Name: Administração intra-traqueal de Haemophilus influenzae No mouse modelos para o Estudo de inflamação das vias aéreas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Aprenda a técnica de inoculação intra-traqueal de Haemophilus influenzae em camundongos para estudar inflamação das vias aéreos. Este método reprodutível permite investigar respostas imunes e mecanismos regulatórios pulmonares.

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Agradecemos ao Dr. Carson Harrod pela leitura crítica do manuscrito. Também agradecemos ao Sr. Minghui Zeng e aos Drs. Mahesh Kathania e Prashant Khare por suas contribuições. Este trabalho foi apoiado por doações da American Cancer Society (bolsa Research Scholar, 122713-RSG-12-260-01-LIB) e do Sammons Cancer Center (bolsa do Projeto Piloto) para K. Venuprasad.

Todos os experimentos foram realizados em conformidade com as diretrizes da Comissão Institucional animal Cuidado e Uso (IACUC) do Instituto de Pesquisa Baylor. 1. A cultura não tipificável de Haemophilus influenzae (NTHi) e preparar o inóculo <ol><li> Placa de NTHi numa placa de agar de chocolate e manter a placa invertida numa atmosfera humidificada de CO 2 incubadora durante a noite a 37 ° C e 5% de CO 2. No dia seguinte, a cultura das bactérias em caldo de infusão cérebro coração. Em seguida, adicionar 1 ml de caldo num tubo esterilizado de 1,5 mL. </li><li> Centrifugar a 4.000 xg durante 5 min à temperatura ambiente. Em seguida, descartar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em 1 ml de solução estéril de PBS 1x. Repita este passo uma vez. </li><li> Transferir 100 ul da solução de re-suspensa em 900 ul de 1x PBS e medir a absorvência da cultura diluída a 600 nm comprimento de onda num espectrofotómetro. </li><li> Determinar a unidade de viabilidade e de formação de colóniass (CFUs) do inoculo de cultura de diluições em série 1:10 em placas de agar de chocolate e incubando durante a noite a 37 ° C e 5% de CO 2. </li><li> Com base na viabilidade e CFU determinada a partir da etapa anterior, ajustar o inóculo até uma concentração final de 20 x 10 6 CFU / mL. </li></ol> 2. Intra-traqueal (IT) A instilação <ol><li> Injetar o mouse por via intraperitoneal (ip) com 0,1 ml / 10 g de peso corporal do rato com um + 20 mg solução de 150 mg / ml de cetamina / ml de xilazina. O procedimento deve ser feito na capa com uma fonte de luz para manter o animal aquecido. </li><li> Comprima o espaço interdigital do mouse para verificar se o mouse está devidamente anestesiados. </li><li> Posicione o mouse sobre as suas costas. Raspar a área ventral do pescoço e desinfectar com clorexidina e álcool etílico a 70%. </li><li> Levantar a pele da parte ventral superior do pescoço de ratos usando uma pinça dente. Fazer uma pequena incisão (0,5-1,0 cm) acima do timo utilizando um bisturie dissecar cuidadosamente o músculo para expor a traqueia. <ol><li> Usando uma seringa de 1 ml com uma agulha de 27 G, injectar lentamente 0,05 ml de ar, seguido por 0,05 ml de NTHi obtidos a partir de uma secção ou solução salina como controlo, seguida por outra de ar de 0,05 ml. Manter animais vertical por cerca de 1 min. </li></ol></li><li> Fechar a incisão com cola cirúrgica. Mantenha o mouse lateralmente reclinada e quente por cerca de 10 min. </li></ol> 3. Coleção LBA <ol><li> Sacrificar o mouse por cervical deslocamento de 24 horas após a infecção. </li><li> Abrir a cavidade abdominal do rato com uma tesoura anatômicas e cortou a aorta ventral a sangrar. Expor a parte ventral do pulmão. </li><li> Expor a traquéia e entubar com um cateter de calibre 20. Instilar 0,8 ml de tampão LBA (1x PBS, 0,1% de dextrose, 10 U / ml de heparina) e recolher a lavagem por aspiração suave. Repita este procedimento três vezes. </li><li> Contar o número total de células em 100 ul de suspensão de LBA utilizando um hemocytometros em 10x com Trypan Blue coloração. </li><li> Preparar lâminas para coloração Giemsa modificado. Alíquota de 100 uL de BALF nos poços apropriados da Cytospin e centrifugar a 500 xg durante 5 min. Secam-se as lâminas durante 10 minutos e corar as células com corante de Giemsa modificado de acordo com os protocolos do fabricante. </li><li> Use as restantes células para posterior análise, tal como células de fluorescência activada (FACS), microscopia confocal, a expressão do gene e western blot 11-13. </li></ol> 4. Preparação Histopatologia <ol><li> Para análise histopatológica, infectar ratos com NTHi como descrito no passo 2.4. Após 24 horas de infecção, sacrificar os animais por deslocação cervical. Cortar abrir a