Name: A Neonatal do rato Spinal Cord Injury Compression Modelo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 31 s
Description: Aprenda a criar uma lesão compressiva da medula espinhal em camundongos neonatos. Este modelo permite estudar a plasticidade adaptativa e mecanismos de recuperação funcional em neurociência.

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Este trabalho foi apoiado por doações da Autoridade Regional de Saúde do Sudeste da Noruega (JLB, 2014119; JCG, número 2015045 e 2012065), pelo Conselho Norueguês de Pesquisa (JCG, número do projeto 23 00 00) e pela Universidade de Oslo.

Este protocolo experimental foi aprovado pela Autoridade Nacional de Pesquisa Animal da Noruega (Forsøksdyrutvalget, número local experimental aprovação 12,4591) em conformidade com os regulamentos da União Europeia de cuidados de animais (Associação Ciência Animal Federação Laboratório Europeu). Foram feitos esforços para minimizar o número de animais utilizados e seu sofrimento. Neste artigo, o procedimento utilizado em pós-natal (P) dia 1 de tipo selvagem ICR (imprinting Região de Controle) ratinhos (Jackson, EUA) é descrito mas a mesma abordagem pode também ser utilizado em fases posteriores. 1. Construção de um sistema de anestesia de gás para ratos Neonatal (Figura 1) <ol><li> Construir um nariz-máscara a partir da ponta de uma seringa. Conecte-o ao 3-way válvula com tubo de plástico (Figura 1 - tubo vermelho e Figura 2A1). </li><li> Perfurar um pequeno furo no lado da máscara nariz e ligar esta para tubos de plástico para remover o excesso de gás a partir damáscara. Terminar a tubagem, quer a uma bomba de vácuo ajustado para uma pressão ligeiramente negativa, ou numa hotte (Figura 1 - tubo verde-claro). </li><li> Realizar uma câmara de anestesia de um x 25 mm de plástico de Petri 150 mm (Figura 2A2). <ol><li> De um lado, fazer um buraco grande o suficiente para acomodar a cabeça do rato ea máscara nariz. </li><li> No lado oposto, faça dois furos menores por meio do qual os tubos de plástico de e para a máscara do nariz podem ser inseridos (figura 1 - tubulação vermelho e verde brilhante, respectivamente). </li><li> Adicione um terceiro orifício na parte superior da tampa e se ligar a este um terceiro tubo de plástico que termina na bomba de vácuo (Figura 1 - tubo verde-escuro). O objectivo deste terceiro tubo é para assegurar que qualquer excesso de gás, que não foi captada pela saída do nariz máscara é removida. </li></ol></li><li> Criar uma câmara de sono, fazendo um buraco no fundo de qualquer tipo de prato de laboratório que é suficientemente grande para Contain o rato e tem uma borda lisa e uniforme (na abertura do prato deve estar nivelada com a tabela para evitar fugas de gás). Ligue o orifício na câmara até a torneira de 3 vias com tubo de plástico (Figura 1 - tubo castanho). Coloque a câmara de dormir sob uma coifa. </li><li> Conectar uma torneira de passagem de 3 vias para o tubo de saída do vaporizador (Figura 1 - tubo amarelo e Figura 2A3). </li><li> Ligue a entrada do vaporizador para o fornecimento de oxigénio (Figura 1 - tubo azul). </li></ol> 2. A modificação de um Yasargil temporária Aneurysm Mini-clip para criar a ferramenta de compressão (Figura 2 e Tabela 1) <ol><li> Apor o clipe firmemente a um carrinho com uma braçadeira. Usando uma lupa binocular para controle visual, arquivo para baixo da superfície exterior da ponta de cada lâmina de clipe para uma espessura final de cerca de 150 um, utilizando uma pedra de afiar montado sobre uma broca (Figura 2B e C). </li&gt; <li> Adicione uma rolha para o clipe por corte de um curto troço de tubo de polietileno capilar (Tabela 1) sob um estereomicroscópio usando um micro-faca (Tabela 1), e colocar este em uma das lâminas (Figura 2A4 e as Figuras 2B e C). Isso impede o fechamento completo do clipe e cria dimensões compressão padronizados. Quando o clipe estiver fechou a distância interblade é de cerca de 230 um. Fazer uma nova rolha para cada experiência como o material de polietileno pode comprimir durante a sua utilização, o que alteraria o espaço interblade. Nota: A tensão da mola de aperto diminui ao longo do tempo tais que, após cerca de 80 compressões o clipe não fecha totalmente a rolha e necessita de ser substituída. </li></ol> 3. Preparação antes da cirurgia <ol><li> Colocar o rato na câmara de sono (Figura 1) e iniciar a anestesia com isoflurano a 4% (Figura 2A5 </strong&gt;) Vaporizado em oxigénio puro, usando um vaporizador (Figura 2A3 e Tabela 1). </li><li> Teste o reflexo de retirada do mouse por beliscar suavemente a web de pele entre os dedos dos pés com uma fina pinça de plástico. Faça isso com cuidado como ratos recém-nascidos são facilmente feridos. Beliscar resultados muito duras em hematomas imediata. Se efectuar este ensaio, no início da sedação desencadeia o reflexo e fornece uma boa indicação da quantidade de força necessária. </li><li> Uma vez que o reflexo é abolido, remova o mouse da câmara de sono e colocá-lo em uma posição propensa na mesa de operação com o focinho inserido no nariz máscara que proporciona um fornecimento contínuo de 4% de isoflurano misturado com oxigênio puro (Figura 1). Certifique-se de que a almofada de aquecimento está ligado e definido para 37-38 ° C como hipotermia durante a cirurgia pode ser fatal. </li><li> Para obter analgesia completa, injectar por via subcutânea de 50 uL de anestésico local bupivacaína (2,5 mg / ml, <strong&gt; Figura 2A6) no local da cirurgia (nas experiências relatadas aqui, isto é ao nível torácico (T) 9-T11). Usar uma seringa de insulina (300 ul, 30 g, Figura 2A7 e Tabela 1) para executar a injecção. </li><li> Reduzir a concentração de isoflurano entregue ao nariz máscara para 1-2%. </li></ol> 4. Dorsal Laminectomy <ol><li> Realizar a cirurgia sob controle microscópico. </li><li> Depois de limpar a área de cirurgia com gluconato de clorexidina (Tabela 1 # 19) durante pelo menos 30 segundos, fazer um 1-2 mm incisão cutânea transversal em T9-T11 usando um microlanceta (Figura 2A8). Nota: Em ratinhos ICR neonatal a porção rostral do estômago, visível quando contém leite, está de frente para os níveis vertebrais T12-T13 (Figura 3). Outro marco é a parte rostral do agregado tecido adiposo subcutâneo torácica que termina em cerca de T8-9. Este marco é visível somente após incisão na pele. </li><li&gt; utilize uma pinça (Figura 2A9 e A10) para aumentar a abertura da pele numa direcção transversal para 8-9 mm, puxando a pele suavemente rostral e caudal (a pele rasga facilmente, criando uma ferida suave e linear). Isto proporciona acesso lateral suficiente para a coluna vertebral. </li><li> Retrair as bordas da incisão da pele a partir de estruturas subjacentes através da inserção de peças estéreis de esponja de gelatina hemostática (Figura 2A11 e Tabela 1) por via subcutânea rostral e caudal para a incisão. Isto aumenta a abertura e impede a pele de retracção e obscurecendo a área durante a cirurgia. A esponja de gelatina hemostática não necessita de ser embebido em solução salina, antes da utilização. </li><li> Para expor a coluna vertebral, dissecar os músculos paravertebrais, usando tesouras finas (Figura 2A12, e Tabela 1). Corte os anexos dos músculos para a coluna vertebral e expor a lâmina (Figura 4A). Nãoe também que, nesta fase do processo espinhal é subdesenvolvido. </li><li> Identificar a linha média e cortar transversalmente entre as duas lâminas (que, nesta fase, é cartilaginoso) com tesouras finas (Figura 4B). Coloque cuidadosamente uma lâmina de uma fina fórceps entre a lâmina e a dura-máter (Figura 4C), segure a lâmina com a pinça e levante-o cuidadosamente até um pedaço quebra, deixando a dura-máter intacta (Figura 4D). Repita este procedimento 2-3 vezes para obter um longo laminectomia 1-2 segmento. </li><li> Usando fórceps finos como fórceps, remover partes das articulações bilateralmente para ganhar espaço suficiente para colocar o clipe dentro do canal vertebral. Limpar a área cirúrgica e controlar o sangramento com pequenos pedaços de esponja de gelatina hemostática. </li></ol> 5. Spinal Cord Injury Compression <ol><li> Abra o aneurisma mini-clipe modificado no suporte do clipe (Figura 2A13 e Figura 2B) e local the lâminas em cada lado da medula espinal, nos espaços entre a faceta junções e o cabo. Certifique-se de que as lâminas são inseridas profundamente o suficiente para afectar a parte ventral da medula espinal. Se isso não for possível, remova mais das articulações. </li><li> Solte o mini-clipe rapidamente, segurando-o no lugar com o suporte do grampo para evitar que ele caia. Manter a compressão por 15 s. </li><li> Abra o mini-clip rápida e removê-lo. Para alcançar uma compressão simétrica, inverter a orientação do mini-grampo, e usando a marca facilmente visto feito pelo edema hemorrágica da primeira compressão como um guia, reposicionar o clipe na orientação inversa, para uma segunda compressão de 15 seg (prévia experiência mostrou que isso gera déficits histológicas e fisiológicas simétricas, enquanto as compressões individuais não 1). A dura-máter não devem ser danificados pela compressão. </li><li> Limpar a área e manter a hemostasia com pedaços de esponja de gelatina hemostática.