Name: A Cancer Cell Spheroid Ensaio para avaliar a invasão em um ambiente 3D (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 34 s
Description: Aprenda a avaliar a invasão de células cancerígenas em esferoides 3D usando matriz de membrana basal e colágeno tipo I. Este método permite monitorar dinâmicas de invasão em ambiente fisiologicamente relevante in vitro.

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Financiado pelo NIH CA051008 subvenções P30 CA009686 e T32 (ATR).

1. Geração de esferóides <ol><li> Prepare a suspensão de células individuais para pendurar culturas gota a separar culturas aderentes de células de cancro de ~ 70% de confluência utilizando uma lavagem com PBS, seguido por exposição a uma solução tripsina-EDTA 0,05%. <ol><li> Neutraliza-se a solução de tripsina com meio de cultura de células e contagem das células, utilizando-se uma alíquota da suspensão de células. Nota: O meio de cultura de células específico dependerá da linha celular a ser testada. Seguir as recomendações da ATCC media, onde o meio de cultura celular é normalmente de DMEM + 10% de FBS. Mais informação pode ser encontrada na Tabela Materiais. </li><li> Efectuar uma diluição para permitir a sementeira de 500-1000 células por 20 ul gota de meio de cultura celular. </li></ol></li><li> Adquirir 10 cm de placa e adicionam-se 5 ml de PBS estéril para o fundo. Nota: Esta etapa protege o enforcamento cai de evaporação. Baixo custo &quot;bacteriológicos&quot; pratos grau pode ser usado em lugar de pratos de grau de cultura de células, como as células não irá contactuar a superfície de cultura. </li><li> Usar uma pipeta multi-canal para transferir gotas de 20 ul da suspensão de células diluída com a superfície interna da tampa. <ol><li> Pipetar 40 gotas (5 linhas de 8 gotas) sobre a tampa da placa de 10 cm. </li></ol></li><li> Inverter a tampa e coloque sobre o prato de cultura. Incubam-se as culturas de gota em suspensão a 37 ° C durante 72 h, para gerar esferóides. <ol><li> Vire a tampa de uma forma confiante, ainda controlada. Nota: Inverter a tampa muito rápido ou muito lento pode causar as gotículas de mudar. Algumas linhas de células podem formar esferóides em 48 horas ou menos, enquanto outros podem exigir mais do que 72 horas para produzir agregados compactos. </li></ol></li></ol> 2. Incorporação de Spheroids em Matrix 3D <ol><li> Descongelar uma aliquota de crescimento reduzida de factor porão materiais de membrana, a 4 ° C durante a noite antes de incorporação dos esferóides. <ol><li> Opcional: poços camada com ECM de antecedência para evitar a interação potencial esferóide com o tecido culture superfície. <ol><li> Pipetar 200 l de ECM por cavidade em uma placa de 24 cavidades. </li><li> Inclinar a placa para assegurar que a ECM cobre toda a superfície dos poços. </li><li> Retirar cuidadosamente o excesso ECM com uma pipeta. </li><li> Incubar a placa até que os poços estão secas: 3 horas à temperatura ambiente ou durante a noite a 4 ° C. </li></ol></li></ol></li><li> Recolher os esferóides inclinando a tampa da placa de cultura de tecidos e de partilha dos meios de comunicação. Transferir os meios de comunicação com os esferóides em um tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. </li><li> Permitir que 10 min durante os esferóides para assentar no fundo do tubo de microcentrífuga. Esferóides deve ser visível a olho nu. </li><li> Misturar 100 mL de materiais de membrana basal com 100 ul de frio (4 ° C) colagénio do tipo I, em um tubo pré-refrigerada separada. Manter-se a mistura a 4 ° C para evitar qualquer gel solidifique prematuramente. <ol><li> Utilize pontas de pipetas pré-refrigerados se transferir pequenos volumes. </li><li> Dê