cavidade torácica, com uma tesoura anatômicas para expor os pulmões e a traqueia, como mencionado antes. Em seguida, insira o cateter calibre 20 na traqueia. </li><li> Encha os pulmões com 2% de solução de agarose quente preparado em formalina a 4%. Uma vez opulmões são totalmente inflado, gelo lugar no topo dos pulmões para solidificar a solução de agarose. </li><li> Em seguida, retire cuidadosamente a ficha torácica e colocá-lo em uma solução de 50 ml de formalina a 4% em 1x PBS até que seja processada para (H &amp; E) seções hematoxilina e eosina. </li></ol> 5. FACS coloração de células no LBA <ol><li> Colocar 1 x 10 5 células do fluido de LBA numa placa de micro titulação de fundo em V de 96 poços. </li><li> Lavar as células com 300 uL de PBS frio 1x e centrifugação a 4000 xg durante 3 minutos a 4 ° C. </li><li> Corar as células com solução de coloração de células em 100 ul de PBS 1x (1: 1000 de diluição) e manter à temperatura ambiente durante 15 min. </li><li> Lavar as células com 300 uL de frio 1x PBS a 4000 xg durante 3 minutos a 4 ° C. </li><li> Manter as células em 100 ul de tampão de lavagem de FACS [tampão de lavagem (1x PBS, 2% de FBS, 1 mM de EDTA, 0,1% de azida de sódio] contendo 1: 100 diluído Fc-bloco durante 15 min a 4 ° C. </li><li> células centrifugar a 4000 xg por 3 min e descartar supernatant. </li><li> As células são coradas com 100 ul de coquetel de coloração da superfície (diluição 1: 100) em tampão de lavagem de FACS durante 30 min a 4 ° C. </li><li> Lave as células três vezes com 300 ul de tampão de lavagem FACS a 4000 xg durante 3 minutos a 4 ° C. </li><li> Fixar as células em 100 uL de paraformaldeído a 4% durante 15 min à temperatura ambiente. </li><li> Lavar as células duas vezes com 300 ul de 1x PBS a 400 xg durante 3 min a 4 ° C e re-suspensão em 300 ul de tampão de lavagem de FACS. </li><li> Tornar os controlos de coloração de cor única, utilizando citometria de fluxo esferas. <ol><li> Adicionar uma gota de grânulos para a placa de microlitro de 96 poços de fundo em V e lava-se com 200 ul de PBS 1x. </li><li> Adicionar 1 ml de anticorpo de coloração a 100 ul de PBS 1x e grânulos e incubar à temperatura ambiente durante 5 min. </li><li> Lavar as pérolas duas vezes com 300 ul de PBS 1x. </li></ol></li><li> Analisar controles e células isoladas coradas por citometria de fluxo 14. </li></ol> 6. A homogeneização de tecido pulmonar para isolar RNA <ol><li> Após a infecção, recolhe um pequeno pedaço de pulmão (20-40 mg) e mantê-lo em RNA estabilizador reagente a 4 ° C durante a noite. Em seguida, armazená-lo a -80 ° C até ao passo seguinte. </li><li> Lavar os tecidos do pulmão em frio 1x PBS para se livrar do reagente de estabilização RNA. </li><li> Colocar o tecido em um tubo de 1,5 ml de centrífuga contendo tampão de lise (1 mL de tampão de lise + 10 ul β-mercaptoetanol). </li><li> Pique o tecido em pequenos pedaços com uma tesoura de pontas e homogeneizar utilizando um pilão pelota do motor sem fio para 20-40 seg. </li><li> Manter o lisado em gelo durante 5 minutos e continue com a etapa 7.1. </li></ol> 7. RNA isolamento do pulmão <ol><li> Centrifuga-se o lisado a 18.000 xg durante 3 min. Remover o sobrenadante por pipetagem e transferir cuidadosamente para um novo tubo de 1,5 mL. </li><li> Adicionar 1 volume de etanol a 70% ao lisado. Misturar imediatamente por pipetagem e esperar por 2-4 min. </li><li> Transferir para 700 ul de lisado a uma coluna de rotação colocadoem um tubo de recolha de 2 ml. </li><li> Centrifugar a 9.600 xg durante 15 seg e descartar o fluxo de passagem. </li><li> Adicionar 350 ul de tampão de lavagem rigorosa e centrifugar a 9600 xg por 15 s. Descartar o fluxo de passagem. </li><li> Adicionar 80 ul de ADNase I directamente para a membrana da coluna de spin e mantê-lo à temperatura ambiente durante 15 min. </li><li> Adicionar 350 mL de buffer rigorosas de lavagem para a coluna de centrifugação e centrifugar a 9600 xg por 15 s. Descartar o fluxo de passagem. </li><li> Adicionar 500 ul de tampão de lavagem de ARN e centrifugar a 9600 xg durante 15 seg. Descartar o fluxo de passagem. </li><li> Adicionar 500 mL de tampão de lavagem RNA e girar a 9.600 g durante 2 min. Descartar o fluxo de passagem. </li><li> Colocar a coluna de centrifugação em um novo tubo de recolha de 2 ml e centrifugar a 9600 x g durante 1 min. Descartar o fluxo de passagem. </li><li> Adicionar 30-50 mL água livre de ARNase directamente para a coluna de centrifugação e centrifugar a 9600 x g durante 1 min. ARN armazenar a -80 ° C. </li><li> Realizar a análise de RNA-Seq 14. </li></ol>

