Name: A ressecção apical mouse modelo para estudar precoce Regeneração Mammalian Coração (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: Aprenda a técnica de ressecção apical em camundongos neonatos para estudar a regeneração cardíaca precoce. Este método simples e direto auxilia pesquisadores a investigar os mecanismos celulares e moleculares da reparação cardíaca.

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Os autores agradecem Drs. James Hawkins, Zu-Xi Yu Xuan Qu e do National Heart, Lung, and Blood Institute (NHLBI) por sua assistência com a cirurgia do mouse e preparação e coloração de secções de parafina. Os autores são gratos ao Conselho Editorial NIH Fellows de assistência editorial.

Todas as experiências do rato foram aprovados pelo Animal Care e Use Program no National Institutes of Health (NIH) com número de protocolo H0083R3. O NHLBI IACUC aprovou o protocolo sem analgésicos. 1. Hipotermia Anestesia em Neonatal Mice <ol><li> Esterilizar esponjas e equipamento cirúrgico em autoclave antes da cirurgia. Preparar todos os materiais cirúrgicos e ligar um esterilizador quente talão 15-20 minutos de antecedência para chegar a 240 ° C a 270 ° C. </li><li> Transferir todos os camundongos C57BL / 6 filhotes (idade P1) de sua mãe que amamenta a uma gaiola limpa rato com roupas de cama e materiais de nidificação. Uma vez que as crias são levadas para uma sala de cirurgia, realizar a cirurgia apical rapidamente para minimizar o seu tempo gasto separado da matriz e para reduzir o risco de cannibalization materna. </li><li> Coloque esponjas em uma cama de gelo e, em seguida, colocar um filhote de cachorro na esponja para ~ 3 min para conseguir anestesia hipotermia. Confirme anestesia observando apnea e acinesia e beliscar um pé de trás. Verifique o status de recém-nascidos com freqüência porque muito pouco tempo não vai fazer o akinetic filhote de cachorro e apnéia, e uma duração excessiva da anestesia pode diminuir a taxa de sobrevivência 12. </li></ol> 2. Thoracotomy <ol><li> Transferir o filhote de cachorro da cama de gelo para uma área de bancada cirúrgica e usar a fita para imobilizar os braços, pernas e cauda em uma posição supina. </li><li> Desinfectar o peito usando betadine e gentilmente limpe-o com um pano com álcool prep 70%. </li><li> Faça uma incisão transversa da pele ao longo da área intercostal diante da cavidade torácica através de um Vannas Primavera Scissor, e, em seguida, sem corte dissecar os músculos intercostais adiante para facilitar o acesso ao coração. NOTA: As taxas de sobrevivência melhoraram quando a perda de sangue é minimizada durante o processo cirúrgico. </li></ol> 3. A amputação cirúrgica do Ventricular Apex Coração <ol><li> Ao lado, aplicar suavemente a pressão sobre o abdômen para exteriorizar ovértice do coração. Absorver o sangue ao redor da área cirúrgica com aplicadores com ponta de algodão estéreis para visualização clara. Para recém-nascidos de controle operados por simulação, prossiga diretamente para a Etapa 4 (Sutura e Recuperação de Mice). </li><li> Sob uma lente de aumento e usando uma tesoura iridectomia, realizar suavemente ressecção fragmentada do ventrículo esquerdo (VE), até que a câmara de LV é exposto. Tenha cuidado para minimizar as porções ressecados da LV. Aproximadamente 15% a ressecção é necessária para alcançar uma exposição óptima da câmara LV. </li><li> Assegure-se que o coração retorna para a cavidade torácica, uma vez que a câmara LV é exposta. </li></ol> 4. Sutura e Recuperação de Mice <ol><li> Suturar as costelas e músculos juntos para selar a cavidade torácica utilizando suturas estéreis prolina 6-0, e em seguida, feche cuidadosamente o local da incisão da pele usando cola de pele. </li><li> Aqueça o recém-nascido sob um calor luminária para ~ 3 min de recuperação, e, em seguida, limpar o sangue e vestígios de cola usando uma compressa embebida em álcool 70% prep before reintroduzir-lo aos seus irmãos. Tente completar todo o procedimento cirúrgico dentro de 10 min porque minimizando o tempo gasto separada da mãe melhora a sobrevivência das crias após a ressecção apical. </li><li> A seguir a cada cirurgia, colocar os instrumentos cirúrgicos em contacto com os grânulos do esterilizador talão quente para aproximadamente 20 segundos para a esterilização completa. Permitir que os instrumentos cirúrgicos arrefecer até à TA antes de cada cirurgia. </li><li> Depois de completar cirurgias para todos os filhotes em uma maca, misture os filhotes com roupa de cama e excrementos da mãe antes de devolvê-los ao ninho da mãe. NOTA: Geralmente, ICR / CD-1 ratos são mães adotivas melhor do que C57BL / 6, mas mesmo entre as mães de enfermagem do mesmo fundo genético, os instintos de fomento variar. Se a mudança de uma mãe que amamenta é necessário para reduzir a mortalidade materna por canibalização, retire os filhotes P0 a uma mãe de cuidados e, em seguida, executar a ressecção apical em P1. Apenas a executar qualquer operação simulada ou a r apicalesection em uma ninhada de filhotes, porque a mistura farsa e filhotes cirúrgicos poderia diminuir as taxas de sobrevivência do grupo cirúrgico de filhotes 6. </li></ol> 5. Análise Pós-Cirúrgica <ol><li> Um dia após a cirurgia, monitorar os filhotes, garantir que não há nenhuma diferença entre os grupos sham e cirúrgicos, e contar o número de filhotes para medir a taxa de sobrevivência. Se as cirurgias são realizadas adequadamente, as taxas de sobrevivência deve ser semelhante e maior do que 60% em ambos os grupos sham e cirúrgicos. </li><li> Isolamento do coração e fixação. <ol><li> Euthanize os filhotes nos dias 1 e 2 pós-cirurgia via decapitação e dia 21 pós-cirurgia por CO2 com uma garantia de morte por deslocamento cervical, em seguida, limpar o peito usando uma preparação de álcool 70%. </li><li> Faça uma incisão na pele da linha média e músculos do peito e, em seguida, abrir o peito. </li><li> Extirpar os corações inteiros a partir da cavidade torácica e corrigir todo o coração de cada amostra em 5 ml de paraformaldeído a 4% O / N à temperatura ambiente. </li></ol></li><li> No dia seguinte, a transferência das amostras para etanol a 70%. As amostras podem ser armazenadas até uma semana antes da inclusão em parafina. </li><li> Fatia cortes de parafina 5 mícrons de espessura através de todo o ventrículo e executar hematoxilina padrão e eosina (H &amp; E) e tricromo de Masson para examinar a resposta regenerativa 5, 7. Especificamente, H &amp; E mancha é usado para examinar substituição muscular e tricrômico de Masson é utilizada para examinar as respostas fibróticas 5. </li><li> Selecione a área de interesse e criar pelo menos três focos por amostra manualmente usando um scanner de slides. Imagem e analisar as lâminas de coloração a 40 × ampliação de acordo com as instruções do fabricante, com os parâmetros por defeito. </li></ol>

