Name: Injeção Artéria Intra-ilíaca para eficiente e seletiva Modelagem de microscópico metástase óssea (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Aprenda a injeção intra-ilíaca para modelagem eficiente de metástase óssea microscópica em camundongos. Esta técnica minimiza danos teciduais e permite estudar interações entre células de câncer de mama e o microambiente ósseo.

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A pesquisa no laboratório de Zhang foi apoiada por X. H.-F. CA151293 NCI de Z., CA183878, Fundação de Pesquisa do Câncer de Mama, Departamento de Defesa dos EUA DAMD W81XWH-13-1-0195, um Prêmio Piloto de CA149196-04, McNair Medical Institute e pelo Departamento de Defesa dos EUA de H.W. DAMD W81XWH-13-1-0296.

Todo o trabalho animal foi feito de acordo com as orientações de cuidados de animais da Baylor College of Medicine. 1. Preparação de células NOTA: As linhas de células de cancro diferentes podem ser usadas para injecção AII dependendo fins de investigação. Temos usado linhas celulares de cancro da mama MCF7, 4T1, 4T07, MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-436 e linha de células de cancro da próstata C4-2 em nossa pesquisa. Normalmente usamos tanto vaga-lume células cancerosas marcadas com GFP luciferase e para o nosso estudo e mostrar alguns dados aqui a partir da linha de células MCF7 GFP-luciferase marcado. <ol><li> Manter as células em DMEM contendo 10% de FBS e 0,1 mg / ml de penicilina-estreptomicina a 37 ° C em 5% de CO 2. </li><li> Antes da injecção AII, trypsinize células a 80 - 90% de confluência com uma solução / EDTA a 0,25% de tripsina. Use PBS frio para lavar as células duas vezes, e re-suspender as células em 10 ml de PBS para contagem das células. Para remover o PBS, as células de centrifugação a 800 xg durante 5 min. </li><li> células re-suspensãoa uma concentração de 5 X 10 6 células / ml em PBS arrefecido em gelo. </li><li> Utilize 100 mL GFP e células cancerosas marcado com a luciferase de pirilampo para IIA injeção de um mouse. Nota:. Portanto, o número de células recebidas por cada animal é de 5 x 10 5 Este número pode precisar de ser alterada com base na agressividade de linhas celulares. </li><li> Manter as suspensões de células em gelo. Nota: As vibrações podem ser necessários para evitar a agregação de células a cada poucos minutos até que esteja pronto para a injecção. Para algumas linhas de células (tais como MDA-MB-231), procedimentos mais rigorosas (por exemplo, passando através de 45 um filtro de células) podem ser necessários para evitar a agregação. Por favor note que a obstrução dos vasos pode causar necrose do tecido e, portanto, confundindo os experimentos. </li></ol> 2. Preparação de animais <ol><li> Para dor de animais de gestão, dar origem a 5 mg / kg / dia carprofeno (ou outro analgésico) com suplemento dietético para os ratinhos não menos do que 24 horas antes da cirurgia. Administradoruma dose de 0,1 mg / ml de buprenorfina por via subcutânea 60 minutos antes da cirurgia. Nota: um procedimento opcional é implantar estradiol pallet na parte traseira de animais para fornecer estradiol extra. Isto irá acelerar a crescer de células ER + de cancro (por exemplo, células MCF-7) 9. </li><li> Anestesiar de 4 - 6 semanas de idade rato (aproximadamente 20 g) com cetamina (80-100 mg / kg) e xilazina (10 -12,5 mg / ml) por injecção intraperitoneal. </li><li> Confirme o nível adequado de sedação de um rato 20 g por pitada dedo do pé e da observação de uma redução de 50% na taxa respiratória e rosa membranas mucosas (por exemplo, pele de orelha de rato e pele pata). Continuar a acompanhar estes sinais vitais a cada 15 minutos durante a cirurgia. Nota: Nenhum