Name: Modelo murino de isquemia-reperfusão (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Aprenda a induzir lesão de isquemia-reperfusão intestinal em camundongos para estudos de gastroenterologia e imunologia. Este método reprodutível permite investigar mecanismos celulares de lesão e regeneração tecidual sem causar mortalidade.

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Este trabalho foi apoiado pelo russo Science Foundation, conceder nenhuma. 14-50-00060 e LLC RUSCHEMBIO. Este trabalho também foi apoiado pela Fundação de Crohn e Colite da América conceder 294083 (para AVT), e pelo NIH concessão RO1 DK47700 (para CJ).

Os estudos em animais foram realizados de acordo com o Instituto Nacional de Saúde e orientações foram aprovados pelo Institutional Animal Care and Use Committee da Trudeau Institute. 8-12 semanas de idade C57BL / 6 murganhos foram utilizados para o estudo. 1. Preparação para a cirurgia <ol><li> Preparar e esterilizar instrumentos cirúrgicos. </li><li> Prepare sistema de anestesia com base em isoflurano com cone do nariz, e uma almofada aquecida. Certifique-se de almofada aquecida não está superaquecido (&lt;39 ºC). </li><li> Certifique-se de que a eliminação de gás isofluorano recipiente é posicionado correctamente para garantir as portas de escape, na parte inferior do recipiente não estão bloqueadas ou oclusa em qualquer maneira. Pesar de gás eliminação canister antes do procedimento e peso documento sobre canister. Deite fora a embalagem quando o peso recipiente for superior a 50 g de peso acumulado (~ 12 horas). </li></ol> 2. Anestesia <ol><li> Anestesiar rato com 3% de isoflurano numa câmara de indução (1 L / minO 2). <ol><li> Avaliar a profundidade da anestesia por uma incapacidade de permanecer em pé, perda de movimento intencional voluntário, perda de reflexo de piscar, relaxamento muscular e perda de resposta ao reflexo de estimulação (dedo do pé ou pitada cauda com uma pressão firme). </li><li> Avaliar a frequência respiratória e padrão observando parede torácica e movimentos abdominais. Sob anestesia ideal, a taxa de respiração deve ser ~ 55-65 respirações por min. </li><li> Retirar do rato da câmara de indução e rapidamente raspar a área do abdômen do mouse. </li></ol></li><li> Para evitar a dessecação da córnea, colocar pomada oftálmica branda nos olhos. </li><li> Coloque o mouse sobre a almofada aquecida e conectá-lo via cone do nariz para o sistema de anestesia. Certifique-se de membrana cone do nariz do látex se encaixa firmemente sobre a cabeça do mouse e não há vazamento de isoflurano. </li><li> Reduzir a taxa de isoflurano a 1,5%, e injectar buprenorfina (0,1 mg / kg) e cetamina (10 mg / kg) por via subcutânea a evitar wind-up da dor-cascata. </li><li> limpe the a pele da área de operação, com uma mecha de algodão estéril embebido em solução cirúrgica Betadine seguido por 70% de etanol. </li></ol> 3. Cirurgia <ol><li> Faça uma linha de meados 3-5 cm laparotomia com uma tesoura de operação. área de atuação tampa com almofada anti-aderente estéril umedecido com solução salina. Isolar ceco e íleo e expor a artéria mesentérica superior utilizando zaragatoas de algodão humedecido em solução salina. </li><li> Para facilitar o clipe de aplicar, fazer pequenos cortes no mesentério em torno da artéria mesentérica superior usando iris finas scissors.To fazer isso, levante cuidadosamente o intestino com uma pinça de vestir e cortar mesentério em ambos os lados da artéria mesentérica superior na posição clipe desejado (Figura 1A). Em seguida, adicionar algumas gotas de solução salina estéril para a área do grampo posição desejada antes de aplicação de clipes. Nota: Para realizar a cirurgia sham, siga o procedimento cirúrgico até ao passo 3.2. Não aplicar clipes. Em vez disso, manter o tecido húmido por acrescentou s quenteAline como descrito em 3.6, durante 1 h. Depois, siga para o passo 4.1, </li><li> Ocluir as primeiras ramificações ordem da artéria mesentérica superior com clipes microvasculares (70 g) utilizando uma força de aplicador de pinças para criar uma região de 5-7 cm do íleo isquémica adjacente ao ceco (Figura 1B). Embora a posição dos vasos é conservadora, pode haver ligeiras variações entre ratos (ver exemplos na Figura 1). Portanto, 2 ou 3 clipes são geralmente necessária (ver a localização dos clipes na Figura 1A, D, E, setas pretas). Nota: Use grampos de navios de qualidade elevada. clipes de alta pressão pode danificar os vasos e impedir a regeneração enquanto clipes de baixa pressão (&lt;30 g) não pode bloquear completamente o fluxo sanguíneo. </li><li> Bloquear