Name: Usando Individual Sensillum Gravação para detectar respostas Olfativo Neurônio de percevejos para Semioquímicos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 55 s
Description: Aprenda a técnica de gravação de sensilo individual para investigar respostas neuronais olfativas em percevejos. Este método permite medir com precisão a sensibilidade de neurônios a semioquímicos, auxiliando no desenvolvimento de estratégias de controle de pragas baseadas em atrativos ou repelentes.

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O projeto foi apoiado pelo Prêmio AAES 461Hatch/Multistate Grants ALA08-045 e ALA015-1-10026 para N.L.

1. Preparação de Instrumentos, Soluções de estímulos, e Percevejos <ol><li> Prepara-se uma solução de KNO 2 50% (w / v) em um frasco de 20 ml. </li><li> Afie dois microeléctrodos de tungsténio em solução KNO 2 a 5 V mergulhando repetidamente os eletrodos de tungstênio dentro e fora da solução. <ol><li> Cerca de afiar o fio de tungsténio por imersão a cerca de 10 mm de fio de tungsténio a dentro e para fora da solução de KNO 2 a uma velocidade de 2 imersões / seg durante cerca de 5 min, o que pode consumir muito, a extremidade dianteira do fio de tungsténio. </li><li> Delicadamente afiar o eléctrodo por meio de imersão de cerca de 1 mm da ponta do fio dentro e para fora da solução a uma velocidade de 2 imersões / seg durante pelo menos 1 minuto, de modo a fazer um ponto de o eléctrodo fino e afiado. Verifique o diâmetro ponta do eletrodo sob o microscópio com freqüência até que ele atinja 0,2-0,5 mm, que deve estar bem o suficiente para perfurar a cutícula percevejos sensillum olfativo. Nota: Enquanto manualmente afiadaening o eléctrodo, a velocidade de imersão de o fio de tungsténio na solução de KNO 2 não é constante durante todo o tempo. Com mais prática, é muito mais fácil de manter uma velocidade relativamente constante no afiar do eléctrodo. O tempo de nitidez também é incerto, dependendo de como o eléctrodo fino deve ser. Aqui, uma ponta de eléctrodo com o diâmetro de 0,2 m ~ é suficiente para perfurar através do sensillum olfactiva. </li></ol></li><li> Dilui-se cada um dos estímulos químicos em sulfóxido de dimetilo (DMSO) a partir do composto puro a uma concentração inicial de 1:10 v / v como uma solução estoque. Criar uma série de diluições Decádico dependendo do número de doses necessárias na experiência, novamente com o DMSO, a partir de cada uma das soluções de reserva para cada químico. Aqui, usa 10% (+) - β-pineno e eucaliptol. </li><li> Coloque os dias em jejum ou sete de pós-alimentação percevejos adultos (macho ou fêmea) do Ft. Dix colónia (uma oferta do Dr. Haynes na Universidade de Kentucky) para ser usado em tele experimentar numa placa de Petri. Nota: Não há um número exato para percevejos colocados na placa de Petri. Ele pode ser um pouco ou muito. </li></ol> 2. Bed Bug Antena Preparação <ol><li> Anestesiar os percevejos no gelo (2-3 min). </li><li> Corrigir tanto as antenas eo corpo inseto em uma lamela de microscópio com fita dupla face e remover as pernas com uma tesoura fina. </li><li> Use um pequeno pino para tocar suavemente as antenas de modo a colocá-los na fita de forma constante. </li><li> Descansar a lamela contra uma esfera pequena (~ 1 cm de diâmetro) de cera dental para facilitar a manipulação e ajustá-lo a um ângulo apropriado (~ 90 °) para o eléctrodo de registo (Figura 1). </li><li> Uma vez garantido, coloque o bug cama sob um microscópio estéreo, ligue a fonte de luz fria e ajustar a intensidade da iluminação até a antena está claramente apresentada, e concentrar-se o microscópio sobre a segunda flagelo da antena de percevejos em alta ampliação (720x) . Nota: A intensidade de iluminação utilizado na experiência não é quantificada, que realmente depende de como os olhos do experimentador sentir a intensidade de iluminação. </li></ol> 3. Único Sensillum Recording <ol><li> Ligue o pré-amplificador (10X) com o controlador de aquisição de sinal, o qual está ligado com o computador para o registo e visualização de sinais. Ligue o computador e iniciar o software, por