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Otimização do Ensaio Wound zero para detectar mudanças na Murino estromais mesenquimais migração ...
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JoVE Journal Developmental Biology
Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Otimização do Ensaio Wound zero para detectar mudanças na Murino estromais mesenquimais migração celular após a lesão por Extract fumo do cigarro Solúvel

Full Text
17,640 Views
08:40 min
December 3, 2015

DOI: 10.3791/53414-v

Nicholas Cormier*1, Alexander Yeo*1, Elizabeth Fiorentino1, Julia Paxson1

1Department of Biology,College of the Holy Cross

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

A capacidade de migrar é uma função chave de muitos tipos diferentes de células, incluindo células estromais mesenquimais (MSCs). No entanto, quantificar as alterações na capacidade migratória após os danos é um desafio. Este protocolo descreve um ensaio de migração facilmente adaptável que usa estatísticas rigorosas para quantificar as mudanças na capacidade migratória do MSC após danos.

O objetivo geral deste ensaio é detectar alterações na capacidade migratória das células estromais mesenquimais pulmonares após danos com extrato solúvel de fumaça de cigarro. Este método pode ser usado para responder a questões-chave no campo da biologia regenerativa pulmonar, incluindo como a capacidade migratória das células progenitoras pulmonares pode ser melhorada para ajudar no reparo pulmonar. A principal vantagem dessa técnica é que ela foi otimizada para fornecer melhores medições quantitativas para a migração celular, mantendo-se econômica de executar e fácil de personalizar.

Nesta demonstração, o ensaio de arranhões será usado para quantificar a capacidade migratória das células estromais mesenquimais do pulmão murino, ou MSCs. Após a exposição ao extrato solúvel de fumaça de cigarro, as MSCs são cultivadas em meio completo em placas de 60 milímetros e danificadas conforme descrito no texto do protocolo. Uma confluência apropriada é importante para o ensaio de arranhão porque garante que o software de imagem possa identificar corretamente os limites do arranhão.

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