movimento do animal indica que o animal é anestesiado e suficientemente pronta para a cirurgia. </li><li> Use vet pomada nos olhos para evitar a secura. </li><li> Raspar o mouse na parte inferior do abdômen, especialmente a área da virilha direita onde a cirurgia e injeção vaitomar lugar. Nota: Isto não é necessário se forem utilizados ratos nus atímicos. </li><li> Coloque o mouse sobre as suas costas, espalhar as pernas na sua posição natural e ficar ao pé, papelão dissecção móvel com fita adesiva. </li><li> Limpe a área da virilha direita com etanol 70% isopropílico embebido cotonetes estéreis, seguiu com betadine paramentação várias vezes. </li></ol> 3. O Iliac Vein Comum e Artéria Localização e Separação <ol><li> Faça uma incisão na pele de 1,0 - 1,2 cm de comprimento entre o 4º e 5º mamilos no abdômen inferior direito usando estéreis, # 10 carbono lâminas de bisturi de aço realizada em uma alça No. 3. Em seguida, usar uma cobertura cirúrgica estéril para cobrir o corpo do animal, excepto no local da incisão. </li><li> Mova o animal a bancada padrão superior dissecção microscópio. Utilize uma ampliação de 4X para injecção. </li><li> De acordo com uma ampliação de 4X do microscópio de dissecção, inserir uma pinça de separação sem corte entre o tecido gordo e o peritoneum, e empurrar os tecidos para fora de ambos os lados para expor os vasos ilíacos e nervos (ver Figura 1). Nota: A artéria aorta entre a partir da linha média e a parte inferior do ramos das artérias é chamado de artéria ilíaca comum. Este é o local onde a injeção ocorre. </li><li> Utilizar um par de fórceps finos rectas para romper o tecido conjuntivo (como uma membrana) entre os vasos e o nervo, mais perto dos vasos. </li><li> Alternar as pinça fina direto para a mão esquerda. Pegue um par de fórceps finos angulares usando a mão direita. Inserir a pinça mão direita na mesma posição em que os tecidos conjuntivos foram quebrados. E depois ficar a pinça da mão direita através de, por baixo das embarcações. </li><li> Ao mesmo tempo, inserir a pinça da mão esquerda para dentro dos tecidos conjuntivos no lado esquerdo dos vasos para orientar a pinça da mão direita passando. </li><li> Uma vez que a pinça da mão direita fica abaixo dos vasos, tentar separar os vasos do ti circundantessue um pouco mais, em seguida, mantê-los no topo da pinça da mão direita. </li><li> Use uma pinça da mão esquerda para entregar a ponta de uma sutura de seda 4-0 para a pinça mão direita, e em seguida, puxe o fio de sutura suave e lentamente através debaixo dos vasos. Nota: Agora ambos os navios veia e artéria comuns são levantadas para cima pela sutura (ver Figura 2). </li></ol> 4. Injeção e Pós-injeção de Cuidados <ol><li> Preparar as células para injectável em seringa de insulina 31 G. Utilizar 100 ul de suspensão de células em PBS por injecção. Certifique-se de pipetar para cima e para baixo várias vezes para separar as células e evitar a agregação de modo a que as células injectadas não vai entupir e bloquear o fluxo de sangue. </li><li> Com a pinça em ângulo na mão esquerda, coloque a pinça debaixo dos vasos ao longo da orientação da sutura, e abra os dois braços da pinça, tendo as embarcações detidas suavemente sobre a pinça. Nota: O intervalo entre os dois braços de pinça será o ilocal njection. </li><li> Segure a 31 G agulha com 100 suspensões de células ul na mão direita, com o bisel da agulha para cima, pronto para a injecção. </li><li> Inserir a agulha para o lúmen da artéria (sangue vai entrar na ponta da agulha). Em seguida, empurrar lentamente suspensão de células em injectar as células. A suspensão de células vai empurrar o sangue vermelho no vaso. Tente não quebrar os vasos ou vazar a