Name: Tratar ratos SCA1 com solúvel em água compostos não especificamente impulsionar a função mitocondrial (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Aprenda a avaliar compostos solúveis em água para tratar ataxia espinocerebelar tipo 1 em camundongos. Este método utiliza ácido succínico via água de beber para melhorar função mitocondrial e comportamento cerebelar.

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Gostaríamos de agradecer ao Dr. Harry Orr, da Universidade de Minnesota, por seu generoso presente de camundongos transgênicos. Também gostaríamos de agradecer aos seguintes ex-alunos do Skidmore College por seu trabalho realizando os experimentos anteriores: Monica Villegas, Porter Hall, Mitchell Spring, Nicholas Toker, Jenny Zhang, Chloe Larson e Cheyanne Slocum. Além disso, gostaríamos de agradecer ao Skidmore College por financiar o desenvolvimento desses métodos.

<ol><li>Stucki, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+impairments+contribute+to+Spinocerebellar+ataxia+type+1+progression+and+can+be+ameliorated+by+the+mitochondria-targeted+antioxidant+MitoQ%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial impairments contribute to Spinocerebellar ataxia type 1 progression and can be ameliorated by the mitochondria-targeted antioxidant MitoQ.</a> Free Radic Biol Med. 97, 427-440 (2016).</li>
<li>Breuer, M. E., Willems, P. H., Russel, F. G., Koopman, W. J., Smeitink, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+mitochondrial+dysfunctions+in+the+brain%2C+from+mice+to+men%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inherit+Metab+Dis%22%5BJournal%5D)">Modeling mitochondrial dysfunctions in the brain, from mice to men.</a> J Inherit Metab Dis. 35 (2), 193-210 (2012).</li>
<li>Breuer, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mitochondrial+OXPHOS+dysfunction+in+the+development+of+neurologic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">The role of mitochondrial OXPHOS dysfunction in the development of neurologic diseases.</a> Neurobiol Dis. , (2012).</li>
<li>Hroudová, J., Singh, N., Fizar, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunctions+in+neurodegenerative+diseases%2C+relevance+to+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunctions in neurodegenerative diseases, relevance to Alzheimer's disease.</a> Biomed Res Int. 2014, 175062(2014).</li>
<li>Burright, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCA1+transgenic+mice%2C+a+model+for+neurodegeneration+caused+by+an+expanded+CAG+trinucleotide+repeat%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SCA1 transgenic mice, a model for neurodegeneration caused by an expanded CAG trinucleotide repeat.</a> Cell. 82 (6), 937-948 (1995).</li>
<li>Clark, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purkinje+cell+expression+of+a+mutant+allele+of+SCA1+in+transgenic+mice+leads+to+disparate+effects+on+motor+behaviors%2C+followed+by+a+progressive+cerebellar+dysfunction+and+histological+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Purkinje cell expression of a mutant allele of SCA1 in transgenic mice leads to disparate effects on motor behaviors, followed by a progressive cerebellar dysfunction and histological alterations.</a> J Neurosci. 17 (19), 7385-7395 (1997).</li>
<li>Kuznetsov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+mitochondrial+function+in+situ+in+permeabilized+muscle+fibers%2C+tissues+and+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analysis of mitochondrial function in situ in permeabilized muscle fibers, tissues and cells.</a> Nat Protoc. 3 (6), 965-976 (2008).</li>
<li>Deng-Bryant, Y., Singh, I. N., Carrico, K. M., Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+tempol%2C+a+catalytic+scavenger+of+peroxynitrite-derived+free+radicals%2C+in+a+mouse+traumatic+brain+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of tempol, a catalytic scavenger of peroxynitrite-derived free radicals, in a mouse traumatic brain injury model.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 28 (6), 1114-1126 (2008).</li>
<li>Vaishnav, R. A., Singh, I. N., Miller, D. M., Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+peroxidation-derived+reactive+aldehydes+directly+and+differentially+impair+spinal+cord+and+brain+mitochondrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Lipid peroxidation-derived reactive aldehydes directly and differentially impair spinal cord and brain mitochondrial function.</a> J Neurotrauma. 27 (7), 1311-1320 (2010).</li>
<li>Matthews, R. T., Yang, L., Browne, S., Baik, M., Beal, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coenzyme+Q10+administration+increases+brain+mitochondrial+concentrations+and+exerts+neuroprotective+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Coenzyme Q10 administration increases brain mitochondrial concentrations and exerts neuroprotective effects.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (15), 8892-8897 (1998).</li>
