Name: Emulsões água em óleo: Um novo sistema para a montagem de proteínas de ligação de clorofila solúveis em água com pigmentos hidrofóbicos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 26 s
Description: Aprenda a montar proteínas solúveis em água com clorofilas hidrofóbicas usando emulsões água em óleo. Este método de alta vazão permite estudar interações proteína-clorofila sem marcação ou imobilização.

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DN reconhece o apoio do FP7 UE projectos PEPDIODE (GA 256672) e REGPOT-2012-2013-1 (GA 316.157), e uma bolsa de investigação pessoal (nº 268/10) do Israel Science Foundation. Agradecemos Prof. Shmuel Rubinstein, da Escola de Engenharia e Ciências Aplicadas, Universidade de Harvard, Cambridge MA, EUA para tirar as imagens de microscopia confocal.

1. Preparar Chl um estoque Solutions <ol><li> Passo crítico: executar todos os passos de preparação de clorofila numa hote química, sob luz verde (520 nm) ou, no escuro, a fim de minimizar o fotoenvelhecimento. Sempre adicionar azoto ou árgon antes de congelar os pigmentos para armazenamento. Assegurar que todos os solventes são grau analítico. </li><li> Pesar cerca de 5 mg de células Spirulina platensis liofilizadas ou outras células contendo apenas cianobactéria Chl a em tilacóides e esmagá-lo usando um almofariz e pilão. </li><li> Carregar células trituradas numa coluna de vidro e lava-se com cerca de 50-100 ml de acetona a 100%, a fim de remover os carotenóides. Descarte a fração laranja / verde eluída. Nota: Se a fracção de laranja não é eluída com 100 ml de acetona continuar a lavagem das células com acetona até fracção verde começa a eluir. </li><li> Acetona Exchange com 100% de metanol e recolher a fracção verde contendo Chl a. O volume de eluído fractião pode variar entre 50-100 ml. No início, a fracção eluida tem uma cor verde escuro, que muda para verde pálido na extremidade de eluição. Quando a cor da fraco elua se transforma em verde pálido parar a eluição. </li><li> Evapora-se o metanol utilizando um evaporador rotativo até que o extracto é completamente seca. Não aplique calor para a solução; assegurar que a temperatura do banho de água do evaporador não exceda 30 ° C. Nota: O tempo de evaporação depende do volume da fracção de metanol a ser evaporado e pode variar entre 10-60 min. É importante secar o extracto completamente. </li><li> Dissolve-se os pigmentos do extracto seco num pequeno volume de éter dietílico (cerca de 5-10 ml), e filtrar através de lã de algodão. Certifique-se de que os pigmentos são completamente dissolvido em éter, antes de filtrar. </li><li> Evapora-se o éter dietílico até os pigmentos estarem completamente secos (10-30 min). Nota: Os pigmentos secos pode ser purgado com e mantido sob atmosfera de azoto ou árgon a -20 ° C, no escuro, até processamento posterior. </li><li> Dissolve-se os pigmentos secos no menor volume possível de 100% de metanol (cerca de 1 ml), mesmo se não tudo está completamente suspenso. Adicionar 4 ml de acetona à solução, e agite suavemente o vidro, a fim de dissolver completamente os pigmentos. </li><li> Usando uma pipeta de Pasteur, carregar a amostra suavemente sobre uma coluna de DEAE Sepharose equilibrada em 100% de acetona. </li><li> carotenóides eluir (uma tira amarelo-laranja), com 100% de acetona. Então, eluir Chl a (faixa verde) com mistura 3: 1 v / v de acetona / metanol. Nota: O volume de acetona e mistura de acetona / metanol é aproximadamente equivalente ao volume de DEAE Sepharose carregada na coluna. </li><li> Verifique Chl a pureza por cromatograf ia em camada fina utilizando uma 68: (v / v) de uma mistura 2 de diclorometano / n-hexano / isopropanol / metanol como eluente 17: 25: 5. </li><li> Evapora-se o solvente usando um evaporador rotativo até que a Chl a é completamente seco (10-60 min). Nota: O Chl seco a pode ser purgado com azoto ou árgon e armazenados sob atmosfera de árgon à temperatura de -20 ° C no escuro. </li><li> Prepare uma solução estoque Chl por re-dissolução do Chl a seco em 2-4 ml de etanol a 100%. Nota: O coeficiente de extinção de um Chl em 663 nm é 74.400 cm -1 m -1 (83,3 cm-1 (mg / mL) -1) em etanol. Uma solução de estoque típico deve ter uma DO de 1860 que corresponde a uma concentração de 25 mM (23 mg / ml). A adição de 20 ul desta lingua a uma emulsão contendo 5 ml de fase orgânica, e 1 mg de WSCP em 1 ml de resultados fase aquosa, de uma mistura com um excesso molar de 10 vezes de uma Chl vs. WSCP. </li></ol> 2. Preparar fase orgânica da emulsão Nota: A fase orgânica da emulsão é composta de óleo mineral contendo 4,5% (v / v) de Span 80 e 0,4% (v / v) de Tween 80. <ol><li> Pesa-se um tubo de 50 ml de 0,2 g de tween 80, 1,8 g de Span 80, e 38 g de óleo mineral. Misture bem todos os componentes