Cortina Fluxo Coluna: Optimização da Eficiência e Sensibilidade

O objetivo geral deste método é melhorar a eficiência e a sensibilidade de uma separação por meio da otimização de uma coluna de fluxo de cortina. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo das ciências ambientais, forenses e em áreas que requerem análise de amostras vestigiais, onde é necessária uma técnica de separação eficiente e altamente sensível. A principal vantagem desta técnica é que ela aumenta a eficiência de uma separação e a sensibilidade da análise em comparação com os métodos convencionais de separação por HPLC.

Este método pode fornecer um meio de aumentar o poder de separação e, portanto, acelerar a capacidade, de maneira econômica e eficiente em termos de tempo. A coluna de fluxo de cortina é um novo conceito para os praticantes de HPLC, no entanto, seu uso não é complicado. Requer simplesmente a otimização das taxas de fluxo apropriadas.

Primeiro, prepare garrafas de água 100% ultrapura e 100 metanol para as fases móveis A e B do instrumento HPLC. Purgue as bombas de acordo com a necessidade do fabricante. Após a purga, desconecte a linha da bomba da válvula injetora do amostrador automático.

Anexe uma peça em T à linha desconectada. Para cada porta da peça T, conecte tubos de 0,13 milímetros de diâmetro interno e 15 centímetros de comprimento. Conecte um tubo da peça T à válvula injetora do amostrador automático.

Finalmente, ajuste a bomba para uma vazão de um mililitro por minuto. Tarar dois recipientes de coleta vazios e rotulá-los central e periférico. Por 60 segundos, use o recipiente com rótulo central para coletar a fase móvel de saída da linha proveniente do injetor.

Pesar novamente o recipiente central e determinar a massa da fase móvel coletada. Repita esse processo coletando o fluxo através da porta periférica com o recipiente marcado com periférico. Determine a porcentagem de fluxo, ou mililitros por minuto, de cada linha usando as equações indicadas.

A porta central deve ter cerca de 40% e a porta periférica cerca de 60%. Se os valores diferirem em mais de dois por cento, altere o comprimento ou diâmetro da tubulação para ajustar a taxa de fluxo. Em seguida, repita a coleta e as etapas de cálculo.

Em seguida, desligue o fluxo da bomba e conecte a linha do injetor à porta central da entrada da coluna. Conecte também a linha da peça T à porta periférica da entrada da coluna. Aumente lentamente a taxa de fluxo para um mililitro por minuto de fase 100% móvel B.To terminar de ajustar o sistema, flua 100% de metanol a um mililitro por minuto por 10 minutos para equilibrar a coluna.

Para começar, use tubos para conectar a porta de saída central ao detector UV-Vis. Conecte o mesmo tipo e comprimento de tubulação à porta de saída periférica da coluna CF. Em seguida, ajuste a bomba para uma vazão de um mililitro por minuto.

Tara dois recipientes de coleta vazios e rotule novamente um para coleta central e outro para periférico. Por 60 segundos, use o recipiente rotulado centralmente para coletar a fase móvel de saída do detector UV-Vis. Pesar novamente o recipiente de recolha para determinar a massa da solução iludida.

Repita esse processo com a porta de saída periférica e o recipiente de coleta rotulado. Agora determine a porcentagem de fluxo de cada linha, conforme executado anteriormente com o fluxo de entrada. A linha UV-Vis deve ser de 21 por cento e o fluxo de saída periférico deve ser de 79 por cento.

Se a taxa de fluxo se desviar significativamente, ajuste o tamanho da tubulação conectada à saída do detector UV-Vis para alterar a porcentagem de fluxo central. É importante que as relações de fluxo entre o central e o periférico na entrada e na saída da coluna sigam este protocolo para garantir o desempenho ideal da coluna de fluxo de cortina. As colunas de tecnologia de fluxo ativo foram desenvolvidas usando um design de frita especializado nas conexões de extremidade de coluna multiportas para superar a heterogeneidade do leito da coluna e melhorar o desempenho da separação.

Uma mistura de teste contendo fenetol, butilbenzeno e pentilbenzeno foi analisada em colunas convencionais de diâmetro interno de 4,6 e 2,1 milímetros e uma coluna de fluxo de cortina de diâmetro interno de 4,6 milímetros. A separação da mistura ilustra o desempenho aprimorado em termos de eficiência e sensibilidade de uma coluna de fluxo de cortina em relação às colunas padrão. O uso de uma coluna de fluxo de cortina aumentou o sinal para butilbenzeno, apesar do volume de pico reduzido.

Uma vez dominada, essa técnica pode ser configurada em menos de meia hora se for executada corretamente. A configuração da coluna de fluxo de cortina pode ser reutilizada várias vezes, mas as taxas de fluxo devem ser verificadas rotineiramente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de estar o mais próximo possível das taxas de fluxo prescritas.

A coluna de fluxo de cortina abriu o caminho para os pesquisadores na área de HPLC ultrapassarem os limites das colunas e instrumentos UPLC para obter uma análise de amostra mais rápida sem comprometer o desempenho da separação. Depois de assistir a este vídeo, você deve entender a importância das colunas de fluxo de cortina, pois elas podem fornecer melhor separação do que as colunas de HPLC convencionais.