaço-temporal óptimo (ou seja, através de fixação superfície a activação das células T num único plano que é paralelo ao imagiologia XY óptima avião) 11-15 (Figura 1B). Estes modelos têm facilitado importantes insights sobre a dinâmica subcelulares / molecular que controlam a sinalização antigênico nas células T, incluindo a descoberta de actina dinâmica / TCR sinalização micro-aglomerados 7,11-14. No entanto, tais modelos são inerentemente muito simplificado, assim como rígida (impedindo o desenvolvimento / estudo de características topológicas 3-dimensional) (Figura 1B). Portanto, permanece incerto como relacionar esses achados para phycélula-célula siologic vigilância imunológica. Embora ainda pouco estudadas, vascular e células endoteliais linfáticas estão emergindo como uma grande (ou seja, maior em número do que todos os APCs profissionais, por ~ 1.000 vezes) compartimento periférico de &quot;semi-profissional&quot; APCs 16-18. Estas células expressam MHC-I, MHC-II e uma multiplicidade de moléculas co-estimuladoras (por exemplo, CD40, LFA3, ICOSL, 4-1BB, OX40L, TL1A, PD-L1, mas não CD80 e CD86) e são estrategicamente posicionada na interface de sangue-tecido onde servem funções especializadas sentinela 16-18. Estudos anteriores demonstraram que as células endoteliais podem efetivamente re-estimular efector / memória, mas não naïve, células T 19-25. Assim, as células endoteliais são susceptíveis de desempenhar papéis exclusivos da APC na fase efectora da resposta imune adaptativa no interior dos tecidos periféricos, tais como a influência local sobre a activação de células T, a diferenciação, a memória e a tolerância 16,17,26. Criticalmente, quando cultivadas in vitro, as células endoteliais formam superfícies celulares praticamente planares e estão facilmente transfectáveis ​​(por exemplo, com os repórteres de proteína fluorescente). Estas características são ideais para imagens de alta resolução espacial e temporal da dinâmica topológica durante as interações célula-célula 19,27. Assim, as células endoteliais pode servir como um fisiológico &quot;planar celular da APC modelo extremamente adequado para o estudo dos mecanismos de remodelação subcelulares / moleculares que conduzem o reconhecimento do antigénio e regulam as respostas (Figura 1C) 19,20. Previamente estabelecida técnicas de imagem complementares (incluindo a transfecção de células endoteliais com fabricantes de proteína fluorescente da membrana de plasma e citossol) para estudar os detalhes da interacção de leucócitos-endotélio durante a adesão e a migração transendotelial de 27, mostraram que os leucócitos sondar activamente a superfície do endotélio por dinâmico inserção de umd retração de sub-mícron-escala, saliências cilíndricas ricas em actina (~ 200-1.000 nm de diâmetro e profundidade) denominado saliências invadosome-like (ou seja, &#39;ILPS&#39;) 27,28. Estas abordagens de imagem têm sido expandida, juntamente com a criação de protocolos para tirar proveito da função endotelial APC para desenvolver os primeiros métodos para imagens de alta resolução espacial e temporal da célula endotelial sinapse imunológica T como relatado 19,20 e ainda descrever aqui. Uma constatação fundamental derivado dessa modelo APC celular romance planar é que procedimentos ILP células T funcionar tanto na promoção da detecção Ag inicial e na manutenção de sinalização subsequente. Na verdade, matrizes de múltiplos procedimentos ILP (que foram estabilizados e acumulados em resposta a rubricar o fluxo de cálcio) mostram enriquecimento em TCR e moléculas de sinalização sugestivos activa, tais PKC-Q, ZAP-70, fosfotirosina e HS1. Portanto, procedimentos ILP parecem representar um equivalente fisiológico tridimensional para o micro-TCR sinalizaçãoaglomerados observados nos modelos de duas camadas planas. Esta abordagem, assim, com sensibilidade revela / relatórios dinâmica molecular e arquitetônicos (e implícitas biomecânico) de outra forma não detectável. O método descrito aqui deve ser útil para fazer a ponte entre APC profissional e modelos artificiais de substrato APC a fim de aumentar a nossa capacidade de interrogar mecanismos básicos da resposta imune adaptativa. Embora aqui o foco é sobre a activação das células T CD4 + do tipo Th1 efector / célula de memória, esta abordagem básica pode ser facilmente modificado para estudar uma ampla gama de tipos de células T e Ags, como discutido abaixo.