suspensão de células para fora. </li><li> Quando a injecção está terminada, puxe de volta a agulha e continue segurando os vasos em cima a pinça da mão esquerda para parar o sangramento. Em seguida, afastar a sutura. </li><li> Afaste os fórceps da mão esquerda e, rapidamente, use um cotonete para pressionar área da incisão da artéria para parar o sangramento. Nota: Geralmente 5-10 min pressão contínua é suficiente para parar o sangramento. </li><li> Quando o sangramento parar, use cola de pele para fechar as bordas da pele da área da cirurgia. Faça uma marca auricular, e verificar se há bioluminescência sinalização para examinar a distribuição de células injetadas. &lt;BR /&gt; Nota: Uma injecção bem sucedido resultará numa imagem semelhante à da Figura 3. <ol><li> Verificar sinalização bioluminescência por injecção de 100 ul de 15 mg / ml de luciferina em PBS a 75 mg / kg de concentração de rato através do seio intra-orbital. <ol><li> Para injecção intra-orbital, colocar os dedos em ambos os lados do olho do rato, utilize pressão para fazer olho bola pop ligeiramente fora da moldura dos olhos, coloque 28 g de agulhas de insulina seringa entre bola de olho e nariz, e depois empurrar lentamente a seringa para injetar luciferina . Nota: Na posição correcta, a agulha deve ser capaz de chegar a uma profundidade de 2 - 3 mm, antes de bater de tecido duro (osso). </li><li> Coloque o mouse no sistema de imagem para in vivo de imagens animal inteiro por 10-60 seg dentro de 5 min (ver Figura 3). Nota: Um procedimento opcional é implantar estradiol sedimento na parte traseira de animais para fornecer estradiol extra. Isto irá acelerar o crescimento de células cancerosas ER + (por exemplo, MCF-7células) 15. </li></ol></li></ol></li><li> Deixe o mouse sobre uma almofada de aquecimento morna até que acorda. Monitorar o sangramento, inchaço, sinais de deiscência e dor no período pós-cirúrgico. Coloque os ratos de volta para a gaiola com cobertura analgésica (suplemento dietético carprofin sugerido) dada para o manejo da dor até que não haja sinais de dor. Preste muita atenção e cuidado para os animais durante 7 dias após a cirurgia. </li></ol> 5. Monitorização do Crescimento metastático <ol><li> histomorfometria: <ol><li> Tumor colheita rolamento tecidos ósseos, fixar os ossos em paraformaldeído a 4% durante 24 h, em seguida, decalcify-los em pH 7,0 solução de EDTA 14% para 3 - 5 dias e submetê-las a inclusão em parafina, como descrito anteriormente 14. </li><li> Secção os tecidos ósseos incorporar em parafina com a espessura de 3 micrómetros e executar método histológico convencional da coloração de hematoxilina / eosina como previamente descrito 14. </li></ol></li><li> Immunohistochemisexperimentar: <ol><li> Óssea rolamento tumor embebido em parafina Assunto desliza à imuno-histoquímica coloração para diversos fins, como descrito anteriormente 14. Resumidamente, as células cancerosas imunocoloração MCF7 por anticorpos anti-GFP, e células osteogénicas imunocoloração (pré-osteoblastos e osteoblastos) por anticorpos anti-Osterix e anticorpos anti-fosfatase alcalina (ALP), respectivamente. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Embora apenas a artéria ilíaca é alvo de injeção de células cancerosas, recomendamos a separação de ambos veia ilíaca e artéria dos tecidos circundantes, e para levantá-los juntos como um pacote. Isto é porque a veia e a artéria extensivamente contactar uns com os outros, e a parede do vaso venoso é fina e é fácil de quebrar. Portanto, para uma injeção de sucesso, ele economiza tempo e esforço para segurar os dois navios juntos, embora as células cancerosas são injectados apenas para a artéria. Uma sutura de seda 4-0 é ...