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<li>Decramer, M., Janssens, W., Miravitlles, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+obstructive+pulmonary+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Chronic obstructive pulmonary disease.</a> Lancet. 379, 1341-1351 (2012).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Aqui, nós descrevemos um procedimento único e minimamente invasivo para inocular os pulmões de ratinhos com um agente patogénico bacteriano pulmão. Nós demonstramos que este procedimento pode ser utilizado para estudar a função de genes diferentes que utilizam ratinhos que são deficientes em genes de vias de sinalização inflamatórias. Este procedimento também pode ser usado para estudar as respostas inflamatória a infecções pulmonares virais e fúngicas. As vantagens deste processo em relação aos outros métodos, tais com...

A inflamação é um mecanismo de defesa imunitário fundamental da contra agentes infecciosos. Ela promove a erradicação do patógeno e reparação de tecidos danificados. Além disso, facilita a recuperação para um estado normal e saudável 1. No entanto, a inflamação desregulado muitas vezes leva a doenças inflamatórias crónicas 2. Inflamação das vias respiratórias é um gatilho inicial para diferentes doenças pulmonares tais como doença pulmonar obstrutiva crónica (DPOC), asma e fibrose pulmonar 3. A influenzae não tipificável (não encapsulado) Haemophilus (NTHi) é associada com doenças inflamatórias superiores e inferiores do pulmão crónicas 4,5. É a espécie dominante isolados das vias aéreas inferiores de crianças e adultos com 4,6,7 doença pulmonar obstrutiva crónica. A resposta inflamatória após a infecção NTHi é caracterizado pela regulação positiva de citocinas pró-inflamatórias (tais como TNF e IL-1β), e é mediada by mitogen activated protein kinase (MAPK) e fator nuclear-kB (NF-kB) através de receptores toll-like (TLR) 8. modelos de rato são ferramentas muito úteis para analisar a patologia subjacente de doença inflamatória do pulmão, devido à disponibilidade de linhas diferentes de genes deficientes. Vários métodos têm sido utilizados para inocular / bactérias vivas atenuadas e produtos bacterianos, incluindo a instilação intranasal e 9,10 inalação na forma de aerossol. Aqui, nós demonstramos a instilação intra-traqueal. Embora seja utilizada menos frequentemente, esta abordagem é mais eficiente e altamente reprodutível devido à entrega directa do inoculo para o tracto respiratório inferior.

