Ortotópico Hind Limb Transplantation no mouse

O objetivo geral deste vídeo instrutivo é apresentar um modelo murino de transplante ortotópico de membros posteriores usando uma técnica de manguito sem sutura para anastomose supermicrovascular. Os modelos animais são fundamentais para a compreensão e tratamento de doenças humanas e abriram caminho para que o transplante reconstrutivo se tornasse uma realidade clínica nas últimas duas décadas. Este modelo específico pode ajudar a responder a questões-chave relacionadas ao caminho da fisiologia de uma resposta aloimune específica para aloenxertos compostos vascularizados.

A principal vantagem da técnica é que a técnica de manguito sem sutura reduz significativamente a complexidade e aumenta a taxa de sucesso desse procedimento supermicrovasular. Depois de confirmar o nível adequado de sedação por pinça do dedo do pé, raspe o membro posterior e a virilha do animal doador. Em seguida, desinfete a pele com iodo de povidona a 10% e coloque o mouse sob um microscópio de dissecação.

Usando uma tesoura, comece a colheita do membro doador com uma incisão na pele da virilha proximal à área do meio da coxa. Circunstancialmente conectando a incisão para demarcar o membro posterior do resto do resto do corpo. Identifique e disseque a artéria, veia e nervo femoral.

Em seguida, use fórceps e microtesouras para separar as três estruturas. A prevenção de microtraumas na parede do vaso por meio de uma técnica sem toque é essencial para garantir o sucesso do procedimento. Uma vez que o pedículo vascular tenha sido dissecado, use a microtesoura para dividir os vasos no ligamento inguinal.

Continue a divisão dos grupos musculares ventrais e dorsais individuais aproximadamente no meio da coxa para separar o enxerto do animal doador. Em seguida, corte o corte do fêmur no meio da diáfise femoral. Usando uma seringa equipada com uma agulha de calibre 33, lave o membro colhido com dois ml de solução salina heparinizada de quatro graus Celsius.

Em seguida, coloque manguitos individuais de poliimida na veia e artéria femoral. E armazene o enxerto em gaze de algodão úmida em uma placa de Petri a quatro graus Celsius até a inserção. A montagem da pesis nos manguitos de poliimida é a etapa mais crítica do procedimento.

Como a notação maliciosa pode prejudicar o fluxo sanguíneo e a pressão inadequada pode expor alguns tecidos antibióticos, aumentando a probabilidade de formação de trombose. Para remover o membro posterior receptor, injete 0,3 ML de solução salina quente por via intraperitoneal. Faça uma incisão circunferencial ao redor do membro posterior e identifique e disseque a artéria, a veia e o nervo femoral, conforme demonstrado.

Uma vez que o pedículo vascular tenha sido dissecado, prenda os vasos femorais no ligamento inguinal. E corte os vasos distalmente na artéria epigástrica superficial. Continue a dividir os grupos musculares ventrais e dorsais individuais aproximadamente no meio da coxa para separar o membro posterior nativo do animal receptor.

Em seguida, faça o transecto do fêmur no meio da diáfise femoral. Em seguida, usando uma agulha espinhal de calibre 20 como haste intramedular e alinhe os ossos do fêmur do receptor e o enxerto na posição nativa do membro posterior. Conecte os ossos do fêmur doador e receptor.

Use material de sutura absorvível para coaptar os grupos musculares ventral e dorsal. Realizar esse alinhamento com precisão e rapidez evita a perda prolongada de sangue da cavidade óssea. Para conectar os vasos femorais, puxe o lado receptor do vaso sobre os manguitos de poliimida.

E use uma sutura de náilon 10-0 para fixar o vaso receptor no manguito com um laço circunferencial. Quando o vaso estiver estabilizado, solte os grampos. E verifique visualmente se os manguitos não estão girados incorretamente.

Verifique visualmente a homeostase e use o eletrocautério para interromper qualquer fonte de sangramento. Em seguida, feche a pele com suturas de náilon não absorvíveis. E monitore o animal até que ele esteja totalmente recuperado.

A realização de alotransplante composto vascularizado em um modelo de camundongo usando esta técnica de manguito sem sutura facilita a obtenção de excelente e longo prazo de enxerto e sobrevivência animal. Além disso, esta técnica representa um método confiável para obter resultados reproduzíveis de rejeição gradual do aloenxerto e um modelo de alotransplante composto vascularizado, conforme documentado pelas imagens. De fato, a análise histológica de tecidos obtidos de animais submetidos à rejeição ressalta ainda mais a dinâmica reprodutível da rejeição do aloenxerto neste modelo murino.

Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em 90 a 120 minutos, se for executada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de prestar a máxima atenção ao manuseio do tecido e evitar qualquer tipo de sangramento. Após seu desenvolvimento, essa técnica pode abrir caminho para pesquisadores na área de transplante reconstrutivo.

Explorar questões mecanicistas básicas relacionadas à aloimunidade de aloenxertos compostos vascularizados. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar todas as etapas críticas de um transplante ortotópico de membro posterior no camundongo.