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A Whole Mount In Situ Hybridization Method for the Gastropod Mollusc Lymnaea stagnalis

A Monte Whole In Situ Método de hibridação para o molusco gastrópode stagnalis Lymnaea

Full Text
9,465 Views
07:33 min
March 15, 2016

DOI: 10.3791/53968-v

Daniel J. Jackson1, Ines Herlitze1, Jennifer Hohagen1

1Department of Geobiology,Georg-August University of Göttingen

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol outlines methods for the high-throughput decapsulation of Lymnaea stagnalis embryos and larvae, facilitating whole mount in situ hybridization. It aims to visualize gene expression patterns in developmental biology.

Key Study Components

Area of Science

  • Developmental Biology
  • Evo-Devo
  • Gene Expression Analysis

Background

  • Lymnaea stagnalis is a freshwater gastropod.
  • Understanding gene expression is crucial for developmental biology.
  • Whole mount in situ hybridization allows for spatial visualization of gene expression.
  • Efficient decapsulation is essential for this analysis.

Purpose of Study

  • To visualize spatial expression patterns of genes in embryos and larvae.
  • To explore interactions between genes and their functions.
  • To provide a developmental roadmap for categorizing material.

Methods Used

  • Use of a 20-milliliter disposal syringe connected to silicone tubing.
  • Taping a microscope slide to an inverted Petri dish.
  • Stage-specific pre-hybridization treatments.
  • Quick and effective removal of embryos and larvae from egg capsules.

Main Results

  • Successful visualization of gene expression patterns.
  • Efficient categorization of developmental stages.
  • Enhanced understanding of gene interactions.
  • Streamlined protocol for high-throughput analysis.

Conclusions

  • The protocol provides a reliable method for studying gene expression.
  • It facilitates research in Evo-Devo and developmental biology.
  • Future studies can build on this method for deeper insights.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this protocol?
The main advantage is the quick and effective removal of embryos and larvae from their egg capsules.
How does this method contribute to developmental biology?
It allows researchers to visualize where and when genes are expressed in developing organisms.
What species is this protocol designed for?
This protocol is specifically designed for the freshwater gastropod Lymnaea stagnalis.
Are there supplementary materials available?
Yes, a developmental roadmap is provided in the supplementary material.
What are the initial steps of the procedure?
Connect a syringe to silicone tubing and prepare a microscope slide on an inverted Petri dish.
What type of analysis can be performed with this method?
This method allows for high-throughput analysis of gene expression patterns.

O objetivo deste protocolo é fornecer aos usuários um conjunto de métodos para a descapsulação de alto rendimento de embriões e larvas de Lymnaea stagnalis em preparação para hibridização in situ de montagem inteira e para tratamentos subsequentes de pré e pós-hibridização.

O objetivo geral deste protocolo é visualizar eficientemente os padrões de expressão espacial de genes individuais em montagens inteiras embrionárias e larvais do gastrópode de água doce Lymnaea stagnalis. Este método pode ajudar a responder a questões-chave nos campos do Evo-Divo e da biologia do desenvolvimento, como onde e quando os genes são expressos, como eles interagem uns com os outros e quais podem ser suas funções punitivas. A principal vantagem dessa técnica é que a remoção do material embrionário e larvário de suas cápsulas de ovos é rápida, fácil e eficaz.

Este material é então categorizado de acordo com um roteiro de desenvolvimento que fornecemos no material suplementar e, em seguida, processamos por meio de etapas de pré-hibridização específicas do estágio. Para iniciar este procedimento, conecte uma seringa de descarte de 20 mililitros a um tubo de silicone. Em seguida, cole uma lâmina de microscópio padrão em uma grande placa de Petri invertida.

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Biologia Molecular Edição 109 toda montagem In situ Hibridação molusco gastrópode stagnalis Lymnaea A expressão do gene cápsula de ovo Proteinase-K desenvolvimento larva trochophore veliger

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