Avaliação transcutânea da função renal em roedores conscientes

O objetivo geral deste procedimento é medir a função renal por via transcutânea sem a necessidade de amostras de sangue ou análises experimentais adicionais. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da nefrologia, como qual é o impacto de causar danos renais ou intervenções terapêuticas específicas na função renal. As principais vantagens desta técnica são que ela é minimamente invasiva e que os resultados estão prontos para serem analisados imediatamente após a medição, sem manipulações experimentais subsequentes.

Esta técnica pode ser usada para estudar praticamente qualquer condição renal em várias espécies diferentes. Além disso, é útil para realizar medições sequenciais dentro de um animal. Antes de iniciar o procedimento, confirme o nível adequado de anestesia por pinça do dedo do pé.

E use um barbeador elétrico para remover uma área de três por seis centímetros de pelo da parte inferior do abdômen do animal. Retire o pelo restante com creme depilatório. Após dois a três minutos, lave bem a pele desnuda, pois o creme pode emitir alguma fluorescência de fundo.

Em seguida, coloque o dispositivo óptico para medir a função renal em um lado de um adesivo de dupla face. Posicionando a parte óptica acima da janela transparente e deixando o lado oposto coberto com película protetora. Em seguida, prenda um pedaço de adesivo de dupla face na bateria.

Antes de fixar o dispositivo, pese o animal. Em seguida, corte um pedaço de atadura de gaze elástica tubular cerca de um centímetro a mais do que a largura do adesivo de dupla face. E puxe o curativo sobre a cabeça do animal.

Em seguida, coloque o animal em decúbito dorsal, deixando a área raspada descoberta. E conecte o conector da bateria na porta correspondente do dispositivo. Se a bateria estiver conectada corretamente, o dispositivo começará a piscar.

Remova a película protetora do outro lado do adesivo preso à bateria. E monte a bateria na superfície superior do dispositivo. Agora, remova a tampa protetora do adesivo do dispositivo operacional e segurando as bordas até que esteja corretamente fixada, coloque o adesivo na área raspada nas costas do animal.

Cubra o dispositivo com a atadura tubular de gaze elástica, tendo o cuidado de esticar totalmente a ligadura sobre o abdômen, certificando-se de que os membros possam se mover livremente. Uma boa fixação é crucial para evitar artefatos de movimento durante a medição, portanto, tome cuidado para que o dispositivo esteja conectado corretamente antes do início da medição. Quando o curativo estiver no lugar, aplique uma tira de fita adesiva de tamanho correspondente sobre o dispositivo para cobrir os fios da bateria.

E meça a leitura de fundo por um a três minutos sem pressionar o dispositivo. Para administrar o FITC-sinistrina, após aquecer a cauda do animal para dilatar as veias da cauda, injetar IV o volume apropriado de solução estoque de FITC-sinistrina. Em seguida, coloque cuidadosamente o animal sozinho em sua gaiola doméstica, sem água ou tampa de arame.

Tomando cuidado para não introduzir artefatos de movimento. Em seguida, registar a fluorescência emitida pelo FITC-sinistrina com o dispositivo óptico durante o período de tempo experimental adequado. No final do período de gravação, remova cuidadosamente a fita adesiva seguida do curativo tubular.

Em seguida, retire suavemente o adesivo de dupla face da pele. E devolva o animal à sua gaiola normal. Para ler os dados, desconecte a bateria do dispositivo e remova o adesivo

Em seguida, use um cabo micro USB para conectar o gravador óptico a um computador e baixe os dados com o software apropriado. Por fim, use o software apropriado para gerar a curva cinética de eliminação de acordo com os protocolos do software. E abra o arquivo CSV de pontos que contém os dados.

Quando a função renal é afetada, a meia-vida da sinistrina FITC aumenta. Devido à redução da excreção da substância e ao aparecimento das alterações da curva. Normalmente, a curva medida não volta ao nível de fundo e uma área aumentada sob a curva é observada.

No mesmo animal, as medições pré e pós-lesão demonstram um aumento na intensidade máxima de fluorescência devido ao acúmulo do marcador causado por sua excreção reduzida. Por exemplo, na presença de insuficiência renal, a curva FITC-sinistrin medida por via transcutânea exibe um estado estacionário devido à função gravemente prejudicada do tecido renal. Além disso, o dispositivo miniaturizado tem sido usado para medir com sucesso a função renal em várias cepas de roedores com uma variedade de estados de saúde diferentes.

Ressaltando a adequação e sensibilidade do dispositivo para detectar alterações devido à doença renal e envelhecimento. Uma vez dominado, o experimento pode ser completamente configurado em 50 minutos com pelo menos quatro animais por hora podendo ser avaliados por um único experimentador. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de proteger o dispositivo eletrônico removendo o abastecimento de água e qualquer estrutura saliente durante o período de medição.