Name: Primária endodérmico epitelial Cultura de Células da gema Sac Membrana de japoneses codorniz Embriões (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: Aprenda a cultivar células epiteliais endodérmicas primárias de embriões de codorna japonesa para estudar o transporte de lipídios e a utilização de nutrientes durante o desenvolvimento aviário.

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O financiamento para o desenvolvimento de protocolo atual é particularmente apoiada por &quot;Aim para o Plano Universidade Top&quot;, da Universidade Nacional de Taiwan, Taiwan (concessão ID-104R350144), bem como o Ministério da Ciência e Tecnologia de Taiwan (ID concessão: a maioria dos 104 -2313-B-002-039-MY3). Agradecemos especialmente o Centro de Biotecnologia da Universidade Nacional de Taiwan para fornecer uma sala de animais e espaço de laboratório para o estudo atual.

NOTA: Este procedimento é uma modificação de um protocolo de cultura modelo de galinha desenvolvido por Bauer et al 2013 e Nakazawa et al, 2011. 2,9.. 1. Prepare Healthy Embryonic Dia 5 embriões de codorniz japonesa <ol><li> Coloque 1 do sexo masculino e 3 do sexo feminino sexualmente maduros codornas japonesas juntos na mesma gaiola. Alimentação de alimentação e água ad libitum. Ajustar a luz na sala de animal para 14 horas de luz e 10 horas de escuridão. </li><li> Recolher os ovos fertilizados em sacos de plástico a cada dia no período da tarde e mantê-los em um 16 ° C geladeira para retardar a taxa de crescimento dos embriões. </li><li> Após recolha de um número suficiente de ovos dentro de um período de duas semanas, incubar os ovos fertilizados de uma incubadora a 37 ° C com bom arejamento durante cinco dias. </li></ol> 2. Prepare Basal Médio e soluções de lavagem <ol><li> Use DMEM / F-12 (ajustado a pH 7,2) como meio de crescimento, e completá-locom o novo 10% de soro vitelo recém-nascido (NBCS) e 1% de Pen-Strep Ampho. Solução (PSA; penicilina, 10 5 unidades / L; estreptomicina, 100 mg / l; anfotericina B, 0,25 mg / L). </li><li> Preparar a solução salina tamponada com fosfato (PBS) a uma concentração 10x para o armazenamento; usar a solução 1x PBS (contendo NaCl, 137,93 mM; KCl, 2.667 mM; KH 2 PO 4, 1.471 mM; Na 2 HPO 4 7H 2 O, 8,06 mM; acertar a pH 7,2) para lavar e umedecer o tempo membrana saco vitelino separação da endoderme de gema de ovo e albumina. </li><li> Use meio DMEM (ajustado para pH 7,2) para re-suspender as pelotas endoderme. </li></ol> 3. Recolha de EECS primária de japoneses codorniz YSMs <ol><li> Incubar os ovos recolhidos durante 5 dias (passo 1.3). Examine os ovos por um candler ovo para confirmar o desenvolvimento embrionário normal. NOTA: No dia embrionário 5, o limite da YSM mesoderme é muito clara e as 3 camadas embrionárias são menos bem-ligados entre si, por isso é fácil de obendoderme Tain. Utilize apenas os ovos que apresentem o desenvolvimento normal circulação capilar para coleções YSM. </li><li> Limpar a casca de ovo com cuidado usando água doce e 75% de etanol. Abra a casca de ovo a partir da posição das células de ar por um par de tesouras, descascar delicadamente fora e recolher toda a YSM por uma pinça e coloque em um prato de cultura 10 centímetros preenchido com 37 ° C 1x PBS. </li><li> Utilizando um par de tesouras remover o embrião, gema e clara de ovo, e lavar cuidadosamente o YSM com 1x PBS três vezes e colocar YSM em solução de PBS numa placa de cultura de 10 cm. </li><li> Use uma pinça e um par de tesouras para remover o ectoderme de YSM. Use 2 fórceps, um para segurar firmemente a camada de células endoderme, e a outra para segurar o mesoderme capilar. </li><li> Sob um microscópio de dissecação, separar e separar a endoderme a partir da borda da mesoderme em direcção ao embrião. Recolhe-se o endoderme amarelo claro em 50 ml de tubos de centrífuga usando um conta-gotas e o lugar em 15 ml de meio de crescimento numa Wat 37 ° Cbanho er até que todas as coleções de tecidos estão concluídas. </li></ol> 4. A digestão do Endoderma fatias por digestão de colagenase <ol><li> Recentemente dissolver 6,5 unidades de colagenase tipo IV em 10 ml de DMEM. </li><li> Centrifugar os tubos de 50 ml (3,4) a 130 xg durante 3 minutos à temperatura