</li><li> Remover os pedaços de esponja de gelatina hemostática que foram colocados sob as bordas da incisão da pele no início da cirurgia e fechar a incisão na pele com estéril 6,0 sutura e um suporte de agulha (Figura 2A14 e 15). </li><li> Injectar por via subcutânea 0,75 mg / kg de peso corporal de Buprenorfina (Figura 2A16) diluída em PBS estéril usando uma seringa de insulina (300 ul, 30 g). </li></ol> 6. Cuidados no pós-operatório <ol><li> Remover o rato da máscara do nariz e colocá-lo em um conjunto de câmara com temperatura controlada a 30 ° C até que a anestesia desgasta fora eo mouse torna-se alerta (1-3 hr é tipicamente suficiente). </li><li> Injectar Diazepam (Figura 2B17) intraperitonealmente para a matriz (8 g / kg de peso corporal). Isto cria um torpor que diminui o risco de canibalismo durante a primeira noite, quando este risco é mais elevado. </li><li> Retornar o mouse operado para a maca. </li><li> Se o lixo é large (&gt; 12 filhotes), remova alguns dos filhotes não operados, preferencialmente os animais maiores se eles diferem em tamanho, para reduzir a competição para o leite. cuidados maternos dos filhotes operados há de melhor na linha de ICR se o tamanho da ninhada é de cerca de 9 filhotes. </li><li> Para a gestão da dor, administrar buprenorfina (0,75 mg / kg de peso corporal) por via subcutânea uma vez por dia durante os primeiros dias após a cirurgia, utilizando uma seringa de insulina (300 ul, 30 g). Um volume apropriado para a injecção subcutânea é de 30-50 ul. Em vocalização ratos neonatal e agitação são bons indicadores de dor. </li><li> Realizar um exame diário dos ratinhos lesionados usando uma folha de pontuação para avaliar a nutrição, o peso corporal, desidratação, dor, cicatrização de feridas, a retenção de urina e estado da infecção. De acordo com a pontuação obtida, fornecer cuidados especiais, tais como injeções de uma solução estéril pediátrica nutrição (Tabela 1 # 18) em caso de alimentação anormal. A folha de pontuação também0; define critérios endpoint humanas. Uma mãe que não rejeita os filhotes feridos é o melhor cuidador. </li><li> No caso incomum de disfunção da bexiga, realizar massagem de bexiga duas vezes por dia até que a função é restaurada. Isso é feito colocando o rato em decúbito dorsal em uma mão e massagear o abdômen inferior delicadamente em um sentido rostro-caudal usando a ponta dos dedos. </li></ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Neste artigo são descritos os procedimentos para uma lesão SCC gerado-clip em ratos P1. Os mesmos procedimentos, também pode ser realizada em fases posteriores. Lesões de compressão foram realizados com êxito em P5, P7, P9 e P12 (Züchner, et ai., Manuscrito em preparação). Em todas as fases pós-natal, a anestesia geral é obtida com isoflurano vaporizado com oxigênio puro, mas o resultado anestésico depende muito da idade. Em tentativas iniciais de P1-P4, antes da anestesia local, foi introduzido no protocolo, foi difícil obter uma sedação profunda e prolongada devido a uma janela estreita de dose-efeito entre a sedação e sobredosagem insuficiente. Além disso, as preocupações relacionadas com um efeito neurotóxico de isoflurano em animais recém-nascidos foram levantadas 27-30. Uma combinação de isoflurano e os resultados anestésico bupivacaína locais em uma anestesia mais profunda e mais estável para permitir uma redução da dose de isoflurano por um factor de 2-3. Diferentes tipos de anestesiaSIA foram descritas para roedores neonatais, incluindo Crioanestesia 31,32, mas um inconveniente potencial de Crioanestesia é o seu efeito neuroprotector (revisto por 33,34), o que pode complicar a geração de uma lesão reprodutível e eficiente. Anestesia-barbitúrico com base é considerada para ter uma eficiência mais baixa, em ratos neonatais devido aos níveis mais baixos de albumina do soro e de gordura corporal do que em adultos 35,36. Embora bastante invasiva e traumática, uma vez que o procedimento é estabelecido a taxa de mortalidade durante a cirurgia é baixa. No entanto, há passos críticos durante o procedimento que requerem uma atenção especial para melhorar a recuperação e sobrevivência dos ratinhos operados. Uma questão importante é selecionar filhotes que terão a melhor chance de sobreviver à cirurgia. Quando o lixo é grande o estado nutricional dos filhotes individuais varia. Além do sangramento inevitável que ocorre durante a cirurgia, os filhotes operados passar horas longe da mãe, e muitas vezes eles não bebem leite antes da manhã seguinte. É assim uma vantagem para seleccionar crias que já possuem uma certa quantidade de leite no estômago. Isto é facilmente visível através da pele abdominal de P0 a P7. Durante a primeira noite o filhote operado está em grande risco de ser canibalizados pela mãe. Durante o desenvolvimento inicial do presente modelo de mais de metade dos ratos operados estavam em falta na manhã seguinte, com sinais claros de sangue na gaiola. Necrophagy, canibalismo e infanticídio em roedores têm sido estudados há décadas 37-40. Neste estudo, o canibalismo só foi testemunhado uma vez, mas foi considerado uma explicação mais provável do que necrofagia porque os filhotes que foram devolvidos para a jaula eram tipicamente em tão boa forma que a morte por causas naturais durante a noite parecia improvável. Isto levou a idéia de usar um agente farmacológico reversível tais como Diazepam para reduzir a ansiedade e agressividade in a mãe (revisado por 41). A injecção intraperitoneal de Diazepam melhorou muito a situação, soltando a mortalidade durante a primeira noite de mais de 60% para menos de 20%. Reduzir o tamanho da leitegada através do abate e perturbando o lixo tão pouco quanto possível após o retorno pós-operatório são elementos adicionais que podem beneficiar os animais operados. No entanto, deixando filhotes única operados com a mãe não é benéfico. O melhor equilíbrio entre operados / filhotes não operados podem variar de acordo com a linha, mas para ICR e SCID-ICR ratos que saem 4-5 filhotes operados (lesão ou simulada) em conjunto com 3-4 filhotes não operados deu os melhores resultados. De um modo geral, a principal limitação deste modelo SCI neonatal é que a medula espinhal neonatal difere em muitos aspectos da medula espinal adulta, e, assim, pode não fornecer resultados experimentais, que são comparáveis ​​aos obtidos a partir de modelos SCI adultos. Essas diferenças incluem o tamanho total evolume da medula espinal, o número de células, a sub-representação de tipos de células específicos, tais como oligodendrócitos, respostas imunes imaturos e circuitos neuronais imaturas. As conclusões extraídas dos experimentos neste modelo deve, portanto, ser considerado com cuidado. Por outro lado, o modelo é relevante para o cenário relativamente menos investigados de SCI pediátrica. Além disso, a fraqueza aparente no que diz respeito aos modelos SCI adultos também uma força potencial, uma vez que pode permitir que a elucidação dos mecanismos de plasticidade que, embora minimamente existentes na medula espinal adulta, podem representar um substrato terapêutico se restabelecido. É concebível que a reintegração de condições neonatais ou mesmo embrionárias poderia ser implementado através da implantação de células ou tecidos menos desenvolvidos ou por tratamento com reagentes que geram o tecido adulto com características de desenvolvimento anteriores. Usando enzimas para eliminar redes perineurais é um exemplo da última abordagem 42,43. <p class=&quot;Jove_content&quot;&gt; Uma questão importante ao estabelecer um modelo animal para SCI é a obtenção de uma lesão padronizada. Este é um aspecto importante que tem sido abordada em vários modelos SCI, por exemplo, o corte transversal, hemissecção, pêndulos, compressão por balão, esmagamento fórceps, compressão de peso estático, etc. Com relação ao impacto dispositivos, os esforços neste sentido resultaram em modelos SCI em roedores adultos, onde vários parâmetros de impacto, como velocidade, força e duração podem ser manipuladas (revisto em 44). Outra abordagem, envolvendo menos equipamento, emprega uma modificação do grampo de aneurisma Kerr-Lougheed 45,46. Estes 2 abordagens são complementares como o pêndulo imita uma lesão contusão enquanto os imita clipe de uma lesão de compressão com algum grau de isquemia concorrente. Devido às restrições de tamanho substancial e uma maior vulnerabilidade dos ratinhos neonatais, a maior mortalidade associada com cirurgias maiores, bem como os custos de desenvolver equipamento escala menor, que foi escolhida para desenvolver uma compressão gerada pelo clipe em vez de uma abordagem contusão gerado pelo pêndulo. Isto foi realizado por adaptação de um aneurisma mini-grampo disponíveis comercialmente para acomodar o tamanho da coluna vertebral de ratos neonatais 1. Adicionando uma rolha garante uma largura de compressão padronizada, e desde que a tensão do clipe comprime ao limite da rolha, a força de compressão durante a fase estática a largura mínima deve variar pouco. O que não é normalizada é a velocidade da compressão, durante a sua fase dinâmica, uma vez que este variará em função da evolução da tensão de grampo sobre a sua vida útil. À medida que a fase estática da compressão dura muito mais tempo do que a fase dinâmica, e há pouco para sugerir que o tecido da medula espinhal exerce tanto de uma força contrária contra as lâminas mini-grampo, é provável que a gravidade da lesão é mais dependente a fase estática. Isto, no entanto, continua a ser testado. Prejuízoseveridade é provável que dependem de múltiplos factores, incluindo a força de compressão estática e a duração, a velocidade de compressão e descompressão, a posição do mini-grampo, e o número de compressões executadas no mesmo local. Assim, a variação combinatória nestes parâmetros poderia resultar na geração de um espectro de severidade de lesões de fraca a grave. Apesar do potencial de variabilidade, em nosso estudo publicado anteriormente 1 obtivemos resultados consistentes no histológica, níveis fisiológicos e comportamentais, por isso há pouco para sugerir que a normalização aceitável é difícil de alcançar. Notamos que, nesse estudo, utilizamos vários métodos de validação em cada nível, incluindo os testes comportamentais, tais como ar-stepping como mostrado na Figura 5. Neste modelo SCI neonatal a lesão poupa uma certa proporção de axônios e, assim, proporciona uma situação favorável para induzir plasticidade adaptativa por meio da re-modeling de conexões poupado e a formação de novos circuitos. Além disso, desde o rato neonatal é bem adequado para investigação por muitos métodos experimentais, é possível usar este modelo para estudar a recuperação funcional e plasticidade adaptativa com uma abordagem integrativa, incluindo testes comportamentais, traçado axonal retrógrado e anterógrado, imuno-histoquímica, eletrofisiologia e alta de gravação óptica -throughput 1. Como exemplo, aproveitamos esta abordagem integrativa para demonstrar re-modelagem de rede ao nível das entradas descendentes específicos usando imagem de cálcio de alto rendimento em ex vivo preparações wholemount do tronco cerebral e medula espinhal feridos 1. Isso pode ser empurrado ainda mais usando ferramentas de neuro-optogenética e farmacologia optogenética para avaliar a remodelação de conexões sinápticas entre as populações específicas de neurônios espinhais.

