Name: Uma abordagem automatizada-Semi Preparando Antibody Cocktails para Análise imunofenotípica de Sangue Periférico Humano (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Aprenda a preparar cocktails de anticorpos semi-automatizados para imunofenotipagem de sangue periférico humano. Este método aumenta a precisão da pipetagem e reduz erros manuais, melhorando a confiabilidade dos resultados imunológicos.

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Agradecemos a Hannah Puzas pela ajuda com o design e configuração do sistema e a Kevin Khovananth pelo conselho técnico. O financiamento para este trabalho foi fornecido pelas Fundações Hearst e pela Fundação Médica Providence Portland.

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YK, ILG, TLM, WLM, DPH e KSB: Não há concorrentes interesses financeiros. ANT é um funcionário da Beckman Coulter, Inc. publicação deste artigo vídeo é patrocinado pela Beckman Coulter, Inc.

Imunofenotipagem de sangue periférico é criticamente importante para a obtenção de insights sobre as respostas individuais à imunoterapia. O desafio reside na normalização ensaio para controlar a variabilidade 1,14 experimento-a-experiência. Uma fonte principal de variabilidade reside na manipulação humana de amostras. Portanto, é concebível que a automatização completa ou parcial do processamento da amostra irá facilitar uma redução dramática na variabilidade 1,14 experimento-a-experimento. Neste protocolo, relatamos o nosso bem-sucedido esforço para minimizar a variabilidade do ensaio através da introdução de um manipulador de líquidos automatizado equipado com leitor de código de barras 2D para a coloração da amostra total imunofenotipagem sangue. No design, o nosso método é versátil e pode monitorar outros subconjuntos imunes, acrescentando adicionais &quot;Cocktails base&quot; para defini-los. Tais subgrupos incluem células T auxiliares, células T reguladoras, células B, células NK, células dendríticas e monócitos (manuscrito empreparação) 18. Nós adaptamos painéis de anticorpos recomendados pelo consórcio através da introdução de marcadores adicionais 1. populações celulares foram identificados utilizando &quot;cocktail Base&quot; conjugados com fluorocromos com emissões mínimas para o brilhante violeta 421 (BV421), ficoeritrina (PE), e aloficocianina (APC) detectores, como queríamos para reservar estes canais para a detecção de antigénios induzíveis. Esta característica não só garante a mais alta sensibilidade para monitorar o status de ativação de células imunes, mas também permite acomodação flexível de novos marcadores de ativação, como estes três fluorocromos são mais frequentemente conjugada com anticorpos contra marcadores induzíveis. Por isso, o nosso método não só é adequado para a preparação de cocktail para toda a imunofenotipagem de sangue, mas também é útil para a coloração de outras amostras, incluindo células mononucleares de sangue periférico e as células recuperadas a partir de tecidos de desagregação (por exemplo, tumor). introdução bem sucedidadução do nosso método requer uma atenção especial aos passos na preparação laboratorial e de programação e execução do método. Preparação dos tubos de código de barras 2D inclui rotulagem com rótulos legíveis por humanos e transferência dos anticorpos aos tubos designados. Para evitar a introdução de erros, recomendamos fazer isso com duas pessoas. Sempre mudando planilhas, os investigadores devem verificar se o método funciona corretamente. Escolher métodos de pipetagem adequadas durante a programação garante a transferência líquida de sucesso. LLS permite pipetagem sem receber detritos precipitou a partir do fundo de tubos de anticorpos, para o qual usamos tanto P50 ou P200 dicas condutores. LLS pode não ser uma boa opção para dicas P1000 como LLS é mais sensível com dicas P1000 e às vezes falsamente desencadeada pela presença de bolhas. Heights em definição material de laboratório deve ser ajustada para cada instrumento de transferência de líquido como sub-óptima poderia ocorrer, por exemplo, se não houver espaço suficiente entre a borda de dicase a parte inferior de tubos. Como mostrado na Figura 12, se o &quot;cocktail Base&quot; e / ou &quot;cocktail Activação&quot; não são bem agitadas, pode resultar em sub-óptima de coloração. Nós pensamos sobre o uso de reagentes liofilizados para a coloração de células como uma abordagem alternativa para reduzir a variabilidade relacionada com o reagente de distribuição 19. No entanto, os conjugados de polímero de corantes violeta brilhante são conhecidos por interagir uns com os outros que provoquem sinais não específicos. Como tal, a adição de mais do que dois conjugados de polímero (por exemplo, BV421 e BV650 etc.) em reagentes liof ilizados podem causar sinalização não-específica (por exemplo, aumento do sinal de fundo no BV650 BV421 + população) 20. Além disso, reagentes liofilizados carecem de flexibilidade para a inclusão de nova coloração. Eles são geralmente mais caros e exigem uma ordem de maioria. Por essas razões, optamos por utilizar o manipulador de líquidos automatizado equipado com tubos de código de barras 2D. Embora tflocos tempo para configurar e implica um investimento inicial para comprar o instrumento, no longo prazo, tais fatores serão compensadas pelo aumento da produtividade e reprodutibilidade dos ensaios. Na verdade, alguns grupos previamente relatado a integração bem sucedida do manipulador de líquidos automatizado em seu fluxo de trabalho de imunofenotipagem ou aplicações semelhantes 21,22. soluções automatizadas para análise de citometria de fluxo também estão disponíveis a partir de fontes comerciais (FACS SPA III, Cocktail Automated Preparação de estação de trabalho, e FlowStainer). Isto indica ainda existe uma grande necessidade de uma preparação de cocktail automatizado para imunofenotipagem. Depois de dominar esta técnica, nós prevemos que o desenvolvimento de totalmente automatizado imunofenotipagem sangue total irá reduzir ainda mais variabilidade experimento-a-experiência e pode fazer toda a imunofenotipagem do sangue viável, mesmo em um ensaio clínico multicêntrico ajuste 23. Nós já começaram usando uma lise foih assistente para automatizar os passos de lise e de lavagem. Nós também prevêem que a determinação automatizada do volume de anticorpo nos tubos de código de barras 2D e o acompanhamento de distribuição do reagente melhorará grandemente inventário de anticorpos e o controlo de qualidade sobre o nosso método, respectivamente.