ambiente. Aspirar o meio e colocar toda a endoderme em uma placa de cultura de 6 centímetros, usando uma pipeta. Adicionar solução de colagenase 1 ml a esta placa de cultura. </li><li> Cortar a endoderme recolhidos a partir de 2 embriões de codorniz com um par de tesouras curvas até que o tamanho de cada fatia é de aproximadamente 2 a 3 mm. Usar um conta-gotas, recolher todas as fatias para um tubo de centrífuga de 50 ml, juntamente com 9 ml de solução de colagenase fresco. </li><li> Digerir o tecido com colagenase durante 30 minutos num banho de água com agitação a 37 ° C a 175 rpm. Esta digestão parcial com colagenase é utilizado para melhorar a proliferação de células dos explantes. </li><li> Centrifugar a 130 xg durante 3 minutos à temperatura ambiente e suavemente remover a fracção do sobrenadante utilizando uma pipeta. Lava-se a pelete por suspensão em 20 ml de DMEM e remover a fracção do sobrenadante após a centrifugação de 130 x g durante 3 min. </li><li> Re-suspender o sedimento com 12 ml de meio de crescimento (DMEM / F12 com 10% de NBCS e 1% de PSA) e sementes suavemente e igualmente numa placa de 24 poços (cada poço uma solução de células com 500 ul). </li><li> Incubar explantes de tecido a 37 ° C em 5% de CO 2 em ar durante 2 dias para permitir que as células a proliferar para fora dos tecidos. </li><li> Incubar as células por mais 2 dias e caracterizar quanto à viabilidade celular por um protocolo de ensaio de viabilidade celular. 15 NOTA: Living células manter um ambiente de redução dentro do citoplasma. Resazurina, o ingrediente activo, é, de um composto não-tóxico permeável célula que é azul em cor e virtualmente não fluorescente. Quando adicionado a culturas de células, a Resazurina é reduzida a resorufina no citosol por enzimas mitocondriais. Resorufina é de cor vermelha e altamente fluorescente. As células viáveis ​​converter continuamente resazurina a resorufina, increasing a fluorescência global e cor do meio de cultura de células circundante. </li><li> Realizar endoderme célula epitelial de isolamento de ARN total, a transcrição e quantitativa PCR em tempo real de expressão de ARNm de gene marcador reversa como descrito 16,17. <ol><li> Use de PCR de transcriptase reversa para detectar SOAT1 ARNm (sentido directo: 5&#39;-GAAGGGGCCTATCTGGAACG-3 &#39;; anti-sentido: 5&#39;-ATCTGCACGTGACATGACCA-3&#39;; produto de PCR = 168 pb) como um marcador específico para as células CEE. Use β-actina de ARNm (sentido directo: 5&#39;-TGGTGAAGCTGTAGCCTCTC-3 &#39;; anti-sentido: 5&#39;-GTGATGGACTCTGGTGATGG-3&#39;; produto de PCR = 151 pb), como um gene de manutenção e o controlo interno. </li><li> Use electroforese em gel para detectar o tamanho do produto de RT-qPCR. Prepare 1% de gel de agarose, e misturam 10 jil do produto qPCR com 2 ul de corante de carga. Carga de 10 ul de mistura em cada poço em gel de agarose a 1%, e executar o gel por 100V durante 30 minutos. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Abeyrathne, E. D., Lee, H. Y., Ahn, D. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg+white+proteins+and+their+potential+use+in+food+processing+or+as+nutraceutical+and+pharmaceutical+agents--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Poult+Sci%22%5BJournal%5D)">Egg white proteins and their potential use in food processing or as nutraceutical and pharmaceutical agents--a review.</a> Poult Sci. 92 (12), 3292-3299 (2013).</li>
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<li>Yoshizaki, N., Soga, M., Ito, Y., Mao, K. M., Sultana, F., Yonezawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-step+consumption+of+yolk+granules+during+the+development+of+quail+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Growth+Differ%22%5BJournal%5D)">Two-step consumption of yolk granules during the development of quail embryos.</a> Dev Growth Differ. 46 (3), 229-238 (2004).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22alamarBlue+Cell+Viability+Assay+Protocol%22">alamarBlue Cell Viability Assay Protocol</a>. , Source: 
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</ol>

Não há interesses financeiros concorrentes ou outros conflitos de interesse. Não recebemos nenhum financiamento de nenhuma empresa privada.