o fluxo de sangue colateral através do intestino utilizando dois clipes microvasculares através vasos (40 g vigor), demarcando a região do intestino isquêmico (Figura 1). Oclusão de vasos colaterais é necessária paraimpedir o fornecimento de sangue dos vasos sanguíneos adjacentes (ver a localização dos clipes na Figura 1A, D, E, setas verdes). </li><li> Opcional: Adicionar solução de heparina (6 USP unidades / ml), para impedir a coagulação do sangue. Gota a gota, adicionar 0,5 ml de solução de heparina para o intestino isolado. </li><li> Wet almofada anti-aderente delicados toalhetes estéreis com solução salina pré-aquecido a 37 ° C e aplicar à área cirúrgica. Certifique-se que toalhetes permanece molhada durante todo o procedimento. </li><li> Manter a isquemia durante 60 minutos utilizando 1-1,5% anestesia com isoflurano todo. Se procedimento de isquemia é realizado corretamente, a região isquêmica mudará para vinho de cor vermelha em aproximadamente 30 min. Note-se que os vasos sanguíneos distais para a posição de grampo são aumentados durante a isquemia (Figura 1, painéis direitos), indicando oclusão bem sucedida. </li><li> acompanhar de perto o mouse durante a fase de isquemia. Continuar a aplicar uma solução salina para a almofada não-aderente que cobre o local da cirurgia. </li><li> Marcaas margens da área isquémica através de pipetagem 20 ul de Gill`s 3 hematoxilina no tecido para facilitar a colheita do tecido isquémico e tecido saudável adjacente a partir do mesmo rato para comparação (Figura 1E, painel da direita). </li></ol> 4. A reperfusão Stage <ol><li> No final da isquemia adicionar algumas gotas de solução salina na zona do grampo e suavemente remover clipes microvasculares com aplicador de agrafo. Em seguida, empurre cuidadosamente o intestino volta para a cavidade abdominal com solução salina umedecido dicas de algodão. Remover almofada anti-aderente e fechar a parede abdominal e a pele usando 9 mm agrafos de aço inoxidável. Se reperfusão é realizado mais do que 3 horas, usar uma sutura Vicryl absorvível para fechar a parede abdominal antes de aplicação de clipes para feridas na pele. </li><li> Manter ratinhos em uma gaiola limpa aquecida para a quantidade desejada de tempo (30 min, 60 min, 120 min, ou 180 min) para a fase de reperfusão. </li><li> Verifique animais, pelo menos a cada 30 min para assegurar a estabilidade. </li></ol><pclass = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Necropsia e Colheita de Intestino Delgado <ol><li> Eutanásia ratos por overdose de CO2, seguido por deslocamento cervical no tempo desejado após a reperfusão. </li><li> Abra cavidade abdominal e recolher o tecido intestinal isquémica, para posterior análise. Colheita tecido normal saudável adjacente ao tecido lesionado como um controlo interno para a conta para qualquer reação sistêmica à lesão. Nota: Este controle é mais apropriado do que o falso operado camundongos de controle porque os ratos sujeitos a operação simulada não sejam objecto de uma reação sistêmica à lesão induzida pelo IR. </li><li> Lavar o conteúdo intestinal utilizando 30 ml seringa com agulha gavage anexo preenchido com solução salina e depois cortar o intestino longitudinalmente. Se é necessária uma amostra de intestino para análise da expressão do gene, um fragmento cortado longitudinalmente 1,5 milímetros, e utilizar a parte restante para análise histológica. </li><li> Para análise histológica, preparar um rocambole usando um par de fórceps para rolar a intestine. </li><li> Para manter a forma enrolada, colocar as peças de intestino entre almofadas de espuma de biópsia em cassetes de tecido (Figura 2). Coloque as cassetes em formalina a 10% tamponada. </li><li> Corrigir o tecido em formalina durante pelo menos 24 h. Substituir formalina com 70% de etanol durante mais 24 horas adicionais. tecido loja em etanol 70% indefinidamente à temperatura ambiente. </li><li> Incorporar-se em parafina, cortadas secções de 5 | iM e mancha com hematoxilina e eosina utilizando um protocolo padrão (Figura 3). </li></ol> 6. Scoring <ol><li> Pontuação da lesão de isquemia-reperfusão murino como resumido na Tabela 2. Escolha um método de pontuação apropriada. </li><li> Opcional: Dividir o campo de visão em quatro secções visto que a gravidade da lesão varia ao longo da secção. </li><li> Calcule a média das notas de cada seção da pontuação obtida cegamente. </li><li> Comparar o grau do tecido lesado entre casos e controle, bem como a the ilesa tecido utilizando um teste de Kruskal-Wallis, seguido do teste de comparações múltiplas de um Dunn. </li></ol>