Metástases representam mais de 90% das mortes causadas por tumores sólidos. O osso é o órgão mais comum afectado por metástases de vários tipos de cancro, especialmente cancros da mama e da próstata. Quando diagnosticado na clínica, metástases ósseas geralmente já entraram estágios avançados com qualquer osteolíticas ou osteoblásticas alterações nos ossos, muitas vezes acompanhados com sintomas neurológicos. Estudos anteriores predominantemente focado nas metástases ósseas osteolíticas evidentes 1-3, no entanto atualmente temos a compreensão de micrometástases em ossos limitado antes do início do processo de osteolítico. Isto é, pelo menos em parte devido à falta de modelos e abordagens experimentais adequadas. Modelos de ratos geneticamente modificada de cancro da mama frequentemente metastizar para os pulmões, mas muito menos eficientemente aos ossos 4. Da mesma forma, os tumores ortotopicamente transplantados raramente desenvolvem metástases ósseas espontâneas, com alguma 4T1 carcinom mamária osso-tropicaluma sub-clones e MSP overexpressed modelo de rato transgénico PyMT como exceções 5-7. Perfuração intra-tibial pode entregar células cancerosas para o osso 8-10, mas também incorre danos e inflamação de tecidos locais. Atualmente injecção intra-cardíaca de linhas celulares de cancro da mama tem sido a principal abordagem para investigar a colonização óssea 11-13. No entanto, depois de as células cancerosas são introduzidos no ventrículo esquerdo apenas uma proporção limitada vai finalmente chegar osso e medula óssea, o que torna difícil controlar metástases microscópicas de um modo quantificável. Neste estudo, nós estabelecemos uma técnica, ou seja, intra-arterial ilíaca (IIA) de injecção 14, para entregar seletivamente as células cancerosas nos tecidos dos membros posteriores, enriquecendo assim a célula de câncer nos ossos e medula óssea, sem causar danos aos tecidos locais. Por causa da especificidade do osso, esta abordagem também permite tempo suficiente para que as células cancerosas indolentes para eventualmente colonizar antes a umsucumbir a animais produtores de tumores primários ou metástases em outros órgãos vitais. Quando combinado com uma variedade de outras técnicas, tais como a imagiologia bioluminescente, imunofluorescência e a histomorfometria óssea, AII injecção é potencialmente útil para uma ampla gama de efeitos de pesquisa relacionadas com metástases ósseas, especialmente para controlar a progressão de células cancerígenas único de multi-célula micrometástases. Em particular, foi demonstrado que AII injecção permite visualizar as interacções entre as células cancerosas e vários tipos de células circundante no microambiente do osso.