Uma vez que o sistema de cultura anterior tem apenas um sucesso limitado, é necessário um sistema de cultura melhor. A endoderme codornizes YSM japonesa requer tratamento com enzimas proteolíticas tais como a colagenase para soltar as junções célula-célula para alcançar um melhor desempenho do crescimento nos explantes ex-vivo. Os nossos dados mostram que o número de células de tratamento digestão parcial foi maior do que a partir da cultura de tecido não digerido após a sementeira, durante 2 dias (Figura 1).</s...

O recurso principal nutricional do embrião aviário é gema, composto de 33% de lípidos, proteínas 17%, e 1% de cinzas. 1 durante o desenvolvimento embrionário, a membrana vitelina (YSM) cresce a partir de dentro da cavidade abdominal embrionário e cobre gradualmente a gema superfície. Começando no dia embrionário 2, a expressão de genes associados com o metabolismo dos lípidos e a angiogénese é gradualmente aumentada em YSM, e o YSM desenvolve lentamente projecções das vilosidades semelhantes. Estas projecções 8,9 aumentar a absorção de nutrientes gema para suportar o desenvolvimento embrionário. O YSM é um tecido extra-embrionário que contém três camadas germinativas, endoderme, mesoderme e ectoderme. 14 do ectoderma saco vitelino enfrenta a clara e links com a membrana vitelina para cobrir suavemente o saco vitelino. As células epiteliais da endoderme são confrontados diretamente para a gema de ovo e servir como portais de utilização de nutrientes. 6 À medida que a ADM se expande, células epiteliais endodérmico (EECS) pode ser dividido por shape e funcionalidade em dois grupos, a área vitelínicas e vasculosa área. 7 vitelina área é composta por células da endoderme e está distante do embrião; vasculosa área é composta por células mesodérmicas e cobre EECS diferenciadas com vasos sanguíneos e tecidos conjuntivos. Por dia embrionário 5, a gema é totalmente coberta por ectoderma e endoderma de YSM ea área vascular tem crescido rapidamente. O YSM absorve, recompõe e liberta lípidos (como-gema derivado lipoproteína de muito baixa densidade) e proteínas no sistema circulatório embrionário. 9, 2 Assim, foi estabelecido um embrionário sistema de codorniz japonesa primária endodérmica epitelial de cultura de células, para estudar os mecanismos de lípido utilização em YSM durante o desenvolvimento embrionário aviária. Os lípidos tais como triglicerídeos, lecitina, de fosfolípidos e ésteres de colesterol (CE) são as fontes de energia primárias para embriões de aves. Nas fases iniciais de desenvolvimento, lípidos da gema são Composed de apenas 1,3% do CE e ele sobe para 10-15% a meio do período de desenvolvimento embrionário aviária 3, 11. éster de colesterol é sintetizado a partir do colesterol, esteróis O-aciltransferase 1 (SOAT1) em YSM embrião aviária. 4 A forma de armazenamento de colesterol é CE, CE é realizada nas lipoproteínas e lipoproteínas são transportados pela circulação para os tecidos. 13 Uma semana antes escotilha há um crescimento rápido dos embriões de aves. Aproximadamente 68% do conteúdo de lípidos restantes na gema são absorvidos durante esta fase. 10 O mecanismo pelo qual a gema de lípidos são utilizados pode ser clarificada por um modelo de pesquisa CEE. Um protocolo de cultura de frango CEE foi estabelecido para atingir este objectivo de pesquisa. 2, 9 No entanto, devido à baixa taxa de sucesso de explantes de tecidos, um processo de cultura de células CEE melhorada é necessária para estudar a função de certas enzimas e proteínas na mediação de a utilização de nutrientes pelos embriões de aves durante o desenvolvimento.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium</td><td>Gibco da Life technologies</td><td>12800-017 10 X 1 L</td><td>Para lavar os pellets EECs</td></tr><tr><td>D-MEM/F-12</td><td>Gibco da Life technologies</td><td>12400-024 10 X 1 L</td><td>Como meio basal na cultura de EECs</td></tr><tr><td>NBCS</td><td>Gibco da Life technologies</td><td>16010-159</td><td>Como o soro de fornecimento na cultura de EECs</td></tr><tr><td>Pen-Strep Ampho. Solução</td><td>BI (Indústrias Biológicas)</td><td>03-033-1B 100 ml</td><td>Para atenuar a possível infecção&nbsp;</td></tr><tr><td>Colagenase Tipo IV</td><td>Gibco da Life technologies</td><td>17104-019 1 g</td><td>&nbsp; A colagenase é uma protease com especificidade para a ligação entre um aminoácido neutro (X) e glicina na sequência Pro-XGly-Pro. Como a protease para dissociação de células do tecido primário.</td></tr><tr><td>placa de 24 poços</td><td>FALCON&reg; </td><td>REF-353047</td><td>Para EECs para anexar e estender</td></tr><tr><td>tubos de centrífuga PP de 50 ml</td><td>Corning&reg; CentriStarTM</td><td>430829</td><td>Para transporte de membranas e digestão enzimática</td></tr><tr><td>Tubo de fundo cônico de 50 ml com tampa</td><td>PRO TECH</td><td>CT-50-PL-TW</td><td>Para transporte de membranas e digestão enzimática Banho de</td></tr><tr><td>agitação recíproca</td><td>DEAGLE</td><td>SB302</td><td>Para melhor digestão enzimática nas membranas</td></tr></tbody></table>