<ol><li>Eltzschig, H. K., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia+and+reperfusion--from+mechanism+to+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation.</a> Nat Med. 17, 1391-1401 (2011).</li>
<li>Lenaerts, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+in+intestinal+ischemia-reperfusion+injury%3A+implications+for+intestinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">New insights in intestinal ischemia-reperfusion injury: implications for intestinal transplantation.</a> Curr Opin Organ Transplant. 18, 298-303 (2013).</li>
<li>Yasuhara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+mesenteric+ischemia%3A+the+challenge+of+gastroenterology%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Today%22%5BJournal%5D)">Acute mesenteric ischemia: the challenge of gastroenterology.</a> Surg Today. 35, 185-195 (2005).</li>
<li>Perez-Chanona, E., Muhlbauer, M., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbiota+protects+against+ischemia%2Freperfusion-induced+intestinal+injury+through+nucleotide-binding+oligomerization+domain-containing+protein+2+%28NOD2%29+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The microbiota protects against ischemia/reperfusion-induced intestinal injury through nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 2 (NOD2) signaling.</a> Am J Pathol. 184, 2965-2975 (2014).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delineating+the+relationships+among+the+formation+of+reactive+oxygen+species%2C+cell+membrane+instability+and+innate+autoimmunity+in+intestinal+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Delineating the relationships among the formation of reactive oxygen species, cell membrane instability and innate autoimmunity in intestinal reperfusion injury.</a> Mol Immunol. 58, 151-159 (2014).</li>
<li>Yoshiya, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+gut+commensal+bacteria+attenuates+intestinal+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Depletion of gut commensal bacteria attenuates intestinal ischemia/reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 301, G1020-G1030 (2011).</li>
<li>Wu, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+receptor+for+complement+component+C3a+mediates+protection+from+intestinal+ischemia-reperfusion+injuries+by+inhibiting+neutrophil+mobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The receptor for complement component C3a mediates protection from intestinal ischemia-reperfusion injuries by inhibiting neutrophil mobilization.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 9439-9444 (2013).</li>
<li>Muhlbauer, M., Perez-Chanona, E., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell-specific+MyD88+signaling+mediates+ischemia%2Freperfusion-induced+intestinal+injury+independent+of+microbial+status%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell-specific MyD88 signaling mediates ischemia/reperfusion-induced intestinal injury independent of microbial status.</a> Inflamm Bowel Dis. 19, 2857-2866 (2013).</li>
<li>Gonzalez, L. M., Moeser, A. J., Blikslager, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemia-reperfusion-induced+intestinal+injury%3A+progress+and+promise+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemia-reperfusion-induced intestinal injury: progress and promise for translational research.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 308, G63-G75 (2015).</li>
<li>Megison, S. M., Horton, J. W., Chao, H., Walker, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+for+intestinal+ischemia+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A new model for intestinal ischemia in the rat.</a> J Surg Res. 49, 168-173 (1990).</li>
<li>Goldsmith, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+cell-derived+mu-opioid+signaling+protects+against+ischemia+reperfusion+injury+through+PI3K+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial cell-derived mu-opioid signaling protects against ischemia reperfusion injury through PI3K signaling.</a> Am J Pathol. 182, 776-785 (2013).</li>
<li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+synthase+kinase-3beta+inhibition+attenuates+the+development+of+ischaemia%2Freperfusion+injury+of+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Glycogen synthase kinase-3beta inhibition attenuates the development of ischaemia/reperfusion injury of the gut.</a> Intensive Care Med. 33, 880-893 (2007).</li>
<li>Farber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+specific+inhibitor+of+apoptosis+decreases+tissue+injury+after+intestinal+ischemia-reperfusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">A specific inhibitor of apoptosis decreases tissue injury after intestinal ischemia-reperfusion in mice.</a> J Vasc Surg. 30, 752-760 (1999).</li>
<li>Ben, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR4+mediates+lung+injury+and+inflammation+in+intestinal+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">TLR4 mediates lung injury and inflammation in intestinal ischemia-reperfusion.</a> J Surg Res. 174, 326-333 (2012).</li>