<table><tbody><tr><td>Prato de ágar chocolate</td><td>Fisher Scientific</td><td>CAS50-99-7</td><td></td></tr><tr><td>Dextrose Anidra</td><td>Themo Scientific</td><td>R01300</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Hospira,Inc</td><td>RL-3010</td><td></td></tr><tr><td>Solução rápida e hábil</td><td>Sigma</td><td>GS500-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Agulha de seringa 20/26G&nbsp;</td><td>Seringa BD(</td><td>REF305115/175)</td><td></td></tr><tr><td>Iml</td><td>BD</td><td>REF 309602</td><td></td></tr><tr><td>Cateter 20GA</td><td>BD</td><td>REF</td><td></td></tr> 381433 <tr><td>Tesoura de dissecação, reta, 10 cm de comprimento</td> pinça de íris <td>kentscientific</td><td>INS600393</td><td></td></tr><tr><td>, serrilhada, 10 cm de comprimento</td><td>kentscientific</td><td>INS650915</td><td></td></tr><tr><td>pinça #5 aço inoxidável, 11 cm de comprimento</td><td>kentscientific</td><td></td><td></td>INS600095</tr><tr><td>Formalina 10%</td><td>Fisher Scientific</td><td>CAS 67-56-1</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>peqlab</td><td>35-1020</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de poliestireno de 5ml com fundo redondo</td><td>BD</td><td>REF 352058</td><td></td></tr><tr><td>1,5 ml Tubos de microcentrífuga</td><td>Light Labs</td><td>A-7001-R</td><td></td></tr><tr><td>Reasy Mini&nbsp; kit&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>Motor de pellets pestile (Homoginizador de tecido)</td>Placas de microtitulação de 96 <td>poços Sigma</td><td>Z359971-1EA</td><td></td></tr><tr><td>V bottom Thermo</td><td></td><td>2605</td><td></td></tr><tr><td>1X PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>OneComp eBeads eBioscience</td><td></td><td>01-1111-42</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2-APC</td><td>eBioscience</td><td>17-0454-81</td><td>Diluição de trabalho 1:100</td></tr><tr><td>Ly-6G-eFlor 450</td><td>eBioscience</td><td>48-5931-82</td><td>Diluição de trabalho 1:100</td></tr><tr><td>BSA</td><td>HyClone</td><td>SH30574.03</td><td></td></tr><tr><td>RBC Lysis Buffer (10X)</td><td>Biolegend</td><td>420301</td><td></td></tr><tr><td>Live/Dead fixable aqua kit de coloração de células mortas</td><td>Invitrogen</td><td>L-34957</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0.5M)</td><td>lifetechnologies</td><td>15575-020</td><td></td></tr><tr><td>CD16/ CD32 FcBlock</td><td>BD</td><td>553142</td><td></td></tr><tr><td>Facs tubos de poliestireno tubo inferior redondo</td><td>BD</td><td>352052</td><td></td></tr><tr><td>Formaldeído</td><td>Polyscience</td><td>4018</td><td></td></tr></tbody></table>

administração intra-traqueal de<em&gt; haemophilus influenzae</em&gt; no mouse modelos para o estudo de inflamação das vias aéreas

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Aqui, descrevemos um procedimento detalhado de forma eficiente e entregar diretamente Haemophilus influenzae pelas vias respiratórias inferiores de ratos. Nós demonstramos o procedimento para a preparação H. influenzae inóculo, instilação intra-traqueal de H. influenzae para o pulmão, acúmulo de líquido bronco-alveolar lavagem (LBA), análise de células imunes no LBA, e isolamento de RNA para análise de expressão diferencial de genes. Este procedimento pode ser utilizado para estudar a resposta inflamatória do pulmão para qualquer bactérias, vírus ou fungos. A instilação traqueal directa é mais preferido mais de procedimentos de inalação de aerossóis intranasais ou porque mais eficiente proporciona o inoculo bacteriano para o tracto respiratório inferior com menos ambiguidade.