Durante a última década, evidências crescentes obtidas de diferentes modelos de lesão medular (LM) mostraram que as redes espinhais podem se reorganizar espontaneamente para contribuir para a recuperação funcional1-9. A plasticidade adaptativa tornou-se, como consequência, um tópico importante na pesquisa da SCI. Foi demonstrado que a plasticidade abrange o crescimento de axônios poupados, o surgimento de novos colaterais axônicos e a formação de novas conexões sinápticas. Muito desse conhecimento foi obtido a partir de estudos comportamentais ou anatômicos em animais adultos. Uma limitação importante dos estudos da medula espinhal em adultos é a dificuldade de realizar avaliação fisiológica de alto rendimento, o que é mais fácil em preparações neonatais1. Uma grande diferença é que as preparações ex vivo do tronco encefálico adulto e da medula espinhal têm baixa viabilidade. Outra é que o tecido espinhal adulto é mais opaco à luz porque é mais espesso e mielinizado. Embora os avanços recentes na imagem in vivo (ver, por exemplo, 10-12) possam superar parcialmente esses problemas, a possibilidade de realizar imagens de alto rendimento em qualquer profundidade dorsoventral desejada em vários locais ao longo de uma determinada preparação tronco encefálico-medula espinhal é atualmente viável apenas em neonatos. O estado imaturo de mielinização do axônio na medula espinhal neonatal facilita o registro óptico ex vivo de alto rendimento, permitindo assim uma avaliação dinâmica das conexões sinápticas funcionais13-17. Combinadas com repórteres de cálcio geneticamente codificados e ferramentas de estimulação optogenética e farmacologia, as abordagens ópticas podem contribuir para uma compreensão mais profunda dos mecanismos subjacentes à plasticidade adaptativa.
Estima-se que entre 1-10% de todas as lesões da medula espinhal afetem bebês e criançasde 18 a 22 anos. Em contraste com a LME em adultos, a patogênese e o potencial de recuperação espontânea na LME pediátrica são menos estudados. O uso de um modelo de LME neonatal pode, portanto, fornecer mais informações sobre a LME pediátrica e contribuir para uma melhor compreensão dos mecanismos patogenéticos e de recuperação envolvidos. Além disso, acredita-se que a plasticidade pós-LM que apoia a recuperação funcional na medula espinhal adulta envolva, pelo menos em parte, os mesmos mecanismos que governam o desenvolvimento do sistema nervoso central, como o crescimento do axônio, a ramificação e a formação de novas sinapses23-26. Assim, o uso de um modelo de LME neonatal pode fornecer informações importantes sobre os mecanismos que também operam na medula espinhal adulta ou que podem ser restabelecidos na medula espinhal adulta (por exemplo, por implantação de células ou tecidos fetais ou de tecido construído de novo a partir de células-tronco pluripotentes) para facilitar a recuperação.
O camundongo neonatal, portanto, fornece uma plataforma para uma abordagem integrativa e multimetodológica para investigar a plasticidade adaptativa após lesão medular, na qual uma combinação de métodos comportamentais, fisiológicos, anatômicos, moleculares e genéticos pode ser prontamente empregada. O estabelecimento de modelos padronizados de lesões neonatais é um passo importante na implementação de tais estudos.