<li>Watson, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+ischemia%2Freperfusion+injury+triggers+activation+of+innate+toll-like+receptor+4+and+adaptive+chemokine+programs%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Intestinal ischemia/reperfusion injury triggers activation of innate toll-like receptor 4 and adaptive chemokine programs.</a> Transplant Proc. 40, 3339-3341 (2008).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+MyD88+signaling+pathway+inhibits+ischemia-reperfusion+injury+in+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Activation of the MyD88 signaling pathway inhibits ischemia-reperfusion injury in the small intestine.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G324-G334 (2012).</li>
<li>Murayama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JNK+%28c-Jun+NH2+terminal+kinase%29+and+p38+during+ischemia+reperfusion+injury+in+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">JNK (c-Jun NH2 terminal kinase) and p38 during ischemia reperfusion injury in the small intestine.</a> Transplantation. 81, 1325-1330 (2006).</li>
<li>Park, P. O., Haglund, U., Bulkley, G. B., Falt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sequence+of+development+of+intestinal+tissue+injury+after+strangulation+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">The sequence of development of intestinal tissue injury after strangulation ischemia and reperfusion.</a> Surgery. 107, 574-580 (1990).</li>
<li>Jilling, T., Lu, J., Jackson, M., Caplan, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+apoptosis+initiates+gross+bowel+necrosis+in+an+experimental+rat+model+of+neonatal+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial apoptosis initiates gross bowel necrosis in an experimental rat model of neonatal necrotizing enterocolitis.</a> Pediatr Res. 55, 622-629 (2004).</li>
<li>Aprahamian, C. J., Lorenz, R. G., Harmon, C. M., Dimmit, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+2+is+protective+of+ischemia-reperfusion-mediated+small-bowel+injury+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 2 is protective of ischemia-reperfusion-mediated small-bowel injury in a murine model.</a> Pediatr Crit Care Med. 9, 105-109 (2008).</li>
<li>Tatum, P. M., Harmon, C. M., Lorenz, R. G., Dimmitt, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+4+is+protective+against+neonatal+murine+ischemia-reperfusion+intestinal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 4 is protective against neonatal murine ischemia-reperfusion intestinal injury.</a> J Pediatr Surg. 45, 1246-1255 (2010).</li>
<li>Fleming, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-phospholipid+antibodies+restore+mesenteric+ischemia%2Freperfusion-induced+injury+in+complement+receptor+2%2Fcomplement+receptor+1-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anti-phospholipid antibodies restore mesenteric ischemia/reperfusion-induced injury in complement receptor 2/complement receptor 1-deficient mice.</a> J. Immunol. 173, 7055-7061 (2004).</li>
<li>Fleming, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+deficient+in+complement+receptors+1+and+2+lack+a+tissue+injury-inducing+subset+of+the+natural+antibody+repertoire%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mice deficient in complement receptors 1 and 2 lack a tissue injury-inducing subset of the natural antibody repertoire.</a> J. Immunol. 169, 2126-2133 (2002).</li>
<li>Lapchak, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+orchestrate+remote+tissue+damage+after+mesenteric+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Platelets orchestrate remote tissue damage after mesenteric ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G888-G897 (2012).</li>
<li>Rehrig, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complement+inhibitor%2C+complement+receptor+1-related+gene%2Fprotein+y-Ig+attenuates+intestinal+damage+after+the+onset+of+mesenteric+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Complement inhibitor, complement receptor 1-related gene/protein y-Ig attenuates intestinal damage after the onset of mesenteric ischemia/reperfusion injury in mice.</a> J. Immunol. 167, 5921-5927 (2001).</li>
<li>Hoffman, S. M., Wang, H., Pope, M. R., Fleming, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+infection+alters+MyD88+and+Trif+signalling+in+response+to+intestinal+ischaemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Helicobacter infection alters MyD88 and Trif signalling in response to intestinal ischaemia-reperfusion.</a> Exp Physiol. 96, 104-113 (2011).</li>
<li>Moses, T., Wagner, L., Fleming, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR4-mediated+Cox-2+expression+increases+intestinal+ischemia%2Freperfusion-induced+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">TLR4-mediated Cox-2 expression increases intestinal ischemia/reperfusion-induced damage.</a> J Leukoc Biol. 86, 971-980 (2009).</li>
<li>Feinman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIF-1+mediates+pathogenic+inflammatory+responses+to+intestinal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">HIF-1 mediates pathogenic inflammatory responses to intestinal ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 299, G833-G843 (2010).</li>