Imunofenotipagem do sangue periférico humano determina alterações quantitativas e qualitativas em subconjuntos de células imunitárias 1. Ele fornece insights sobre os mecanismos de ação e resistência, descoberta ajudas de biomarcadores preditivos, e facilita o desenvolvimento de imunoterapias combinação. Portanto, a validação e padronização de imunofenotipagem é uma área de grande interesse para pesquisadores acadêmicos, laboratórios clínicos, e indústrias. Embora imunofenotipagem do sangue periférico por métodos de citometria de fluxo é usado atualmente para o manejo clínico de doenças malignas hematológicas 2,3 e vírus da imunodeficiência humana (VIH) 4,5, imunofenotipagem confiável de sangue periférico para as demandas de imunoterapia considerações específicas na validação e padronização porque requer mais extensa cobertura sobre subconjuntos de células imunes e ativação de receptores inibitórios / 1,6-8. succeimunofenotipagem ssful exige padronização cuidadosa para minimizar a variabilidade experimento-a-experimento relacionado à configuração do instrumento e do processo de coloração de células 9,10. Enquanto padronização das definições do aparelho para citometria de fluxo está bem estabelecido para resolver o ex preocupação 9,11,12, não se sabe como para minimizar a variabilidade relacionada com coloração celular sem restringir a cobertura de subconjuntos de células imunes e seu estado de ativação. À medida que o número de antigénios a serem detectados aumenta, o mesmo acontece com a oportunidade de erro e a variabilidade devido à distribuição do reagente sub-óptima e a contaminação cruzada. Métodos de análise phenoptypic de sangue total anticoagulado foram estabelecidas na década de 1980 atrasado para utilização em ensaios de laboratório clínico. Estes mesmos métodos servir as necessidades do laboratório de pesquisa para preparação de amostras. Importante, as misturas de anticorpos utilizados nos laboratórios clínicos são tipicamente menos complexo e Available pré-titulado e pré-misturado a partir do fabricante. Apenas uma única transferência do cocktail de anticorpos pré-misturado é necessária. No contexto de investigação, misturas de anticorpos de anticorpos 10-16 são típicos. Cada cocktail deve ser validado para a estabilidade pelo laboratório ou preparada antes de cada ensaio. Preparando vários cocktails de anticorpos para uma amostra possam implicar a pipetagem de 50-80 anticorpos individuais, uma tarefa que é tediosa e propensa a erros. Automatização de preparação de cocktail tem várias vantagens sobre a preparação cocktail manual de como menos erros, maior precisão de pipetagem, e possivelmente até mesmo diminuiu o desperdício de reagente. Aqui, nós relatamos a introdução bem sucedida de um manipulador de líquidos automatizado equipado com um bidimensional (2D) leitor de código de barras para o processo de coloração de células da imunofenotipagem para minimizar a variabilidade relacionada com a preparação da amostra.

