Name: Murino próstata Micro-dissecção e castração cirúrgica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Aprenda a microdissecção prostática e castração cirúrgica em camundongos para estudar câncer de próstata e condições hormonais. Este método permite analisar efeitos de privação hormonal em glândulas prostáticas individuais.

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Algumas das figuras neste manuscrito foram generosamente fornecidos pelo laboratório de Bart O. Williams. Os autores são suportados pelo Instituto Nacional do Câncer concede U54CA143803, CA163124, CA093900, CA143055 E.

Este protocolo cumpre e segue as diretrizes estabelecidas pelo Comitê Animal Care Institucional e Use da Universidade Johns Hopkins. 1. Micro-dissecando um rato próstata <ol><li> Euthanize o mouse por asfixia com dióxido de carbono ou por um método alternativo aprovado em conformidade com as orientações de cuidados de animais e uso institucional. </li><li> Pin o rato em decúbito dorsal para um quadro de dissecção, colocando um pino através de cada uma das quatro patas. </li><li> Pulverizar o abdômen com etanol 70%. </li><li> Segure a pele do abdómen inferior com uma pinça, e usar uma tesoura para cortar através da pele e peritônio aproximadamente 1 cm anterior à abertura do pénis, cuidado para não cortar quaisquer órgãos. </li><li> Cortar a pele e peritônio da parte inferior do abdome, um aumento de ambos os lados do abdômen para a caixa torácica, expondo a cavidade peritoneal. </li><li> Identificar a bexiga e trato urogenital, e expô-los movendo-se delicadamente órgãos de gordura e outros para o lado. </li><li> Usiforceps Ng, aderência do canal deferente na base perto da uretra, e arrancá-la. </li><li> Repita com o canal deferente opostas. </li><li> Utilizando uma pinça, cuidadosamente aderência da bexiga e puxá-lo para cima, ao mesmo tempo, usando uma tesoura para cortar através da uretra abaixo da bexiga e próstata ventral (aproximadamente 1 cm abaixo da base da bexiga). Nota: Como a bexiga é puxado para cima, o (bexiga contendo, uma secção da uretra, todos os lobos da próstata e as vesículas seminais) toda trato urogenital virá com ele. Pode haver alguma resistência. </li><li> Colocar o tracto urogenital (UGT) num prato de Petri contendo 60-100 mm aproximadamente 5-10 ml de fosfato tamponado salino (PBS). </li><li> Realizar a parte restante do protocolo sob um microscópio de dissecção. Use duas pinça fina, um em cada mão. Segure a pinça &quot;, como um lápis&quot; e descansar os antebraços na bancada, de modo a estabilizá-los. </li><li> Utilize uma pinça fina para posicionar a UGT de tal modo que a bexiga estáem cima, a uretra é apontada para baixo, e as vesículas seminais são posicionados em ambos os lados da bexiga. </li><li> Aperto da uretra com um fórceps e puxe cuidadosamente a gordura com os outros fórceps sem rasgar fora qualquer tecido da próstata. Nota: Gordura aparece relativa &quot;brilhante&quot; para o tecido circundante. </li><li> Uma vez que a gordura é removida, utilizar uma pinça para rasgar o tecido conjuntivo entre os dois lóbulos ventrais da próstata e separá-los. </li><li> Para remover um dos lobos ventrais, use uma pinça para agarrar um único lobo ventral perto da ponta, e usar as outras forceps aperto que lóbulo na base tão perto da uretra possível. Enquanto ainda segurando a base do lobo, usar os outros pinça para aperto da uretra. Puxe o lobo longe da uretra com um movimento firme e suave. Certifique-se de não tecido da próstata permanece ligado à uretra. Colocar o lóbulo para o meio apropriado, dependendo da próxima etapa experimental. <ol><li> Para corrigir e parafina-incorporar os samplo para análise histológica, coloque o lobo em formalina 10% neutra tamponada (NBF) 8. </li><li> Coloque o lobo no meio de congelamento, como OCT, para criopreservação e secção 8. </li><li> Coloque o lobo em PBS frio para o isolamento de célula única para a cultura ou citometria de fluxo 9. </li></ol></li><li> Repita o passo 1,15 com o outro lobo ventral. </li><li> Para remover um dos lóbulos anteriores, utilize uma pinça para puxar delicadamente o lobo longe da vesícula seminal, tomando cuidado para não perfurar a vesícula seminal. Uma vez que o lóbulo é independente da vesícula seminal, removê-lo do mesmo modo como no lóbulo