exemplo, AutoSpike32 e clique no modo &quot;Record&quot; na barra de menu. Em seguida, escolha a &quot;onda&quot; de modo a começar a gravar os sinais de onda. Nota: Uma linha reta em execução a partir da esquerda para a direita do monitor repetidamente deverão ser agora visíveis. Aqui, a janela de gravação dura 40 seg. Gravação de onda máximo é de 10 segundos. Taxa de amostragem selecionada é 96.000 e taxa de amostragem digital é 240. Há 0 deslocamento% e sem filtragem, nenhuma retificação para os sinais de gravação. Todas estas definições de parâmetros do software pode ser modificado conforme necessário. </li> &lt;li&gt; Ligue o alto-falante ligado ao pré-amplif icador, que é usado para apresentar o modo de tonificação para as respostas neuronais a partir de sensillum antenal. </li><li> Insira o eletrodo de referência para o abdome do percevejo estabilizado. Nota: O eletrodo de referência foi realizada por um metal estande fixada magneticamente à mesa do ar. </li><li> Depois de o eléctrodo de referência tenha sido ligado ao abdómen da percevejo, mover o eléctrodo de registo, que está conectado ao pré-amplificador e manipulado por um micromanipulador, no sentido da extremidade posterior da antena do percevejo. </li><li> Quando o eléctrodo de gravação está em contacto com a ponta direita da antena, ligar o microscópio e localizar o eléctrodo a baixa ampliação. </li><li> Ajustar o eléctrodo de registo enquanto aumenta gradualmente até que a ampliação tanto o eléctrodo e o sensillum antenal estão no mesmo plano e claramente visíveis ao microscópio. Nota: Por esta altura, o microscópio é habitually com a maior ampliação. </li><li> Insira o eletrodo de registro no eixo da sensillum usando o micromanipulador e ir um pouco mais fundo, se o ruído de fundo é elevado em comparação com o potencial de ação. </li><li> Uma vez que os potenciais de acção claros são observados a partir do sensillum gravado, preencher uma micropipeta com 10% de (+) - β-pineno. Utilizar a micropipeta para depositar 10 ul aliquota de 10% (+) - β-pineno em uma tira de papel de filtro (~ 3 x 15 mm) colocado dentro de uma pipeta de Pasteur de vidro. <ol><li> Ligar a pipeta carregado para o tubo de saída do fluxo de impulsos de estímulo e o controlador de colocar a ponta da pipeta no pequeno orifício no tubo orientado para a antena. </li></ol></li><li> Quando todas essas ligações tenham estabilizado, pressionar o pedal do controlador de estímulo para fornecer um sopro de 0,5 seg estímulo (0,5 L / min) para o fluxo de ar humidificado contínua. A gravação do potencial de ação será iniciada simultaneamente quando o footswitch é deprimido. O processo de gravação será passado para 10 segundos a partir de 1 segundo antes da estimulação. </li><li> Conte os potenciais de ação off-line para dois períodos 500 ms, uma antes e outra após a estimulação. Subtrair qualquer alteração na taxa de pico durante a 500 mseg após a estimulação da actividade espontânea registados durante os últimos 500 mseg e converter as contagens na escala convencional de espigas / s por sua multiplicação por 2. </li></ol> 4. Estímulo substituição na SSR <ol><li> Uma vez que o interruptor de pé foi desencadeada, entregar a 10% (+) - β-pineno na pipeta para o percevejo antenas e gravar a resposta a este odorante específico durante 10 seg, após o que a pipeta é removido. </li><li> Rotular outra nova pipeta com o eucaliptol 0,001% a ser testado. Coloque um pequeno pedaço de papel de filtro sobre a qual 10 ul do estímulo foi aplicado, na nova pipeta. </li><li> Espere por 2-5 min até que o estímulo é completamente vaporized na pipeta de vidro. Fixar a pipeta para o tubo de saída do fluxo de impulsos. </li><li> Insira a ponta da pipeta no pequeno orifício do tubo orientado para a antena. Pressionar o pedal e iniciar a gravação de 10 segundos. </li><li> Desligue a pipeta e preparar outra pipeta com 0,01% de eucaliptol. </li><li> Teste todo o resto das doses de eucaliptol (de 0,001% a 10%) sobre o sensilla antennal para observar as respostas dependentes da dose. Teste a partir do mais diluída para as doses menos diluir. </li></ol>