<li>Lapchak, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+platelet+factor+4+in+local+and+remote+tissue+damage+in+a+mouse+model+of+mesenteric+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">The role of platelet factor 4 in local and remote tissue damage in a mouse model of mesenteric ischemia/reperfusion injury.</a> PloS one. 7, e39934(2012).</li>
<li>Wen, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+postconditioning+during+reperfusion+attenuates+intestinal+injury+and+mucosal+cell+apoptosis+by+inhibiting+JAK%2FSTAT+signaling+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Ischemic postconditioning during reperfusion attenuates intestinal injury and mucosal cell apoptosis by inhibiting JAK/STAT signaling activation.</a> Shock. 38, 411-419 (2012).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+variations+of+the+ileal+microbiota+in+intestinal+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Temporal variations of the ileal microbiota in intestinal ischemia and reperfusion.</a> Shock. 39, 96-103 (2013).</li>
<li>Zou, L., Attuwaybi, B., Kone, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+NF-kappa+B+inhibition+on+mesenteric+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of NF-kappa B inhibition on mesenteric ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 284, G713-G721 (2003).</li>
<li>Hassoun, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-melanocyte-stimulating+hormone+protects+against+mesenteric+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Alpha-melanocyte-stimulating hormone protects against mesenteric ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 282, G1059-G1068 (2002).</li>
<li>Stallion, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia%2Freperfusion%3A+a+clinically+relevant+model+of+intestinal+injury+yielding+systemic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Ischemia/reperfusion: a clinically relevant model of intestinal injury yielding systemic inflammation.</a> J Pediatr Surg. 40, 470-477 (2005).</li>
<li>Blikslager, A. T., Roberts, M. C., Rhoads, J. M., Argenzio, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+reperfusion+injury+an+important+cause+of+mucosal+damage+after+porcine+intestinal+ischemia%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Is reperfusion injury an important cause of mucosal damage after porcine intestinal ischemia?</a> Surgery. 121, 526-534 (1997).</li>
<li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+stem+cells+in+small+intestine+and+colon+by+marker+gene+Lgr5%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of stem cells in small intestine and colon by marker gene Lgr5.</a> Nature. 449, 1003-1007 (2007).</li>
<li>Victoni, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+remote+tissue+injury+upon+intestinal+ischemia+and+reperfusion+depends+on+the+TLR%2FMyD88+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Local and remote tissue injury upon intestinal ischemia and reperfusion depends on the TLR/MyD88 signaling pathway.</a> Med Microbiol Immunol. 199, 35-42 (2010).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+2+mediates+ischemia-reperfusion+injury+of+the+small+intestine+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 2 mediates ischemia-reperfusion injury of the small intestine in adult mice.</a> PloS one. 9, e110441(2014).</li>
<li>Pope, M. R., Fleming, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR2+modulates+antibodies+required+for+intestinal+ischemia%2Freperfusion-induced+damage+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR2 modulates antibodies required for intestinal ischemia/reperfusion-induced damage and inflammation.</a> J. Immunol. 194, 1190-1198 (2015).</li>
<li>Leung, F. W., Su, K. C., Passaro, E. Jr, Guth, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+differences+in+gut+blood+flow+and+mucosal+damage+in+response+to+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regional differences in gut blood flow and mucosal damage in response to ischemia and reperfusion.</a> Am J Physiol. 263, G301-G305 (1992).</li>
<li>Chiu, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+mucosal+lesion+in+low-flow+states.+I.+A+morphological%2C+hemodynamic%2C+and+metabolic+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal.</a> Arch Surg. 101, 478-483 (1970).</li>
<li>Quaedackers, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+evaluation+of+methods+for+grading+histologic+injury+following+ischemia%2Freperfusion+of+the+small+bowel%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">An evaluation of methods for grading histologic injury following ischemia/reperfusion of the small bowel.</a> Transplant Proc. 32, 1307-1310 (2000).</li>
<li>Bianciardi, P., Scorza, R., Ghilardi, G., Samaja, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xanthine+oxido-reductase+activity+in+ischemic+human+and+rat+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Res%22%5BJournal%5D)">Xanthine oxido-reductase activity in ischemic human and rat intestine.</a> Free Radic Res. 38, 919-925 (2004).</li>
<li>Yandza, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+as+a+preclinical+model+for+intestinal+ischemia-reperfusion+and+transplantation+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">The pig as a preclinical model for intestinal ischemia-reperfusion and transplantation studies.</a> J Surg Res. 178, 807-819 (2012).</li>
</ol>

