Electrotaxis Estudos de pulmão células de câncer usando um Multichannel Dual-elétrico-campo Microfluidic Chip

O objetivo geral deste experimento microfluídico é avaliar os efeitos dos inibidores de quinase na migração de células tumorais sob um campo elétrico direto. Portanto, esse método pode ajudar a responder a perguntas-chave em estudos celulares do Texas Portanto, a principal vantagem dessa técnica é que ela é um estudo eletro Texas altamente reprodutível e que economiza tempo e pode ser facilmente implementado.

A implicação dessa técnica se estende ao diagnóstico de potência metastática do câncer. Como a mobilidade das células cancerígenas magnéticas pode ser aumentada por um campo elétrico. Portanto, este método pode fornecer o interior ular, eletrotestículo das células tumorais.

Também pode ser aplicado ao processo de regeneração da pele, como a cicatrização de feridas. Comece usando um programa de desenho e design para desenhar um padrão de camada de acrílico individual. Salve o padrão e ligue o riscador a laser.

Conecte o scriber ao laptop de controle e clique no padrão projetado file para abrir o padrão de camada de acrílico. Em seguida, coloque um pedaço de folha de acrílico em branco no estágio x, Y, Z do riscador a laser e use o bastão de alinhamento automático do riscador a laser correspondente. Para definir o foco do feixe de laser na superfície da folha.

Envie o padrão projetado para o riscador a laser para usinagem direta da chapa de acrílico. Em seguida, use uma pinça para remover o papel protetor das folhas de acrílico e limpe as superfícies com gás nitrogênio. Agora empilhe as folhas e una-as sob uma pressão de dois quilos por centímetro quadrado em um ligante térmico por 45 minutos a 110 graus Celsius para formar o conjunto do canal de estimulação elétrica de fluxo.

Depois de preparar a fita dupla-face da mesma maneira, prenda a lamínula limpa no conjunto do canal de estimulação elétrica de fluxo. Em seguida, use super cola para colar 13 peças de adaptadores de acrílico nas aberturas individuais na camada um do campo elétrico duplo multicanal ou conjunto de chip MDF para configurar a rede de ponte de sal de chip MDF. Comece conectando os tubos de plástico do piso ao conjunto de cavacos de MDF por meio dos adaptadores de entrada e saída do meio.

Em seguida, conecte o cone de isca dos tubos de plástico de entrada e saída médios à seringa de três vias Cox A de três mililitros contendo 2.5 mililitros de PBS equilibrado com dióxido de carbono à torneira de parada de três vias do tubo de plástico de entrada e uma seringa vazia de três mililitros à torneira de parada de três vias do tubo de plástico de saída. Use porcas brancas sólidas para selar as aberturas dos adaptadores azul e verde na folha de acrílico da camada um. Em seguida, encha os canais da ponte de sal e as câmaras de cultura com o PBS equilibrado com dióxido de carbono, tomando cuidado para evitar bolhas.

Transfira o chip para uma incubadora de cultura de células de dióxido de carbono a 37 graus Celsius a 5% durante a noite para permitir que o ar dissolvido na fita dupla face forme bolhas dentro das câmaras na manhã seguinte. Use as duas seringas para gerar um fluxo rápido de PBS para eliminar as bolhas que bombeiam o PBS para frente e para trás, conforme necessário. Quando todas as bolhas tiverem sido removidas, use a torneira de três vias conectada ao tubo de saída do meio para drenar o PBS dos canais.

Em seguida, substitua a seringa conectada à entrada por uma seringa de três mililitros contendo 2,5 mililitros de dióxido de carbono, um DM EM equiparado e reabasteça as câmaras com o meio quando as câmaras estiverem cheias. Remova as porcas sólidas dos adaptadores verdes e injete 3%aros aquecidos a pelo menos 70 graus Celsius no canal da ponte de sal. Através das aberturas nos adaptadores, a ponte de sal quente A prepara a injeção, garantindo o bloqueio da fileira mediana entre as câmaras culturais.

Pare de injetar os agros quando o composto preencher três quartos do comprimento do canal da ponte de sal e sele novamente os poros com as nozes sólidas. Agora substitua as porcas sólidas nos adaptadores azuis por porcas tubulares translúcidas e carregue aros nas porcas tubulares. Em seguida, incorpore eletrodos de prata e cloreto de prata nas porcas tubulares antes que o aro solidifique.

Para configurar um experimento eletrotático, injete 0,3 mililitros de células no chip de MDF através da tubulação de saída e devolva o chip à incubadora de cultura de células. Após duas a quatro horas, instale o sistema microfluídico de MDF em um aquecedor de vidro transparente de óxido de índio e estanho e conecte um termopar tipo K entre o chip de MDF e o vidro de óxido de índio e estanho. Para medir a temperatura do chip, use um controlador derivado integral proporcional para definir a temperatura de incubação do sistema microfluídico MDF para 37 graus Celsius e monte o conjunto do chip MDF com temperatura controlada no estágio motorizado XYZ controlado por computador de um microscópio invertido.

Em seguida, usando uma bomba de seringa de quatro canais, dispense o meio completo nas câmaras de cultura através das entradas a uma taxa de fluxo de 20 microlitros por hora. Coleta dos resíduos de cultura das saídas em tubos de fuga microcentrais. Incube as células a 37 graus Celsius por mais 16 a 18 horas.

No dia seguinte, substitua o meio em cada câmara por meio novo suplementado com a concentração apropriada de inibidor de quinase por 60 minutos de tratamento. Em seguida, conecte uma fonte de alimentação DC ao chip MDF através dos eletrodos de prata, cloreto de prata e em série. Conecte um amperímetro ao circuito elétrico para monitorar a corrente elétrica no chip MDF.

Por fim, ligue a fonte de alimentação e ajuste a tensão entre 15 e 19 volts. Para definir a corrente do amperímetro para 86.94 microamperes. Neste experimento representativo do sistema microfluídico MDF, células de câncer de pulmão tratadas com várias concentrações do inibidor de quinase.

Y 2 7 6 3 2 não exibiu alterações na velocidade de migração celular com ou sem estimulação elétrica. No entanto, o tratamento com Y 2 7 6 3 2 sob a adição de um campo elétrico reduziu significativamente a náutica da migração das células cancerígenas. De fato, a uma concentração de 50 micromolares, o inibidor de rocha eliminou completamente o movimento náutico das células sem afetar sua velocidade de migração.

Além disso, houve uma correlação dose-dependente entre as concentrações químicas aplicadas e o índice de direcionamento, confirmando a confiabilidade e eficiência do sistema microfluídico MDF como método para o estudo do axxis. Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em sete a oito horas se for executada corretamente após seu desenvolvimento. Essa técnica tira para os pesquisadores da área de eletro Texas explodir com golpes na pele.

Não se esqueça de que trabalhar com um raspador a laser pode ser extremamente perigoso e que sempre devem ser tomadas precauções ao realizar este procedimento.