ventral no passo 1.15. </li><li> Repita o passo 1,17 com o outro lobo anterior. </li><li> Virar o trato urogenital restante sobre tais que a próstata dorsal é visível. </li><li> Para remover um dos lobos dorsolateral, utilize uma pinça para rasgar o tecido conjuntivo entre os dois lóbulos dorsolateral e também o tecido conjuntivo entre os lobos e tele região posterior das vesículas seminais. Remover o lóbulo de uma forma semelhante como no lóbulo ventral no passo 1.15. </li><li> Repita o passo 1,20 com o outro lobo dorsolateral. </li></ol> 2. castração cirúrgica Nota: Esta é uma cirurgia sobrevivência, de modo a assepsia, anestesia e gestão da dor são importantes para a conclusão ética e bem sucedida deste protocolo. Siga todas as orientações de cuidados de animais e uso institucional. Utilizar uma fonte de calor externa, tal como um cobertor de água em recirculação, durante o procedimento cirúrgico, para evitar a hipotermia. Não deixe um animal sem supervisão até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter decúbito esternal. Não devolva um animal que foi submetido a uma cirurgia para a companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado. Autoclave todos os instrumentos cirúrgicos antes do uso em cirurgia. <ol><li> Em uma superfície limpa e esterilizada anestesiar o mouse usando medidas adequadas (por exemplo, 2% de isoflurano inalado) e posicione o mOuse em decúbito dorsal. Nota: métodos de anestesia alternativos, tais como a cetamina, que também pode ser utilizado, dependendo do protocolo de animais aprovados. </li><li> Verifique os reflexos do rato por beliscar os dedos dos pés. Se o rato não reagir, avançar para a próxima etapa. Se ele não reagir, espere 1-3 minutos e verifique novamente. Raspar a área cirúrgica com um barbeador elétrico. </li><li> Assepticamente preparar o abdómen do rato usando alternando esfrega de 70% de etanol e iodo ou procedimentos recomendados pela equipe veterinária institucional ou IACUC. </li><li> Utilizando um escalpelo esterilizado, fazer uma incisão vertical 1 centímetro através da pele na linha média do abdome inferior, aproximadamente 1,5 cm anterior ao pénis. </li><li> Fazer uma pequena incisão (&lt;1 cm) através do peritônio, cuidado para não cortar todos os órgãos. </li><li> Utilizando uma pinça estéril, segure a borda do corte do peritônio e levante-o suavemente de modo a ser capaz de ver a cavidade peritoneal por baixo. </li><li> Usando outra pinça estéril, chegar em the cavidade peritoneal e aderência tanto a almofada de gordura testicular esquerda ou direita, lateral à bexiga. Puxar a almofada de gordura através da abertura no peritoneu e da pele até que o testículo sai bem. Tenha cuidado para não ferir quaisquer outros tecidos ou órgãos durante esta etapa. </li><li> Usando uma caneta cautério, cortar a almofada de gordura que está segurando o testículo. Corta-se lentamente através da artéria testicular com a caneta cautério Nota: Se a artéria testicular é cortado muito rapidamente, não pode ser demasiado sangramento e o rato pode ter que ser sacrificados. </li><li> Uma vez que a almofada de gordura e artéria são cortadas, remover o testículo e gordura pad. </li><li> Repita os passos 2,6-2,9 com o outro testículo. Nota: Um método alternativo para a remoção dos testículos é a ligar cirurgicamente a artéria testicular, seguido pelo corte do recipiente com uma tesoura. </li><li> Suturar o peritônio fechada com sutura absorvível. </li><li> Staple a pele fechada com agrafos cirúrgicos. </li><li> Administrar um analgésico para controlar a dor, e localo rato em uma gaiola limpa em uma gaiola mais quente durante 5-10 min. Monitorar o mouse para sinais de dor ou sangramento. </li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li>
<li>Roehrborn, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+benign+prostatic+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Impot+Res%22%5BJournal%5D)">Pathology of benign prostatic hyperplasia.</a> Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).</li>
<li>Valkenburg, K. C., Williams, B. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of prostate cancer.</a> Prostate Cancer. , 895238(2011).</li>
