Retroductal submandibular Glândula instilação e localizada fracionado irradiação em um modelo de rato de salivar Hipofunção

A hipofunção das glândulas salivares, um dos principais efeitos adversos da radioterapia de cabeça e pescoço, diminui a qualidade de vida do paciente. A demonstração da eficácia de novas terapias em modelos animais é um pré-requisito antes da transição clínica. Este protocolo descreve a administração retroductal e a irradiação local das glândulas submandibulares de ratos.

O objetivo geral deste procedimento é administrar terapêutica retroductalmente às glândulas submandibulares para avaliar sua eficácia no combate à disfunção salivar. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo dos distúrbios das glândulas salivares, como quais terapias podem proteger ou restaurar a função das glândulas salivares contra a radiação. A principal vantagem dessa técnica é que as glândulas salivares podem ser tratadas localmente, reduzindo assim o risco de efeitos colaterais de tecidos não-alvo.

Geralmente, as pessoas novas nesse método terão dificuldades porque as aberturas do duto não são visíveis e a cânula precisa ser manipulada cegamente no duto. Antes de iniciar o procedimento, corte um comprimento de dez centímetros de tubo de polietileno PE 10 com um bispo e, em seguida, segure as duas extremidades do tubo entre o dedo indicador e o polegar de cada mão e aqueça a seção intermediária do tubo acima de uma chama suave, puxando cuidadosamente os dois lados para esticar o tubo amolecido para dobrar seu comprimento. Em seguida, use um bisturi para cortar o tubo no meio em um ângulo de 45 graus para obter dois cânones, cada um com uma extremidade cônica.

Estique a extremidade não cônica de uma das cânulas sobre a agulha de calibre 29 da seringa de insulina de 0,5 cc. Em seguida, remova a cânula e retire 220 microlitros de solução salina para a seringa. Bata no eixo da seringa para desalojar quaisquer bolhas de ar e recoloque a cânula sobre a agulha.

Pressione o êmbolo para expelir o ar da cânula e garantir um fluxo livre da solução através do tubo e ajuste o volume de solução salina na seringa para 200 microlitros. Agora confirme o nível apropriado de sedação do rato por pinça do dedo do pé e reflexo palpável e aplique lubrificante ocular sobre as córneas expostas. Coloque o amimal em uma plataforma de contenção especialmente projetada e encaixe os dentes incisivos superiores na barra transversal.

Enrole um elástico ao redor dos incisivos inferiores para puxar a mandíbula para baixo. Ancorando-o na plataforma. Em seguida, passe uma sutura estéril pela língua e levante-a para levantar o assoalho da boca.

Em seguida, use um hemostático para prender as suturas e passe o hemostático sobre a barra transversal. Em seguida, use um espalhador de bochechas personalizado para expandir as bochechas e um microscópio de dissecação para localizar os papilos sublinguais no assoalho da boca. Usando pinças delicadas, segure a extremidade cônica do tubo PE 10 pré-formado e manipule suavemente a ponta da cânula no orifício ductal da papila sublingual.

Em seguida, rosqueie a cânula de três a cinco milímetros no duto, certificando-se de que a cânula passe pelo duto sem obstrução. Antes de instilar a solução salina, injete a atrofina por via subcutânea na nuca do animal. Dez minutos após a injeção, prenda a cânula ao orifício do ducto com uma gota de cianoacrilato.

Depois que a cola secar lentamente, pressione o êmbolo da seringa a 50 microlitros por minuto até que 200 microlitros da solução salina tenham sido instilados na glândula. Se você encontrar pressão de volta durante a instilação, pare e retire o tubo e reanule com uma nova cânula. Em seguida, prenda o tubo com um hemostático e remova cuidadosamente a seringa.

Deixe o tubo no duto por 30 a 60 minutos até que o animal recupere a consciência. Em seguida, remova a sutura que segura a língua e transfira o animal para uma gaiola separada sob uma lâmpada de calor até que esteja totalmente recuperado. Aplicar localmente irradiação fracionada na glândula submandibular.

Colunar uma fenda de três centímetros de campo de radiação que abrange a área da borda inferior da mandíbula até o topo do esterno do rato anestesiado em decúbito dorsal. Depois de colocar um bolo de tecido equivalente de um centímetro sobre a região. Ajuste a distância entre a fonte de radiação e o topo do bolo alimentar para 100 centímetros usando um feixe de fótons de seis megavolts no acelerador linear.

Irradie o animal com 2,5 cinzas para o comprimento adequado de exposição. No final do período de exposição à radiação, aqueça o animal durante sua recuperação, como acabamos de demonstrar. Durante os experimentos iniciais, a colocação adequada da cânula foi confirmada pela infusão da glândula com solução de hematoxilina ou azul de Tryplan e avaliando a coloração da glândula em animais eutanasiados.

As glândulas submandibulares foram estudadas porque podem ser irradiadas seletivamente com radiação colunada para o pescoço, evitando efeitos orais graves fora do alvo que podem afetar a saúde dos animais e o resultado experimental. A análise dos efeitos desse esquema de radiação fracionada no fluxo salivar oito semanas após a radiação demonstra que a exposição diária a 2,5 incrementos de cinza reduz precipitadamente o fluxo salivar. Dentro de sua redução de 10 vezes na produção de saliva em animais irradiados em comparação com animais não irradiados.

Uma vez dominada, esta técnica pode ser concluída em poucos minutos se for executada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de garantir a passagem irrestrita da cânula para o ducto excratório da glândula salivar. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores no campo de distúrbios das glândulas salivares explorarem tratamentos para radiação e doenças autoimunes das glândulas salivares.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar a instalação retroductal na glândula submandibular do rato e irradiar localmente as glândulas para avaliar a eficácia terapêutica da melhora da toxicidade da radiação. Não se esqueça de que trabalhar com terapias genéticas e proteicas pode ser extremamente perigoso e as precauções, como evitar picadas de agulha e minimizar a exposição da pele a agentes biológicos, devem ser tomadas durante a realização deste procedimento.