<ol><li>Bartonicka, T., Gaisler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+dynamics+in+the+numbers+of+parasitic+bugs+%28Heteroptera%2C+Cimicidae%29%3A+a+possible+cause+of+roost+switching+in+bats+%28Chiroptera%2C+Vespertilionidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol+Res%22%5BJournal%5D)">Seasonal dynamics in the numbers of parasitic bugs (Heteroptera, Cimicidae): a possible cause of roost switching in bats (Chiroptera, Vespertilionidae).</a> Parasitol Res. 100 (6), 1323-1330 (2007).</li>
<li>Thomas, I., Kihiczak, G. G., Schwartz, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bed+bug+bites%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Bed bug bites: a review.</a> Int J Dermatol. 43 (6), 430-433 (2004).</li>
<li>Anderson, A. L., Leffler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bed+bug+infestations+in+the+news%3A+a+picture+of+an+emerging+public+health+problem+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22J+Environ+Health%22%5BJournal%5D)">Bed bug infestations in the news: a picture of an emerging public health problem in the United States.</a> J Environ Health. 70 (9), 24-27 (2008).</li>
<li>Boase, C. Bed bugs (Hemiptera: Cimicidae): an evidence-based analysis of the current situation. Sixth international conference on urban pests. OOK-Press Kft. Robinnson, W., Bajomi, D. Budapest, Hungary, , (2008).</li>
<li>Doggett, S. L., Geary, M. J., Russell, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Resurgence+of+bed+bugs+in+Australia%3A+with+notes+on+their+ecology+and+control%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health%22%5BJournal%5D)">The Resurgence of bed bugs in Australia: with notes on their ecology and control.</a> Environ Health. 4 (2), 30-38 (2004).</li>
<li>Ter Poorten, M. C., Prose, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+return+of+the+common+bedbug%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Dermatol%22%5BJournal%5D)">The return of the common bedbug.</a> Pediatr Dermatol. 22 (3), 183-187 (2005).</li>
<li>Yoon, K. S., Kwon, D. H., Strycharz, J. P., Craig, S., Lee, S. H., Clark, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+and+molecular+analysis+of+deltamethrin+resistance+in+the+common+bed+bug+%28Hemiptera%3A+Cimicidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Entomol%22%5BJournal%5D)">Biochemical and molecular analysis of deltamethrin resistance in the common bed bug (Hemiptera: Cimicidae).</a> J Med Entomol. 45 (6), 1092-1101 (2008).</li>
<li>Wang, L., Xu, Y., Zeng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resurgence+of+bed+bugs+%28Hemiptera%3A+Cimicidae%29+in+mainland+China%5BTitle%5D)+AND+%22Fla+Entomol%22%5BJournal%5D)">Resurgence of bed bugs (Hemiptera: Cimicidae) in mainland China.</a> Fla Entomol. 96 (1), 131-136 (2013).</li>
<li>Haynes, K. F., Potter, M. F. Recent progress in bed bug management. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHaynes%2C+KF+%22Advanced+technologies+for+managing+insect+pests%22">Advanced technologies for managing insect pests</a>. Ishaaya, I., Palli, S. R., Horowitz, A. R. , Springer. New York. 269-278 (2013).</li>
<li>Carey, A. F., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+olfaction+from+model+systems+to+disease+control%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Insect olfaction from model systems to disease control.</a> Proc Natl Acad Sci. 108 (32), 12987-12995 (2011).</li>
<li>Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant+reception+in+insects%3A+roles+of+receptors%2C+binding+proteins%2C+and+degrading+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Entomol%22%5BJournal%5D)">Odorant reception in insects: roles of receptors, binding proteins, and degrading enzymes.</a> Annu Rev Entomol. 58, 373-391 (2013).</li>