<ol><li>Lin, Z., Pu, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+cardiac+regeneration+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Strategies for cardiac regeneration and repair.</a> Sci Transl Med. 6, 231-239 (2014).</li>
<li>Xin, M., Olson, E. N., Bassel-Duby, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mending+broken+hearts%3A+cardiac+development+as+a+basis+for+adult+heart+regeneration+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mending broken hearts: cardiac development as a basis for adult heart regeneration and repair.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 14, 529-541 (2013).</li>
<li>Mahmoud, A. I., Porrello, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turning+back+the+cardiac+regenerative+clock%3A+lessons+from+the+neonate%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Turning back the cardiac regenerative clock: lessons from the neonate.</a> Trends Cardiovasc Med. 22, 128-133 (2012).</li>
<li>Porrello, E. R., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neonatal+blueprint+for+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">A neonatal blueprint for cardiac regeneration.</a> Stem Cell Res. 13, 556-570 (2014).</li>
<li>Porrello, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+regenerative+potential+of+the+neonatal+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart.</a> Science. 331, 1078-1080 (2011).</li>
<li>Mahmoud, A. I., Porrello, E. R., Kimura, W., Olson, E. N., Sadek, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+models+for+cardiac+regeneration+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Surgical models for cardiac regeneration in neonatal mice.</a> Nat Protoc. 9, 305-311 (2014).</li>
<li>Allen, T. C. Armed Forces Institute of Pathology. Hematoxylin and eosin. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAllen%2C+TC+%22Laboratory+methods+in+Histotechnology%22">Laboratory methods in Histotechnology</a>. Prophet, E. B., Mills, B., Arrington, J. B., Sobin, L. H. , American Registry of Pathology. Washington DC. 53-58 (1992).</li>
<li>Andersen, D. C., Ganesalingam, S., Jensen, C. H., Sheikh, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+neonatal+mouse+hearts+regenerate+following+heart+apex+resection%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Do neonatal mouse hearts regenerate following heart apex resection?</a> Stem cell reports. 2, 406-413 (2014).</li>
<li>Kotlikoff, M. I., Hesse, M., Fleischmann, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comment+on+%27Do+neonatal+mouse+hearts+regenerate+following+heart+apex+resection%3F%27%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Comment on 'Do neonatal mouse hearts regenerate following heart apex resection?'.</a> Stem cell reports. 3, 2(2014).</li>
<li>Sadek, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-investigator+letter+on+reproducibility+of+neonatal+heart+regeneration+following+apical+resection%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Multi-investigator letter on reproducibility of neonatal heart regeneration following apical resection.</a> Stem cell reports. 3, 1(2014).</li>
<li>Andersen, D. C., Jensen, C. H., Sheikh, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+to+Sadek+et+al.+and+Kotlikoff+et+al%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+reports%22%5BJournal%5D)">Response to Sadek et al. and Kotlikoff et al.</a> Stem cell reports. 3, 3-4 (2014).</li>
<li>Phifer, C. B., Terry, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+hypothermia+for+general+anesthesia+in+preweanling+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Use of hypothermia for general anesthesia in preweanling rodents.</a> Physiol Behav. 38, 887-890 (1986).</li>
<li>Laflamme, M. A., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerating+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Regenerating the heart.</a> Nat Biotechnol. 23, 845-856 (2005).</li>
<li>Laflamme, M. A., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Heart regeneration.</a> Nature. , 326-335 (2011).</li>
<li>Jesty, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((c-kit%2B+precursors+support+postinfarction+myogenesis+in+the+neonatal%2C+but+not+adult%2C+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">c-kit+ precursors support postinfarction myogenesis in the neonatal, but not adult, heart.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 13380-13385 (2012).</li>
<li>Gonzalez-Rosa, J. M., Martin, V., Peralta, M., Torres, M., Mercader, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+scar+formation+and+regression+during+heart+regeneration+after+cryoinjury+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Extensive scar formation and regression during heart regeneration after cryoinjury in zebrafish.</a> Development. 138, 1663-1674 (2011).</li>
</ol>