<li>Shappell, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+pathology+of+genetically+engineered+mice%3A+definitions+and+classification.+The+consensus+report+from+the+Bar+Harbor+meeting+of+the+Mouse+Models+of+Human+Cancer+Consortium+Prostate+Pathology+Committee%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Prostate pathology of genetically engineered mice: definitions and classification. The consensus report from the Bar Harbor meeting of the Mouse Models of Human Cancer Consortium Prostate Pathology Committee.</a> Cancer Res. 64 (6), 2270-2305 (2004).</li>
<li>Valkenburg, K. C., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+discovery+in+prostate+cancer+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Drug discovery in prostate cancer mouse models.</a> Expert Opin Drug Discov. , 1-14 (2015).</li>
<li>El-Alfy, M., Pelletier, G., Hermo, L. S., Labrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+features+of+the+basal+cells+of+human+prostate+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Unique features of the basal cells of human prostate epithelium.</a> Microsc Res Tech. 51 (5), 436-446 (2000).</li>
<li>Prins, G. S., Huang, L., Birch, L., Pu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+estrogens+in+normal+and+abnormal+development+of+the+prostate+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of estrogens in normal and abnormal development of the prostate gland.</a> Ann N Y Acad Sci. 1089, 1-13 (2006).</li>
<li>Valkenburg, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Wnt%2Fbeta-catenin+signaling+in+a+subpopulation+of+murine+prostate+luminal+epithelial+cells+induces+high+grade+prostate+intraepithelial+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Activation of Wnt/beta-catenin signaling in a subpopulation of murine prostate luminal epithelial cells induces high grade prostate intraepithelial neoplasia.</a> Prostate. 74 (15), 1506-1520 (2014).</li>
<li>Lukacs, R. U., Goldstein, A. S., Lawson, D. A., Cheng, D., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+cultivation+and+characterization+of+adult+murine+prostate+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation, cultivation and characterization of adult murine prostate stem cells.</a> Nat Protoc. 5 (4), 702-713 (2010).</li>
<li>Michiel Sedelaar, J. P., Dalrymple, S. S., Isaacs, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+men--warning%3A+intact+versus+castrated+adult+male+mice+as+xenograft+hosts+are+equivalent+to+hypogonadal+versus+abiraterone+treated+aging+human+males%2C+respectively%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Of mice and men--warning: intact versus castrated adult male mice as xenograft hosts are equivalent to hypogonadal versus abiraterone treated aging human males, respectively.</a> Prostate. 73 (12), 1316-1325 (2013).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+luminal+epithelial+stem+cell+that+is+a+cell+of+origin+for+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A luminal epithelial stem cell that is a cell of origin for prostate cancer.</a> Nature. 461 (7263), 495-500 (2009).</li>
<li>Pascal, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((5alpha-Reductase+inhibition+coupled+with+short+off+cycles+increases+survival+in+the+LNCaP+xenograft+prostate+tumor+model+on+intermittent+androgen+deprivation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">5alpha-Reductase inhibition coupled with short off cycles increases survival in the LNCaP xenograft prostate tumor model on intermittent androgen deprivation therapy.</a> J Urol. 193 (4), 1388-1393 (2015).</li>
<li>Shen, M. M., Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+genetics+of+prostate+cancer%3A+new+prospects+for+old+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Molecular genetics of prostate cancer: new prospects for old challenges.</a> Genes Dev. 24 (18), 1967-2000 (2010).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Próstata de micro-dissecção de experimentação específica permite-lobo e análise da próstata de ratinho (Figura 1). Em modelos de rato geneticamente modificadas, fenótipos podem ser vistos em um lóbulo que não é observada em outros. Além disso, para análise histológica, este protocolo garante que a quantidade máxima de tecido da próstata puro pode ser seccionados e corados, sem outros tecidos do tracto urogenital presente na secção. Finalmente, para experiências de uma única célula, este protocolo permit...