<table><tbody><tr><td>Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>HyClone</td><td>SH30022.01</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>16000</td><td></td></tr><tr><td>Pen/Strep Anfotericina B</td><td>Lonza Biowhittaker</td><td>17-745E</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Lonza Biowhittaker</td><td>17-516F</td><td></td></tr><tr><td>Solução de tripsina/EDTA</td><td>HyClone</td><td>SH30042.01</td><td></td></tr><tr><td>45 &mu; Filtro de células M</td><td>VWR International Laboratory</td><td>195-2545</td><td></td></tr><tr><td>MediGel CPF com carprofeno&nbsp;</td><td>Item controlado de cuidados veterinários em BCM</td><td></td><td>Para controle da dor</td></tr><tr><td>Buprenorfina&nbsp;</td><td>Item controlado de cuidados veterinários em BCM</td><td></td><td>Para controle da dor</td></tr><tr><td>Pellet de estradiol</td><td>Innovative Research of America</td><td>SE-121</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina e xilazina</td><td>Item controlado de cuidados veterinários em BCM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pomada veterinária</td><td>Item controlado de cuidados veterinários em BCM</td><td></td><td>Evite a secura dos olhos</td></tr><tr><td>Barbeador</td><td>Oster</td><td>78005-050</td><td>Para camundongos peludos</td></tr><tr><td>Etanol isopropílico</td><td>ACROS</td><td>67-63-0</td><td></td></tr><tr><td>Esfoliante cirúrgico Betadine</td><td>Item controlado de cuidados veterinários em lâminas de</td> bisturi BCM <td></td><td></td></tr><tr><td># 10</td><td>Ted Pella, Inc</td><td>549-3CS-10</td><td>Alça</td></tr><tr><td>múltipla nº 3</td><td>Ted Pella, Inc</td><td>541-31</td><td>Precisa ser autoclavado</td></tr><tr><td>Campo cirúrgico estéril</td><td>Tecnologia de infusão Sai</td><td>PSS-SD1</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Reta&nbsp;</td><td>Roboz Instrumento Cirúrgico</td><td>RS-5132</td><td>Precisa ser autoclavado</td></tr><tr><td>Pinça fina reta</td><td>Ferramentas de Fine Science</td><td>11253-20</td><td>Precisa ser autoclavado</td></tr><tr><td>Pinça fina afiada</td><td>Ferramentas de Fine Science</td><td>11253-25</td><td>Precisa ser autoclavada</td></tr><tr><td>4-0 Sutura de seda Vicryl</td><td>Johnson & Johnson Health Care</td><td>J214H</td><td></td></tr><tr><td>31 G seringas de insulina</td><td>BD</td><td>328418</td><td>Múltiplos</td></tr><tr><td>cotonetes Q-tips (Estéril)</td> <td>VWR International Laboratory</td><td>89031-272</td><td></td></tr><tr><td>Cola para a pele</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>31477</td><td>Para fechamento da pele no local da cirurgia</td></tr><tr><td>Aplicador de Brincos</td><td>Fine Science Tools</td><td>24220-00</td><td></td></tr><tr><td>Brincos</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>24220-50</td><td></td></tr><tr><td>D-luciferina</td><td>Ouro Biotecnologia</td><td>SORTE</td><td>Evite a luz e coloque no gelo</td></tr><tr><td>Seringas de insulina de 28 G</td><td>BD</td><td>329410</td><td>Para injeção intra-orbital</td></tr><tr><td>Paraformadeído</td><td>Alfa Aesar</td><td>30525-89-4</td><td>Para fixação de tecido</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>OmniPur</td><td>4050</td><td>Para decalficicação de tecido ósseo</td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>EquipamentoMicroscópio de</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>dissecação</td><td>Leica</td><td>Leica S6E estéreo</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina II imaging system</td><td>Advanced Molecular Vision</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Anticorpos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorpos anti-GFP (JL-8)</td><td>Clontech</td><td>632381</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpos anti-ALP</td><td>Abcam</td><td>ab108337</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Osterix anticorpos</td><td>Abcam</td><td>ab22552</td><td></td></tr></tbody></table>