<li>Den Otter, C. J., Behan, M., Maes, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+response+in+female+Pieris+brassicae.+%28Lepidoptera%3A+Pieridae%29+to+plant+volatiles+and+conspecific+egg+odours%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Single cell response in female Pieris brassicae. (Lepidoptera: Pieridae) to plant volatiles and conspecific egg odours.</a> J Insect Physiol. 26 (7), 465-472 (1980).</li>
<li>Levinson, H. Z., Levinson, A. R., Muller, B., Steinbrecht, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+of+sensilla%2C+olfactory+perception%2C+and+behavior+of+the+bed+bug%2C+Cimex+lectularius.%2C+in+response+to+its+alarm+pheromone%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Structural of sensilla, olfactory perception, and behavior of the bed bug, Cimex lectularius., in response to its alarm pheromone.</a> J Insect Physiol. 20 (7), 1231-1248 (1974).</li>
<li>Harraca, V., Ignell, R., Löfstedt, C., Ryne, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+antennal+olfactory+system+of+the+bed+bug+%28Cimex+lectularius%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Senses%22%5BJournal%5D)">Characterization of the antennal olfactory system of the bed bug (Cimex lectularius).</a> Chem Senses. 35 (3), 195-204 (2010).</li>
<li>Liu, F., Haynes, K. F., Appel, A. G., Liu, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antennal+olfactory+sensilla+responses+to+insect+chemical+repellents+in+the+common+bed+bug%2C+Cimex+lectularius%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chem+Ecol%22%5BJournal%5D)">Antennal olfactory sensilla responses to insect chemical repellents in the common bed bug, Cimex lectularius.</a> J Chem Ecol. 40 (6), 522-533 (2014).</li>
<li>Olson, J. F., Moon, R. D., Kells, S. A., Mesce, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology%2C+ultrastructure+and+functional+role+of+antennal+sensilla+in+off-host+aggregation+by+the+bed+bug%2C+Cimex+lectularius%5BTitle%5D)+AND+%22Arthropod+Struct+Dev%22%5BJournal%5D)">Morphology, ultrastructure and functional role of antennal sensilla in off-host aggregation by the bed bug, Cimex lectularius.</a> Arthropod Struct Dev. 43 (2), 117-122 (2014).</li>
<li>Bruyne, M., Foster, K., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+coding+in+the+Drosophila+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Odor coding in the Drosophila antenna.</a> Neuron. 30 (2), 537-552 (2001).</li>
<li>Qiu, Y. T., Loon, J. J. A., Takken, W., Meijerink, J., Smid, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+coding+in+antennal+neurons+of+the+malaria+mosquito%2C+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Senses%22%5BJournal%5D)">Olfactory coding in antennal neurons of the malaria mosquito, Anopheles gambiae.</a> Chem Senses. 31 (9), 845-863 (2006).</li>
<li>Ghaninia, M., Ignell, R., Hansson, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+classification+and+central+nervous+projections+of+olfactory+receptor+neurons+housed+in+antennal+trichoid+sensilla+of+female+yellow+fever+mosquito%2C+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional classification and central nervous projections of olfactory receptor neurons housed in antennal trichoid sensilla of female yellow fever mosquito, Aedes aegypti.</a> Eur J Neurosci. 26 (6), 1611-1623 (2007).</li>
<li>Hill, S. R., Hanson, B. S., Ignell, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+antennal+trichoid+sensilla+from+female+southern+house+mosquito%2C+Culex+quinquefasciatus+Say%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Senses%22%5BJournal%5D)">Characterization of antennal trichoid sensilla from female southern house mosquito, Culex quinquefasciatus Say.</a> Chem Senses. 34 (3), 231-252 (2009).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