<table><tbody><tr><td>Seringa de plástico (30 ou 50&nbsp; ml)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Placa de Petri de plástico (150 x 25&nbsp; mm)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vaporizador de isoflurano Fortec</td><td>Cyprane</td><td></td><td>Usamos um dispositivo antigo fora de produção, verifique o link para o dispositivo mais recente</td></tr><tr><td>Yasargil mini-clipe de aneurisma temporário</td><td>&AElig; Tubo de</td> Polietileno de Furo Fino sculap <td>FE681K</td><td></td></tr><tr><td>ID 0.58&nbsp; mm, OD 0.96&nbsp; mm</td><td>Smiths Medical</td><td>800/100/200</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano (Foreno)</td><td>Abbott GmbH & Co. KG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Marcain (Bupivacain)</td><td>AstraZeneca Seringa</td><td></td><td></td></tr> de <tr><td>insulina 0,3&nbsp; ml 30&nbsp; G x 8&nbsp; mm</td><td>VWR</td><td>80086-442</td><td></td></tr><tr><td>Faca Micro Ultra Fina 5&nbsp; mm de ponta</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>10315-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Graefe Extra Fina &ndash; 0.5&nbsp; mm Tip</td><td>Fine Science Tools</td><td>1153-10</td><td>Não é realmente necessário, muitas vezes os dentes são muito grandes</td></tr><tr><td>Fórceps SuperGrip Straight</td><td>Fine Science Tools</td><td>00632-11</td><td>São necessárias duas pinças</td></tr><tr><td>Spongostan Special 70 x 50 x 1&nbsp; mm</td><td>Tesouras de Mola Ferrosan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vannas - 2&nbsp; mm Lâminas Retas</td> Ferramentas <td>de Ciência Fina</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>Vario Clip Aplicando Fórceps</td><td>Aesculap</td><td>FE502T</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 6&ndash; 0 (Ethicon)</td><td>Johnson and Johnson</td><td>J105G</td><td></td></tr><tr><td>Diethrich micro porta-agulha</td><td></td><td>11-510-20</td><td></td></tr><tr><td>Temgesic (buprenorfina)</td><td>Schering-Plough</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stesolid (diazepam)</td><td>Actavis</td><td></td><td>Também conhecido como Valium</td></tr><tr><td>Pedamix</td><td>Fresenius Kabi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Klorhexidinsprit (gluconato de clorexidina)</td><td>Fresenius Kabi</td><td>D08A C02</td><td></td></tr></tbody></table>