<table><tbody><tr><td>Torniquete sem látex elástico BD</td><td>Biosciences BD Biosciences</td><td>367203</td><td></td></tr><tr><td>Cotonetes com álcool BD</td><td>Biosciences</td><td>BD Biosciences 326895</td><td></td></tr><tr><td>BD Vacutainer Safety-Lok</td><td>BD Biosciences</td><td>367861</td><td>K2</td></tr><tr><td>EDTA BD Vacutainer Conjunto de coleta de sangue com botão de pressão</td><td>BD Biosciences</td><td>367335</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8758-1L</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GE17-1440-02</td><td>Traga para RT antes</td></tr><tr><td>de usar FCS-Optima</td><td>Atlanta Biologics</td><td>s12450</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td> inativada por calor <td>Sigma-Aldrich</td><td>P4458-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Trypan blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-20ML</td><td></td></tr><tr><td>enterotoxina estafilocócica</td><td>B Toxina Tecnologia</td><td>BT202RED</td><td>Solução de estoque 1mg / ml em PBS</td></tr><tr><td>toxina da síndrome do choque tóxico 1</td><td>Tecnologia de toxinas</td><td>TT606RED</td><td>Solução de estoque 1mg / ml em</td></tr><tr><td>PBS IL-15 humano</td><td>R & D Systems</td><td>247-IL-025</td><td>Solução de estoque 50ug / ml em PBS</td></tr><tr><td></td><td>PBS Life Technologies</td><td>10010-049</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectina</td><td>Life Technologies</td><td>33016-015</td><td>Solução de estoque 1mg / ml em H20</td></tr><tr><td>HMVEC-d Ad-Dermal MV Endo Cells</td><td>Lonza</td><td>CC-2543</td><td>Outros ECs microvasculares humanos podem ser usados, ou seja, HLMVECs</td></tr><tr><td>EGM-2 MV kit de bala</td><td>Lonza</td><td>CC-3202</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-4174</td><td>Solução de estoque 10x, diluída em PBS</td></tr><tr><td>amaxa-HMVEC-L Kit de nucleofector</td><td>Lonza</td><td>vpb1003</td><td>Kit necessário para a etapa 4</td></tr><tr><td>IFN-g</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3265</td><td>Solução de estoque 1mg/ml em H20</td></tr><tr><td>TNF-alfa 10ug, Human</td><td>Life Technologies</td><td>PHC3015</td><td>Solução de estoque 1mg/ml em fenol H20</td></tr><tr><td>HBSS sem vermelho</td><td>Life Technologies</td><td>14175-103</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP299-100</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto</td><td>de Cálcio Sigma-Aldrich</td><td>C1016-100G</td><td>Solução de estoque 1M em H20</td></tr><tr><td>Cloreto</td><td>de magnésio Sigma-Aldrich</td><td>208337</td><td>Solução de estoque 1M em H20</td></tr><tr><td>Albumina de soro humano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6909-10ml</td><td></td></tr><tr><td>Immersol 518 F óleo de imersão livre de fluorescência</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-624-66A</td><td></td></tr><tr><td>Fura-2 AM 20x50ug</td><td>Life Technologies</td><td>F1221</td><td>Solução de estoque 1mM em DMSO</td></tr><tr><td>pEYFP-Mem (Mem-YFP)</td><td>Clontech</td><td>6917-1</td><td></td></tr><tr><td>pDsRed-Monomer (DsRed citoplasmático solúvel)</td><td>Clontech</td><td>632466</td><td></td></tr><tr><td>pDsMembrana de monômero vermelho (Mem-DsRed)</td><td>Clontech</td><td>632512</td><td></td></tr><tr><td>pEGFP-Actin</td><td>Clontech</td><td>6116-1</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Faloidin</td><td>Life Technologies</td><td>A12379</td><td></td></tr><tr><td>Solução de formaldeído 