e arrefecer no gelo. Nota: A fase orgânica pode ser armazenado em 4 ° C até uma semana. </li></ol> 3. Preparação da fase aquosa da emulsão Nota: A fase aquosa da emulsão pode ser composta de qualquer WSCP purificada ou extracto em bruto de bactérias que sobre-expressam WSCP. <ol><li> Preparar uma fase aquosa contendo WSCP purificada. <ol><li> Crescer as bactérias E. coli BL21 contendo o plasmídeo WSCP 12 em 1 L de meio LB a 37 ° C até à DO de 0,3-0,6. </li><li> Induzir a expressão da proteína por adição de IPTG 1 mM. Após a indução crescer as bactérias a 30 ° C durante 12-16 hr. </li><li> Colheita bactérias por centrifugação a 5000 xg durante 10 min a 4 ° C. </li><li> Dissolver o sedimento em tampão e sonicate vinculativo sobre gelo (30 seg on, 15 seg off, cinco vezes). Utilizar 10 ml de tampão para o sedimento, obtido pela centrifugação de 250 ml demeio LB com células que sobreexpressam a proteína. Nota: Dependendo do método de purificação, o tampão de ligação pode ser composta de 100 mM de tampão fosfato, pH 7,2 ou 50 mM Tris, pH 7,5, 500 mM de NaCl, 5 mM de EDTA. </li><li> Girar o lisado celular a 12000 xg durante 30 min a 4 ° C. </li><li> Purifica-se por cromatografia de afinidade WSCP. Dependendo da tag fundido com WSCP, purificar as proteínas recombinantes utilizando o sistema de cromatografia de afinidade comercialmente disponível adequado para a purificação de proteínas, seguindo as instruções do fabricante. </li><li> Para a preparação da emulsão, utilizar WSCP purificada em tampão fosfato 50 mM, pH 7,8. Certifique-se de que a quantidade final de proteína utilizada para a reconstituição é de 0,5-1,0 mg por 1 ml de tampão. </li></ol></li><li> Preparar uma fase aquosa contendo lisado bacteriano em bruto com WSCP. <ol><li> Crescer as células de E. coli BL21 contendo WSCP-expressando plasmídeo em 250 ml de meio LB a 37 ° C até 0,3-0,6 OD. </li><li> Induzem a expressão de proteínas com1 mM de IPTG e bactérias crescem durante a noite a 30 ° C. </li><li> Colheita de células bacterianas por centrifugação a 5000 xg durante 10 min a 4 ° C. </li><li> Dissolve-se o sedimento em 1-2 ml de 50 mM de tampão de fosfato de sódio pH 7,8, sonicar (30 seg ligado, 15 segundos desligado, três vezes) e centrifugar a 12000 xg durante 30 min a 4 ° C. </li><li> Preparar a fase aquosa da emulsão por mistura de 0,125 ml de sobrenadante com 0,875 mL de 50 mM de tampão fosfato de sódio pH 7,8. </li></ol></li></ol> 4. Montagem de WSCP com Chl a em Emulsão <ol><li> Transferência de 5 ml de mistura de óleo-agente tensioactivo para um frasco de vidro e arrefecer em gelo. Antes de pipetagem, verificar que todos os componentes da fase orgânica são muito bem misturados e não existe separação de fases entre tensioactivos e óleo mineral. </li><li> Adicionar 1 ml de fase aquosa gelada preparadas como no ponto 3 a 5 mL de fase orgânica. </li><li> Misturar ambas as fases, utilizando um homogeneizador de tecidos durante 2 min a 9500 rpm em gelo.</li><li> ETAPA CRÍTICA: A partir dessa etapa, executar todas as medidas adicionais sob luz verde (520 nm), a fim de minimizar o fotoenvelhecimento. Adicionar 20 ul de 25 mM de Chl uma solução de estoque (ver secção 1.13) à emulsão. Dispersar sacudindo e invertendo o frasco de vidro. Certifique-se de que a Chl é distribuída uniformemente na emulsão. </li><li> Incubar a emulsão durante 1-2 horas em gelo no escuro. </li><li> A fim de quebrar a emulsão de gotas de água e separadas da fase orgânica transferir a emulsão para tubos de 1,5 ml de plástico e centrifugar a 14000 xg durante 5 min à temperatura ambiente. Nota: Se o conjunto é bem sucedido, a fase aquosa inferior deve ter uma cor verde. </li><li> Descarte a fase de óleo superior e adicionar 1 ml de óleo mineral. Misture bem o óleo mineral com a emulsão sedimentado por vortex ou lançando o tubo completamente. Girar a amostra a 14000 xg durante 5 min à temperatura ambiente. Repita este passo até um menisco clara separando o aquoso e mineiroal fases de óleo, sem qualquer emulsão intermédia é obtida. </li><li> Execute esta etapa em uma capa química. Após as fases de óleo e aquosas minerais estão claramente separados, remover o óleo mineral e adicionar 1 ml de éter dietílico saturado com água. Vortex e girar a amostra a 14000 xg durante 5 min à temperatura ambiente. Repita esta etapa duas vezes. </li><li> Após a segunda centrifugação, remover o éter dietílico e deixar os tubos abertos durante 5-20 minutos na capa. </li><li> Finalmente, carregar a fase aquosa contendo o WSCP / Chl um complexo sobre uma coluna de dessalinização e elui-se com tampão apropriado para outras experiências. Nota: A proteína é estável em tampões de fosfatos e tris em uma ampla gama de pH (6,0-7,5). A amostra pode ser armazenada a 4 ° C protegida da luz até um mês. </li></ol>