Instilação intra-traqueal resultou num marcadamente aumentada número de leucócitos no LBA (Figura 1A, painel esquerdo) do que a instalação com solução salina. A análise da contagem diferencial dos leucócitos mostrou claramente aumentou a infiltração de neutrófilos (Figura 1, painel da direita). A análise FACS das células no LBA confirmou ainda mais o aumento do número de neutrófilos (Figura 1B). A análise histológica de secções de H @ E-...

Demonstramos o procedimento para inoculação intratraqueal de Haemophilus influenzae no trato respiratório inferior de camundongos. Esta é uma ferramenta muito útil para estudar as vias de sinalização que regulam a inflamação das vias aéreas em modelos de camundongos.

Administração intra-traqueal de<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; No mouse modelos para o Estudo de inflamação das vias aéreas

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

O objetivo geral deste experimento é estudar as respostas imunes no pulmão durante infecção bacteriana. Este tema pode ajudar a responder algumas questões-chave na área da inflamação pulmonar, como quais são os principais mecanismos regulatórios e genes que inibem ou promovem a inflamação pulmonar. A principal vantagem desta técnica é que ela é muito eficiente e altamente reprodutível devido à administração direta do inóculo bacteriano nas vias respiratórias inferiores.Para começar, plaque a NTHi em uma placa de ágar chocolate. Incube a placa virada para baixo durante a noite, a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono. No dia seguinte, cultive as bactérias em um caldo de infusão cérebro-corpo.Em seguida, em um tubo de microcentrífuga, adicione um mililitro do caldo. Centrifugue a mistura a 4.000 g por cinco minutos à temperatura ambiente. Em seguida, descarte o sobrenadante e re-suspenda o pellet em um mililitro de PBS.Repita este passo de lavagem mais uma vez. Em seguida, dilua 100 microlitros da solução reconstituída em 900 microlitros de PBS e meça a absorbância do cultivo em 600 nanômetros. Utilize esta informação para ajustar o inóculo a 20 milhões de UFC por mililitro.Em seguida, determine a viabilidade e as UFCs do inóculo. Incube de uma a dez diluições seriadas do caldo em placas de ágar chocolate e incube as placas durante a noite. Comece anestesiando o camundongo e verifique se ele está adequadamente anestesiado utilizando um aperto no dedo do pé.Em seguida, posicione o camundongo em decúbito dorsal e retire os pelos da região ventral do pescoço. Desinfete a pele exposta. Agora, levante a pele da parte ventral superior do pescoço com uma pinça dentada, e utilizando um bisturi, faça uma incisão de meio a um centímetro acima do timo.Em seguida, separe cuidadosamente o músculo para expor a traqueia. Na traqueia, injete lentamente 50 microlitros de ar, seguidos por 50 microlitros de NTHi preparado, seguidos por mais 50 microlitros de ar. Para um procedimento de controle negativo, injete solução salina em vez de NTHi.Após a injeção, mantenha o animal na posição vertical por cerca de um minuto. Em seguida, feche a incisão com adesivo tecidual e mantenha o camundongo em decúbito lateral e aquecido por cerca de 10 minutos. 24 horas após a infecção, eutanazie o animal infectado e abra a cavidade abdominal com tesoura anatômica.Em seguida, corte a artéria ventral para sangrar o animal. Depois, exponha a parte ventral do pulmão para acessar a traqueia. Intube a traqueia com um cateter de calibre 20.Usando o cateter, infunda 0,8 mililitros de tampão de LBA e recolha a lavagem por aspiração dental. Repita este procedimento mais três vezes, reunindo as quatro coletas de lavagem em uma única suspensão. Retire uma alíquota de 100 microlitros e centrifugue por dois minutos a 2.000 RPM.Remova o sobrenatante e re-suspenda no tampão de lise de hemácias. Centrifugue e re-suspenda o precipitado com PBS 1x. Em seguida, conte o número total de células em 100 microlitros da suspensão usando um hemocitômetro com ampliação de 10x e coloração com azul de tripano.Em seguida, prepare lâminas para colorir as células. Aliquotar 100 microlitros da suspensão de LBA em poços apropriados de lâminas para citocentrifugação e centrifugar as lâminas a 500 g por cinco minutos. Em seguida, deixe as lâminas secar por 10 minutos à temperatura ambiente e corar as células utilizando uma coloração Giemsa