a neonatal do rato spinal cord injury compression modelo

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

lesão da medula espinal (SCI) normalmente provoca déficits neurológicos devastadores, nomeadamente através danos às fibras que descem do cérebro para a medula espinhal. Uma grande área atual da pesquisa é focada sobre os mecanismos de plasticidade adaptativa que fundamentam a recuperação funcional espontânea ou induzida a seguir a SCI. recuperação funcional espontânea é relatado para ser maior no início da vida, levantando questões interessantes sobre como adaptativa alterações de plasticidade como a medula espinhal se desenvolve. Para facilitar a investigação dessa dinâmica, temos desenvolvido um modelo SCI no ratinho neonatal. O modelo tem relevância para SCI pediátrica, o que é muito pouco estudada. Porque plasticidade neural no adulto envolve alguns dos mesmos mecanismos como plasticidade neural no início da vida 1, este modelo pode, potencialmente, ter alguma relevância também para adultos SCI. Aqui nós descrevemos todo o procedimento para a geração de uma lesão reprodutível compressão da medula espinhal (SCC) no ratinho neonataltão cedo quanto pós-natal (P) dia 1. SCC é conseguido através da realização de uma laminectomia para um dado nível espinal (aqui descrita em níveis torácicos 9-11) e, em seguida, utilizando um mini-Yasargil aneurisma grampo modificado para comprimir e descomprimir rapidamente a medula espinhal . Como descrito anteriormente, os ratos neonatais ferido pode ser testado para os défices comportamentais ou sacrificados para análise ex vivo fisiológica de conectividade sináptica usando técnicas de gravação óptica electrofisiológicos e alto rendimento 1. Anteriores e em curso estudos com avaliação comportamental e fisiológica demonstraram uma dramática deterioração aguda da motilidade dos membros posteriores seguido por uma recuperação funcional completa dentro de 2 semanas, e a primeira evidência de mudanças no circuito funcional ao nível da identificadas descendente conexões sinápticas 1.

