Uma alternativa simples para injeção estereotáxica para Brain Knockdown específico de miRNA

Aqui demonstramos o uso de um peptídeo penetrante de células com um oligonucleotídeo antisense modificado para derrubar especificamente o micro RNA no cérebro de camundongos. Isso foi conseguido projetando um antigo contra 29 de maio. Neste estudo, usamos machos antigos para direcionar microRNAs bloqueiam modificações de ácido nucleico.

Ou seja, as modificações do LNA foram incorporadas em cinco posições diferentes. Neste, uma incorporação de modificações de LNA aumenta sua afinidade de ligação ao micro RNA. Além disso, dá resistência ao núcleo e, portanto, aumenta a eficiência do direcionamento do microRNA.

Complexos do ANTIGO MAR com o peptídeo foram preparados in vitro e injetados nos camundongos através da veia da cauda. O knockdown do micro RNA resultou em mudanças comportamentais que sugerem o envolvimento desse microRNA na ataxia, três injeções consecutivas foram suficientes para induzir mudança perceptível na marcha após o tratamento, o tecido cerebral foi coletado e o knockdown do microRNA foi confirmado. CPPs ou peptídeos autopenetrantes surgiram recentemente como transportadores atraentes para a entrega de ácido nucleico.

Aqui, usamos um peptídeo neurotrópico rico em arginina que pode sofrer complexação baseada em carga com o LNA, que, após administração na circulação sistêmica, atingirá seu local alvo designado, que são as células neuronais, neste caso, e garantirá a liberação adequada do LNA nessas células. As sequências dos membros da família ME 29 foram recuperadas do mease e o antisense 16 MER foi sintetizado com modificações de ácido nucleico bloqueado em cinco posições uniformemente espaçadas para preparar complexos. As soluções peptídicas e antigas de concentrações apropriadas foram preparadas separadamente em glicose estéril a 10%.

Em condições assépticas. A solução de Antigo foi adicionada lentamente gota a gota à solução peptídica com agitação suave. A adição lenta e a agitação suave são críticas para a formação de complexos monodispersos cujo tamanho está na escala tric.

O antigo foi adicionado em três partes iguais de cada vez, permitindo um minuto para mistura, seguido por um minuto de incubação sem mistura. A adição rápida pode levar à agregação dos complexos e precipitação. O complexo Antigo está agora pronto para injeção.

O complexo foi administrado por meio de uma injeção na veia da cauda. Os camundongos foram devolvidos à mesma gaiola. Ensaios comportamentais para ataxia foram realizados diariamente, três horas após a injeção.

O rato foi segurado pela cauda, não permitindo que ele tocasse em nenhum objeto ao redor. Observe a maneira como os membros posteriores são abertos por 10 segundos. No teste de borda, os ratos foram obrigados a caminhar ao longo da borda fina da gaiola.

Os ratos caminham por um canal fino, deixando pegadas com os pés pintados em uma tira de papel absorvente grosso, tinta apenas nas patas traseiras. Para evitar dados confusos De quatro membros, vejamos O efeito do tratamento antigo. Isolamos o cérebro e outros tecidos dos camundongos tratados e controlados.

Descobrimos que o peptídeo R VG entregou um siRNA marcado com fluorescência especificamente para o cérebro, mas não para outros tecidos como o fígado. Um peptídeo de controle não neurotrópico RVM entregou o siRNA ao fígado. Os camundongos tratados com ANTIER 29 apresentaram defeitos nos membros posteriores.

Camundongos controlados tratados com um ânimo mexido puderam negociar a borda, mas após o tratamento com o ânimo contra o MARE 29, os camundongos apresentaram defeitos leves neste ensaio. No ensaio de pegada, houve um encurtamento impressionante do comprimento do passo nos camundongos tratados. Além disso, confirmamos por meio do QR tpcr que os níveis de 29 A e 29 B foram regulados negativamente para o desenvolvimento de terapias baseadas em micro NNA.

A entrega específica do cérebro de antimicroRNAs é um desafio devido à barreira hematoencefálica. Usando a técnica apresentada aqui, podemos evitar o método convencional de entrega de antimicroRNAs ao cérebro. Este método torna o knockdown de microRNAs tecnicamente viável e aumenta a especificidade do tecido.