37%</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP531-500</td><td>Tóxico, use capela</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-5ML&</td><td></td></tr><tr><td>nbsp; Tubos de Centrífuga Cônicos Falcon 15mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-70C</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de Centrífuga Cônicos Falcon 50mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49A&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Frascos Tratados com Cultura de Tecidos Falcon T25</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-126-9</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Frascos Tratados com Cultura de Tecidos Falcon T75</td><td>Fisher Scientific</td><td>&nbsp; 13-680-65</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Corning Cell Culture Treated T175</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-126-61&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lamínulas de vidro&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-85&nbsp;</td><td>12 mm de diâmetro</td></tr><tr><td>&nbsp; Placas de Cultura de Tecidos Falcon 24-well</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-1</td><td></td></tr><tr><td>Placas Delta-T</td><td>Bioptechs</td><td>04200415B</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas Pasteur Descartáveis Wheaton</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-8D</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml Eppendorf tube&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-402-25</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; ICAM1 camundongo anti-humano</td><td>BD Biosciences</td><td>555509</td><td></td></tr><tr><td>camundongo HS1 camundongo anti-humano</td><td>BD Biosciences</td><td>610541</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Human CD11a (LFA-1alpha) Purificado</td><td>ebioscience</td><td>BMS102</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Human CD3 Alexa Fluor&reg; 488</td><td>ebioscience</td><td>53-0037-41</td><td></td></tr><tr><td>Anti-MHC Classe II anticorpo&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab55152</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Talin 1 anticorpo</td><td>Abcam</td><td>ab71333</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PKC theta anticorpo&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab109481</td><td></td></tr><tr><td>fosfotirosina (4G10 Platinum)</td><td>Millipore</td><td>50-171-463</td><td></td></tr><tr><td>Nucleofector II</td><td>Amaxa Biosystems</td><td></td><td>Eletroporador necessário para o passo 4</td></tr><tr><td>Zeiss Axiovert</td><td>Carl Zeiss MicroImaging</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zeiss LSM510&nbsp;</td><td>Carl Zeiss MicroImaging</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Axiovison Software</td><td>Carl Zeiss MicroImaging</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NU-425 (Série 60) Armário de Segurança Biológica</td><td>NuAIRE</td><td>Nu-425-600</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Forma STRCYCLE 37 &deg; C, 5% CO2 Incubadora de Cultura</td><td>de Células Centrífuga Fisher Scientific</td><td>202370</td><td></td></tr><tr><td>5810</td><td>Eppendorf</td><td>EW-02570-02</td><td></td></tr><tr><td>Hemocitômetro</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; Z359629</td><td>Hemocitômetro Bright-Line</td></tr><tr><td>Isotemp Banho-maria modelo 202</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-462-2</td><td></td></tr></tbody></table>