<table><tbody><tr><td>BD LSRFortessa</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Citômetro de fluxo</td></tr><tr><td>NXp Span-8 Estação de trabalho de automação de laboratório&nbsp;</td>Estação de Trabalho de Automação de Laboratório <td>Beckman Coulter</td><td>A31839</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Inserto, Tubo, 11 mm, Branco, para Tubos Microfuge de 1,5 ml (caixa de 25)</td><td>Acessório 373696 Beckman Coulter</td><td></td><td>para Suporte de Tubo de 24 Posições para acomodar tubos de microfuge.&nbsp;</td></tr><tr><td>Kit LLS</td><td>Beckman Coulter</td><td>719262</td><td>Anexe a parte inferior do deck na Estação de Trabalho de Automação Laboratorial para permitir a detecção de nível de líquido</td></tr><tr><td>Rack de tubos de 24 posições</td><td>Beckman Coulter</td><td>373661</td><td>Rack de tubos para segurar tubos de microfífugas para coquetéis de anticorpos ou sangue</td></tr><tr><td>SACOS DE AUTOCLAVE BIOHAZARD 12 x 24 POLEGADAS VERMELHO</td><td>LabMart</td><td>M111416</td><td>Sacos de autoclave descartáveis para a Estação de Trabalho de Automação Laboratorial</td></tr><tr><td>Leitor de Código de Barras 2D de Alta Velocidade VisionMate</td><td>Thermo Scientific</td><td>AB-1850</td><td>Leitor de código de barras 2D</td></tr><tr><td>Capsulador/Decapador de Tampa de Rosca Manual de 8 Canais</td><td>Thermo Scientific</td><td>4105MAT</td><td>Para decapagem e tampagem de tubos de código de barras 2D&nbsp;</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-681-335</td><td>Para fazer coquetel ou fornecer amostras de sangue para a Estação de Trabalho de Automação Laboratorial</td></tr><tr><td>CoolRack XT CFT24</td><td>biocisão</td><td>BCS-534</td><td>Para segurar tubos de amostra.</td></tr><tr><td>Tubos de Âmbar Matrix ScrewTop de 1,0 ml em Racks de Trava</td><td>Thermo Scientific</td><td>3741AMB</td><td>Tubos de código de barras 2D para armazenar anticorpos fluorescentes cojugados por corante</td></tr><tr><td>Biomek Span-8 P1000 Pontas, Condutivas, Pré-estéreis com Barreira, 1,025 &micro; l</td><td>Beckman Coulter</td><td>987925</td><td>Dicas para Estação de Trabalho de Automação Laboratorial</td></tr><tr><td>Biomek Span-8 P50 Pontas, Condutivas, Pré-estéreis com Barreira, 50 &micro; l (Caixa de 10 racks)</td><td>Beckman Coulter</td><td>B01091</td><td>Dicas para Estação de Trabalho de Automação de Laboratório&nbsp;</td></tr><tr><td>Biomek Span-8 P250 Pontas, Condutivas, Pré-estéreis com Barreira (Caixa de 10 racks)</td> <td>Beckman Coulter</td><td>394627</td><td>Pontas para Estação de Trabalho de Automação Laboratorial&nbsp;</td></tr><tr><td>Solução de lise BD FACS 10x concentrado</td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>lise de hemácias</td></tr><tr><td>Falcon Tubos de poliestireno de fundo redondo</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-5</td><td>Tubos de amostra</td></tr><tr><td>Anti-CD45 FITC</td><td>BD Biosciences</td><td>347463</td><td>Effector Painel de células T (base)</td></tr><tr><td>Anti-CD3 Alexa Fluor 700</td><td>eBioscience</td><td>56-0038-42</td><td>Painel de células T efetor (base)</td></tr><tr><td>Anti-CD4 PerCPCy5.5</td><td>BD Biosciences</td><td>341654</td><td>Painel de células T efetoras (base)Painel de células T efetor</td></tr> <tr><td>564156</td> BD <td>Biosciences</td><td></td><td>(base)Painel de células T efetor</td></tr> <tr><td>BDRab BV786</td><td>BD Biosciences</td><td>563825</td><td>efetor (base)Painel de células T efetor</td></tr> <tr><td>APC-H7 BD Biosciences 560179 anti-CD8</td><td></td><td></td><td>(base)</td></tr><tr><td>Anti-CCR7 PE-CF594</td><td>BD Biosciences</td><td>Painel</td> de <td>células T efetoras 562381 (base)</td></tr><tr><td>Painel de células T efetoras 337167 Anti-CD45RA PE-Cy7</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>(base)Painel de células T efetoras</td></tr> <tr><td>562804</td> <td>anti-HLA-DR BV421</td><td>BD Biosciences</td><td>(ativação)Painel de células T efetor</td></tr> <tr><td>557802 anti-CD278 (ICOS) PE</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>(ativação)</td></tr><tr><td>Anti-CD38 APC</td><td>BD Biosciences</td><td>340439</td><td>Painel de células T efetoras (ativação)</td></tr><tr><td>Anti-CD279 (PD1) BV421</td><td>BD Biosciences</td><td>562516</td><td>Painel de células T efetoras (ativação)</td></tr><tr><td>Anti-CD357 (GITR) PE</td><td>eBioscience</td><td>12-5875-42</td><td>Painel de células T efetoras (ativação)</td></tr><tr><td>Anti-CD137 (41BB) APC</td><td>BD Biosciences</td><td>550890</td><td>Painel de células T efetoras (ativação)</td></tr><tr><td>Anti-CD69 BV421</td><td>BD Biosciences</td><td>562884</td><td>Painel de células T efetor (ativação)</td></tr> <tr><td>Anti-CD314 (NKG2D) PE</td><td>BD Biosciences</td><td>557940</td><td>Painel de células T efetor (ativação)</td></tr> <tr><td>Anti-CD134 (OX40) APC</td><td>BioLegend</td><td>350008</td><td>painel de células T efetor (ativação)</td></tr> <tr><td>Tubos de coleta de sangue de plástico BD Vacutainer com heparina sódica: Rolha convencional</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-689-6</td><td>para coleta de sangue</td></tr><tr><td>Albumina, soro bovino, fração V, RIA e 126593 de</td><td>EMD Millipore</td> da categoria de ELISA <td></td><td>para o amortecedor de lavagem</td></tr><tr><td>do fluxo Azida de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8032</td><td>Para o amortecedor da lavagem do fluxo</td></tr><tr><td>Heparina, sal de sódio</td><td>Affimetrix</td><td>16920</td><td>Para o amortecedor da lavagem do fluxo</td></tr><tr><td>Hank' s Solução Salinal Balanceada (HBSS), 1x, com Cálcio, Magnésio, sem Vermelho de Fenol</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>SH30588.02</td><td>Para tampão de lavagem de fluxo</td></tr></tbody></table>

