Coleta de Leite no Rato Usando Capilar Tubos e Estimativa da gordura do leite por conteúdo crematócrito

O objetivo geral deste procedimento é descrever como coletar manualmente o leite de um rato em lactação para análise laboratorial da composição do leite. Este método pode ser usado para ajudar a responder a questões-chave no campo da saúde materno-infantil, como a dieta materna pode influenciar a composição do leite. A principal vantagem dessa técnica é que ela pode ser realizada por um único investigador sem nenhum equipamento especializado de vácuo ou sucção.

No.To começar, separe a mãe de sua prole por no mínimo cinco minutos antes da ordenha. Em seguida, colete todos os materiais necessários para o procedimento de ordenha, conforme mostrado aqui. Em seguida, coloque uma almofada de bancada absorvente em uma mesa cirúrgica aquecida ou use uma almofada térmica separada para evitar a perda de calor da barragem durante o procedimento de ordenha.

Em seguida, verifique o sistema anestésico para garantir que o sistema tenha oxigênio e flúor ISO suficientes antes do procedimento. Em seguida, coloque a máscara que será usada para a indução inicial da anestesia na máquina e coloque a máscara de manutenção nas proximidades. Abra o tanque de oxigênio e ajuste o fluxo para um litro por minuto.

Em seguida, ligue o fluxo de flúor isof e defina seu fluxo para 5%Uma vez anestesiado, mude a barragem para a máscara de manutenção. Confirme um nível suficiente de anestesia verificando a falta de reflexo pedal. Em seguida, coloque a barragem em decúbito dorsal na almofada absorvente da bancada.

Reduza o fluxo de flúor isof para dois a 3% Monitore continuamente a barragem durante todo o procedimento e ajuste o fluxo de flúor isof conforme necessário para evitar dor e depressão respiratória. Em seguida, use um lenço umedecido com álcool estéril ou uma almofada de limpeza para desinfetar um frasco de ocitocina usando uma seringa de um mililitro equipada com uma agulha de calibre 25, retire 0,1 mililitros de ocitocina. Em seguida, insira a agulha no quadrante inferior direito do abdômen da barragem com a agulha apontando para a cabeça em um ângulo de 15 a 30 graus, cerca de 0,5 centímetros de profundidade.

Puxe o êmbolo para trás para garantir a pressão negativa antes da injeção. Se nenhum fluido for aspirado, injete a ocitocina e descarte a agulha e a seringa imediatamente em um recipiente de risco biológico. Espere aproximadamente cinco a 15 minutos para que a ocitocina estimule o leite.

Desça durante esse período, escolha os tets dos quais o leite será coletado. Use aparadores para remover suavemente o pelo ao redor dos tets selecionados, pois o pelo pode causar dificuldade na coleta de amostras. Em seguida, limpe os tets com água morna.

Prepare pelo menos dois locais, pois mais de um local pode ser necessário para a coleta de leite. Assim que o leite descer, aperte suavemente a base do Tet para expelir manualmente o leite. Para a coleta, colete as gotículas de leite em um tubo capilar de 50 microlitros.

Quando estiver cheio, distribua o leite do tubo capilar em um tubo de microcentrífuga estéril tocando a extremidade do tubo que foi usado para puxar o leite do teto para o lado do tubo de microcentrífuga. Em seguida, use uma agulha de calibre 18 presa a uma seringa de um mililitro para soprar qualquer leite que não tenha sido puxado para o tubo. Repita a coleta de leite e transfira-a para o tubo de microcentrífuga até que leite suficiente tenha sido coletado.

Para a análise escolhida, tente limitar o tempo total que a barragem fica sob anestesia a menos de uma hora. Quando a ordenha estiver concluída, desligue o fluxo de flúor e oxigênio e remova a máscara da barragem. Continue a monitorar a barragem até que ela recupere a consciência suficiente para manter o esterno reclinado.

Se nenhuma análise adicional for necessária, espalhe o leite a 80 graus negativos. Para se preparar para a medição de CCR, carregue de 15 a 20 microlitros de leite em um tubo de microhematócrito diretamente do Tet. Em seguida, sele a extremidade do tubo com um selante de argila.

Coloque o tubo capilar no girador de hematócrito com o amassado de vedação apontando para fora e certifique-se de que a centrífuga esteja equilibrada. Em seguida, gire a amostra a 13.700 vezes G por dois minutos. Assim que a amostra terminar de girar, remova o tubo da centrífuga.

Observe a separação da amostra em uma camada de creme e uma camada transparente. Meça e registre o comprimento total do fluido no tubo e o comprimento da camada de gordura ou creme usando uma régua ou paquímetros. Use essas informações para calcular o CCR conforme descrito no protocolo de texto que acompanha o texto, a fim de determinar como a dieta durante a gravidez e lactação afeta a composição do leite.

Amostras de leite foram coletadas no desmame de mães de Worcester que são alimentadas com alto teor de proteína, alto teor de fibra prebiótica ou dieta controlada. O leite coletado de mães na dieta rica em fibras prebióticas apresentou o hematócrito C numericamente mais alto, concentração ruim e valor energético. No entanto, essas diferenças não foram estatisticamente significativas quando se trata de proteína.

No entanto, o leite coletado das mães na dieta hiperproteica apresentou a maior concentração de proteína. Embora, novamente, essa diferença não tenha sido estatisticamente significativa. Uma vez dominada, essa técnica pode ser realizada em menos de uma hora a partir do ponto inicial de anestesia da barragem, se feita corretamente.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de monitorar continuamente a barragem para garantir que a depressão da respiração não ocorra durante a anestesia após este procedimento. Outros métodos, como espectrometria de massa, podem ser usados para responder a perguntas adicionais, como a determinação da composição de oligossacarídeos do leite. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter um bom entendimento de como realizar a coleta manual de leite de um rato lactante.