injeção artéria intra-ilíaca para eficiente e seletiva modelagem de microscópico metástase óssea

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

A injeção de artéria intra-ilíaca (AII) é uma abordagem eficiente para introduzir lesões metastáticas de várias células cancerígenas em animais. Em comparação com as injeções intracardíacas e intratibiais amplamente utilizadas, a injeção de AII traz várias vantagens. Primeiro, ele pode fornecer uma grande quantidade de células cancerígenas especificamente para os ossos dos membros posteriores, fornecendo assim eventos de colonização em estágio inicial espacialmente sincronizados e permitindo quantificação robusta e detecção rápida de células tumorais disseminadas. Em segundo lugar, injeta células cancerígenas na circulação sem danificar os tecidos locais, evitando assim processos inflamatórios e de cicatrização de feridas que confundem o processo de colonização óssea. Em terceiro lugar, a injeção de IIA causa muito pouco crescimento metastático em órgãos não ósseos, evitando assim que os animais sucumbam a outras metástases vitais e permitindo o monitoramento contínuo de lesões ósseas indolentes. Essas vantagens são especialmente úteis para a inspeção da progressão de células cancerígenas únicas para micrometástases multicelulares, que foram amplamente evasivas no passado. Quando combinada com abordagens de ponta de imagens biológicas e histologia óssea, a injeção de IIA pode ser aplicada a vários fins de pesquisa relacionados a metástases ósseas.