uma abordagem automatizada-semi preparando antibody cocktails para análise imunofenotípica de sangue periférico humano

A Semi-automated Approach to Preparing Antibody Cocktails for Immunophenotypic Analysis of Human Peripheral Blood

Imunofenotipagem do sangue periférico por fluxo determina citometria de mudanças no status de leucócitos periféricos frequência e activação durante a doença e tratamento. Tem o potencial para prever a eficácia terapêutica e identificar novos alvos terapêuticos. coloração de sangue total utiliza sangue não manipulada, o que minimiza artefactos que podem ocorrer durante a preparação da amostra. No entanto, a coloração sangue total deve também ser feito sobre o sangue colhido de fresco para garantir a integridade da amostra. Além disso, é melhor se preparar cocktails de anticorpos no mesmo dia, para evitar potenciais instabilidade do tandem, corantes e evitar a interação reagente entre corantes violeta brilhante. Portanto, a coloração de sangue total requer cuidadosa padronização para controlar a variabilidade intra e inter-experimental. Aqui, nós relatamos a implantação de um manipulador de líquidos automatizado equipado com um bidimensional (2D) leitor de código de barras em um processo padrão de fazer Antibodcocktails y para citometria de fluxo. Os anticorpos foram transferidos para tubos de código de barras 2D arranjados num formato de 96 poços e os seus conteúdos compilados numa base de dados. O manipulador de líquido pode então localizar os frascos de anticorpos fonte referenciando nomes de anticorpos dentro do banco de dados. O nosso método eliminado coordenação entediante para o posicionamento dos tubos de anticorpos de origem. Forneceu versatilidade permitindo que o usuário altere facilmente qualquer número de detalhes no processo de distribuição de anticorpo, tal como um anticorpo específico para usar, volume e destino, modificando o banco de dados sem reescrever o script no método de software para cada ensaio. A prova de conceito experimento alcançado notável precisão do ensaio inter e intra, demonstrado pela preparação réplica de um 11-cor, fluxo de 17 anticorpo citometria de ensaio. Estas metodologias maior rendimento global de citometria de fluxo ensaios e facilitou a preparação diária dos cocktails de anticorpos complexos necessários para a pheno detalhadacaracterização typic de sangue periférico anticoagulado de colheita recente.