Os autores declaram não haver conflito de interesses

O desenvolvimento de modelos de rato de lesão IR intestinal têm melhorado muito a compreensão dos mecanismos de lesão tecidual e ajudado no desenvolvimento de potenciais estratégias terapêuticas para minimizar danos nos tecidos 7,9,11,34. Os passos críticos deste protocolo é o posicionamento adequado dos clipes microvasculares, timing correto da isquemia e histológica adequada avaliação da lesão IR. A duração da isquemia é crítico para a subsequente lesão do epitélio. O tempo típi...

O intestino é muito sensível à interrupção do fluxo sanguíneo que provoca isquemia e epitelial danos. A reperfusão após isquemia fornece a re-oxigenação do tecido, e pode promover ainda mais a patologia. Portanto, a lesão por isquemia e reperfusão intestinal está associada com uma vasta gama de patologias, incluindo enterocolite necrotizante, a rejeição de aloenxertos em transplantes do intestino delgado, complicações de cirurgia abdominal aórtica do aneurisma, bypass cardiopulmonar, e 1,2 inflamatória doença do intestino. Lesão intestinal IR, isquemia mesentérica especialmente grave, é uma doença potencialmente fatal, resultando em morbidade e mortalidade 3. Embora pouco compreendida, isquemia-reperfusão (IR) lesão é pensada para ser associada com mudanças na flora intestinal, bem como a produção de espécies de oxigénio reactivas e citocinas inflamatórias e quimiocinas 1,4-6. Isto leva a activação de ambos emNate e mecanismos imunes adaptativas que promovem a inflamação e lesão tecidual 1,7,8. Os modelos animais são fundamentais para a compreensão dos mecanismos de lesão IR, uma vez que permitem fácil gain- e perda de função experimentos genéticos. Vários modelos animais de IR foram desenvolvidos que incluem a oclusão vascular completa, isquemia baixo fluxo, e segmentado oclusão vascular (resumidos num recente revisão abrangente 9). A isquemia intestinal provocada por uma oclusão vascular completa da artéria mesentérica superior (SMA) é um modelo simples e utilizada de IR em grandes animais roedores e 9-11. No entanto, diferentes áreas do intestino ter susceptibilidade diferente a uma lesão. Além disso, a diversidade de anestésicos, analgésicos, as técnicas de oclusão da artéria, bem como inconsistência na duração das lesões de isquemia e recuperação resultado em graus variáveis ​​de lesão confundir o nosso entendimento da biologia do IR através de vários Studies. A Tabela 1 mostra estas inconsistências nos estudos IR murino. A maior desvantagem de usar o tempo de isquemia mais curtos (30-45 min) tem como alvo a janela de recuperação sobre a qual podem ser observadas diferenças discerníveis entre casos e controles. lesão leve para o epitélio pode ser resolvido de uma hora após a reperfusão, portanto especializada métricas patológicos pode ser necessário para encontrar diferenças de restituição epitelial. Em contraste, danos excessivos, como visto por 100 min de lesão isquémica pode resultar na denudement completa do epitélio, em que a restituição não é mais possível, aumentando a taxa de mortalidade, e o tempo de recuperação. Portanto, aqui nós descrevemos o procedimento detalhado de IR intestinal em camundongos que resulta em lesão reprodutível sem mortalidade para incentivar a padronização da técnica em todo o nosso campo. Este modelo de lesão intestinal de IR podem ser utilizados para estudar os mecanismos celulares e moleculares da lesão e da regeneração.

<table><tbody><tr><td>Almofada aquecida</td><td>Sunbeam</td><td>E12107-819</td><td>Alternativa: Braintree Scientific almofada aquecida</td></tr><tr><td>Máquina de anestesia de pesquisa de mesa</td><td>Vasco</td><td>UCAP 0001-0000171</td><td>Alternativa: Parkland Scientific,</td></tr><tr><td>V3000PS Cone de nariz</td><td>Parkland Scientific</td><td>ARES500</td><td></td></tr><tr><td>Vasilha de limpeza e cartucho de reposição</td><td>Parkland Scientific</td><td>80000, 80120</td><td></td></tr><tr><td>Câmara de Indução</td><td>Surgivet</td><td>V711802</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-013-10</td><td>Substância controlada, entre em contato com a máquina</td></tr><tr><td>de cortar animais</td> IACUC<td>Oster&nbsp;</td><td>Oster Golden A5 078005-050-003</td><td></td></tr><tr><td>Pomada oftálmica</td><td>Webster</td><td>8804604</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>McKesson</td><td>562766</td><td>Substância controlada, entre em contato com IACUC</td></tr><tr><td>Ketaset (Cetamina HCl)</td> <td>Pfizer</td><td>NADA 45-290</td><td>Substância controlada, entre em contato com IACUC</td></tr><tr><td>Dicas de algodão</td><td>Produtos médicos puritanos</td><td>806-WC</td><td>Autoclave antes de usar</td></tr><tr><td>Produtos Betadine</td><td>Purdue</td><td>67618-150-17</td> Solução salina estéril de <td>iodopovidona a 10%</td></tr><tr><td></td><td>Aspen</td><td>46066-807-60</td><td>Ajuste à temperatura ambiente antes de usar</td></tr><tr><td>Termômetro IR para roedores</td><td>BIOSEB</td><td>BIO-IRB153</td><td></td></tr><tr><td>Micro clipes vasculares, 70 g</td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>RS5424, RS5435</td><td>Alternativa: WPI 14121, para oclusão SMA</td></tr><tr><td>Micro clipes vasculares, 40 g</td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>RS6472</td><td>Alternativa:WPI 14120, para oclusão de vasos colaterais</td></tr><tr><td>Pinça de aplicação de clipe</td><td>World Precision Instruments</td><td>14189</td><td>Alternativa: Roboz #RS-5410 ou&nbsp; #RS-5440</td></tr><tr><td>Gill's 3 hematoxilina</td><td>Thermo Scientific</td><td>14-390-17</td><td></td></tr><tr><td>Grampos cirúrgicos, Reflex 9 mm</td><td>Cell Point Scientific</td><td>201-1000</td><td></td></tr><tr><td>Aplicador de autoclip</td><td>Beckton Almofada de espuma Byopsy Dickinson</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td></td><td>de tecido Simport</td><td>M476-1</td><td></td></tr><tr><td>Fisher</td><td>Healthcare</td><td>15182701A</td><td>Histosette II combinação de tampa e base</td></tr><tr><td>10% de formalina tamponada Fisher</td><td>Scientific</td><td>245-684</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de íris cirúrgica</td><td>World Precision Instruments</td><td>501263-G SC</td><td>Alternativa: Roboz RS6816</td></tr><tr><td>Tesoura de operação</td><td>World Precision Instruments</td><td>501219-G</td><td>Alternativa: Pinça de curativo Roboz RS6814</td></tr><tr><td></td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>RS-5228, RS-8122</td><td>Alternativa: World Precision Instruments 1519-G</td></tr><tr><td>Heparina, livre de endotoxinas, 300 unidades USP/frasco, 50 mg</td><td>Pinça de</td> remoção de clipe de ferida Sigma <td>2106</td><td></td></tr><tr><td>Reflex</td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>RS-9263</td><td>Alternativa: World Precision Instruments: 500347</td></tr><tr><td>Mouses C57BL/6J mouses&nbsp;</td><td>Jackson Laboratory</td><td>Stock No 0664</td><td></td></tr><tr><td>Curativos não aderentes Telfa, 3 x 4, estéreis</td><td>Pipetas de transferência Coviden</td><td>1050</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand</td><td>Fischer Scientific</td><td>13-711-5AM</td><td>Use pipetas para adicionar solução salina gota a gota</td></tr></tbody></table>