cuidado aomisturando o material de membrana basal e colágeno tipo I para evitar a formação de bolhas de ar. Nota: As bolhas de ar podem dificultar a imagiologia mais tarde no protocolo de se tornar incorporado no gel. </li></ol></li><li> Aspirar os esferóides a partir da porção inferior 40 ul do tubo de microcentrífuga, e combinar com o material da membrana basal / mistura de colagénio do tipo I. Tenha cuidado para evitar a formação de bolhas de ar quando a mistura. Nota: A solução contendo 100 ul de materiais de membrana basal, 100 ul de colagénio do tipo I, e 40 ul de esferóides criará material suficiente para 4 3D culturas independentes. Isto pode ser escalado para cima ou para baixo. </li><li> Pipetar 40 ul de gotas da mistura viscosa para os centros das cavidades de uma placa de 24 poços. Manter o nível de placa para evitar que a mistura de correr para o lado do poço. Nota: Uma coluna única na placa de 24 cavidades - 4 poços - é recomendado para cada condição a ser testado. </li><li> Colocar a placa intoa 37 ° C incubadora e deixar em repouso por 30 min. A cultura 3D irá polimerizar durante este período. </li><li> Lentamente submergir as culturas 3D em 1 mL de meios de cultura celular. <ol><li> Certifique-se de que a mídia está quente ao adicioná-lo nos poços para promover ainda mais a polimerização gel. </li><li> Passo crítico: Delicadamente adicionar a mídia para as culturas 3D. Pipetando os meios muito rapidamente nas cavidades pode levar ao descolamento das culturas em 3D a partir da superfície da cultura de tecidos. </li></ol></li></ol> 3. Monitoramento e Análise Spheroid Invasion <ol><li> Invasão imagem dos esferóides na matriz 3D circundante em pontos de tempo decidido pelo investigador. Adquirir fotografias usando um microscópio invertido com a lente objetiva de 20x. Nota: Ideal pontos de tempo irá variar de acordo com a linha de células que está sendo testado. Linhas de células mais invasivos começará sua saída dos esferóides logo após o plaqueamento e, portanto, levar fotografia inicials dentro de um par de horas após o plaqueamento. Geralmente, as fotografias são tiradas a 0 h (após o plaqueamento), 24 horas e 48 horas. Invasão conclui tipicamente de 24 a 48 h após o plaqueamento. </li><li> Quantificar a capacidade invasiva utilizando software de análise de imagem como Imagem J. <ol><li> Analise invasão celular como a distância a partir da borda do esferóide. <ol><li> Use a ferramenta straight draw para marcar o raio e / ou a distância máxima invasiva. </li><li> Clique em &quot;Analisar&quot; no menu superior e clique em &quot;Measure&quot; para exibir a medição do comprimento. </li></ol></li><li> Analisar invasão como a área total invasiva fora do esferóide. <ol><li> Use a ferramenta de desenhar à mão livre para traçar a fronteira do esferóide e / ou total área invasiva. </li><li> Clique em &quot;Analisar&quot; no menu superior e clique em &quot;Measure&quot; para exibir a medição da área. </li></ol></li><li> Use um plugin como ROI Ferramentas do Gerenciador de criar medidas para uma pilha de imagens. </li></ol>
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Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Este estudo foi avaliado o desempenho de um painel de linhas celulares de cancro em um ensaio de invasão esferóide (Tabela 1). De um modo geral, descobrimos que a formação do esferóide é aumentada em mais as linhas de células epiteliais de aspecto, em que a presença de junções célula-célula promove a formação de uma arquitectura do tipo esferóide. Linhas celulares conhecidas que foram submetidos a uma transição epitelial-mesenquimal, tais como MDA-MB-231 não formar esferóides na cultura de gota suspensa...