A figura 1 ilustra a localização anatômica e relação de artéria ilíaca comum (vermelho) e veia (azul). A Figura 2 mostra a posição relativa dos vasos ilíacos e nervos sob microscopia de dissecção. Como representado na Figura 2A, os vasos e nervos estão bem abaixo da parede peritoneal e pode ser revelado após a incisão na pele é feita e o peritônio é empurrado. A veia ilíaca co...

Este manuscrito fornece o procedimento detalhado de injeção de artéria intra-ilíaca (IIA), uma técnica para entregar células cancerígenas especificamente aos tecidos dos membros posteriores, incluindo ossos, para estabelecer metástases ósseas experimentais. Embora inicialmente estabelecido com modelos de tumor de mama, esse protocolo pode ser facilmente estendido a outros tipos de câncer.

Injeção Artéria Intra-ilíaca para eficiente e seletiva Modelagem de microscópico metástase óssea

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer metástase óssea experimental por meio da administração direta de células cancerígenas nos tecidos da pata traseira, incluindo os ossos, por injeção na artéria ilíaca. Assim, este método pode nos ajudar a responder perguntas-chave sobre a colonização óssea pelo câncer de mama, especialmente na fase inicial desse processo, como as células de câncer de mama interagem com as células do microambiente no osso. Realizamos hoje a injeção na artéria ilíaca.A principal vantagem desta técnica é que ela estabelece de forma eficiente e seletiva um modelo experimental microscópico de metástase óssea para diversos tipos de câncer, sem causar danos teciduais locais. Geralmente, indivíduos novos neste método terão dificuldades, pois encontrar uma injeção precisa, na posição da artéria ilíaca sob o microscópio, pode exigir prática para atingir uma taxa de sucesso superior a noventa por cento. Comece confirmando o nível apropriado de sedação por meio de pinçamento do dedo do pé em um camundongo de vinte gramas com idade entre cinco e seis semanas.Após aplicar pomada oftálmica, limpe a área da virilha direita depilada várias vezes com cotonetes estéreis embebidos em etanol isopropílico a 70%, aplicados sequencialmente, seguidos por uma anti-sepsia cirúrgica com betadine. Em seguida, cubra todo o camundongo com um campo estéril. Então, utilize uma lâmina estéril de bisturi de aço carbono número dez e um cabo número três para fazer uma incisão de pele de um a 1,2 centímetro entre os quartos e quintos mamilos no abdômen inferior direito.E transfira o animal para sob um microscópio de dissecação padrão de bancada. Sob a objetiva de 4X, insira uma pinça romba na incisão entre o tecido adiposo e o peritônio, e empurre os tecidos para fora em ambos os lados para expor os vasos ilíacos e os nervos. Em seguida, use uma pinça fina e reta para romper o tecido conjuntivo entre os vasos e o nervo mais próximo aos vasos.Em seguida, deslize a pinça angulada através do tecido conjuntivo e sob os vasos ilíacos, ao mesmo tempo em que insere a pinça reta nos tecidos conjuntivos do outro lado dos vasos para guiar a pinça angulada através do tecido. Recomendamos separar e levantar a borda ilíaca e a artéria como um feixe nesta etapa. Embora as células tumorais sejam injetadas apenas na artéria, economiza tempo e esforço isolar ambos os vasos juntos.Uma vez que a pinça angulada esteja posicionada, separe ainda mais a veia ilíaca e a artéria do tecido circundante, mantendo os vasos sobre a pinça angulada durante a dissecação. Quando os vasos estiverem bem visíveis, use a pinça reta para levar a ponta de uma sutura de seda 4-0 até a pinça angulada e puxe a sutura lentamente e com cuidado sob os vasos. Tanto a veia ilíaca comum quanto os vasos arteriais devem então ser sustentados pela sutura.Quando os vasos estiverem prontos, pipete as células tumorais para cima e para baixo várias vezes para re-suspenderem-nas em uma solução de células isoladas e para dispersar quaisquer agregados. Em seguida, aspire 100 microlitros de células por camundongo em uma seringa de insulina com agulha 31. Agora, deslize a pinça angulada novamente sob os vasos, usando o fio cirúrgico como guia, e abra a pinça de modo que os vasos repousem suavemente sobre as pontas.Com a outra mão, insira a ponta da agulha com o bisel voltado para cima na luz do segmento da artéria entre as pontas da pinça. Pressione lentamente o êmbolo para injetar as células. A suspensão celular irá expelir o sangue através do vaso.Quando todas as células tiverem sido administradas, remova cuidadosamente a agulha, mantendo os vasos elevados com a pinça para prevenir sangramento. Em seguida, retire o ponto cirúrgico. Por fim, remova rapidamente a pinça e pressione um cotonete sobre a incisão por cinco a dez minutos para estancar o sangramento.Aqui, é apresentada uma imagem representativa de bioluminescência em todo o organismo após injeção intra-arterial ilíaca de cinco vezes 10 à quinta potência de células de câncer de mama MCF-7 marcadas com luciferina GFP, seguida pela administração de D-luciferina por injeção no seio retro-orbital. No dia 14 após a injeção, um forte sinal de bioluminescência foi obtido no osso posterior injetado pela artéria ilíaca, mas não no osso controle contralateral, confirmando a localização específica das células injetadas. O corte e a coloração com hematoxilina e eosina (H&E) dos ossos com tumor também demonstraram uma população celular compacta, semelhante a paralelepípedos, com núcleos grandes, indicativos de lesões metastáticas microscópicas de MCF-7 no tecido ósseo 14 dias após a injeção intra-arterial ilíaca.Além disso, a coloração imunofluorescente das seções ósseas também revelou uma mistura das células MCF-7 com osteoblastos e pré-osteoblastos. Uma vez dominada, esta técnica pode ser concluída em dez a quinze minutos. Após esses procedimentos, você pode utilizar outros métodos para responder perguntas adicionais.Por exemplo, podemos usar o RNA-Seq para caracterizar as células do microambiente no nicho de metástase e compará-las às células normais. Esta técnica fornece um método para pesquisadores de câncer de mama e de câncer de próstata estudarem micrometástases ósseas em animais. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como estabelecer um modelo de metástase óssea de câncer de mama por injeção na artéria ilíaca interna.Adote precauções apropriadas, pois trabalhar com cetamina e xilazina pode ser extremamente perigoso.

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Na patogénese da metástase óssea, a angiogénese é um processo crucial e, portanto, representa um alvo para imagiologia e terapia. Aqui, apresentamos um modelo do rato de site-specific metástases ósseas de câncer de mama e descrever as estratégias para não-invasiva angiogênese...

Multi-modal de imagem de angiogênese em um modelo de rato nu de Câncer de mama utilizando a ressonância magnética, tomografia computadorizada volumétrica e ultra-som

Os modelos animais são freqüentemente utilizada para estudar metástase de câncer de osso. Neste protocolo, iremos descrever dois métodos comuns de inoculação do tumor para estudos de metástase óssea e descrever brevemente algumas das análises utilizadas para monitorar e quantificar esses modelos.