<li>Ferrante, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+creatine+in+a+transgenic+mouse+model+of+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of creatine in a transgenic mouse model of Huntington's disease.</a> J Neurosci. 20 (12), 4389-4397 (2000).</li>
<li>Ferrante, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+effects+of+coenzyme+Q10+and+remacemide+in+transgenic+mouse+models+of+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Therapeutic effects of coenzyme Q10 and remacemide in transgenic mouse models of Huntington's disease.</a> J Neurosci. 22 (5), 1592-1599 (2002).</li>
<li>Hersch, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creatine+in+Huntington+disease+is+safe%2C+tolerable%2C+bioavailable+in+brain+and+reduces+serum+8OH2%27dG%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Creatine in Huntington disease is safe, tolerable, bioavailable in brain and reduces serum 8OH2'dG.</a> Neurology. 66 (2), 250-252 (2006).</li>
<li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+with+coenzyme+Q10+and+creatine+produces+additive+neuroprotective+effects+in+models+of+Parkinson%27s+and+Huntington%27s+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Combination therapy with coenzyme Q10 and creatine produces additive neuroprotective effects in models of Parkinson's and Huntington's diseases.</a> J Neurochem. 109 (5), 1427-1439 (2009).</li>
<li>Yang, X., Dai, G., Li, G., Yang, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coenzyme+Q10+reduces+beta-amyloid+plaque+in+an+APP%2FPS1+transgenic+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Coenzyme Q10 reduces beta-amyloid plaque in an APP/PS1 transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> J Mol Neurosci. 41 (1), 110-113 (2010).</li>
<li>Sandhir, R., Mehrotra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+supplementation+is+effective+in+improving+mitochondrial+dysfunctions+induced+by+3-nitropropionic+acid%2C+implications+in+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Quercetin supplementation is effective in improving mitochondrial dysfunctions induced by 3-nitropropionic acid, implications in Huntington's disease.</a> Biochim Biophys Acta. 1832 (3), 421-430 (2013).</li>
<li>Ergonul, P. G., Nergiz, C. <a target="_blank" href="http://www.agriculturejournals.cz/publicFiles/31627.pdf">Determination of organic acids in olive fruit by HPLC.</a> 'Czech Food Sci. 28 (3), 202-205 (2010).</li>
<li>Jones, B. J., Roberts, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+quantiative+measurement+of+motor+inco-ordination+in+naive+mice+using+an+acelerating+rotarod%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The quantiative measurement of motor inco-ordination in naive mice using an acelerating rotarod.</a> J Pharm Pharmacol. 20 (4), 302-304 (1968).</li>
<li>Luong, T. N., Carlisle, H. J., Southwell, A., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+motor+balance+and+coordination+in+mice+using+the+balance+beam%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assessment of motor balance and coordination in mice using the balance beam.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li>
<li>Servadio, A., Koshy, B., Armstrong, D., Antalffy, B., Orr, H. T., Zoghbi, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+analysis+of+the+ataxin-1+protein+in+tissues+from+normal+and+spinocerebellar+ataxia+type+1+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Expression analysis of the ataxin-1 protein in tissues from normal and spinocerebellar ataxia type 1 individuals.</a> Nat Genet. 10 (1), 94-98 (1995).</li>
<li>Klement, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ataxin-1+nuclear+localization+and+aggregation%2C+role+in+polyglutamine-induced+disease+in+SCA1+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Ataxin-1 nuclear localization and aggregation, role in polyglutamine-induced disease in SCA1 transgenic mice.</a> Cell. 95 (1), 41-53 (1998).</li>
<li>Serra, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+profiling+links+SCA1+pathophysiology+to+glutamate+signaling+in+Purkinje+cells+of+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Gene profiling links SCA1 pathophysiology to glutamate signaling in Purkinje cells of transgenic mice.</a> Hum Mol Genet. 13 (20), 2535-2543 (2004).</li>
<li>Carter, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+progressive+motor+deficits+in+mice+transgenic+for+the+human+Huntington%27s+disease+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Characterization of progressive motor deficits in mice transgenic for the human Huntington's disease mutation.</a> J Neurosci. 19 (8), 3248-3257 (1999).</li>
<li>Anjomani Virmouni, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+GAA-repeat-expansion-based+mouse+model+of+Friedreich%27s+ataxia%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">A novel GAA-repeat-expansion-based mouse model of Friedreich's ataxia.</a> Dis Model Mech. 8 (3), 225-235 (2015).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para revelar.