um modelo de celular endotelial planar for imaging imunológica synapse dynamics

An Endothelial Planar Cell Model for Imaging Immunological Synapse Dynamics

A imunidade adaptativa é regulada por interações dinâmicas entre as células T e células apresentadoras de antígenos (&#39;APCs&#39;) conhecido como &#39;sinapses imunológicas. Dentro destas interfaces de célula-célula íntimos agrupamentos sub-celular discretas de MHC / Ag-TCR, F-actina, adesão e moléculas de sinalização formar e remodelar rapidamente. Essas dinâmicas são pensados ​​para ser determinantes críticos tanto da eficiência e qualidade das respostas imunes que se desenvolvem e, portanto, de proteção contra a imunidade patológica. Compreensão atual das sinapses imunológicas com fisiológico APCs é limitado pela inadequação da resolução de imagem obtidos. Embora modelos substrato artificial (por exemplo, bicamadas lipídicas planas) oferecem excelente resolução e têm sido ferramentas extremamente valiosas, eles são inerentemente não-fisiológica e simplista. As células endoteliais vasculares e linfáticas surgiram como um tecido periférico importante (ou estroma) compartimento de &quot;semi-profissãoai APCs &#39;. Estas APCs que expressam (a maioria da maquinaria molecular de APCs profissionais) têm a característica única de formação da superfície celular praticamente plana e são facilmente transfectáveis ​​(por exemplo, com os repórteres de proteína fluorescente). Aqui uma abordagem básica para implementar as células endoteliais como uma nova e fisiológico &quot;planar modelo celular da APC &#39;para melhorar a imagiologia de interrogação e de processos fundamentais de sinalização antigénicos irá ser descrito.

Uma nova abordagem de imagem usando células endoteliais e que combina as vantagens de resolução do cartão planar bicamadas lipídicas modelo com a complexidade fisiológica e deformabilidade da APC profissional foi desenvolvido (Figura 1). A Figura 2 proporciona exemplos de migração típica, fluxo de cálcio e dinâmica topológica observada com este abordagem. Na ausência de retracção no endotélio, os linfócitos T CD4 + Th1 SAg específicos espalhar...

A imunidade adaptativa é controlada por 'sinapses imunológicas' dinâmicas formadas entre células T e células apresentadoras de antígenos. Este protocolo descreve métodos para investigar células endoteliais como APCs fisiológicas pouco estudadas e como um novo tipo de 'modelo de APC celular planar'.

Um modelo de celular endotelial Planar for Imaging imunológica Synapse Dynamics

Adaptive immunity is regulated by dynamic interactions between T cells and antigen presenting cells (&#39;APCs&#39;) referred to as &#39;immunological ...

O objetivo geral desta técnica é utilizar células endoteliais como um novo tipo de modelo de célula apresentadora de antígeno planar para investigar processos fundamentais de sinalização antigênica. Este método pode nos ajudar a responder perguntas essenciais na área da imunidade adaptativa, como a coordenação espacial e temporal da dinâmica de remodelamento subcelular e molecular dentro da sinapse imunológica. A principal vantagem desta técnica é que o endotélio forma uma superfície de célula apresentadora praticamente planar.Isso permite a obtenção de imagens com resolução espaço-temporal ótima no contexto de uma superfície celular fisiologicamente complexa e moldável. Embora este método se concentre na ativação de células T CD4 positivas de memória efetora, ele também pode ser aplicado para o estudo de diversos tipos de linfócitos T, antígenos e processos de sinalização. Hoje, Chris e eu mostraremos como realizar o segundo passo: transfectar células endoteliais microvasculares primárias de pulmão humano ou dérmicas com YFP de membrana e DSRed solúvel por meio de NU nuclear e semear as células transfectadas em placas de cultura para imagem em tempo real de células vivas.No dia se

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Suportados bicamadas planar são ferramentas poderosas que podem ser usados ​​para modelar as interações moleculares em uma sinapse imunológica. Aqui, vamos mostrar os métodos de ancoragem de proteínas de adesão celular que modula a formação de sinapses para o folheto superior do bilyer lipídico e visualize a formação de sinapses através de microscopia TIRF.

Suportados Bicamadas Planar para a Formação do Estudo da Sinapses imunológicas e Kinapse

Este artigo descreve um método para visualizar a formação de uma sinapse envelope de HIV-1 induzida por virológica em vidro suportados bicamadas planares por reflexão total interna de fluorescência microscopia (TIRF). O método pode também ser combinado com coloração de imunofluorescência para detectar a activação e redistribuição de moléculas de sinalização que ocorrem durante o HIV-1 a formação de sinapses envelope induzida virológica.