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</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

O nosso objectivo foi desenvolver um novo sistema para a montagem geral de proteínas de ligação a clorofila solúveis em água com pigmentos hidrofóbicos. Aqui mostra-se que o novo sistema de reconstituição com base em W / O emulsão é uma abordagem geral comprovada para o trabalho para a montagem de apoproteínas WSCP de couves de Bruxelas, couve-flor, rabanete japonês e Virginia pepperweed recombinante expressos em E. coli. Aqui os resultados são apresentados a partir de reconstituição de 1 mg de WSCP com excesso...

pigmentos hidrofóbicos, tais como clorofilas (CHLS), bacteriochlorophylls (Bchls) e carotenóides são os principais cofatores na centros de reação fotossintética e proteínas de colheita de luz que realizam transporte de elétrons, e captura de energia de luz e transferência. Os centros de reação e a maior parte dos complexos de colheita de luz Chl-ligação são proteínas transmembrana. A proteína Fenna-Matthews-Olson (FMO) de não oxigênicos bactérias fotossintéticas-enxofre verde 1,2 e a proteína peridinina-Chl (PCP) de dinoflagelados 3 são exemplos excepcionais de proteínas de colheita de luz solúveis em água. A ligação de clorofila proteínas solúveis em água (WSCPs) de Brassicaceae, Polygonaceae, Chenopodiaceae e plantas Amaranthaceae 4, 5 são outro exemplo único, mas em contraste com FMO e PCP, estes não são nem envolvidos na captura de luz nem em qualquer um dos reacção fotossintética primária e sua phy precisafunções fisiológi- são ainda incerto 5-8. A sua afinidade de ligação a Chl elevada conduziram a uma função sugerida como transportadores transientes de Chis e derivados de Chi 9,10. Alternativamente, se a hipótese de que WSCP desempenha um papel importante na limpeza Chis em células danificadas e protege contra danos induzidos photooxidative-Chl 7,11-13. Mais recentemente, sugeriu-se que as funções de WSCP como um inibidor de protease e desempenha um papel na resistência herbívoros assim regula a morte celular durante o desenvolvimento da flor 14. WSCPs são divididos em duas classes principais de acordo com as suas propriedades fotofísicas. A primeira classe (classe I, por exemplo. De Chenopodium album) pode sofrer fotoconversão sobre iluminação. Classe WSCPs II de plantas Brassica, que não se submetem a fotoconversão 5,10, estão subdivididos em classes IIa (ex., A partir de Brassica oleracea, Raphanus sativus) e IIb (por exemplo., De Lepidium virginicum </em&gt;). A estrutura da classe IIb WSCP de Lepidium virginicum foi resolvida por cristalografia de raios-X em resolução de 2.0 a 8. Ela revela um homotetrâmero simétrica em que as subunidades da proteína formar um núcleo hidrofóbico. Cada subunidade se liga a um único Chl o que resulta em um arranjo apertado de quatro Chis estreitamente empacotadas dentro das core.This simples arranjo todos Chl faz WSCPs um sistema modelo potencialmente útil para o estudo de ligação e montagem de complexos de Chl-proteína, e os efeitos da vizinha Chis e ambientes de proteína sobre as propriedades espectrais e eletrônicas de Chis individuais. Além disso, pode fornecer modelos para a