Taxas de publicação para este artigo foram patrocinados por um presente de Ferramentas Ciência Belas para Dr. Jian Hou.

A regeneração cardíaca mostra potencial para o tratamento e prevenção da insuficiência cardíaca1, 2. Os modelos animais são indispensáveis e desempenham um papel fundamental na compreensão de como ocorre a regeneração cardíaca3-6. Muitos anfíbios e peixes regeneram o tecido cardíaco em resposta a lesões, fornecendo informações sobre nossa compreensão das doenças cardiovasculares humanas13, 14. Em termos de evolução, no entanto, a fisiopatologia deve ser mais conservada entre um modelo de ...

A expectativa de vida humana prolongada leva a várias doenças relacionadas ao envelhecimento e ao estilo de vida, incluindo insuficiência cardíaca, uma das principais causas de mortalidade. No entanto, sem a substituição de células musculares cardíacas perdidas ou disfuncionais, a terapêutica atual só pode melhorar transitoriamente a função cardíaca1, 2. Assim, é necessário descobrir e desenvolver estratégias inovadoras para regeneração e reparo cardíaco. O coração de mamíferos adultos tem potencial regenerativo limitado. Estudos de vertebrados inferiores, como anfíbios urodele e peixes teleósteos, forneceram informações sem precedentes sobre os mecanismos moleculares e celulares subjacentes à regeneração do coração3, 4. Recentemente, surgiu um modelo de camundongo neonatal de regeneração cardíaca que pode permitir a identificação e caracterização de eventos fisiopatológicos mais evolutivamente conservados necessários para a regeneração cardíaca humana5. 
A ressecção apical refere-se à remoção cirúrgica do ápice do ventrículo esquerdo. Este procedimento é restrito a camundongos de 1 a 7 dias de idade (P1 a P7) devido à sua alta letalidade em camundongos mais velhos6. Espera-se que o processo de regeneração cardíaca em camundongos neonatais após a ressecção apical seja o seguinte: (I) formação rápida e eficaz de um hematoma para selar o ápice e prevenir a exsanguinação; (II) regeneração de cardiomiócitos e restauração da função sistólica5, 7. Trabalhos recentes têm estimulado o debate sobre o significado e a eficiência desse modelo8-11. Assim, é importante apresentar a ressecção apical de forma clara e detalhada. Para esse fim, este protocolo descreve de forma vívida e específica um vídeo de como fiz a ressecção apical com base em um protocolo anterior6. 
Compreender os mecanismos moleculares subjacentes à regeneração cardíaca é importante para o tratamento de doenças cardíacas caracterizadas por perda e/ou lesão de cardiomiócitos, como insuficiência cardíaca1, 2. Dado o progresso atual e promissor da ressecção apical na pesquisa de regeneração cardíaca, este estudo poderia promover o uso dessa técnica e seus usos na pesquisa de regeneração cardíaca.