Imagem do HIV-1 Synapse Envelope induzida virológica e Sinalização em bicamadas lipídicas sintéticas

Este vídeo demonstra imagens de células vivas da topologia de sinapses imunológicas, investigando as interações entre linfócitos T e células epiteliais que carregam antígenos fluorescentes. A microscopia de fluorescência revela deslocamento do citoplasma vermelho e anéis de membrana amarela nas células endoteliais, indicando a formação de sinapses imunológicas.

Avaliação da topologia imunológica de sinapses por meio de imagens de células vivas

Fonte: Ing-Esteves, S. &amp; Lefebvre, J. L. Time-Lapse Imaging of Neuronal Arborization using Sparse Adeno-Associated Virus Labeling of Genetically Targeted Retinal Cell Populations. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra o uso da microscopia confocal para visualizar a dinâmica dendrítica em explantes retinianos de camundongos vivos. Ele descreve as etapas para estabilizar a retina sob um microscópio confocal, realizando imagens de epifluorescência para visualizar interneurônios amácrinos...

Imagem confocal com lapso de tempo da dinâmica dendrítica neuronal em explantes retinianos de camundongos

Aqui, ilustramos o protocolo para a imagiologia por duas cores STED Nanoscopia citotóxica sinapse imune das células NK retomados em vidro. Usando este método, obtemos resolução nm sub-100 de proteínas de sinapses e do citoesqueleto.

Visualização do imunológica Synapse por Dual Color Time-fechado Emissão Estimulada Exaustão (STED) Nanoscopia

Os leucócitos atravessam a monocamada endotelial utilizando o paracelular ou o percurso intracelular. Foi desenvolvido um ensaio simples para seguir a distribuição de juncional endógeno VE-caderina e PECAM-1 durante a migração transendotelial de leucócitos sob fluxo fisiológico para discriminar entre as duas vias de transmigração.

Imagens em tempo real de endoteliais junções célula-célula durante Neutrophil Transmigração Sob Fisiológica Fluxo

Descrevemos aqui uma combinação da técnica de bicamada lipídica suportada em vidro de formação de sinapses imunológicas com a técnica de imagem de super-resolução de microscopia de depleção por emissão estimulada (STED). O objetivo deste protocolo é fornecer aos usuários as instruções necessárias para realizar com sucesso essas duas técnicas.

Super-Resolution Imaging da Célula Natural Killer imunológica Synapse em um vidro com suporte Planar Lipid Bilayer

Aqui, descrevemos um fluxo de trabalho completo para a análise qualitativa e quantitativa das sinapses imunes entre primárias células T humanas e células apresentadoras de antígeno. O método baseia-se na imagem citometria de fluxo, que permite a aquisição e a avaliação de várias imagens de milhares de células dentro de um período relativamente curto de tempo.

Análise qualitativa e quantitativa de sinapse imunológica no sistema humano usando a imagem latente de citometria de fluxo

Este protocolo images a formação imunológica da sinapse e o tráfego polarizado subseqüente do secretry para a sinapse imunológica. Conjugados celulares foram formados entre uma célula Raji com pulso de superantígeno (agindo como uma célula de apresentação de antígeno) e um clone de Jurkat (agindo como um linfocito auxiliar de efetoreto T).

Imagem da Sinapse Imunológica Humana

Aqui apresentamos o protocolo para a reconstituição stepwise de células que apresentam antígenos sintéticos usando Bicamadas lipídicas apoiadas por contas e seu uso para interrogar a saída sináptica de células T ativadas.

Preparação de Bicamadas lipídicas apoiadas por contas para estudar a saída de partículas de sinapses imunes de células T

Aprenda a utilizar células endoteliais como modelo planar de células apresentadoras de antígeno para investigar processos de sinalização antigênica. Este método permite imagem de alta resolução da sinapse imunológica e ativação de células T.

Um modelo de celular endotelial Planar for Imaging imunológica Synapse Dynamics

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