A técnica standard sensillum gravação tem sido extensivamente utilizado para testar as respostas neurais de insectos, tais como moscas de fruta, mosquitos e percevejos a diferentes estímulos químicos no ambiente. Estes estímulos químicos são frequentemente dissolvidos e diluídos num solvente comum, a fim de preparar a diferentes doses de tratamentos. No entanto, diferentes solventes pode produzir diferentes taxas de libertação bastante para os estímulos. Estudos anteriores sobre alguns insetos amplamente estudados, tais...

O percevejo comum Cimex lectularius L (Hemiptera: Cimicidae), como um ectoparasita temporária, é um inseto sugador de sangue obrigado, o que significa a sua sobrevivência, desenvolvimento e reprodução necessitam de fontes de sangue de hospedeiros, incluindo seres humanos e animais 1,2. Embora a transmissão do vírus raramente tem sido relatada devido a C. lectularius, o incômodo gerado por morder uma infestação afeta seriamente anfitriões tanto física como psicologicamente 3. A introdução e uso generalizado de inseticidas químicos, especialmente o DDT, reduziu o risco de infestações e até o final de 1950 as infestações estavam em um nível tão baixo que eles já não eram uma preocupação pública grave. No entanto, uma série de possíveis fatores levaram a ressurgimento em populações de percevejos em todo o mundo, tais como a redução do uso de inseticidas, um declínio de sensibilização da opinião pública, o aumento da atividade viajar, eo desenvolvimento de resistência a inseticidas 4-9. &lt;/ p&gt; Sinais químicos no ambiente são detectados e reconhecidos por insetos através de órgãos olfativos, como antenas e palpos maxilares. O sensilla olfativo sobre o inseto antenas desempenham um papel crucial na detecção desses sinais químicos. As moléculas químicas entrar na cutícula antenal através de poros na superfície da cutícula. Proteínas de ligação odorante no ligamento linfa antennal a estas moléculas químicas e transportá-los para os receptores olfativos 10. Os receptores olfactivos e os seus co-receptores do canal de iões catiónica não-selectivos na membrana neuronal, que será despolarizada uma vez que estas moléculas químicas são reconhecidas pelos receptores olfactivos 11. Sensillum gravação único (SSR) foi desenvolvido para detectar a alteração extracelular no potencial de acção causada pela aplicação de um destes estímulos químicos ou não químicos. Através da inserção de um eletrodo de registro na linfa sensillum e um eléctrodo de referênciaem alguma outra parte do corpo do insecto (geralmente se os olhos compostos ou do abdómen), a taxa de disparo dos neurónios em resposta a estímulos podem ser gravados 12. As alterações no número de picos representam a sensibilidade do insecto a estímulos específicos. Estímulos químicos de diferentes identidades e concentração irá eliciar respostas neurais diferentes, com diferentes taxas de combustão e estruturas temporais, e pode assim ser utilizado para investigar o processo de codificação de o insecto a substâncias químicas específicas. Para o percevejo comum, ambas as formas sexuais compartilhar o mesmo padrão de sensilla olfativa nas antenas: nove sulcado sensilla peg C, 29 cabelo-como E (E1 e E2) sensilla, e um par de cada um dos Dα, Dβ, Dγ peg suave sensilla 13,14. Como vários neurónios foram identificadas em cada tipo de sensillum, não é fácil de distinguir os potenciais de acção de diferentes neurónios alojados no mesmo sensillum, assim, para esta experiência a total números de potenciais de ação foram contadas off-line por um período de 500 ms antes e após a estimulação. O número de potenciais de ação após a estimulação foi então subtraído do número de potenciais de ação antes do estímulo e multiplicado por dois, a fim de quantificar as mudanças na taxa de disparo em cada sensillum indivíduo em picos por segundo 15.

<table><tbody><tr><td>Fio de tungstênio</td><td>AM SYSTEMS</td><td>#716500</td><td>Usado para preparar o eletrodo</td></tr><tr><td>KNO2</td><td>Sigma</td><td>#310484</td><td>Usado para afiar o fio de tungstênio</td></tr><tr><td>Fonte de alimentação CA</td><td>BK Precision</td><td>1653A</td><td>Fornecendo a tensão na afiação do fio de tungstênio</td></tr><tr><td>Leica Z6 APO Microscópio</td><td>Leica</td><td>10447424</td><td>Usado para observar a sensilla nas antenas</td></tr><tr><td>Controlador Simulus</td><td>Syntech</td><td>CS-55</td><td>Usado para controlar a aplicação de estímulo</td></tr><tr><td>Controlador de aquisição USB de 4 canais</td><td>Syntech</td><td>IDAC-4</td><td>Exibição na tela em tempo real de todos os sinais antes e durante a gravação</td></tr><tr><td>Fonte de luz</td><td>SCHOTT</td><td>A20500</td><td>Fornecendo fontes de luz para observação</td></tr><tr><td>Micromanupulator</td><td>Leica</td><td>115378</td><td>Usado para pequenos movimentos de eletrodo</td></tr><tr><td>Alto-falante</td><td>Juster</td><td>95a</td><td>Conectado com o Controlador de Aquisição IDAC-4 e fornecendo som para o sinal</td></tr><tr><td>Suporte magnético</td><td>Narishige</td><td>GJ-1</td><td>Usado para segurar o eletrodo de referência, percevejo estabilizado e tubo de entrega de estímulo</td></tr><tr><td>Mesa de Isolamento de Vibração TMC</td><td>TMC</td><td>63-500</td><td>Usado para isolar a vibração dos equipamentos</td></tr><tr><td>Coverslip</td><td>Tedpella</td><td>2225-1</td><td>Usado para segurar o percevejo</td></tr><tr><td>Fita dupla face</td><td>3M</td><td>XT6110</td><td>Usado para estabilizar o percevejo no clipe de cobertura</td></tr><tr><td>Cera Dental</td><td>Dentakit</td><td>DK-R012</td><td>Usado para apoiar o clipe de cobertura onde o percevejo é estabilizado&nbsp;</td></tr></tbody></table>

usando individual sensillum gravação para detectar respostas olfativo neurônio de percevejos para semioquímicos