primária endodérmico epitelial cultura de células da gema sac membrana de japoneses codorniz embriões

Primary Endodermal Epithelial Cell Culture from the Yolk Sac Membrane of Japanese Quail Embryos

Nós estabelecemos um modelo de cultura de células epiteliais endodérmico (CEE) para estudar a função de certas enzimas e proteínas na mediação de utilização de nutrientes por embriões de aves durante o desenvolvimento. Fertilizados ovos de codorniz Japonesa foram incubadas a 37 ° C durante 5 dias e, em seguida, yolk sac membranas (YSM) foram recolhidas para se estabelecer o sistema de cultura de CEE. Isolamos a camada endoderma embrionário de YSM, e cortado da membrana em 2 - 3 mm pedaços e parcialmente digerido com colagenase antes de semear em placas de cultura de 24 poços. O EECS proliferam para fora do tecido e estão prontos para os estudos de cultura de células. Descobrimos que o EECS tinha características típicas de YSM in vivo, por exemplo, acúmulo de gotículas lipídicas, expressão de esteróis O-aciltransferase e lipoproteína lipase. O tratamento a digestão parcial aumentou significativamente a taxa de sucesso da cultura CEE. Utilizando o EECS, foi demonstrado que a expressão de SOAT1 foi regulado pelo AMPc dproteína quinase ependent Um caminho relacionado. Este sistema de cultura de codorna japonesa CEE primária é uma ferramenta útil para estudar o transporte de lipídios embrionário e para esclarecer o papel de genes envolvidos na mediação de utilização de nutrientes em YSM durante o desenvolvimento embrionário aviária.

A fim de alcançar o objetivo de estabelecer um modelo de celular consistente e útil, nós precisamos de alargar e estabilizar a taxa de proliferação e desempenho dos EECS aviária. Comparamos a incubação directa da endoderme sem digestão com enzima endoderme parcialmente digerido com enzimas proteolíticas, tais como colagenase ou colagenase mais 0,6 L de dispase. Dispase é um amino-endopeptidase que hidrolisa as ligações peptidicas N-terminais de resíduos de aminoácidos não-polares. Consid...

Para estudar o mecanismo de utilização de lipídios nas membranas do saco vitelino durante os estágios finais do desenvolvimento embrionário aviário, estabelecemos um sistema primário de cultura de células epiteliais endodérmicas embrionárias de codorna japonesa.

Primária endodérmico epitelial Cultura de Células da gema Sac Membrana de japoneses codorniz Embriões

We established an endodermal epithelial cell culture model (EEC) for studying the function of certain enzymes and proteins in mediating nutrient ...