Lesão compressão da medula espinhal e perda de função Tal como descrito anteriormente, através da optimização dos processos de pré-operatório, cirurgia e pós-operatórias, um modelo reprodutível SCI compressão no rato neonatal pode ser obtido um. A rolha de polietileno colocado sobre uma lâmina do clipe (Figura 2B e C) impede o fecho completo do grampo e mantém a distância entre a lâmina de forma consistente a cerca de 230 um. Invertendo a orientação do clipe entre os dois resultados compressões em uma lesão simétrica, tal como avaliado por sequelas histológico (Figura 5A e 1). Imediatamente após a remoção mini-clip, o tecido da medula espinhal comprimido torna-se mais escura, devido à contusão hemorrágica e edema. Observação de cortes seriados da medula lesionada coradas para Eosina e Hematoxilina já um dia porlesão epois revela deterioração gradual do tecido quando se aproxima o epicentro da lesão (Figura 5A). A presença de cavidades intra-espinal ou sangue na lesão não é incomum. Avaliação comportamental, por exemplo, rastreando trajectórias dos membros posteriores em condições de ausência de peso condições de rolamento de algumas horas após a cirurgia, mostra uma insuficiência dramáticos da motilidade dos membros posteriores em murganhos SCC lesionado em comparação com ratinhos de controlo placebo, em que apenas uma laminectomia é realizado (Figura 5B e 1) . Este teste pode ser repetido até que o rato é capaz de executar outros testes comportamentais de rolamento que exigem o seu próprio peso 1. Mortalidade e de recuperação após a cirurgia a mortalidade intra-operatória é principalmente devido à apnéia e parada cardíaca causada pela alta concentração de isoflurano necessária para alcançar anesthesi suficienteuma. Introduzindo o anestésico local para Bupivacaína o protocolo cirúrgico permite a redução da concentração de isoflurano e, assim, diminui significativamente a taxa de mortalidade. Em uma série experimental recente, incluindo mais de 20 animais, a mortalidade intra-operatória foi nula. Em contraste, a sobrevivência pós-operatório é influenciada principalmente pela aceitação dos ratos operados por sua mãe. Uma melhoria significativa ocorreu quando a ansiedade e a agressividade foi reduzida através da apresentação de uma única injecção de diazepam (ip 8 g / kg de peso corporal) para a mãe antes de devolver os ratos operados para o maca 1. A aceitação e a recuperação pós-operatório dos ratos operados podem ser monitorizadas pela presença do leite no estômago. O estômago de um rato P1-P7, que tem o leite de embriaguez é claramente branco e visível através da pele abdominal (Figura 3). Comparação de alimentação em funcionamento, controle de farsa e camundongos não operados é útil para avaliar o estado nutricional de ferird ratinhos. Avaliação do crescimento de operado face a ratinhos não operado mostra que, apesar de uma pequena perda de peso durante o primeiro dia pós-operatório, a curva de crescimento de ratos operados normaliza rapidamente depois disso (Figura 6). A mortalidade relacionada à disfunção da bexiga ou infecção não foi observada mesmo em camundongos estudados por até sete semanas. <table border="1"><tbody><tr><td> Número na Fig. 2 </td><td> Nome </td><td> Fabricante / Fornecedor </td><td> referência # </td><td colspan="3"> Ligação </td><td> Comente </td></tr><tr><td> 1 </td><td> seringa de plástico (30 ou 50 ml) </td><td></td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 2 </td><td> Placa de Petri de plástico (150 x 25 mm) </td><td></td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 3 </td><td> vaporizador de isoflurano Fortec </td><td> Cyprane </td><td></td><td colspan="3"> http://www.mssmedical.co.uk/products/new-vaporisers/ </td><td> Usamos e dispositivo antigo fora de produção, consulte o link para o dispositivo mais recente </td></tr><tr><td> 4a </td><td> Yasargil aneurisma temporária mini-clipe </td><td> Aesculap </td><td> FE681K </td><td colspan="3"> http://www.aesculapusa.com/assets/base/doc/DOC697_Rev_C-Yasargil_Aneurysm_Clip.pdf </td><td></td></tr><tr><td> 4b </td><td> Belas furo polietileno capilar tubos ID 0,58 mm, OD 0.96 mm </td><td> Smiths Medical </td><td> 800/100/200 </td><td colspan="3"> http://www.smiths-medical.com/industrialproducts/8/39/ </td><td></td></tr><tr><td> 5 </td><td> O isoflurano (Forene) </td><td> Abbott GmbH &amp; Co. KG </td><td></td><td colspan="3"> http://www.life-sciences-europe.com/product/forene-abbott-gmbh-wiesbaden-group-narcotic-germany-west-2001-1858.html </td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td> Marcain (bupivacaína) </td><td> AstraZeneca </td><td></td><td colspan="3"> http://www.astrazeneca.co.uk/medicines01/neuroscience/Product/marcaine </td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> Insuline seringa de 0,3 ml de 30 G x 8 milímetros </td><td> VWR </td><td> 80086-442 </td><td colspan="3"> https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?product_id=4646138 </td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td> Belas Micro faca de ponta Ultra 5 milímetros </td><td> Ferramentas Ciência Belas </td><td> 10315-12 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat &amp; suchkatalog = 0019900000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td></td></tr><tr><td> 9 </td><td> Extras pinça fina Graefe - 0,5 milímetros Tip </td><td> Ferramentas Ciência Belas </td><td> 1153-1110 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat &amp; suchkatalog = 0055700000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td> Não é realmente necessário, muitas vezes, os dentes são muito grandes </td></tr><tr> &lt;td&gt; 10 </td><td> Fórceps SuperGrip Hetero </td><td> Ferramentas Ciência Belas </td><td> 00632-11 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat &amp; suchkatalog = 0053500000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td> Duas pinças são necessárias </td></tr><tr><td> 11 </td><td> Spongostan especial de 70 x 50 x 1mm </td><td> Ferrosan </td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 12 </td><td> Vannas Primavera Scissors - 2 lâminas mm Hetero </td><td> Ferramentas Ciência Belas </td><td> 15000-03 </td><td colspan="3"> http://www.finescience.de/katalog_ansicht.asp?Suchtyp= Kat &amp; suchkatalog = 0012800000 &amp; reloadmenu = 1 </td><td></td></tr><tr><td> 13 </td><td> Vario clipe Aplicando Fórceps </td><td> Aesculap </td><td> FE502T </td><td colspan="3"> http://www.aesculapusa.com/assets/base/doc/DOC697_Rev_C-Yasargil_Aneurysm_Clip.pdf </td><td></td></tr><tr><td> 14 </td><td> Vicryl 6-; 0 (Ethicon) </td><td> Johnson e Johnson </td><td> J105G </td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 15 </td><td> suporte de agulha micro Diethrich </td><td></td><td> 11-510-20 </td><td colspan="3"> http://trimed-ltd.com/Products/Suture-Instruments/Micro-Needle-Holders-With-Tungsten-Carbide-Inserts/Ref-11-29.html </td><td></td></tr><tr><td> 16 </td><td> Temgesic (buprenorfina) </td><td> Schering-Plough </td><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td> 17 </td><td> Stesolid (diazepam) </td><td> Actavis </td><td></td><td colspan="3"></td><td> Também conhecido como Valium </td></tr><tr><td> 18 </td><td> Pedamix </td><td> Fresenius Kabi </td><td></td><td colspan="3"> http://www.helsebiblioteket.no/retningslinjer/pediatri/mage-tarm-lever-ern%C3%A6ring/parenteral-ern%C3%A6ring </td><td></td></tr><tr><td> 19 </td><td> Klorhexidinsprit (gluconato de clorexidina) </td><td> Fresenius Kabi </td><td> D08A C02 </td><td colspan="3"> http://www.felleskatalogen.no/medisin/klorhexidinsprit-fresenius-kabi-klorhexidinsprit-farget-fresenius-kabi-fresenius-kabi-560639 </td><td></td></tr></tbody></table> Tabela 1. Lista de ferramentas e equipamentos para a geração de uma lesão compressão da medula espinhal impulsionado-clip em um rato neonatal. <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig1.jpg" /> Figura 1. Esquema de configuração anestesia. Este esquema apresenta a configuração anestesia projetado para o rato neonatal, com uma câmara de sono para anestesia inicial e um dispositivo de máscara nariz para anestesia continuado durante a cirurgia. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig2.jpg" /> Figura 2. ferramentas principais e clipe de compressão. (A) As ferramentas usadas durante o procedimento. Os números correspondem à anotação utilizado na Tabela 1. (B e C) Um aneurisma temporária mini-Yasargil grampo com a ponta de cada lâmina cortada manualmente para baixo para cerca de 150 um de espessura. Uma rolha feita de um pedaço de tubo de polietileno (Tabela 1) é colocada sobre uma das lâminas para evitar o encerramento completo do grampo. Barra de escala: 2 mm. App: aplicador de clipe (# 12 em A); St:. Stopper <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53498/53498fig2large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig3.jpg" /> Figura 3. Landmark para a avaliação pré-operatória de nível espinhal em camundongos ICR neonatal. (A) Vista lateral de um rato P1 ICR com leite branco nos s<html> tomach. A parte rostral do estômago corresponde ao nível da coluna vertebral T12-T13. (B) de rato P1 ICR sob anestesia em uma posição propensa. Apesar de ser mais difícil de visualizar que em (A), o estômago cheio de leite é reconhecível. A parte rostral do estômago indica o nível da coluna vertebral T12-T13. Barras de escala: 0,5 cm. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/53498/53498fig4.jpg" /> Figura 4. Dorsal laminectomia. (A) Dissecção da musculatura paravertebral. Note-se que nesta idade o processo espinhal é subdesenvolvido. (B) de corte transversal da lâmina com uma tesoura fina. (C) A introdução de uma lâmina de uma pinça fina entre a lâmina e a dura-máter. O ponto de entrada é mostrado pela seta. (D) A remoção da lâmina. Barra de escala: 2 mm. files / ftp_upload / 53498 / 53498fig5.jpg &quot;/&gt; Figura 5. histológica e os resultados comportamentais após a lesão compressão da medula espinhal em P1. (A) eosina e hematoxilina em secções da espinal medula de um rato ferido (1 dia após a lesão) em diferentes distâncias do epicentro lesão. (B) os traços representativos de membros anteriores e dos membros posteriores trajetórias observada 6 horas após a lesão ou após uma laminectomia controlo simulado. Traços na parte superior representam trajetórias vistos de uma vista lateral do animal. Traços na parte inferior representam trajetórias vistos do aspecto ventral do animal. Ver também uma. Barra de escala: 250? m. DH: corno dorsal; G, para a esquerda; R: right; SCC: compressão da medula espinhal; VH:. Corno anterior <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53498/53498fig5large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt = &quot;Figura 6&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 53498 / 53498fig6.jpg&quot; /&gt; Figura 6. curvas de crescimento comparativos. Histograma mostrando o ganho de peso de ratos feridos não-operado e SCC do dia pós-natal 1 ao dia pós-parto 9.