Using Single Sensillum Recording to Detect Olfactory Neuron Responses of Bed Bugs to Semiochemicals

O sistema olfactivo inseto desempenha um papel importante na detecção de semioquímicos no ambiente. Em particular, o sensilas antenal que abrigam neurónios simples ou múltiplas, para dentro, são considerados para tornar a maior contribuição para responder aos estímulos químicos. Ao gravar diretamente potencial de ação no sensillum olfativa após a exposição a estímulos, a gravação sensillum único (SSR) técnica fornece uma abordagem poderosa para investigar as respostas neurais dos insetos a estímulos químicos. Para o bug cama, que é um parasita humano notório, vários tipos de sensillum olfatório foram caracterizados. Neste estudo, demonstramos respostas neurais de cama bug sensilla olfativo a dois estímulos químicos e as respostas dependentes da dose para um deles usando o método SSR. Esta abordagem permite que pesquisadores para realizar rastreio precoce de estímulos químicos individuais na olfativo sensilla cama bug, que iria fornecer informações valiosas para o desenvolvimento de novos atrativos ou repelentes de insetos de cama e benefícios dos esforços de controle de cama bug.

Sensillum gravação única é uma técnica de investigação poderoso utilizado em estudos de insetos ecologia química e fisiologia neural. Investigando as respostas neurais dos insetos aos compostos voláteis diferentes, especialmente aqueles pensado para ser ecologicamente relacionado com a sobrevivência eo desenvolvimento dos insetos, não só nos dá insights valiosos no processo de olfato do inseto, mas também abre novos caminhos promissores que poderiam, potencialmente, levar para o desenvol...

Os percevejos dependem de neurônios receptores olfativos alojados em sua sensila olfatória antenal para detectar semioquímicos no ambiente. Utilizando a gravação de um único sensor, demonstramos um método para avaliar a resposta dos percevejos aos semioquímicos e explorar o processo de codificação envolvido.

Usando Individual Sensillum Gravação para detectar respostas Olfativo Neurônio de percevejos para Semioquímicos

The insect olfactory system plays an important role in detecting semiochemicals in the environment. In particular, the antennal sensilla which house ...

O objetivo geral do registro em sensílio único é investigar as respostas neuronais do sensílio olfativo antenal a diversos odorantes. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área da ecologia química, como se o inseto é capaz de detectar odorantes químicos em seu ambiente e como ele processa esses odorantes químicos. A principal vantagem dessa técnica é que ela permite espelhar a atividade de um único neurônio em função da função.Oferece uma medição mais precisa da sensibilidade dos neurônios aos odorantes químicos. A implicação desta técnica estende-se ao desenvolvimento de atrativos ou repelentes no controle de insetos. Porque esta técnica pode ser usada para uma grande quantidade de produtos químicos que são biologicamente importantes para o inseto.Inicie este procedimento anestesiando percevejos no gelo por dois a três minutos. Em seguida, fixe as antenas e o corpo dos insetos em uma lamínula de microscópio com fita adesiva dupla face e remova as pernas com uma tesoura fina. Use um pequeno alfinete para ajustar suavemente as antenas sobre a fita.Em seguida, apoie a lamínula contra uma pequena bola de cera dental para facilitar a manipulação e ajuste-a em um

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Neurociência

Respostas eletrofisiológicas de neurônios sensoriais olfativos de odores pode ser medido em insetos usando gravações sensillum único. Neste artigo vamos demonstrar de vídeo como realizar gravações sensillum única nas antenas da mosca do vinagre...

Único Recordings Sensillum na Insetos Drosophila melanogaster E Anopheles gambiae</em

Inseto sistemas olfativos fornecem oportunidades únicas para a gravação odorant induzida por respostas nas formas de electroantennograms (EAG) e gravações sensillum simples (SSR), que são somadas as respostas de todos os neurônios olfativos receptor (ORNS), localizado na antena e daqueles alojados em individuais sensilla, respectivamente.