O objetivo geral deste procedimento de explante ex vivo é aprimorar a coleta e ampliar a aplicação de células epiteliais endodérmicas aviárias para estudar a função de enzimas e proteínas na mediação da utilização de nutrientes por embriões aviários. Este método pode ajudar a responder questões-chave sobre a utilização de lipídios durante a embriogênese aviária, como, por exemplo, como os lipídios da gema são empacotados e transportados da gema para o embrião nas fases posteriores do desenvolvimento. A principal vantagem desta técnica é que podemos obter com sucesso células epiteliais endodérmicas funcionais da membrana do saco vitelino de codornas japonesas, as quais podem ser utilizadas como um modelo para estudar o desenvolvimento embrionário aviário.Para começar, prepare uma solução de PBS 10x conforme descrito no protocolo textual. Dilua esta solução estoque de um para dez para preparar o PBS 1x, que será utilizado para lavar a membrana do saco vitelino durante a dissecação do endoderma. Para preparar o meio de crescimento para células epiteliais endodérmicas, ou EECs, suplemente primeiro o DMEM/F-12 com 10% de soro de bezerro recém-nascido e 1% de solução de penicilina, estreptomicina e anfotericina.Em seguida, insira a sonda de um medidor de pH no DMEM previamente preparado. Adicione três gotas de HCl normal ao meio, gota a gota, até que o pH seja ajustado para 7,2. Após coletar aproximadamente duas dúzias de ovos de codorna fertilizados, coloque-os verticalmente em recipientes para ovos, de modo que suas extremidades largas e não afiladas, onde estão localizadas as câmaras de ar, fiquem voltadas para cima.Em seguida, transfira os ovos para uma incubadora bem ventilada ajustada a 37 graus Celsius. Após cinco dias de incubação, examine os ovos com uma candeeira de ovos. Se os embriões tiverem se desenvolvido normalmente, espera-se observar uma estrutura circular de vasos capilares sob a câmara de ar.Selecione um ovo que demonstre desenvolvimento normal dos capilares e limpe a casca com água fresca e etanol 75%. Em seguida, abra a casca do ovo a partir da posição da câmara de ar usando uma tesoura. Use uma pinça para ajudar suavemente a despejar o conteúdo do ovo em uma placa de cultura vazia de 10 cm.Em seguida, use uma tesoura para destacar o embrião, a gema e qualquer albúmina da membrana do saco vitelino, abreviada como MVS. Após o isolamento, lave a MVS três vezes em PBS 1x e, então, transfira-a para um novo recipiente de 10 cm contendo PBS. Posteriormente, coloque o recipiente sob um microscópio estereoscópico.Em seguida, prossiga removendo qualquer resíduo de clara, que está adjacente à camada externa de ectoderma da membrana de saco vitelino (YSM), com tesoura. Continue usando uma pinça para levantar o ectoderma translúcido e o mesoderma estrutural do capilar vermelho a partir da borda do mesoderma na membrana do saco vitelino. Então, delicadamente, descasque juntos o ectoderma e o mesoderma para isolar a camada celular subjacente de endoderma.Em seguida, com um par de pin&ccedil;as, segure firmemente a camada de c&eacute;lulas endod&eacute;rmicas amarelas da membrana. Com outro par, segure o mesoderma capilar e prossiga puxando o mesoderma para longe da borda de jun&ccedil;&atilde;o entre o mesoderma e o endoderma. Usando um par de tesouras, corte a camada restante de endoderma amarelo e transfira-a para a placa de cultura de seis cent&iacute;metros preenchida com meio de crescimento.Usando um conta-gotas, transfira o endoderma de cor amarelo-claro da placa de cultura de seis centímetros para um tubo cônico de 15 mL após a coleta do YSM e, em seguida, adicione 15 mL do meio de crescimento previamente preparado. Coloque o tubo cônico em um banho-maria a 37 graus Celsius até que todas as coletas de tecido sejam concluídas. Comece dissolvendo 6,5 unidades de colagenase tipo IV em 10 mL de DMEM.Em seguida, centrifugue os tubos contendo endoderme a 130 ×g por três minutos à temperatura ambiente. Após a centrifugação, aspire o meio e use uma pipeta para transferir todas as amostras de endoderme para uma placa de cultura de seis centímetros. Então, adicione um mililitro de solução de colágeno à placa.Com tesoura curva, proceda a cortar o endoderma coletado de quatro embriões de codorna em fatias de aproximadamente dois a três milímetros de tamanho. Em seguida, colete as fatias em um tubo cônico de 50 