<table><tbody><tr><td>Porta-agulhas Olsen-Hegar com Tesoura, 1.5 mm</td><td>Ferramentas de Fine Science</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Mola Vannas - 2 mm Tesoura</td> de <td>Iridectomia</td>de <td>Ponta Ferramentas de Ciência Fina</td><td>15000-03</td></tr><tr><td>Esterilizador de Esferas Quentes</td><td>Pinça de Íris</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>, Reta, Serrilhada</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>11064-07</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de Íris, Curvado, Serrilhado</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Karité - Curvo/Blunt-Blunt/12cm</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>14105-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de Sutura com Cabo Redondo, Reta</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>18025-12</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Mola Vannas com Cabo Redondo</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>15400-12</td><td></td></tr><tr><td>Hemostat Fino</td><td>Ferramentas</td> <td>de Ciência Fina13007-12</td><td></td></tr><tr><td>Lâmpada de Aumento</td><td>Luxolamp Corp</td><td>IM120&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lâmpada de aquecimento</td><td>Brandt Equipment llc</td><td>51152/3</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Suturas de Prolene</td><td>Ethicon</td><td>8889H</td><td></td></tr><tr><td>Cola para a pele-Adesivo de tecido Vetbond&nbsp;</td><td>3M&nbsp;</td>Aplicadores de Algodão Estéril <td>1469</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Dynarex</td><td>4305</td><td></td></tr><tr><td>WEBCOL Almofada de Preparação de Álcool</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td>Médio 2 PLY, 200/CAIXA, Saturado com Álcool Isopropílico 70%</td></tr><tr><td>Esponjas de Uso Geral Curity</td><td>Covidien</td><td>9024</td><td>Não Tecido 4 PLY, 4"x4" (10.2cm&times; 10,2 cm)</td></tr> <tr><td>Folha protetora de bancada</td><td>KIMTECH SCIENCE</td><td>7546</td><td>18 "x 19,5" (45,72 cm x 49,53 cm) x 50</td></tr><tr><td>0,9% Cloreto de sódio, 250ml</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-6138-22</td><td></td></tr><tr><td>Cotonetes de solução Betadine</td><td>Purdue Products LP</td><td>NDC 67618-153-03</td><td></td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>TOMY Digital Biology</td><td>SX-700</td><td>ESTERILIZADOR A VAPOR DE ALTA PRESSÃO Scanner</td></tr> de <tr><td>slides</td><td>HAMAMATSU</td><td>NanoZoomer 2.0-RS</td><td></td></tr></tbody></table>

a ressecção apical mouse modelo para estudar precoce regeneração mammalian coração

Apical Resection Mouse Model to Study Early Mammalian Heart Regeneration

A doença cardiovascular assola o mundo inteiro devido a mudanças de estilo de vida intensivos. A regeneração do coração é uma grande promessa para reparar e restaurar cardiomiócitos perdidos devido a lesões e doenças. Em contraste com a regeneração cardíaca robusta de certos vertebrados inferiores, corações de mamíferos adultos mostram tipicamente uma capacidade mínima para a regeneração cardíaca e reparação. No entanto, estudos recentes têm suscitado interesse científico considerável com a constatação de que, entre o dia pós-natal 1-7 (P1 a P7), o coração neonatal do rato mantém potencial regenerativo significativa após a ressecção apical (ou seja, a amputação cirúrgica e exposição do ápice ventricular esquerda). Uma grande controvérsia sobre este achado pode ser devido aos procedimentos relacionadas à cirurgia diversos usados ​​em esforços para replicar ou expandir sobre esta importante descoberta. Estas instruções apresentar dinamicamente os materiais e metodologia para ressecção apical em um modelo de mouse. As etapas mais salientes deste surviva roedorl cirurgia envolve anestesia hipotermia, toracotomia, amputação cirúrgica do ápice ventricular coração, e sutura e recuperação de ratos. A abordagem descrita poderia expandir a aplicação do modelo de rato ressecção apical para a investigação cardiovascular.

