Quantitativa de autofluorescência de Avaliação de Doenças da retina

O objetivo geral da autofluorescência quantitativa, ou qAF, é avaliar o nível geral de lipofuscina nas células de suporte da retina, o epitélio pigmentar da retina, ou RPE, em olhos saudáveis e doentes. Essa técnica pode ajudar a responder a questões-chave na biologia celular da retina, como a saúde do epitélio pigmentar da retina interage com o desenvolvimento da degeneração macular relacionada à idade, ou DMRI. A principal vantagem dessa técnica é que ela permite a determinação de níveis absolutos de autofluorescência de lipofuscina no fundo e, portanto, o acompanhamento quantitativo e reprodutivo entre os pacientes, entre as sessões de imagem dos pacientes e em grandes populações de estudo.

Antes da imagem, configure adequadamente a opthamoscopia a laser de varredura confocal, ou CSLO, para aquisição de dados de acordo com as instruções do fabricante. Para montar uma referência fluorescente interna, adquirida do fabricante, gire a lente para removê-la, desparafuse o anel de metal da máquina e substitua-o pelo novo anel de metal que contém a referência. É essencial que as pupilas estejam dilatadas em pelo menos 6 mm para a passagem ininterrupta da luz.

Com 0,5% de tropicamida e 2,5% de fenilefrina, dilate as pupilas do paciente em pelo menos 6 mm, o que é essencial para a passagem ininterrupta da luz para ver e medir o fundo. Posicione adequadamente o paciente no CSLO com o queixo apoiado no apoio de queixo, a testa encostada no apoio de testa e o canthi lateral devidamente alinhado com os indicadores. Para adquirir imagens de linha de base, primeiro imagine o fundo com refletância no infravermelho próximo, ou luz infravermelha, a fim de centralizar a câmera sobre a mácula e obter um foco aproximado.

Com o paciente posicionado corretamente, mude a configuração de hardware no painel de controle para o modo de imagem IR, posicione manualmente a câmera até que o fundo esteja em foco total e tire uma imagem. Ajuste a configuração no painel de controle para IROCT, que usa tomografia de coerência óptica de domínio espectral, ou SDOCT, em conjunto com imagens de infravermelho, para avaliar a mácula quanto à doença subjacente. Use as guias presentes na janela de imagem para orientar corretamente a OCT para a imagem IR do fundo de olho.

Para obter a qualidade SDOCT ideal, posicione a câmera de forma que a imagem OCT fique no terço superior de sua janela de imagem. Adquira pelo menos uma varredura de linha horizontal através da fóvea e abrangendo todo o campo de imagem. Para configurar a imagem qAF, use a aquisição de imagem de alta velocidade, o que diminui o risco de perda de sinal devido ao movimento do paciente e bloqueio da luz pela íris ou pálpebras.

Use Média de 9 quadros, que captura rápida e sequencialmente nove quadros de imagem que são calculados para reduzir o ruído e o artefato. Escolha um campo de 30 x 30 graus, que se refere aos graus de área da retina capturados durante a aquisição da imagem. Depois de avisar o paciente sobre a luz azul, ative o modo AF e alinhe o eixo da câmera para que a tela seja preenchida ao máximo com AF de fundo de olho, com escurecimento mínimo dos lados e cantos da imagem.

Se os pacientes tiverem dificuldade em tolerar a luz azul brilhante, afaste a câmera do olho para iniciar a imagem e leve lentamente a câmera em direção ao paciente até que o fundo esteja totalmente visível. Manualmente ou com o joystick do opthamoscópio, ajuste o alinhamento da câmera movendo o CSLO para reposicionar a câmera de forma que o sinal AF esteja em seu nível mais alto em todo o campo, em vez de obter a imagem mais nítida. Durante a aquisição da imagem, pixels coloridos visíveis na referência interna ou no fundo indicam saturação excessiva e, portanto, perda de sinal.

Exponha totalmente a retina à luz AF por pelo menos 20 segundos para minimizar a absorção de luz pela rodopsina na retina sensorial durante a imagem. Use esse período para otimizar o alinhamento, o foco e a sensibilidade da câmera. Faça com que os assuntos pisquem antes de cada aquisição de imagem, pois um filme lacrimal fresco melhora a qualidade do sinal.

Evite as pálpebras no plano de aquisição e tire a imagem. É importante gerar pelo menos duas imagens de alta qualidade por sessão de imagem para análise de dados. Execute o processamento pós-imagem usando o software CSLO para calcular a média da pilha de nove quadros, para aumentar a relação sinal-ruído.

Realize a análise de imagem de acordo com o protocolo de texto. Como mostrado aqui, em olhos saudáveis, a FA emitida pelo EPR é distribuída de maneira relativamente uniforme por todo o fundo. A intensidade reduzida é observada na região macular central devido ao bloqueio da luz pelo pigmento macular e nas laterais e cantos devido à ótica do olho e da câmera.

Os vasos devem estar escuros e em foco claro. Esta figura representa uma apresentação correspondente do mapa de calor dos níveis de qAF a partir desta figura. As cores mais frias correspondem a áreas de menor intensidade de AF, enquanto as cores mais quentes correspondem a áreas de maior intensidade de AF.

A intensidade máxima é geralmente observada no segundo anel concêntrico de oito segmentos, e as intensidades médias nessa área são usadas para a maioria das análises de dados. Aqui é mostrada uma análise representativa do olho com DMRI, demonstrando atrofia geográfica, uma forma avançada de DMRI. Essa forma de DMRI resulta em áreas localizadas de perda de EPR, evidenciada por FA acentuadamente reduzida ou ausente, e causa perda progressiva da visão central.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de selecionar cuidadosamente os pacientes candidatos e obter imagens de alta qualidade reproduzíveis para maximizar a qualidade dos dados. O uso deste procedimento pode permitir o acompanhamento longitudinal da saúde da retina para determinar o progresso das degenerações da retina. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores da área de oftalmologia acompanharem e analisarem as degenerações da retina.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como usar a autofluorescência quantitativa para avaliar seus pacientes com degenerações da retina. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.