Se estes métodos são usados, conforme descrito, eles são capazes de detectar e aliviar a disfunção mitocondrial mediada por fosforilação oxidativa em modelos de ratos doenças neurodegenerativas cerebelares. Os ensaios bioquímicos e comportamentais combinados são métodos multifacetadas para determinar a extensão da contribuição mitocondrial para cerebelar patologia doença neurodegenerativa. Ao tratar ratos com ácido succínico para estimular o metabolismo e aumentar a função mitocondrial, somos capazes de mostrar um resga...

As mitocôndrias são os principais produtores de trifosfato de adenosina (ATP), uma co-enzima essencial para a energia celular, com a maioria do ATP mitocondrial produzido através da fosforilação oxidativa (FOX) usando a cadeia de transporte de electrões. O cérebro, dadas as suas elevadas exigências metabólicas e sua dependência de fosforilação oxidativa para alimentar a atividade neural, é altamente suscetível a disfunção mitocondrial. Como resultado, disfunção mitocondrial é accionado durante o processo de envelhecimento 1 e está implicada na patogénese de várias doenças neurodegenerativas, 2, 3, 4. Portanto, segue-se que as mitocôndrias são alvos terapêuticos atractivos para a neurodegeneração. Neste protocolo, adotamos o uso de ataxia espinocerebelar tipo 1 (SCA1) como uma doença neurodegenerativa modelo para o estudo das mitocôndriasl disfunção e ao desenvolvimento de terapias alvo-mitocondriais. SCA1 é causada por uma mutação de poliglutamina (poliQ) expansão repetida no produto do gene ataxin-1 que desencadeia a progressiva degeneração dos neurónios de Purkinje do cerebelo e neurónios de outras regiões do cérebro. A linha transgénica rato usado aqui (designado como o rato SCA1), que expressa uma ataxin-1 transgene poliQ-mutante sob o controlo de um promotor específico de células de Purkinje, permite a análise orientada de o componente das células de Purkinje de SCA1 5. Ratos SCA1 sofrer degeneração das células de Purkinje gradual e desenvolver marcha atáxica 6. disfunção complexo mitocondrial e eficácia do tratamento alvejado-mitocondrial pode ser avaliada com uma bateria de ensaios moleculares e comportamentais. Disfunção complexo mitocondrial é medida ex vivo através de ensaios de respiração que detectam o consumo de oxigénio no tecido cerebelar alterada ema presença de substratos cadeia de transporte de elétrons e inibidores 7. Os ensaios de respiração foram previamente utilizadas com tecido permeabilizada, isolados mitocondriais, e tecido inteiro 7, 8, 9. Eles permitem a avaliação direta da função mitocondrial ao contrário dos métodos de recolha de dados morfológicos, como a microscopia eletrônica de transmissão ou imunofluorescência. O uso de tecido todo em vez de isolado mitocôndrias impede a seleção tendenciosa de mitocôndrias saudáveis que podem ocorrer durante o processo de isolamento 7. Quando adaptadas ao protocolo como mostrado, o ensaio a respiração é um valioso método para a detecção de disfunção mitocondrial em estados de doenças neurodegenerativas do cerebelo. activadores não específica de metabolismo pode ser usada para inferir a disfunção mitocondrial em modelos de ratinhos transgénicos de diseas neurodegenerativasE e auxílio no desenvolvimento de novas terapias. A quercetina, coenzima Q10 e creatina têm sido mostrados para melhorar a patologia neurodegenerativa doença em doentes e em modelos animais de doença neurodegenerativa 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16. Aqui nós apresentamos um novo activador metabólico, ácido succínico, para estimular o metabolismo e aumentar a função mitocondrial na doença neurodegenerativa. Para assegurar que o activador é de atravessar a barreira hemato-encefálica, a HPLC foi utilizada para detectar a entrega ao tecido neural em ratinhos tratados 17. Para avaliar os efeitos terapêuticos dos compostos solúveis em água metabolicamente alvo, tais como ácido succínico, uma bateria de paradigmas comportamentais e estudos imunopatológicos pode ser usado. due para os défices de coordenação motora encontradas na doença neurodegenerativa cerebelar, o ensaio de pista pegada, ensaio de feixe e ensaio da haste rotativa aceleração são usados para detectar salvamento de patologia comportamental 6, 18, 19. Estas medidas são completadas com a avaliação imunopatológico da citoarquitetura cerebelar, avaliando a espessura molecular camada (definido como o comprimento do mandril Purkinje dendrítica celular) e contagens de células de Purkinje soma dentro de um lóbulo definida de tecido cerebelar 6, 20, 21. Aqui apresentamos vários métodos neuropatológicas e comportamentais para a detecção e tratamento da disfunção mitocondrial com compostos solúveis em água metabolicamente alvo. Nós usamos a análise ex vivo da respiração mitocondrial para analisar a disfunção mitocondrial na tran SCA1rato sgenic. Além disso, mostra-se que os sintomas da doença e patologia são melhoradas pelo impulsionador ácido succínico mitocondrial solúvel em água, implicando ainda a disfunção mitocondrial na progressão da doença SCA1.