Rato filhotes foram sacrificados 1, 2 e 21 dias pós-ressecção apical, e seus corações foram coletadas para H &amp; E e tricrômico de Masson. Cor azul em tricrômico de Masson indica a deposição de matriz extracelular epicardial 5. Com ressecção apical bem sucedida, um coágulo de sangue é formado para selar eficazmente a VE um dia pós-ressecção apical, como mostrado na Figura 1A. Uma reabsorção gradual do coágulo sanguíneo e fibrose cardíaca precoce é observada, e sua substitui...

Um protocolo de vídeo passo a passo de ressecção apical é demonstrado neste estudo. A ressecção apical é uma abordagem cirúrgica recentemente destacada na pesquisa de regeneração cardíaca de mamíferos. Este estudo pode promover a aplicação da ressecção apical como metodologia padrão na pesquisa sobre o mecanismo subjacente à regeneração cardíaca.

A ressecção apical mouse modelo para estudar precoce Regeneração Mammalian Coração

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring ...

O objetivo geral deste procedimento é utilizar a ressecção apical em camundongos neonatos para estudar a regeneração cardíaca mamífera precoce. Este tema pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área de regeneração cardíaca, como quais são os mecanismos moleculares e celulares que sustentam a regeneração cardíaca mamífera inicial. A principal vantagem desta técnica é que o modelo de ressecção apical em camundongos oferece uma abordagem relativamente simples e direta para o estudo da regeneração cardíaca mamífera precoce.Antes de iniciar o procedimento, transfira todos os filhotes de dia pós-natal um C57 black six da mãe amamentadora para uma gaiola limpa para camundongos com cama e materiais para ninho frescos. Em seguida, para cada neonato sucessivamente, transfira o filhote de uma cama de gelo para a área cirúrgica e imobilize os braços, pernas e cauda em posição supina. Desinfete o tórax com betadine, seguido por uma limpeza suave com uma compressa de álcool 70%.Agora, faça uma incisão na pele de transferência ao longo da quarta região intercostal interna da cavidade torácica. Use uma tesoura de mola para fazer uma incisão no ápice do coração. Para acessar o coração, use uma tesoura de mola para fazer uma incisão no ápice do coração, seguida por uma dissecação romba dos músculos intercostais internos.Use suturas estéreis 6-0 para fechar as costelas e os músculos juntos. Use cola cirúrgica para fechar cuidadosamente a incisão na pele e permita que o neonato se recupere sob uma lâmpada de calor por cerca de três minutos. Em seguida, use um lenço umedecido com álcool 70% para limpar todos os vestígios de sangue e cola do filhote e devolva o animal aos seus companheiros de ninhada.Após a realização de todas as cirurgias, misture as crias com a cama e os excrementos da mãe antes de devolver os neonatos ao ninho da mãe. Um dia após a cirurgia, conte o número de crias falsa-operadas e cirúrgicas para determinar a taxa de sobrevivência dentro de cada grupo. No momento apropriado após a cirurgia, para cada animal sucessivamente, limpe o tórax com etanol 70% e faça uma incisão na pele e no músculo da linha média do tórax.Remova completamente o coração da cavidade torácica e fixe o tecido em cinco milímetros de paraformaldeído a quatro por cento durante a noite, à temperatura ambiente. No dia seguinte, transfira as amostras para etanol a 70% por até uma semana antes da inclusão em parafina. Após obter cortes em parafina de cinco micrômetros de espessura através de todo o ventrículo, cora as amostras com hematoxilina, Eosina e tricrômio de Masson para examinar, respectivamente, a substituição muscular e as respostas fibróticas nos corações ressecados.Usando um escâner de lâminas, obtenha manualmente pelo menos três focos por amostra. Em seguida, analise as imagens das amostras com uma ampliação de 40X de acordo com as instruções do fabricante, utilizando os parâmetros padrão do escâner. Com uma ressecção apical bem-sucedida, dentro de um dia após a ressecção apical, um coágulo sanguíneo é efetivamente formado para selar o ventrículo esquerdo.Em seguida, observa-se uma reabsorção progressiva do coágulo sanguíneo e uma fibrose cardíaca inicial, com sua substituição gradual por tecido miocárdico até a regeneração completa do miocárdio em 21 dias após a ressecção. De fato, três semanas após a cirurgia, nenhuma diferença entre os corações ressecados e os corações submetidos a operação simulada é aparente por meio de análise morfológica. Ao tentar realizar este procedimento, é importante lembrar-se de manter condições estéreis.Após este procedimento, outras medidas, como marcação e a avaliação linear, podem ser realizadas para responder perguntas adicionais sobre a proliferação de cardiomiócitos e a ressecção apical. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como realizar a ressecção apical em camundongos neonatos.