Está provado que a motilidade célula cancerosa é preditiva do potencial metastático, uma vez que tal comportamento facilita a invasão através da membrana basal e da entrada no sistema circulatório 1. Mais investigação sobre a motilidade tem-se centrado na forma como as células se comportam de uma configuração bidimensional (2D), embora se tornando-se amplamente reconhecido que o movimento das células em uma matriz tridimensional (3D) é mais representativo de como estas mesmas células vão realmente 2 comportar in vivo. Sistemas de cultura 3D são cada vez mais usados ​​para estudar comportamentos celulares que vão desde a morfologia celular, a cinética de crescimento e de sensibilidade às drogas 3. O desejo de controlar a invasão de células do cancro no contexto de um meio 3D levou à síntese de técnicas anteriormente estabelecidas, envolvendo a geração de agregados de células de 3D ​​(esferóides) através do método de cultura de gota em suspensão 4, seguido por incorporação destes esferóides numa extracelular 3D matriz (ECM) composta de colágeno e da membrana basal materiais 5. Este método visa aperfeiçoar estas técnicas anteriormente estabelecidas, fornecendo uma abordagem simplificada que pode ser facilmente utilizado para comparar invasão sob uma variedade de condições experimentais. Mais formas tradicionais para avaliar a motilidade celular in vitro são o ensaio da ferida-zero e o ensaio transwell 6. O primeiro ensaio de motilidade celular descreve uma configuração em 2D, e é, por conseguinte, independente de uma variedade de características críticas para a invasão in vivo, por exemplo, actividade de protease de 7. O ensaio de invasão de células Transwell pode melhor modelo, quando os insertos de cavidades são revestidas com substratos ECM, mas apenas um único parâmetro, isto é, o aparecimento de células sobre a superfície oposta da membrana é medida, e muitas nuances de invasão de células não são, portanto, facilmente observáveis. Em contraste com estas técnicas, o ensaio de invasão de células de cancro esferóide (figura 1 &lt;/ forte&gt;) permite a monitorização em tempo real da invasão celular, num ambiente que não só é fisiologicamente relevante, mas também permite características importantes específica da linha de células a serem visualizadas, tais como migração de células indivíduo vs colectiva 8. Este método também proporciona vantagens em relação aos ensaios padrão de crescimento de cultura 3D. A geração de agregados celulares através do método de gota em suspensão inicialmente restringe o movimento celular, de modo a que as células serão incentivados a invadir após esta restrição será levantada. Além disso, uma vez que a restrição é levantada, a saída de células irá prosseguir numa direcção uniforme, que pode então ser convenientemente quantificado. Os materiais de ECM mais populares usados ​​para esferóides ensaios de células de câncer são Matrigel e colágeno tipo I, em que cada um destes componentes tem papéis importantes e distintas em influenciar o comportamento metastático. Matrigel é uma mistura de proteínas segregadas por células de sarcoma produzidos Engelbreth Holm Swarm-rato, e é enriquecido em basemeproteínas da membrana nt, tais como laminina, entactina, e colágeno tipo IV 9. Por esta razão Matrigel é doravante referido como &quot;materiais de membrana basal.&quot; Estes materiais de membrana basal proporcionar ligandos essenciais necessários para adesão integrina durante a invasão de células de cancro 10, além de muitas outras proteínas que exercem uma variedade de efeitos no comportamento das células 11. Em comparação, o colagénio do tipo I, geralmente preparado a partir de digestões de ácido dos tendões e outras estruturas de colagénio densas 12, é um material de matriz muito mais simples que serve como um elemento estrutural do tecido do estroma e tecidos conjuntivos de suporte e órgãos do corpo. Foi demonstrado que as características físicas do colagénio pode regular um número de características de motilidade celular; Por exemplo, o alinhamento de fibras de colagénio na interface tumor-estromal permite que as células cancerosas migram subsequentemente ao longo dessas fibrilas ao invadir o estroma 13 em. No ensaio aqui apresentado, tanto o colágeno tipo I e materiais da membrana basal são utilizados como ferramentas para estudar as interações célula de câncer 3D-estroma. O efeito de inibição ou estimulação de caminhos que controlam invasão pode ser monitorizada após as células terem sido incorporados na matriz 3D. As células podem ser pré-tratados durante o crescimento nas gotas de suspensão ou aquando da transferência para a cultura 3D, dependendo se um tratamento prolongado será necessário para modular a invasão. Para tratamentos mais curtos, recomenda-se que a droga ser misturada com a suspensão esferóide após a recolha, assim como os meios de comunicação que vai rodear as culturas em 3D, para facilitar a exposição adequada da droga para as células. Em seguida, as células normais ou associados a tumores do estroma podem ser misturados com o material de matriz para avaliar o seu papel na modulação da invasão de células tumorais, ou para determinar o comportamento de células influências parácrino e autócrino de sinalização. Esta ideia foi demonstrado em um estudo onde a co-cultura de colsobre câncer e células endoteliais em gotas de suspensão levou a uma rede vascular dentro dos esferóides 14. Finalmente, os componentes ECM também pode ser alterado, como a invasão da célula cancerosa é afetado por diferentes substratos 15. O método apresentado abaixo, assim, fornecer um quadro para a avaliação da invasão da célula cancerosa sob uma variedade de condições. De um modo geral verificou-se que nem todas as linhas de células irá criar esferóides nas gotas de suspensão e linhas de células epiteliais de aspecto tipicamente formar esferas regulares.