construção de proteínas Chl vinculativos artificiais que podem ser utilizados para os módulos de luz de colheita em dispositivos fotossintéticos artificiais. Estudos rigorosos de WSCPs nativas não são viáveis ​​porque os complexos purificados a partir de plantas contêm sempre uma mistura heterogénea de tetrâmeros com diferentes combinações de Chl ae Chl b 9. Assim, um método para a montagem de WSCPs expressos de forma recombinante com Chis in vitro é necessário. Este é desafiada pela solubilidade em água desprezável de Chis que faz com que seja impossível montar o complexo in vitro misturando simplesmente as apoproteínas solúveis em água com pigmentos em soluções aquosas. Montagem in vitro misturando as apoproteínas com membranas de tilacóides 15 foi demonstrada, mas este método é limitado à Chis nativa presente nos tilacóides. Schmidt et ai. informou sobre a montagem de vários derivados de Chi e de Bchl com WSCP de couve-flor (CaWSCP), expressando de forma recombinante uma proteína marcada com histidina em E. coli imobilizando-o sobre uma coluna de Ni-afinidade e a introdução de derivados de Chi solubilizados em detergentes 11. Com sucesso reconstituição do WSCPs recombinantes de A. thaliana 6, e couves de Bruxelas (BoWSCP), nabo japonês (RshWSCP) umd Virgínia pepperweed (LvWSCP) por um método semelhante foram também relatados. Aqui, apresentamos um romance, método geral, direto para a montagem de Chis com WSCP que não requerem marcação ou imobilizar as proteínas. Baseia-se na preparação de emulsões de suas soluções aquosas dos apoproteínas solúveis em água, em óleo mineral. As proteínas são assim encapsulados em água-em-óleo (W / O) microgotículas com superficial muito elevada em relação ao volume de 16. Os cofactores hidrofóbicos são, em seguida, dissolvido no óleo e são facilmente introduzidos nas gotículas da fase oleosa. Relatamos usando o método para a montagem de diversas variantes de apoproteínas WSCP recombinante expressos em E. coli com Chl a. Nós demonstramos a montagem a partir de lisados ​​em bruto de bactérias que sobre-expressam WSCP que podem ser utilizados como um sistema de rastreio para o desenvolvimento de novas proteínas de ligação de Chl.

<table><tbody><tr><td>Óleo mineral</td><td>Sigma</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>Span80</td><td>Sigma</td><td>85548</td><td></td></tr><tr><td>Tween80</td><td>Sigma</td><td>P8074</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Scale Mini Profinity eXact Cartuchos</td><td>Bio Rad</td><td>10011164</td><td>Cromatografia de afinidade para purificação WSCP com sequência nativa.</td></tr><tr><td>Coluna His Trap HF</td><td>GE Healthcare Life Science</td><td>17-5248-02</td><td>Cromatografia de afinidade para purificação de WSCP com His-tag</td></tr><tr><td>DEAE Sepharose Fast Flow</td><td>GE Healthcare Life Science</td><td>17-0709-01</td><td>Meio de cromatografia para purificação de clorofila</td></tr></tbody></table>

emulsões água em óleo: um novo sistema para a montagem de proteínas de ligação de clorofila solúveis em água com pigmentos hidrofóbicos

Water in Oil Emulsions: A New System for Assembling Water-soluble Chlorophyll-binding Proteins with Hydrophobic Pigments