<table><tbody><tr><td>Difosfato de adenosina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2754</td><td>ADP</td></tr><tr><td>Ascorbato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7631</td><td></td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2153</td><td>BSA</td></tr><tr><td>4',6-Diamidino-2-fenilindol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9542</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>Digitonina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>Ditiotreitol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D0632</td><td>DTT</td></tr><tr><td>Soro de burro</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>Glutamato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>1446600</td><td></td></tr><tr><td>Malato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>6994</td><td></td></tr><tr><td>Manitol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M4125</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Lactobionato de potássio</td><td>Bio-Açúcares</td><td>69313-67-3</td><td></td></tr><tr><td>Rotenona</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>Saponina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>Ácido succínico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S3674<</td><td></td></tr><tr><td>em>N,N,N&prime;,N&prime; -Tetrametil-p-fenilenodiamina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T7394</td><td>TMPD</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Ureia</td><td>Sigma Aldrich</td><td>U0631</td><td></td></tr><tr><td>Meio de montagem Vectashield</td><td>Vector Labs</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>11NQ anticorpo (anti-ataxina-1)</td><td></td><td></td><td>Servadio, et al. 1995, PMID: 7647801</td></tr><tr><td>Anticorpo secundário anti-camundongo Alexa Fluor 488</td><td>Life Technologies</td><td>A-11015</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secundário anti-coelho Alexa Fluor 594</td><td>Life Technologies</td><td>A-11012</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo de calbindina (cabra)</td><td>Santa Cruz</td><td>C-20</td><td></td></tr><tr><td>Animais</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Camundongos transgênicos de controle</td><td>Harry Orr, Ph.D.</td><td>A02</td><td>Burright, et al. 1997, PMID: 9217978</td></tr><tr><td>camundongos SCA1</td><td>Harry Orr, Ph.D.</td><td>B05</td><td>Burright, et al. 1997, PMID: 9217978</td></tr><tr><td>Camundongos do tipo selvagem</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001800</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ESM-100L micrótomo</td><td>ERMA</td><td></td><td>Sledge micrótomo</td></tr><tr><td>Fluoview FV1200 Microscópio Confocal</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de gelatina de glicerol</td><td>FD Neuro Technologies</td><td>PO101</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Hamilton</td><td>Sigma Aldrich</td><td>VCAT 80465</td><td></td></tr><tr><td>OXYT1 Oxytherm Unidade de Controle de Eletrodo</td><td>Hansatech Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P.T.F.E. papel</td><td>Cole-Parmer</td><td>UX-08277-15</td><td></td></tr><tr><td>Rotallion Rotarod</td><td>PPP & G</td><td></td><td>entre em contato com o autor correspondente para obter informações</td></tr><tr><td>Ultimate 3000 HPLC</td><td>Dionex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>National Institute of Health</td><td></td><td><a href="http://imagej.nih.gov/ij/">http://imagej.nih.gov/ij/</a></td></tr><tr><td>Cell counter plugin (para ImageJ)</td><td>National Institute of Health</td><td></td><td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html">http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html</a></td></tr><tr><td>3P& G Rota-Rod v3.3.3 (software rotarod)</td> <td>PPP & G</td><td></td><td>entre em contato com o autor correspondente para obter</td></tr><tr><td>informações Phidget21.dll (necessário para o software rotarod)</td><td>DLL-Files.com</td><td></td><td><a href="https://www.dll-files.com/phidget21.dll.html">https://www.dll-files.com/phidget21.dll.html</a></td></tr></tbody></table>