<table><tbody><tr><td>Matrigel Fator de Crescimento Reduzido</td><td>Corning</td><td>CB-40234</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno Tipo I, Cauda de Rato, 100 mg</td><td>Millipore</td><td>08-115</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Life Technologies</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Médio&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>0.05% Tripsina-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino, Inativado por Calor</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-12</td><td></td></tr><tr><td>100 mm Pratos tratados com TC</td><td>Corning Incorporated</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>24 poços</td><td>NEST Biotecnologia</td><td>702001</td><td></td></tr><tr><td>Olympus IX-71 Microscópio Invertido</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>As linhagens celulares foram mantidas em DMEM + 10% FBS, com a expectativa de células BT-474 e LNCaP, que foram mantidas em RPMI + 10% FBS.</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

a cancer cell spheroid ensaio para avaliar a invasão em um ambiente 3d

A Cancer Cell Spheroid Assay to Assess Invasion in a 3D Setting

Acredita-se que a natureza invasiva das linhagens de células cancerígenas se correlacione com seu potencial metastático. A maioria dos ensaios tradicionais, no entanto, não examina essas características invasivas em um ambiente tridimensional e os dados resultantes sofrem de aplicabilidade biológica reduzida. Aqui é apresentada uma abordagem para visualizar a capacidade invasiva das linhagens celulares em um ambiente fisiologicamente relevante. O ensaio de invasão de esferóides de células cancerígenas primeiro utiliza a gravidade para gerar esferoides dentro de gotas de meio que ficam penduradas na tampa de uma placa de cultura de células. Em seguida, esses esferoides são incorporados em uma matriz 3D que consiste em uma mistura de materiais de membrana basal e colágeno tipo I. A saída de células cancerígenas dos esferoides para a matriz circundante é então monitorada ao longo do tempo. O método descrito aqui pode ser modificado para examinar a invasão após cocultura de diferentes tipos celulares, inclusão de drogas/inibidores ou alterações nos constituintes da matriz extracelular (MEC).

Usando o ensaio de invasão esferóide (figura 1), um painel de linhas celulares de cancro foi testado quanto à sua capacidade para formar esferóides, bem como para a quantidade de egresso de células expostas após o implante numa matriz 3D que consiste em materiais de membrana basal e colagénio tipo I (Tabela 1). Estes resultados demonstram que nem toda linha celular de cancro criará esferóides bem formadas, onde as linhas de células que possuem uma morfologia epitelial in vitro,...

Este método avalia a invasão de células cancerígenas de esferóides em uma matriz 3D circundante. Os esferoides são gerados através do método de cultura de gota suspensa e, em seguida, incorporados em uma matriz composta de materiais de membrana basal e colágeno tipo I. A invasão dos esferóides é posteriormente monitorada.

A Cancer Cell Spheroid Ensaio para avaliar a invasão em um ambiente 3D

The invasive nature of cancer cell lines is thought to correlate with their metastatic potential.  Most traditional assays, however, do not examine these ...

