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DOI: 10.3791/53972-v
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A ameba social Dictyostelium discoideum sofre uma transição de desenvolvimento para um organismo multicelular quando morre de fome. A proteína evolutivamente conservada coronina A desempenha um papel crucial no início do desenvolvimento. Usando ensaios de agregação como nosso principal método, pretendemos elucidar o papel da coronina A no desenvolvimento inicial.
O objetivo geral deste procedimento experimental é investigar a resposta de fome precoce dependente de Coronina-A de Dictyostelium discoideum. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da Biologia do Desenvolvimento, como a identificação de vias de sinalização e fatores envolvidos no desenvolvimento inicial de Dictyostelium discoideum. A principal vantagem dessa técnica é que ela tem o potencial de fornecer uma ferramenta para triagem automatizada e de alto rendimento de fatores indutores de desenvolvimento e proteínas envolvidas na sinalização inicial do desenvolvimento.
Geralmente, indivíduos novos neste método terão dificuldades devido a múltiplas variáveis inerentes ao ensaio, como densidades celulares, tempo de adesão e tempo de desenvolvimento. Para iniciar este procedimento, cultive células DH1.10 ou células deficientes em corA em um frasco Erlenmeyer contendo meio HL-5, a 22 graus Celsius, em uma incubadora agitada a 160 rpm. Mantenha as células em uma densidade entre 10 a quatro e duas vezes 10 a seis células por mililitro.
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