modificada, conforme os protocolos do fabricante.Utilize as células restantes para análises subsequentes, como FACS, microscopia confocal e assim por diante. Após coletar o lavado do pulmão infectado, retire um fragmento de 20-40 miligramas do pulmão e incube-o em reagente estabilizador de RNA a quatro graus Celsius durante a noite, seguido por armazenamento de longo prazo a 80 graus Celsius. Quando estiver pronto, lave as amostras de tecido pulmonar em PBS frio para remover o reagente de estabilização de RNA.Em seguida, coloque o tecido em um tubo de centrífuga de 1,5 mililitro contendo tampão de lise com beta-mercaptoetanol. Depois, com uma tesoura pequena, pique o tecido em pedaços e homogeneíze-os usando um pistilo motorizado por 20-40 segundos. Mantenha o lisado em gelo por cinco minutos e, em seguida, centrifugue a 18.000 g por três minutos.Remova cuidadosamente o sobrenadante e transfira-o para um novo tubo. Em seguida, adicione um volume de etanol a 70% e triture a mistura. Deixe a mistura em repouso a 25 graus Celsius por dois a quatro minutos.Em seguida, transfira até 700 microlitros para uma coluna de centrifugação posicionada em um tubo coletor de dois mililitros e centrifugue a coluna a 9600 g por 15 segundos. Descarte o fluxo inicial, adicione 350 microlitros de tampão de lavagem e repita a centrifugação. A seguir, incube a membrana com 80 microlitros da Solução de DNase I por 15 minutos à temperatura ambiente.Em seguida, adicione 350 microlitros de tampão de lavagem à coluna e repita a centrifugação. Depois, adicione 500 microlitros de tampão de lavagem de RNA. Repita a centrifugação breve e descarte o fluxo passante.Realize duas lavagens com o tampão de lavagem de RNA. Finalmente, sobre um novo tubo de coleta, adicione diretamente 30-50 microlitros de água livre de RNase diretamente na coluna e centrifugue por um minuto para coletar a amostra de RNA no eluato. O procedimento foi realizado conforme descrito com camundongos normais e saudáveis.A instilação intratraqueal resultou em um aumento acentuado no número de leucócitos no líquido de lavagem broncoalveolar de camundongos inoculados com NTHi em comparação com os controles tratados com solução salina. A análise diferencial dos leucócitos mostra claramente uma maior infiltração de neutrófilos. A análise de fatores das células no LBA confirma ainda o aumento no número de neutrófilos.As seções coradas com HNE do tecido pulmonar mostram aumento da inflamação das vias aéreas. Em conjunto, esses dados sugerem que a instilação intratraqueal induz inflamação das vias aéreas em camundongos. Em um experimento semelhante com camundongos mutantes e controles, o RNA do tecido pulmonar foi analisado por sequenciamento do transcriptoma completo.Em comparação com os controles do tipo selvagem, a deficiência de Itch resultou na expressão diferencial de diversos genes. Acredita-se que Itch seja um regulador de vias de sinalização inflamatória, portanto, esse resultado pode ser utilizado para fomentar novos estudos. Ao longo de todo o seu desenvolvimento, esta técnica abriu caminho para que pesquisadores da área de doenças pulmonares explorassem a sinalização celular em células imunes durante infecções e inflamação pulmonar.Ao realizar este procedimento, é importante lembrar de tomar precauções adicionais em etapas como a exposição da traqueia e a instalação de bactérias na traqueia. Uma vez dominada, a instalação intratraqueal pode ser realizada em até dez minutos e o fluido do frasco pode ser coletado em 10-15 minutos. Após este procedimento, podem ser realizadas análises adicionais, como sequenciamento de RNA, citometria de fluxo e imunobloqueio, para responder perguntas complementares, como quais genes estão regulados para cima ou para baixo.

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

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Realizando a entrega bacteriana intratraqueal em um modelo de camundongo

Fonte: Venuprasad, K., et al. Administração intratraqueal de Haemophilus influenzae em modelos de camundongos para estudar a inflamação das vias aéreas. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a coleta e o processamento do fluido de lavagem broncoalveolar de um camundongo sacrificado infectado com Haemophilus influenzae não tipável para análise a jusante.

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