Clorofilas (CHLS) e bacteriochlorophylls (Bchls) são os principais co-fatores que realizam a colheita de luz da fotossíntese e de transporte de elétrons. Sua funcionalidade depende criticamente sobre a sua organização específica dentro grandes complexos de proteínas e elaborados múltiplas subunidades transmembrana. A fim de compreender a nível molecular destes complexos como facilitar a conversão da energia solar, que é essencial para compreender proteína de pigmento, e interacções pigmento de pigmento, e o seu efeito sobre a dinâmica excitados. Uma maneira de ganhar tal entendimento é através da construção e estudar complexos de Chis com proteínas recombinantes solúveis em água simples. No entanto, a incorporação dos Chis e Bchls lipofílicos em proteínas solúveis em água, é difícil. Além disso, não existe um método geral que pode ser utilizado para a montagem de proteínas solúveis em água com pigmentos hidrofóbicos. Aqui, demonstramos um sistema de transferência simples e alta à base de emulsões de água-em-óleo, o qual permite burroembly de proteínas solúveis em água com Chis hidrofóbicos. O novo método foi validado por reunião de versões recombinantes da proteína de ligação à clorofila solúvel em água de plantas Brassicaceae (WSCP) com Chl a. Nós demonstramos a montagem bem-sucedida de Chl A utilizando lisados ​​impuros de WSCP expressando E. célula de E. coli, que podem ser utilizados para o desenvolvimento de um sistema de tela genética para as proteínas de ligação Chl-solúveis em água novos, e para estudos de interacções proteína-Chl e processos de montagem.

Apoproteínas WSCP recombinantes foram montados com um Chl em emulsões / O w de acordo com o protocolo descrito na secção anterior. O protocolo foi implementado utilizando fases aquosas contendo os WSCPs puros, ou lisados ​​de células de E. coli que sobre-expressam WSCP (Figura 1). O protocolo é simples, rápida e não requer qualquer equipamento especial, exceto um homogeneizador de tecidos. A ...

Este manuscrito descreve um método simples e de alto rendimento para a montagem de proteínas solúveis em água com pigmentos hidrofóbicos que é base de emulsões de água-em-óleo. Demonstramos a eficácia do método na montagem de clorofilas nativas com quatro variantes de água-solúvel em clorofila recombinante proteínas de ligação (WSCPs) de plantas Brassica expressos em E. coli.

Emulsões água em óleo: Um novo sistema para a montagem de proteínas de ligação de clorofila solúveis em água com pigmentos hidrofóbicos

Chlorophylls (Chls) and bacteriochlorophylls (BChls) are the primary cofactors that carry out photosynthetic light harvesting and electron transport. ...

O objetivo geral desta técnica é permitir a incorporação de clorofilas insolúveis em água nos sítios de ligação de proteínas solúveis em água. Este método possibilita a montagem de clorofilas com proteínas recombinantes, o que permite estudos rigorosos das interações entre clorofila e proteína e abre novas possibilidades para a construção de complexos novos de clorofila-proteína. A principal vantagem desta técnica é que ela não requer marcação ou imobilização das proteínas.Assim, é muito adequado para ensaios de triagem. A demonstração do procedimento será feita por Dominica Bednarczyk, pós-doutoranda do meu grupo de pesquisa. Ao preparar as seguintes soluções estoque, realize todos os passos de preparação da clorofila sob capela química, sob luz verde ou no escuro, para minimizar danos fotoinduzidos.Adicione sempre nitrogênio ou argônio antes de congelar os pigmentos para armazenamento e certifique-se de que todos os solventes sejam de grau analítico. Para começar, pese cerca de cinco gramas de células liofilizadas de Spirulina platensis ou de outras células de cianobactérias contendo apenas clorofila a ou clorofila-a nas membranas tilacoides e utilize um almofariz e uma pistila p

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Research

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Chemistry

Química

Este protocolo detalha a reconstituição de complexos coletores de luz in vitro. Essas proteínas integrais da membrana coordenam clorofilas e carotenóides e são responsáveis pela coleta de luz em plantas superiores e algas verdes.

In Vitro Reconstituição de Complexos de Light-colheita de plantas e algas verdes

Moléculas de corantes orgânicos e nanopartículas de conversão ascendente revestidas com ácido oleico não são solúveis em água. Este protocolo descreve um método 'plug and play' que permite a transferência de moléculas de corantes orgânicos e partículas de conversão ascendente de seu solvente hidrofóbico inicial para a água.

Um método &#39;Plug and Play&#39; para criar Nanoassemblies dispersáveis ​​em água contendo um polímero anfifílicas, corantes orgânicos e Upconverting Nanopartículas

Este trabalho relata métodos práticos para preparar hidrogéis em filmes autônomos e membranas impregnadas e para caracterizar suas propriedades físicas, incluindo propriedades de transporte de água.