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Neste vídeo, demonstramos o procedimento para remover cirurgicamente o ápice ventricular esquerdo de um coração de camundongo neonatal.

Modelo de camundongo neonatal de ressecção apical: um procedimento cirúrgico para amputar o ápice ventricular para estudar o potencial regenerativo em um coração de camundongo recém-nascido

A insuficiência cardíaca é a principal causa de hospitalização e uma das principais causas de mortalidade. Um modelo de ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior em camundongos é aplicado para investigar o remodelamento ventricular e a disfunção cardíaca pós-infarto do miocárdio. A técnica de medidas hemodinâmicas invasivas em camundongos é apresentada.

A ligação permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda em Ratos: Um Modelo de Remodelação pós-infarto do miocárdio e insuficiência cardíaca

Este protocolo descreve um modelo altamente reprodutível de regeneração cardíaca por indução cirúrgica de infarto do miocárdio no ventrículo esquerdo de camundongos pós-parto no dia 1. O método envolve indução de anestesia hipotérmica e ligadura da artéria coronária descendente anterior.

Infarto do miocárdio em ratos neonatais, um modelo de regeneração cardíaca

A proliferação de cardiomiócitos após a lesão é um processo dinâmico que requer uma sinfonia de pistas extracelulares de populações de células não miócitos. Utilizando o rastreamento de linhagem, claridade passiva e técnicas tridimensionais de microscopia confocal de montagem completa, podemos analisar a influência de uma variedade de tipos de células na reparação e regeneração cardíaca.

Capturando a resposta de lesão cardíaca de populações de células-alvo através de imagens tridimensionais do coração limpo

Este protocolo visa transplantar um patch bioimpresso 3D no epicárdio de camundongos infartados modelando insuficiência cardíaca. Inclui detalhes sobre anestesia, abertura do tórax cirúrgico, ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda (LAD) e aplicação de um patch bioimpresso na área infarto do coração.

Transplante de um Patch Bioimpresso 3D em um modelo murino de infarto do miocárdio

Uma nova técnica para reconstrução do circuito sanguíneo em um modelo de transplante de coração de camundongo heterotópico é demonstrada.

Reconstrução do circuito sanguíneo em um modelo de transplante de coração de rato abdominal

Fornecemos um protocolo para separação e transplante de macrófago cardíaco neonatal em um coração de rato adulto, o que pode ser uma maneira promissora de promover a reparação cardíaca.

Transplante de Macrófagos Cardíacos de Camundongos Neonatais em Camundongos Adultos

A entrega celular guiada por ultrassom ao redor do local do infarto do miocárdio em camundongos é uma maneira segura, eficaz e conveniente de transplante de células.

Implante de Cardiomiócitos Derivados de Células-Tronco Pluripotentes Induzidos por Ultrassom em Camundongos Infartados do Miocárdio

Aqui, descrevemos um protocolo para isolar uma quantidade suficiente de cardiomiócitos únicos não cardiomiócitos com alta viabilidade de um coração de camundongo pós-infarto do miocárdio (IM). Isso pode ser usado para sequenciamento subsequente de célula única, análise de citometria de fluxo e cultura de células primárias.

Preparação de uma Suspensão de Células Não-Cardiomiócitos para Sequenciamento de RNA de Célula Única de um Coração de Camundongo Adulto Pós-Infarto do Miocárdio

Xenopus tropicalis é um modelo ideal para pesquisa regenerativa, pois muitos de seus órgãos possuem uma notável capacidade regenerativa. Apresentamos aqui um método para a construção de um modelo de lesão cardíaca em X. tropicalis via ressecção do ápice.

Modelo de Ressecção Apical no Coração de Xenopus tropicalis Adulto

Aprenda a técnica de ressecção apical em camundongos neonatos para estudar a regeneração cardíaca precoce. Este método simples e direto auxilia pesquisadores a investigar os mecanismos celulares e moleculares da reparação cardíaca.

A ressecção apical mouse modelo para estudar precoce Regeneração Mammalian Coração

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