Este artigo descreve um método para gerar uma lesão por compressão da medula espinhal (LM) reprodutível no camundongo neonatal. O modelo fornece uma plataforma vantajosa para estudar os mecanismos de plasticidade adaptativa subjacentes à recuperação funcional espontânea.

A Neonatal do rato Spinal Cord Injury Compression Modelo

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

O objetivo geral deste procedimento é realizar uma lesão por compressão da medula espinhal reprodutível em um camundongo neonatal. Isso é alcançado primeiramente anestesiando profundamente o camundongo e, em seguida, realizando uma laminectomia dorsal para expor a medula espinhal.E finalmente, realizando a lesão por compressão. Recentemente, estabelecemos um modelo de camundongo neonatal para lesão da medula espinhal e demonstramos que camundongos neonatais exibem um grau surpreendente de plasticidade adaptativa. O estudo desse mecanismo subjacente à recuperação pode fornecer informações importantes, que poderiam ser utilizadas no tratamento de lesões da medula espinhal.Neste vídeo, demonstraremos como realizar uma lesão por compressão da medula espinhal em um camundongo com um dia de vida. Este procedimento cirúrgico inclui anestesia, laminectomia e duas compressões epidurais realizadas com pinças. Preparação para a cirurgia.A cirurgia é realizada sob um microscópio estereoscópico. Coloque uma placa aquecida sob o microscópio. É fundamental manter o filhote aquecido para evitar morte súbita durante a cirurgia.Coloque uma manta cirúrgica ou uma folha grande de papel laboratorial macio e limpo sobre o tapete aquecido. Para analgesia pré-cirúrgica, prepare uma seringa de insulina, 0,3 mililitros, agulha 30, preenchida com o anestésico local Marcaine, diluído com PBS estéril, até uma concentração final de 2,5 miligramas por mililitro. Para incisão da pele, remoção do músculo e laminectomia, utilize uma microfaca, pinça fina e tesoura de iridectomia fina.Observe que aqui também utilizamos pin&ccedil;as cujas pontas dobramos para formar dentes. Essas funcionam melhor do que as pin&ccedil;as dentadas comercialmente dispon&iacute;veis, porque os dentes precisam ser muito pequenos. Para a compress&atilde;o da medula espinhal, utilize um Clip Mini para Aneurisma Tempor&aacute;rio Yasargil especialmente modificado, que descreveremos posteriormente.Um pequeno trecho de tubo capilar de plástico também é necessário para fazer uma tampinha que impeça o fechamento completo do grampo, além de um aplicador de grampo para colocá-lo. Para sutura, utilize um porta-agulha e uma tesoura pequena para cortar o fio. Para o tratamento da dor, dilua Temgesic em PBS estéril até 0,03 miligramas por mililitro.A lesão da medula espinhal envolve uma compressão por meio de um clipe, utilizando um Miniclipe Aneurismal Temporário Yasargil. Antes do uso, o clipe precisa ser modificado mecanicamente, reduzindo a espessura das lâminas para 150 micrômetros com uma pedra de afiar. Pouco antes da cirurgia, corte um pequeno trecho de tubo plástico e coloque-o sobre uma das lâminas do clipe.O tubo atua como um tampão para impedir o fechamento completo do clipe. Anestesia e analgesia. Para anestesia gasosa, utilizamos um vaporizador de suprano conectado a um tanque de oxigênio.O isoflurano é o anestésico que é vaporizado em oxigênio puro. Para administrar a mistura de isoflurano e oxigênio ao camundongo, é necessário construir uma máscara nasal adaptada para neonatos. Os camundongos neonatos são tão pequenos que a máscara pode ser feita a partir da ponta de uma seringa, que serve como entrada para o tubo plástico conectado à saída do vaporizador.No lado da máscara, faça um pequeno orifício para conectar um tubo de evacuação que termine ou em uma bomba de vácuo regulada, com uma unidade de coleta, ou simplesmente em uma capela de exaustão. Confeccione uma câmara de excesso de anestesia usando uma placa de Petri plástica de 150 por 25 mililitros. Em um dos lados, faça um orifício grande o suficiente para acomodar a cabeça do camundongo.No lado oposto, faça dois orifícios menores com o diâmetro do tubo plástico. Por fim, faça um orifício de evacuação, menor que os demais, na parte superior do recipiente. Corte a ponta de uma ponteira de pipeta de 250 microlitros e insira-a nesse último orifício.A ponta da pipeta funciona como um conector para o tubo de evacuação que está ligado a um dispositivo de vácuo ajustado para uma leve pressão negativa. Usando Plasticina, fixe a máscara logo dentro do orifício para a cabeça do camundongo. Com fita adesiva ou Plasticina, prenda o tubo plástico ao teto da câmara, certificando-se de que os tubos estejam bem posicionados nos orifícios apropriados.Coloque a câmara sobre o cobertor cirúrgico sob o microscópio. Todo o sistema está representado neste esquema. Uma torneira de três vias é colocada na saída do vaporizador.Aqui, o caminho para a câmara de sono está livre, enquanto o caminho para a máscara está bloqueado e o camundongo pode ser colocado na câmara de sono para iniciar a sedação. Girar a torneira de três vias para a direita permite que o gás flua para a máscara e bloqueia o caminho para a câmara de sono. Nessa configuração, o camundongo pode ser transferido para a máscara.A vazão de gás é removida por vácuo da câmara de transbordamento. Selecione uma cria de camundongo que tenha acabado de ingerir leite, conforme evidenciado pela cor branca visível através da pele. Coloque a cria na câmara de sono e introduza Isoflurano vaporizado a 4% para alcançar uma sedação rápida.Transfira o filhote para a máscara. Posicione cuidadosamente o focinho do camundongo bem dentro da máscara para garantir exposição suficiente ao gás anestésico. Gire a torneira de três vias para desviar o gás em direção à máscara.Administre por via subcutânea 50 microlitros de Marcaine a 2,5 miligramas por mililitro no local desejado para a cirurgia. Tenha cuidado para não injetar muito profundamente, pois os vasos sanguíneos podem ser facilmente atingidos e a introdução da Marcaine em um vaso é letal. Remova o excesso de Marcaine com uma pequena compressa estéril.Laminectomia dorsal. Reduza a concentração de isoflurano para um a dois por cento. Após alguns minutos, perfure a pele com uma microtesoura e faça uma abertura de oito a nove milímetros de transversão, puxando suavemente a pele em direção rostrocaudal.Uma abertura de transferência é muito mais conveniente e proporciona melhor acesso lateral para realizar a laminectomia. Retraia as bordas da incisão cutânea a partir do tecido subjacente, inserindo pedaços de esponjistatina, subcutaneamente na região rostral e caudal à incisão. Corte os músculos pré-vertebrais com tesoura fina para expor a coluna vertebral.Observe que, no neonato, o processo espinhoso ainda não está totalmente desenvolvido. Identifique a linha média e corte a lâmina transversalmente com a tesoura fina. Tenha cuidado para não cortar muito profundamente, pois isso pode danificar potencialmente a dura-máter e até mesmo a medula espinhal.Coloque cuidadosamente uma lâmina de uma pinça fina entre a lâmina e a dura-máter. Segure a lâmina fechando a pinça e levante-a com cuidado até que se solte, deixando a dura-máter intacta. Repita o passo duas a três vezes para obter uma laminectomia de um a dois segmentos.Controle o sangramento usando pequenos pedaços de esponjistatina. Usando a pinça fina como rongeur, remova partes das articulações facetárias bilateralmente para obter espaço suficiente para posicionar o miniclips de aneurisma modificado dentro do canal vertebral. Este passo frequentemente resulta em sangramento que pode ser controlado usando pequenos pedaços de esponjistatina.Para melhorar a visibilidade, às vezes é vantajoso lavar com PBS estéril morno, a 37 graus centígrados. Gerando a lesão por compressão da medula espinhal. Abra o clipe e posicione as lâminas em ambos os lados da medula espinhal nos espaços entre as articulações facetárias e a medula.Certifique-se de que as lâminas estejam inseridas profundamente o suficiente para abranger a parte ventral da medula espinhal. Feche rapidamente o clipe, mantendo o aplicador no lugar, para evitar que o clipe deslize para trás. Após 15 segundos, solte o clipe rapidamente.Limpe a ferida utilizando spongistatina. Para obter uma compressão simétrica, inverta as lâminas e realize uma segunda compressão por 15 segundos na orientação oposta. Sutura. Remova os pedaços de spongistatina que foram colocados sob a pele no início da cirurgia e feche a pele com pontos 6,0.Injete 0,05 mililitros de Temgesic a 0,03 miligramas por mililitro, subcutaneamente com uma seringa de insulina de 30 graus e coloque a cria em um ambiente com temperatura controlada a 30 graus centígrados por algumas horas. Para reduzir o comportamento materno agressivo em relação à cria operada durante a primeira noite, após a cirurgia, prepare uma solução de Diazepam diluída em PBS limpo, a 0,1 miligrama por mililitro, para injeção intraperitoneal a oito gramas por quilograma. Resultados.Como mostrado neste gráfico, seis horas após a compressão da medula espinhal, em níveis torácicos baixos, as patas traseiras dos camundongos lesionados estão paralisadas, enquanto as patas dianteiras não estão. No caso dos animais controle simulados, que apenas receberam uma laminectomia, tanto as patas traseiras quanto as dianteiras são altamente móveis. A seção da medula espinhal mostra sangue residual no local da lesão.Além disso, o tecido é translúcido, sugerindo perda tecidual, o que frequentemente leva à formação de uma cavidade vários dias depois. Conclusão. Após este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como gerar uma lesão por compressão da medula espinhal em um camundongo neonatal. A vantagem do uso de camundongos neonatais é que podemos utilizar métodos específicos para investigar a plasticidade adaptativa, os quais não podem ser utilizados em camundongos adultos.Além disso, o modelo fornece uma plataforma para testar abordagens terapêuticas, como o transplante de células-tronco.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Fonte: Elzat, E. Y. Y., et al., Estabelecendo um modelo de lesão medular por contusão em camundongos com base em uma técnica minimamente invasiva. J. Vis. Exp. (2022). Este vídeo demonstra o método para induzir uma lesão de contusão na medula espinhal no nível T9 em um modelo de camundongo, usando uma plataforma coaxial de lesão da medula espinhal. Um peso é colocado na medula espinhal de nível T9 que cria uma contusão que causa imediatamente descoloração e inchaço do tecido.