tratar ratos sca1 com solúvel em água compostos não especificamente impulsionar a função mitocondrial

Treating SCA1 Mice with Water-Soluble Compounds to Non-Specifically Boost Mitochondrial Function

disfunção mitocondrial desempenha um papel significativo no processo de envelhecimento e em várias doenças neurodegenerativas, incluindo as ataxias espinocerebelares hereditárias e outras perturbações do movimento marcadas pela degeneração progressiva do cerebelo. O objetivo deste protocolo é avaliar disfunção mitocondrial em ataxia espinocerebelar tipo 1 (SCA1) e avaliar a eficácia da segmentação farmacológico da respiração metabólica através do ácido succínico composto solúvel em água para retardar a progressão da doença. Esta abordagem é aplicável a outras doenças cerebelares e pode ser adaptado a uma série de terapias solúveis em água. Análise ex vivo da respiração mitocondrial é utilizado para detectar e quantificar as alterações relacionadas com a doença em função mitocondrial. Com a evidência genética (dados não publicados) e as provas proteômica de disfunção mitocondrial no modelo do rato SCA1, podemos avaliar a eficácia do tratamento com o metabólica impulsionador s solúvel em águaácido uccinic por dissolução deste composto directamente na água de beber casa gaiola. A capacidade do fármaco para passar a barreira hemato-encefálica pode ser deduzida utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). A eficácia destes compostos pode ser testada usando múltiplos paradigmas comportamentais, incluindo o rotarod aceleração, teste trave de equilíbrio e análise da pegada. integridade citoarquitectónica do cerebelo pode ser avaliada através de imunofluorescência que detectam os núcleos das células de Purkinje e dendritos das células de Purkinje e soma. Estes métodos são técnicas robustas para a determinação da disfunção mitocondrial e a eficácia do tratamento com compostos solúveis em água na doença neurodegenerativa cerebelar.

Através de segmentação farmacológico da mitocôndria cerebelar com ácido succínico somos capazes de prevenir a disfunção mitocondrial em um modelo do rato do cerebelar SCA1 doença neurodegenerativa. O doador de electrões canónica de succinato desidrogenase, ácido succínico, foi dissolvido em água potável casa gaiola de ratos SCA1 durante um mês, com início avaliação comportamental durante a segunda semana de tratamento e a avaliação neuropatológico após o tratamento (Figura</stron...

Apresentamos um protocolo bioquímico e comportamental para avaliar a eficácia de compostos solúveis em água direcionados às mitocôndrias para o tratamento da ataxia espinocerebelar tipo 1 (SCA1) e outras doenças neurodegenerativas cerebelares.

Tratar ratos SCA1 com solúvel em água compostos não especificamente impulsionar a função mitocondrial

Mitochondrial dysfunction plays a significant role in the aging process and in neurodegenerative diseases including several hereditary spinocerebellar ...

O objetivo geral deste experimento é observar e quantificar os efeitos terapêuticos dos ativadores mitocondriais solúveis em água no comportamento e tecido cerebelar em camundongos com ataxia cerebelar espinhal tipo um. Este método pode ajudar a responder a questões-chave nos campos de ataxia cerebelar espinhal, como os déficits mitocondriais contribuem para a patologia da doença e podem ser impedidos por um ativador mitocondrial solúvel em água. A principal vantagem dessa técnica é que o ácido succínico é um composto solúvel em água barato aprovado pela FDA que pode ser entregue diretamente no cérebro através da água potável.As implicações dessa técnica podem se estender a uma terapia de outras doenças neurodegenerativas porque déficits nos complexos de fosforilação oxidativa mitocondrial são encontrados em várias doenças neurodegenerativas, incluindo Alzheimer e doença de Huntington. Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades com a configuração inicial dos paradigmas comportamentais que podem ter que ser ajustados para alcançar resultados consistentes. A demonstração visual desse método é benéfica porque as etapas comportamentais podem ser difíceis de reprodu

treating-sca1-mice-with-water-soluble-compounds-to-non-specifically

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A disfunção mitocondrial é uma característica da senescência celular. Este trabalho usa não-invasivo do infravermelho próximo (NIR) de tratamento para melhorar a função mitocondrial no rato epitélio sensorial vestibular de envelhecimento.