A imunofenotipagem de sangue total é indispensável para monitorar o sistema imunológico humano. No entanto, o número de reagentes necessários e a instabilidade de fluorocromos específicos em coquetéis pré-misturados exigem a preparação diária do reagente. Aqui mostramos que a preparação semiautomatizada do coquetel de anticorpos de coloração ajuda a estabelecer uma imunofenotipagem confiável, minimizando a variabilidade na distribuição de reagentes.

Uma abordagem automatizada-Semi Preparando Antibody Cocktails para Análise imunofenotípica de Sangue Periférico Humano

Immunophenotyping of peripheral blood by flow cytometry determines changes in the frequency and activation status of peripheral leukocytes during disease ...

O objetivo geral deste protocolo de preparação de coquetel de anticorpos de coloração semiautomatizado é estabelecer um método de imunofenotipagem confiável para minimizar a variabilidade da dispensação de reagentes. Este método pode ajudar a abordar questões-chave no campo do imunomonitoramento, como: como controlar a variabilidade intra e interexperimental da dispensação de reagentes. A principal vantagem dessa técnica é que a automação da preparação do coquetel aumenta a precisão da pipetagem, reduzindo os erros da preparação manual do coquetel. Demonstrando o procedimento estará Iliana Gonzalez, uma técnica do meu laboratório. Antes de iniciar o procedimento, aplique etiquetas legíveis por humanos em tubos de código de barras 2D. Em seguida, transfira todo o conteúdo de cada frasco de anticorpo para os tubos de código de barras 2D correspondentes apropriados, tomando cuidado para evitar bolhas. Quando os anticorpos forem transferidos, use o leitor de código de barras 2D para ler os tubos. Em seguida, crie uma planilha contendo os nomes dos anticorpos e as leituras do código de barras e salve a planilha como um arquivo de valores separados por vírgula. Agora, inicie o leitor de código de barras 2D e, em seguida, o manipulador automatizado de líquidos. Para preparar as seringas do manipulador de líquidos automatizado, em Instrumento, selecione Iniciar todos os eixos.Confirme se nenhuma das seringas contém bolhas de ar visíveis. Quando as seringas estiverem preparadas, abra os métodos para fazer o coquetel base e o coquetel de ativação no software automatizado de manipulação de líquidos. Em seguida, coloque os tubos de microfífugos nos tubos de microfífugos de rack de tubos pequenos para o coquetel base e o coquetel de ativação, de acordo com o número de coquetéis base e de ativação a serem feitos. Use o esquema de configuração do instrumento como referência para colocar os racks de tubos no deck. Coloque o reservatório de buffer na seção apropriada do deck e use um decapador de tampa de rosca de oito canais para decapar os tubos de código de barras 2D contendo os anticorpos. Para evitar contaminação cruzada, coloque cada tampa em uma bandeja de suporte à medida que são removidas, para manter as tampas na ordem apropriada. Em seguida, coloque as pontas do filtro P50 LLS, as pontas do filtro P200 LLS, as pontas P1000 e o rack de tubos Matrix 1mL no deck em suas posições apropriadas. Clique no ícone Iniciar para iniciar o método. Quando a janela pop-up aparecer, confirme se todos os itens no deck correspondem ao esquema de configuração do instrumento para o método. Se tudo estiver na posição, clique em OK. O manipulador de líquidos automatizado transferirá o tampão do reservatório para os tubos de microcentrífugas. O rack de tubos Matrix 1mL passará para o leitor de código de barras 2D e os códigos de barras serão lidos. Quando todos os códigos de barras tiverem sido lidos, clique em OK na janela pop-up para iniciar a transferência de anticorpos. Após a conclusão da transferência, use o decapador de tampa de rosca de oito canais para retampar os tubos de código de barras 2D e retorne os tubos para 4

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo descreve uma técnica de imunoensaio usando esferas magnéticas fluorescentes ou microesferas acopladas a diferentes antígenos para detectar simultaneamente vários isotipos de anticorpos em uma amostra de soro. O ensaio é útil para entender a soroconversão durante uma infecção ou pós-vacinação.