mL e adicione nove mililitros de solução fresca de colagenase, que já está dentro do tubo cônico de 50 mL. Para melhorar a proliferação celular durante a fase de explante, coloque o tubo em um banho-maria agitado ajustado a 37 graus Celsius.Em seguida, incubar o tubo cônico por 30 minutos para realizar a digestão parcial do tecido com colagenase. A digestão proteolítica parcial é a etapa mais importante para melhorar a coleta de células do endoderma da membrana do saco vitelino. Nossos dados mostram uma melhoria significativa na taxa de sucesso do cultivo celular e da proliferação celular com o procedimento de digestão por colagenase.Após a digestão com colagenase, centrifugue o tecido a 130 vezes g durante três minutos à temperatura ambiente e, em seguida, remova a fração sobrenadante com uma pipeta. Prossiga com a lavagem do pellet ressuspendendo-o em 20 mL de DMEM. Centrifugue o tubo conforme descrito anteriormente, remova então o sobrenadante e ressuspenda o pellet em 12 mL de meio de crescimento.Em seguida, adicione cuidadosamente 500 microlitros da suspensão a cada poço de uma placa de 24 poços. Prossiga com a incubação dos explantes de endoderme por dois dias a 37 graus Celsius em 5%CO2. Durante este período, espere que as células proliferem a partir dos tecidos.Em seguida, incubar as células por mais dois dias. Então, submetê-las a um ensaio de viabilidade celular e visualizar os resultados utilizando um leitor de placas. Posteriormente, realizar a RT-qPCR para avaliar os níveis de expressão de marcadores de interesse em EECs e verificar o tamanho do produto da RT-qPCR por eletroforese em gel conforme descrito no protocolo textual.Em comparação com explantes não tratados, aqueles parcialmente digeridos com colagenase exibiram uma proliferação celular significativamente aumentada, conforme mostrado nestes gráficos e determinado por um teste t pareado, demonstrando o sucesso do sistema de cultura. Para avaliar os efeitos de outras enzimas, ensaios de viabilidade celular foram realizados em tecidos tratados com colagenase e dispase ou com colagenase isoladamente. Durante os primeiros cinco dias de incubação, o crescimento celular foi semelhante em ambas as condições.No entanto, do sexto ao nono dia, apenas os EEC tratados com colagenase proliferaram de forma constante, sugerindo que a digestão parcial com esta enzima melhora o crescimento e deveria ser preferencialmente utilizada. Quando visualizados, os EEC cultivados demonstraram características semelhantes às de adipócitos, com grandes gotículas lipídicas circulares, conforme mostrado aqui. Essas células também foram positivas para a coloração com Vermelho de Óleo O, que é comumente usada para identificar adipócitos.Apoiando esses dados morfológicos, a PCR quantitativa em tempo real revelou que EECs cultivadas demonstram altos níveis de SOAT1, uma proteína que sintetiza éster de colesterol a partir do colesterol. Isso sugere ainda que EECs cultivadas demonstram as características fisiológicas corretas de adipócitos. Importante, quando EECs foram expostas a IBMX e forskolina, fatores que aumentam os níveis de adenosina monofosfato cíclico, ou cAMP, e cultivadas por 24 horas, ambos os tratamentos estimularam a expressão de SOAT1, sugerindo possíveis mecanismos de regulação de SOAT1 e utilização de lipídios no MVS.Uma vez dominada, essa técnica pode ser realizada em cerca de quatro horas, durante as quais pelo menos três amostras podem ser coletadas. Após este procedimento, métodos como SOAT1 ou outros ensaios de atividade enzimática, bem como confirmação visual semelhante, podem ser realizados. Tais ensaios podem ajudar a responder perguntas adicionais, como a forma como certas proteínas e macronutrientes estão envolvidas nas fases posteriores do desenvolvimento embrionário.Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores na área de utilização de nutrientes em embriões explorarem o possível mecanismo pelo qual os nutrientes são utilizados e transportados em um modelo embrionário aviário. Após assistir a este vídeo, você deverá ser capaz de aprender como coletar tecidos do endoderma de embriões aviários e também saber como cultivar CEEs para estudar o transporte e a utilização de nutrientes em embriões, utilizando o modelo aviário.

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Research

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