modelo murino de isquemia-reperfusão

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

isquemia intestinal é uma condição de risco de vida associada com uma ampla gama de condições clínicas, incluindo a aterosclerose, trombose, hipotensão, enterocolite necrotizante, transplante do intestino, trauma e inflamação crónica. lesão isquemia-reperfusão (IR) é uma consequência da isquemia mesentérica aguda, causada por fluxo inadequado de sangue através dos vasos mesentéricos, resultando em danos intestinal. A reperfusão após isquemia pode agravar os danos do intestino. Os mecanismos de lesão IR são complexos e pouco conhecidos. Portanto, modelos animais experimentais pequenas são críticas para a compreensão da patofisiologia da lesão de IR e o desenvolvimento de novas terapias. Aqui nós descrevemos um modelo de rato de lesão IR intestinal aguda que fornece lesão reprodutível do intestino delgado sem mortalidade. Isto é conseguido através da indução de isquemia na região do íleo distai por temporalmente ocludinag ramos colaterais periféricos e terminais da artéria mesentérica superior por 60 min usando clipes microvasculares. A reperfusão durante 1 hora, ou 2 horas após a lesão em resultados lesão reprodutível do intestino examinado por análise histológica. posição apropriada dos clipes microvasculares é crítica para o processo. Por isso, o clipe de vídeo fornece uma descrição detalhada visuais passo-a-passo desta técnica. Este modelo de lesão intestinal de IR podem ser utilizados para estudar os mecanismos celulares e moleculares da lesão e da regeneração.

Nós optimizada do protocolo experimental de cirurgia de IV para se obter lesão induzida IR reprodutível do íleo em ratos. Os resultados representativos são demonstradas nesta secção. A Figura 1 mostra exemplos de posição clips microvasculares para induzir isquemia do íleo. setas pretas mostram a posição dos principais clipes de oclusão primeiros ramos da ordem de artéria mesentérica superior. setas verdes most...

Aqui nós descrevemos o procedimento detalhado de isquemia e reperfusão em ratos que resulta em lesão reprodutível sem mortalidade para incentivar a padronização da técnica em todo o campo. Este modelo de lesão por isquemia-reperfusão intestinal pode ser utilizada para estudar os mecanismos celulares e moleculares da lesão e da regeneração.

Modelo murino de isquemia-reperfusão

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

O objetivo geral deste procedimento é realizar uma lesão induzida por isquemia e reperfusão intestinal reprodutível na região do íleo distal de camundongos, por meio da oclusão temporária dos ramos colaterais periféricos e terminais da artéria mesentérica superior. Este método pode ajudar a compreender métodos básicos na área da gastroenterologia e imunologia, como o entendimento dos mecanismos de lesão e regeneração da patela. A vantagem desta técnica é que pode ser realizada por qualquer indivíduo treinado em um laboratório.Outra vantagem é que o próprio procedimento não causa mortalidade em camundongos. Prepare o local cirúrgico conforme especificado no protocolo descrito no texto. Em seguida, utilize tesoura cirúrgica para realizar uma laparotomia mediana de três a cinco centímetros.Em seguida, cubra a área cirúrgica com uma gaze estéril não aderente umedecida com solução salina. Isole o ceco e o íleo, e use cotonetes umedecidos com solução salina para expor a artéria mesentérica superior. Depois, para facilitar a aplicação do clipe, use pinças de tração para levantar suavemente o intestino e pegue uma tesoura de íris para cortar o mesentério em ambos os lados da artéria mesent

murine-model-of-intestinal-ischemia-reperfusion-injury

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

O trauma cirúrgico induz uma resposta inflamatória. As citocinas e ligandos endógenos são conhecidos para modular o tamanho do enfarte do miocárdio após isquemia e reperfusão. Apresentamos um modelo modificado fechado de tórax murino de isquemia e reperfusão utilizando pesos pendurados para minimizar os efeitos de toracotomia.