Síntese de hidrogeles com propriedades anti-deposição como membranas de purificação de água

Este protocolo descreve um meio clinicamente aplicável de dissolver compostos hidrofóbicos em um ambiente aquoso, usando combinações de montagem auto soluções de peptídeos e aminoácidos. Nosso método resolve uma limitação importante da terapêutica hidrofóbica, desprovidas de meios seguros e eficientes de solubilidade e entrega métodos em situações clínicas.

Solubilidade dos compostos hidrofóbicos em solução aquosa usando combinações de montagem auto peptídeos e aminoácidos

Aqui nós apresentamos dois protocolos ultra rápidos para reconstituição das proteínas de membrana em fusogenic proteoliposomes e fusão de tais proteoliposomes com bilayers do lipid alvo para detergente livre entrega destas proteínas de membrana para a BICAMADA postfusion. A combinação dessas abordagens permite montagem rápida e facilmente controlada de sistemas complexos de membrana multi-componentes.

Livre de detergente ultra reconstituição das proteínas de membrana em lípidos Bilayers usando Fusogenic Proteoliposomes complementares carregada.

Aqui, apresentamos um protocolo para isolar a fucoxantina clorofila a/c proteínas obrigatórias (FCP) de diatomáceas e incorporá-las em lipossomas com composições de lipídios naturais para estudar a transferência de energia de excitação sobre as alterações de composição do íon.

Isolando e incorporando luz-colheita antenas de diatomáceas Cyclotella Meneghiniana em lipossomas com lipídios tilacoides

Na interface de solventes orgânicos e aquosos, proteínas anfífilas sob medida se reúnem em estruturas supramoleculares complexas, como vesículas, fibras e coacervates desencadeadas por parâmetros ambientais. Os protocolos de montagem descritos produzem compartimentos baseados em membrana sérica (PMBCs) com propriedades ajustáveis, permitindo o encapsulamento de várias cargas.

Montagem dirigida de proteínas semelhantes à elastina em estruturas supramoleculares definidas e encapsulamento de carga in vitro

Relatamos um protocolo para a produção de uma membrana lipídica híbrida na interface água/ar dopando a bicamada lipídica com moléculas de cobre (II) 2,9,16,23-tetra-tert-butil-29H,31H-phthalocyanine (CuPc). A membrana lipídica híbrida resultante tem uma estrutura de sanduíche lipídida/CuPc/lipídio. Este protocolo também pode ser aplicado à formação de outros nanomateriais funcionais.

Auto-montagem de membranas lipídicas híbridas dopadas com moléculas orgânicas hidrofóbicas na interface água/ar

Os óleos usados para aplicações de administração de medicamentos podem perturbar o perfil lipídico dos pacientes, o que é indesejável em doenças cardiovasculares. Os óleos ricos em ácidos graxos ômega-3 são uma alternativa saudável aos óleos convencionais e têm um enorme potencial para sistemas de administração de medicamentos autoemulsionados.

Auto-nanoemulsificação de óleos saudáveis para aumentar a solubilidade de drogas lipofílicas

O presente protocolo descreve a montagem de lipossomas assistida por octanol (OLA), uma técnica microfluídica para gerar lipossomas biocompatíveis. O OLA produz lipossomas monodispersos do tamanho de mícrons com encapsulamento eficiente, permitindo a experimentação imediata no chip. Prevê-se que este protocolo seja particularmente adequado para biologia sintética e pesquisa de células sintéticas.

Montagem de lipossomas assistida por octanol on-chip para bioengenharia

Este protocolo descreve o sistema de Síntese de Proteínas Livres de Células (CFPS) usado na construção de células sintéticas. Ele descreve os principais estágios com resultados representativos em diferentes microcompartimentos. O protocolo visa estabelecer as melhores práticas para diversos laboratórios na comunidade de células sintéticas, promovendo o progresso no desenvolvimento de células sintéticas.

Sistema de síntese de proteínas livres de células para a construção de células sintéticas

Aprenda a montar proteínas solúveis em água com clorofilas hidrofóbicas usando emulsões água em óleo. Este método de alta vazão permite estudar interações proteína-clorofila sem marcação ou imobilização.

Emulsões água em óleo: Um novo sistema para a montagem de proteínas de ligação de clorofila solúveis em água com pigmentos hidrofóbicos (Vídeo) | JoVE Journal

Emulsões água em óleo: Um novo sistema para a montagem de proteínas de ligação de clorofila solúveis em água com pigmentos hidrofóbicos

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