A próstata é o local mais comum de câncer em homens em os EUA. Cerca de 220.000 homens cada ano serão diagnosticados com câncer de próstata, e aproximadamente 27.000 homens vai sucumbir à sua doença 1. Os homens têm um risco de 1 em 7 vida de um diagnóstico de câncer de próstata em os EUA 1. Hiperplasia benigna da próstata (HBP), uma ampliação não canceroso relacionada com a idade da próstata, é também uma condição generalizada, afectando mais de 80% dos homens com mais de 80 2. Como tal, a próstata é o foco de consideráveis ​​pesquisas. Modelos de ratos têm sido amplamente utilizados para estudar doenças da próstata 3. No geral, a próstata do rato é um excelente representante da glândula humano 4, mas há semelhanças e diferenças entre rato e anatomia da próstata e fisiologia humana 5. Em ambas as espécies, a próstata está localizada na base da bexiga, em torno da uretra. A próstata humana é uma única Loser, dividido em quatro zonas: central, de transição, periférica e estroma fibromuscular anterior. Em contraste, a próstata do rato é composto por três lóbulos emparelhados em diferentes posições em torno da uretra: anterior, ventral, e dorsolateral. A um nível celular, a principal diferença é que a célula basal a proporção de células em luminal humana é de cerca de 1: 1, mas é de 1: 4 em ratinhos 6. O estroma murino também é diferente em ratinhos relativamente a seres humanos - os seres humanos têm mais extenso do músculo liso, enquanto que a camada muscular é muito mais fina na próstata murina. A adequada identificação, dissecção, e manipulação da próstata do rato são essenciais para a investigação do mouse próstata. Os níveis hormonais afectar drasticamente o desenvolvimento e a homeostase da glândula da próstata em humanos e ratos. Enquanto estrogénio parece desempenhar um papel no desenvolvimento da próstata 7, a hormona mais importante na próstata é a testosterona. A testosterona é essencial para um desenvolvimento glandulard manutenção. No seguimento de castração química ou física, aproximadamente 90% das células luminais na apoptose adulta próstata e a glândula encolhe. Se a testosterona é reintroduzido a um indivíduo em condições de castração, a próstata é capaz de regenerar-se a plena capacidade. A testosterona também parece dirigir o cancro da próstata, que é por terapia de privação de androgénio é uma estratégia terapêutica utilizada. No entanto, muitos cânceres de próstata se tornam resistentes à privação de andrógeno. Além disso, homens submetidos a terapia de privação de andrógeno para o tratamento de câncer de próstata submetidos a ciclos de condições castrados e regeneradas. No ratinho, a castração cirúrgica, juntamente com regeneração hormonal da próstata através da reintrodução de testosterona, é uma ferramenta importante para estudar com os quais a resistência a castração e os efeitos da testosterona sobre ciclismo da próstata. Neste artigo, vamos discutir e demonstrar as técnicas adequadas que permitam locatE e micro-dissecção de próstata de rato, assim como na cirurgia de castrar um rato.