Medidas eletrofisiológicas partir de um sistema olfativo Traça

Neurônios receptores olfativos (ORNs) converter sinais de odor primeiro em um receptor de corrente que por sua vez desencadeia potenciais de ação que são transmitidos para os neurônios de segunda ordem no bulbo olfativo. Aqui, descrevemos a técnica da pipeta de sucção para gravar simultaneamente o receptor de odorante induzida atual e os potenciais de ação de ORNs mouse.

Odorante induzidas respostas registradas a partir de neurônios receptores olfativos utilizando a técnica de sucção da pipeta

Neste vídeo, uma mosca Drosophila viva é montada em um tubo para estudos eletrofisiológicos. Os eletrodos são posicionados na base do sensillum para registrar respostas neuronais específicas aos feromônios com os neurônios receptores olfativos da mosca.

Registros eletrofisiológicos de Drosophila Sensilla em resposta a odores voláteis

Nós demonstramos as variações da técnica de gravação extracelular de multi-unidade para caracterizar odor evocadas respostas nas três primeiras etapas da via olfactiva invertebrado. Estas técnicas podem ser facilmente adaptados para examinar a actividade conjunto de outros sistemas neurais também.

Multi-unidade Métodos de gravação para caracterizar a atividade neural no Locust (<em&gt; Schistocerca Americana</em&gt;) Circuitos olfatórias

Descrevemos um protocolo para o uso de antenas de insetos na forma de eletroantenogramas (EAGs) em robôs autônomos. Nosso design experimental permite gravações estáveis em um dia e resolve manchas de odor individuais de até 10 Hz. A eficiência dos sensores EAG para pesquisas olfativas é demonstrada na condução de um robô em direção a uma fonte de odor.

Usando insetos eletroantenogramas Sensores em robôs autônomos para Pesquisas olfativas

A análise das propriedades fisiológicas dos neurônios sensoriais olfativos ainda enfrenta limitações técnicas. Aqui, nós os registramos por meio de patch-clamp perfurado em uma preparação intacta do epitélio olfatório em camundongos direcionados ao gene. Esta técnica permite a caracterização das propriedades da membrana e respostas a ligantes específicos de neurônios que expressam receptores olfativos definidos.

Perfurado gravação patch-clamp de rato Olfactory neurônios sensoriais na Intact neuroepitélio: Análise Funcional do Neurônios Expressando uma Odorant Receptor Identificados

O uso de um chip adaptado"olfativo" para a imagem de cálcio eficiente de machos de c. elegans é descrito aqui. Estudos de exposição masculino glicerol e um pheromone também são mostrados.

Usando um Chip olfativo Microfluidic adaptado para a imagem da atividade Neuronal em resposta aos Pheromones em neurônios de cabeça masculino C. Elegans

O objetivo geral deste protocolo é demonstrar como apresentar odorantes de baixa volatilidade para a gravação de sensibilidade única a partir de neurônios receptores olfativos de Drosophila que respondem a feromonas cuticulares de cadeia longa.

Gravação eletrofisiológica de<em&gt; Drosophila</em&gt; Sensilla Tricoide em resposta aos odorantes de baixa volatilidade

Este artigo descreve um protocolo detalhado e altamente eficaz para gravações de único sensillum do basiconica de sensilas sobre os palpos de peças bucais de insetos.

Único Sensillum gravações para Locust palpo sensilas Basiconica

Um método raramente usado de registro eletrofisiológico, o registro de base, permite a análise de características da codificação do sabor que não podem ser examinadas pelos métodos convencionais de registro. O registro de base também permite a análise das respostas gustativas a estímulos hidrofóbicos que não podem ser estudados usando métodos eletrofisiológicos tradicionais.

Gravação de base: uma técnica para analisar as respostas dos neurônios gustativos em Drosophila

Aprenda a técnica de gravação de sensilo individual para investigar respostas neuronais olfativas em percevejos. Este método permite medir com precisão a sensibilidade de neurônios a semioquímicos, auxiliando no desenvolvimento de estratégias de controle de pragas baseadas em atrativos ou repelentes.

Usando Individual Sensillum Gravação para detectar respostas Olfativo Neurônio de percevejos para Semioquímicos

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