Ensaio de Imunoesferas Multianalita: Uma Técnica de Imunoensaio Baseada em Fluxo para Detecção Simultânea de Vários Subtipos de Anticorpos em Amostra de Soro Humano

Este vídeo demonstra o uso do ensaio ELISpot para avaliar a função das células B secretoras de anticorpos, ASCs. Os anticorpos secretados pelas ASCs interagem com os fragmentos de anticorpos policlonais ligados à membrana, que são detectados pelos anticorpos IgG ou IgM conjugados com enzimas. A mancha colorida produzida em cada poço indica a presença do isotipo do anticorpo específico, que se correlaciona com a atividade secretora das células B.

Avaliação funcional de células B secretoras de anticorpos usando o ensaio ELISpot

Este vídeo demonstra uma técnica baseada em citometria de fluxo usando dois fluorocromos para identificar células T CD4+ e CD8+, células T γδ, células B, células natural killer (NK) e monócitos em células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs). Ao incubar as células com anticorpos conjugados com fluorocromo contra os marcadores de superfície, os subconjuntos de células são identificados usando uma estratégia ideal de controle citométrico de fluxo.

Um ensaio de citometria de fluxo para identificar subconjuntos de células imunes em células mononucleares do sangue periférico

Aqui descrevemos um protocolo para o isolamento de subconjuntos de precursor células B do sangue do cordão umbilical. A quantidade e qualidade suficientes de ácidos nucleicos podem ser extraídos a partir das células e usadas em ensaios subsequentes utilizando DNA ou RNA.

Isolamento de precursor de células B subconjuntos de Sangue do Cordão Umbilical

O sangue periférico humano é comumente usado para a avaliação da resposta imune humoral. Aqui, são descritos os métodos para isolar células B humanas do sangue periférico, diferenciar células B humanas em células B secretoras de anticorpos (Ab) (ASCs) em cultura e enumerar o total de IgM- e IgG-ASCs por meio de um ensaio ELISpot.

O isolamento, a diferenciação e a quantificação de anticorpo humano secretoras de células B de sangue: ELISpot como uma leitura funcional de Imunidade Humoral

Um método simples, mas eficaz, que emprega nanopartículas magnéticas para detectar e enriquecer as células B antígeno-reativa para análise funcional e fenotípica é descrito.

Detecção e enriquecimento da Rare células B antígeno-específica para a análise do fenótipo e função

Nós descrevemos um método para a produção de anticorpos humanos específicos para um antígeno de interesse, a partir de raras células B que circulam no sangue humano. Geração destes anticorpos naturais é rápida e eficiente, e os anticorpos obtidos podem discriminar entre antígenos altamente relacionados.

Geração dos anticorpos monoclonais humanos discriminativa de rara B antígeno-específicas células circulantes no sangue

Aqui nós descrevemos uma abordagem proteômica de célula única para avaliar imunológico fenotípico e funcional (indução de citocinas intracelulares) alterações nas amostras de sangue periférico, analisadas através de citometria de massa.

Análise de célula única do imunofenótipo e produção de citocinas no sangue periférico através de citometria de massa

Aqui, descrevemos os protocolos para a análise e visualização da estrutura e constituição de repertórios de anticorpo toda. Isso envolve a aquisição da vastas sequências de RNA de anticorpo usando sequenciamento de próxima geração.

Identificação de Mouse e repertórios de anticorpo humano por sequenciamento de próxima geração

O método de BSelex para identificar e recuperar anticorpos antígeno-específicos individuais das pilhas mononucleares do sangue periférico humano combina a citometria do fluxo com o único PCR da pilha e a clonagem.

Método de triagem de célula única para a seleção e recuperação de anticorpos com especificidades desejadas de populações de células B de memória humana enriquecida

Aprenda a preparar cocktails de anticorpos semi-automatizados para imunofenotipagem de sangue periférico humano. Este método aumenta a precisão da pipetagem e reduz erros manuais, melhorando a confiabilidade dos resultados imunológicos.

Uma abordagem automatizada-Semi Preparando Antibody Cocktails para Análise imunofenotípica de Sangue Periférico Humano

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