O objetivo geral deste ensaio de invasão de células cancerígenas por esteroides é permitir o monitoramento da invasão de células cancerígenas a partir de um bolus celular e para dentro de uma matriz tridimensional ao redor. Este método pode ajudar a responder perguntas-chave na biologia do câncer, como a identificação de condições que promovem ou inibem a invasão celular. A principal vantagem desta técnica é que as diversas nuances de como as células invadem podem ser avaliadas em um ambiente mais fisiologicamente relevante in vitro.Para começar, remova uma placa de cultura contendo células cancerígenas aderentes do incubador. Lave as células uma vez com PBS e adicione 1,5 mililitros de tripsina 0,05% EDTA. Em seguida, incube as células por três minutos a 37 graus Celsius.Uma vez que as células tenham se destacado, passe as células tripsinizadas através de uma pipeta de cinco mililitros para obter uma suspensão de células simples e, em seguida, adicione 8,5 mililitros de meio de cultura celular ao frasco. Conte a suspensão celular utilizando um contador de células. Dilua a suspensão celular para 500 a 1000 células por 20 microlitros.No meio de cultura, use uma pipeta multicanal para formar gotas de 20 microlitros na superfície interna da tampa de uma placa de 10 centímetros. Pipete cinco fileiras de oito gotas, totalizando 40 gotas. Em seguida, pipete cinco mililitros de PBS estéril no fundo da placa de 10 centímetros. Inverta cuidadosamente a tampa e coloque-a sobre a placa de 10 centímetros.Em seguida, incubar as culturas em gota suspensa a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por até 72 horas para formar esteroides. Para gerar a matriz 3D, descongelar uma alíquota de fator de crescimento, solução reduzida de membrana basal a quatro graus Celsius durante a noite. Em seguida, coletar os esteroides inclinando a tampa da placa de 10 centímetros para reunir as gotas.Transfira o meio para um tubo de centrífuga de 1,5 mililitro e deixe o tubo em repouso por 10 minutos para permitir que os OID sedimentem no fundo. Em seguida, misture 100 microlitros da solução de membrana basal descongelada com 100 microlitros da solução de colágeno tipo I a 2,3 miligramas por mililitro, fria, em um tubo de centrífuga de 1,5 mililitro previamente resfriado.Incube a matriz extracelular ou mistura de MEC em gelo. Pipete 40 microlitros de esteroides de células cancerígenas do fundo do tubo de centrífuga de 1,5 mililitro e combine com a mistura de MEC; agora, pipete gotas de 40 microlitros dessa mistura viscosa no centro de poços individuais em uma placa de cultura celular de 24 poços. Mantendo a placa nivelada, coloque-a em uma incubadora de cultura celular a 37 graus Celsius e deixe-a sem perturbação por 30 minutos.Uma vez que as culturas 3D tenham polimerizado, pipete lentamente um mililitro de meio de cultura celular aquecido em cada poço para submergir a cultura. Em seguida, retorne as culturas 3D ao incubador utilizando uma imagem de microscópio invertido, as células cancerígenas invasoras. Utilizando a objetiva de 20 x em pontos de tempo predeterminados.Incube a placa a 37 graus Celsius. Entre os pontos de tempo de aquisição de imagens para análise de dados, quantifique a capacidade invasiva das células utilizando um software de análise de imagens, como o Image J, para determinar a distância das células em relação à borda do esferoide. Utilize a ferramenta de linha reta para marcar o raio.Em seguida, clique em analisar no menu superior, seguido por medir para exibir a medição de comprimento. Para determinar a área invasiva do esferoide, utilize a ferramenta de desenho livre para traçar a borda do esferoide e, em seguida, a área das células invasivas. Novamente, clique em analisar no menu superior, seguido por medir para exibir a medição da área.Ao testar um painel de linhagens celulares de câncer, observou-se que a maioria formava esteroides utilizando o método de cultura em gota suspensa. Algumas linhagens celulares, no entanto, foram incapazes de formar esteroides ao usar este método de cultura. Além disso, houve variabilidade dentro do grupo de linhagens celulares formadoras de esferoides quanto à sua capacidade de invadir a MEC circundante.Esses dados foram confirmados visualmente, com a invasão celular tornando-se acentuada após 24 horas para várias das linhagens celulares testadas. Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada com apenas algumas horas de trabalho distribuídas ao longo de cinco dias. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de trabalhar rapidamente e evitar aprisionar bolhas de ar na mistura que comporá a cultura 3D. Esta técnica pode ser modificada para examinar o impacto de fármacos, cocultivo celular ou diferentes componentes da matriz extracelular (ECM) na invasão de células cancerígenas.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como avaliar e quantificar a invasão de células cancerígenas em um ambiente tridimensional.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Um ensaio para medir quantitativamente Transforming Growth Factor (TGF)-β induzida por invasão em gel 3-dimensional colágeno é descrito. Este ensaio se aproveita da série MCF10A de linhas de células, que representam diferentes fases de desenvolvimento de câncer de mama. Este método pode ser adotado para ser usado com outras linhagens de células e pode ser usado para investigar outras possíveis ativadores ou inibidores de invasão.

Ensaio esferóide para TGF-β Medida induzida Invasion

Este vídeo demonstra um método para estabelecer uma co-cultura tridimensional de esferóides tumorais e células T. Um molde de agarose com micropoços contendo esferóides tumorais é preparado, seguido pela adição de células T. Após a incubação, essa configuração permite estudar a interação das células T com os esferoides tumorais em um ambiente tridimensional controlado.