Um modelo fechado de tórax murino de isquemia do miocárdio e reperfusão

Nós introduzimos um método cirúrgico para induzir experimental de isquemia / reperfusão (I / R) prejuízo para simular o infarto do miocárdio (MI) em modelos de mouse que permite uma maior clareza no posicionamento da ligadura na artéria descendente anterior esquerda (LAD) para aumentar a reprodutibilidade de experimentos MI em camundongos.

Um modelo murino de isquemia-reperfusão, através da ligadura da artéria Descendente Anterior Esquerda

Este protocolo permitirá aos leitores para estabelecer com sucesso um modelo suíno de isquemia intestinal segmentar e posteriormente isolar e cultura de células-tronco para o estudo da reparação epitelial após lesão intestinais.

Isolamento de células-tronco intestinal e cultura em um modelo suíno de isquemia Intestinal pequena segmentar

Para investigar a fisiopatologia do AVC, é criado um modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral. Nós distalmente ligate da artéria cerebral média direita e artéria carótida comum direita e restaurar o fluxo sanguíneo após 10 ou 40 min de isquemia.

Modelo de Mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão Cerebral

Nisto nós descrevemos um procedimento cirúrgico que mostra como conseguir a ligadura permanente da artéria coronária descendente esquerdo-anterior nos ratos. Este modelo é de grande relevância para investigar a fisiopatologia do infarto do miocárdio e os processos biológicos concomitantes.

Modelo de infarto do miocárdio murino usando ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda

Nós descrevemos em detalhe um modelo clinicamente relevante do tumor das metástases do fígado do cancro colorretal (crlm) e a influência do reperfusão da isquemia do fígado (I/R) no crescimento e na metástase do tumor. Este modelo pode ajudar a compreender melhor os mecanismos subjacentes à promoção cirurgia-induzida do crescimento metastático do fígado.

Modelo murino de tumores hepáticos metastáticos no cenário de lesão de reperfusão de isquemia

A lesão por isquemia renal está associada à alta morbidade e mortalidade em pacientes hospitalizados. Aqui, apresentamos um modelo de camundongo simples e eficaz de lesão unilateral de isquemia renal-reperfusão e fornecemos uma visão geral sequencial das alterações patológicas representativas observadas no rim.

Um modelo eficaz de rato de isquemia renal unilateral-reperfusão lesão

Descrevemos um método simples e reprodutível que pode induzir infarto do miocárdio ou lesão de isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos por ligadura precisa da artéria coronária descendente anterior esquerda através de micromanipulação.

Indução de Infarto do Miocárdio e Lesão de Isquemia-Reperfusão Miocárdica em Camundongos

Descrevemos como gerar um modelo cirúrgico amplamente utilizado de lesão de isquemia-reperfusão (IRI) intestinal em roedores. O procedimento envolve a oclusão da artéria mesentérica superior seguida da restauração do fluxo sanguíneo. Este modelo é útil para estudos que investigam causas oclusivas de IRI intestinal em medicina veterinária e humana.

Modelo de lesão de isquemia-reperfusão intestinal por roedores via oclusão da artéria mesentérica superior

O protocolo descreve um método viável, confiável e reprodutível de pinçamento hilar pulmonar esquerdo que pode ser usado para estudar a lesão de isquemia-reperfusão pulmonar em modelos de camundongos.

Modelo de grampo hilar pulmonar esquerdo murino de lesão de isquemia pulmonar e reperfusão

Este protocolo apresenta um método para induzir lesão de isquemia-reperfusão mesentérica e visualizar armadilhas extracelulares de neutrófilos (TNEs) em vênulas mesentéricas usando microscopia intravital. O fluxo sanguíneo na artéria mesentérica superior foi restrito por 1 h, seguido de reperfusão, permitindo a quantificação direta da adesão leucocitária e da NETose.

Visualização de armadilhas extracelulares de neutrófilos em vênulas mesentéricas após lesão de isquemia-reperfusão mesentérica por microscopia intravital

Aprenda a induzir lesão de isquemia-reperfusão intestinal em camundongos para estudos de gastroenterologia e imunologia. Este método reprodutível permite investigar mecanismos celulares de lesão e regeneração tecidual sem causar mortalidade.

Modelo murino de isquemia-reperfusão

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