Modelos de metástase óssea

Fonte: Lim, M., et al. Modelagem de metástases cerebrais por injeção de células cancerígenas na artéria carótida interna. J. Vis. Exp. (2022)Neste vídeo, um camundongo anestesiado é submetido a um procedimento cirúrgico no qual células cancerígenas são injetadas na artéria carótida comum (CCA) para facilitar a entrega direcionada ao cérebro. O procedimento envolve sutura e manipulação precisas das artérias carótidas para direcionar as células injetadas para a artéria carótida interna (ACI),...

Modelagem de metástase de tumor cerebral por meio de injeção de células cancerígenas na artéria carótida interna

Implantação de enxertos ósseos autólogos e alogênicos constituem aceite abordagens para tratar a maior perda óssea craniofacial. No entanto, o efeito da composição do enxerto sobre a interacção entre a neovascularização, a diferenciação celular e a formação de osso não é clara. Nós apresentamos um protocolo de imagiologia multimodal objetivou elucidar a interdependência angiogênese-osteogênese na proximidade do enxerto.

Tomografia Computadorizada e imageamento óptico de acoplamento Osteogenesis-angiogênese para avaliar a integração do osso craniano Autoenxertos e Aloenxertos

Um procedimento cirúrgico foi desenvolvido para entregar células tumorais mamárias ao fígado murino por meio de injeção na veia porta. Este modelo permite a investigação de estágios tardios de metástase hepática em um hospedeiro totalmente imunocompetente, incluindo extravasamento de células tumorais, semeadura, sobrevivência e crescimento metastático no fígado.

Um modelo de injeção da veia porta para o Estudo do Fígado metástase do câncer de mama

A modelagem da metástase cerebral intracraniana é complicada pela incapacidade de monitorar o tamanho do tumor e a resposta ao tratamento com métodos precisos e oportunos. A metodologia apresentada casais injeção de tumor intracraniano com análise de ressonância magnética, que, quando combinada, cultiva injeções precisas e consistentes, monitoramento animal aprimorado e medições precisas de volume de tumor.

Modelando metástases cerebrais através de injeção intracraniana e ressonância magnética

Os modelos de metástases ósseas não desenvolvem metástases uniformemente ou com 100% de incidência. A injeção direta intraóssea de células tumorais pode resultar em embolização do pulmão. Apresentamos nossa técnica de modelagem de tumores ósseos primários e metástases ósseas usando o implante de enxerto de tumor sólido no osso, levando a enxertia e crescimento reprodutíveis.

Modelagem de Tumores Ósseos Primários e Metástases Ósseas com Implante de Enxerto Sólido de Tumor em Osso

Descrevemos um modelo de metástase cerebral de câncer de mama em camundongos xenoenxerto gerada por injeção na veia caudal de uma linhagem de células inflamatórias de câncer de mama amplificadas endogenamente por HER2.

Modelando Metástase Cerebral Via Injeção Venosa Caudal de Células Inflamatórias de Câncer de Mama

Aqui, apresentamos um protocolo para a injeção intracardíaca de células humanas de câncer de próstata para gerar um modelo de camundongo com lesões de metástase óssea.

Injeção intra-cardíaca de células humanas de câncer de próstata para criar um modelo de xenoenxerto de metástase óssea em camundongos

A técnica de injeção intracraniana estereotáxica permite a implantação precisa e localizada de células tumorais no córtex do camundongo, tornando-se um modelo poderoso para estudar a colonização metastática do cérebro.

Modelagem da Metástase Cerebral: Análise Padronizada da Colonização Metastática e Padrões de Crescimento Histológico por Injeção Intracortical Estereotáxica

Aprenda a injeção intra-ilíaca para modelagem eficiente de metástase óssea microscópica em camundongos. Esta técnica minimiza danos teciduais e permite estudar interações entre células de câncer de mama e o microambiente ósseo.

Injeção Artéria Intra-ilíaca para eficiente e seletiva Modelagem de microscópico metástase óssea

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