Um modelo tridimensional de co-cultura de células T infiltrantes em esferoides tumorais

Fonte: Guyon, J., et al. Um modelo esferóide 3D para glioblastoma. J. Vis. Exp. (2020)O vídeo demonstra a geração de um modelo esferóide tridimensional de invasão de células tumorais. Os esferóides são formados a partir de células tumorais cerebrais humanas e incorporados em uma matriz de colágeno. As células tumorais na periferia esferóide adotam um fenótipo invasivo, secretando proteases para degradar o colágeno e avançando para invadir a matriz circundante.

Geração de um modelo esferóide tridimensional de invasão de células tumorais

A invasão dos tecidos normais circundantes é uma característica definidora dos tumores malignos. Fornecemos aqui um ensaio simples e semi-automatizado de microplacas de invasão em uma biomatriz 3D natural que foi exemplificada com vários modelos de cânceres humanos avançados.

Tridimensional (3D) Tumor Esferóide Invasion Assay

O microambiente tumoral é uma parte essencial do crescimento e invasão do câncer. Para imitar a progressão da carcinoma, uma matriz humana biologicamente relevante é necessária. Este protocolo introduz uma melhoria para in vitro o ensaio tridimensional da invasão do esferóide aplicando uma matriz leiomyoma-baseada humana. O protocolo também introduz uma análise de invasão de células baseada em computador.

Matriz tumor-baseada inteiramente humana no ensaio tridimensional da invasão de spheroid

O objetivo deste protocolo é estabelecer um modelo in vitro 3D para estudar a diferenciação de fibroblastos Cancer-associados (CAFs) em um tumor a granel-como o ambiente, que pode ser abordado em diferentes sistemas de análise, tais como a imunofluorescência, transcricional análise e imagens de células de vida.

Um modelo de spheroid 3D como um sistema mais fisiológico para fibroblastos associados ao cancro diferenciação e invasão in vitro estudos

A abordagem apresentada avalia simultaneamente a invasão de células cancerígenas em ensaios esferoides 3D e citotoxicidade de células T. Esferoides são gerados em um elenco multi-microwell livre de andaimes. A cocultura e a incorporação na matriz de colágeno tipo I são realizadas dentro do mesmo dispositivo que permite monitorar a invasão de células cancerígenas e a citotoxicidade mediada por células T.

Monitoramento da invasão celular cancerígena e citotoxicidade de células T na cultura 3D

Apresentado aqui é um protocolo para a fabricação de um dispositivo de imagem esferoide. Este dispositivo permite imagens de fluorescência dinâmica ou longitudinal de esferoides de células cancerosas. O protocolo também oferece um simples procedimento de processamento de imagem para a análise da invasão de células cancerosas.

Imagem e análise de fluorescência resolvidas no modelo 3D spheroid

A invasão é um fenômeno biológico importante no desenvolvimento e progressão do câncer. Esse processo é influenciado por células não neoplásicas e componentes do microambiente tumoral. O objetivo deste estudo é descrever um método alternativo para análise da invasão de células tumorais in vitro usando culturas tridimensionais (3D).

Estratégia alternativa para analisar a invasão celular in vitro de culturas 3D

Aqui, apresentamos um protocolo para investigar a interação de macrófagos primários derivados de monócitos humanos com um esferóide tumoral em uma matriz tridimensional (3D) de colágeno I, com a possibilidade de comparar o impacto das propriedades solúveis e físicas do microambiente na invasão celular.

Um ensaio de co-invasão de esferoides macrófagos-tumores

Há uma necessidade crítica de modelos 3D de câncer que capturem crosstalk heterocelular para estudar a metástase do câncer. Nosso estudo apresenta a geração de estroma-epitelial heteromulticelular em um ambiente scaffold e scaffold-free que pode ser usado para estudar a invasão e as distribuições espaciais celulares.

Células estromais heteromulticelulares em culturas 3D sem andaimes de células epiteliais cancerígenas para impulsionar a invasão

Aprenda a avaliar a invasão de células cancerígenas em esferoides 3D usando matriz de membrana basal e colágeno tipo I. Este método permite monitorar dinâmicas de invasão em ambiente fisiologicamente relevante in vitro.

A Cancer Cell Spheroid Ensaio para avaliar a invasão em um ambiente 3D

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