Induzindo uma contusão da medula espinhal em um modelo de camundongo usando uma plataforma coaxial de lesão da medula espinhal

Fonte: Lakshman, N., et al. Um ensaio de neuroesfera para avaliar a ativação endógena de células-tronco neurais em um modelo de camundongo com lesão mínima da medula espinhal. J. Vis. Exp. (2018). Este vídeo demonstra a ativação e migração de células-tronco neurais (NSCs) em um modelo de lesão medular de camundongo. Para expor a medula espinhal, uma vértebra da região torácica da coluna vertebral é removida de um camundongo anestesiado. Uma lesão superficial é então criada na substância branca...

 Um modelo mínimo de lesão medular para estudar a ativação e migração de células-tronco neurais

Fonte: Kumar, S., et. al. Modelo de camundongo de úlceras por pressão após lesão medular. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra uma indução detalhada de lesão medular em camundongos. O camundongo anestesiado é dissecado para expor as vértebras T9-T10 e seus processos espinhosos são removidos. A medula espinhal exposta é então seccionada para infligir a lesão. A área cirúrgica é então fechada e o camundongo pode se recuperar.

Gerando um modelo de camundongo com uma lesão na medula espinhal

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Neural Stem Cell Transplantation em Experimental contusão Model of Spinal Cord Injury

Os modelos de lesão medular devem ser altamente reprodutíveis. Demonstramos que o modelo de compressão com fórceps calibrado de lesão medular é um método cirúrgico fácil de usar para gerar lesões reprodutíveis na medula espinhal murina.

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Indução da lesão da medula espinhal tipo transssecção completa em camundongos

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O presente protocolo simulando a síndrome da medula central (SCC) em camundongos melhorou a repetibilidade e minimizou os danos operacionais aos animais experimentais, evitando a ruptura excessiva da estrutura anatômica. A estratégia deste estudo é vantajosa, pois permite a pesquisa dos mecanismos de lesão ao produzir resultados consistentes.

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