Infravermelho Próximo (NIR) Luz aumenta a expressão de um marcador da função mitocondrial no mouse Vestibular Sensorial Epithelium

Um protocolo é descrito para detecção in vivo de efeitos de inibidores mitocondriais no organismo modelo Caenorhabditis elegans e para identificação de potenciais compostos potenciadores. Este protocolo pode ser usado para rastrear bibliotecas de medicamentos em busca de compostos que modulam a função mitocondrial.

A rastreï¿½el<em&gt; In Vivo</em&gt; Ensaio para mitocondrial Modulators Usando Transgenic Bioluminescent<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Murino estudos em modelos de inflamação do cólon têm demonstrado que uma pequena porcentagem (1-5%) de células-tronco mesenquimais (MSC) injetada por via intravenosa ou intraperitonealmente home ao cólon inflamado1,2. Este estudo mostra que guiada por ultra-som intracardíacos injeções de MSCs resultam em aumentada localização até o intestino.

Guiada por ultra-som intracardíaca injeção de células-tronco mesenquimais humanas para aumentar Homing para o intestino para uso em modelos murino de doenças intestinais inflamatórias Experimental

Compreender a influência dos pesticidas organocloritos ambientais (OCPs) na função mitocondrial nos hepatócitos é importante na exploração do mecanismo de OCPs causando distúrbios metabólicos. Este artigo apresenta métodos detalhados na detecção da função mitôndrial hepática.

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Este proctocol tem como objetivo fornecer um método para imagens in vitro e in vivo mitocondrial Ca2+ em astrócitos e neurônios.

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Esses protocolos ajudarão os usuários a sondar o metabolismo de energia mitocondrial em esferoides derivados de células cancerígenas 3D usando a análise de fluxo extracelular do Seahorse.

Explorando o metabolismo de energia mitocondrial de spheróides microtissue 3D únicos usando análise de fluxo extracelular

Aqui, descrevemos a administração de medicamentos guiada por micropipeta (MDA) como um método alternativo à gavagem oral que incentiva o animal de pesquisa a ingerir tratamentos prontamente com o mínimo de estresse e desconforto.

Uso da administração de medicamentos guiados por micropipeta como método alternativo à gavagem oral em modelos de roedores

Os organoides cerebrais servem como um modelo valioso para estudos de encefalomiopatia mitocondrial, acidose láctica e episódios semelhantes a AVC (MELAS), oferecendo insights sobre sua fisiopatologia subjacente e fornecendo uma plataforma para triagem de drogas. Organoides derivados de linhagens celulares com níveis variados de heteroplasmia de genes causadores de doenças exibem diferenças fenotípicas significativas.

Modelagem de doenças mitocondriais usando organoides cerebrais: um foco na encefalomiopatia mitocondrial, acidose láctica e episódios semelhantes a derrames

Injeções locais de um corante mitocondrial marcando mitocôndrias da célula terminal de Schwann in vivo para microscopia confocal. Esse método utiliza prova de conceito demonstrada em tecido muscular esquelético de camundongos com músculo saudável ou doente para fornecer visualização mitocondrial de alta resolução.

Métodos para Quantificação In Situ da Morfologia Mitocondrial em Células Musculares e Terminais de Schwann de Camundongos

Um procedimento não-invasivo para avaliar a função endotelial é demonstrada através dos 2000 Endo-PAT.

Avaliação da função endotelial com a Vasodilatador 2000 Endo-PAT

Aprenda a avaliar compostos solúveis em água para tratar ataxia espinocerebelar tipo 1 em camundongos. Este método utiliza ácido succínico via água de beber para melhorar função mitocondrial e comportamento cerebelar.

Tratar ratos SCA1 com solúvel em água compostos não especificamente impulsionar a função mitocondrial

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