<table><tbody><tr><td>Ferramentas cirúrgicas</td><td>Roboz</td><td>Various</td><td></td></tr><tr><td>Formaldeído</td><td>Sigma</td><td>F8775</td><td></td></tr><tr><td>OCT medium</td><td>VWR</td><td>25608-930</td><td>Deve ser colocado em gelo seco para congelar e armazenado a -80 &deg; C</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Johns Hopkins</td><td></td><td>Também disponível de fornecedores online</td></tr><tr><td>Caneta Cautery</td><td>Medline</td><td>ESCT002</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda</td><td>AD Surgical</td><td>M-S330R19</td><td></td></tr><tr><td>Clipes de ferida cirúrgica</td><td>Roboz</td><td>RS-9265</td><td></td></tr></tbody></table>

murino próstata micro-dissecção e castração cirúrgica

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Modelos de camundongos são usados extensivamente para estudar o câncer de próstata e outras doenças. O camundongo é um excelente modelo para estudar a próstata e tem sido usado como substituto para descobertas no desenvolvimento e doenças da próstata humana. A microdissecção da próstata permite o estudo consistente da anatomia, histologia e características celulares da próstata específicas do lobo na ausência de contaminação de outros tecidos. A testosterona afeta o desenvolvimento e a doença da próstata. A terapia de privação androgênica é um tratamento comum para pacientes com câncer de próstata, mas muitos tumores de próstata se tornam resistentes à castração. A castração cirúrgica de modelos de camundongos permite o estudo da resistência à castração e outras facetas da biologia hormonal na próstata. Este procedimento pode ser acoplado à reintrodução de testosterona, ou regeneração hormonal da próstata, um método poderoso para estudar linhagens de células-tronco na próstata. Juntas, a microdissecção da próstata e a castração cirúrgica abrem uma infinidade de oportunidades para pesquisas robustas e consistentes sobre o desenvolvimento e a doença da próstata. Este manuscrito descreve os protocolos para microdissecção da próstata e castração cirúrgica em camundongos de laboratório.

Todos os seis lóbulos da próstata foram removidos a partir de um rato através de micro-dissecção de próstata (Figura 1). O tracto urogenital completo (UGT) é constituído por todos os lóbulos da próstata, da bexiga, vesícula seminal, e da uretra (Figura 1A). Os canais deferentes atribui à uretra, mas é desnecessário para próstata micro-dissecação, e pode, portanto, ser separado antes da remoção da UGT cortando a uretra (Figura 1b-1c). O t...

Este manuscrito descreve os protocolos de próstata micro-dissecção e castração cirúrgica no rato de laboratório. Nós também retratam resultados representativos produzidos por estes protocolos. Finalmente, discutimos as vantagens e utilização desses protocolos.

Murino próstata Micro-dissecção e castração cirúrgica

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

O objetivo geral desses procedimentos é permitir o estudo da próstata, bem como de diferentes condições hormonais no camundongo. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área do câncer de próstata, como, por exemplo, quais são os efeitos da privação hormonal sobre a carcinogênese prostática. A principal vantagem dessa técnica é que os efeitos de diversos processos patológicos e alterações hormonais podem ser estudados em glândulas prostáticas individuais.Comece fixando um camundongo em uma placa de dissecação na posição supina pelos coxins plantares de cada pata e borrifando o abdômen com etanol 70%. Em seguida, segurando a pele do abdômen inferior com uma pinça, use uma tesoura para cortar a pele e a peritônio aproximadamente um centímetro anterior à abertura do pênis. Continue cortando a pele e o peritônio do abdômen inferior ao longo dos dois lados do abdômen até a caixa torácica, expondo a cavidade peritoneal.Após identificar a localização da bexiga e do trato urogenital, ou UGT, mova suavemente a gordura e outros órgãos para o lado a fim de expor os tecidos urinários. Em seguida, utilizando uma pinça, segure um ducto deferente em sua base, próxima à uretra, e remova o vaso. Após a remoção do outro ducto, use a pinça para segurar e puxar cuidadosamente a bexiga, ao mesmo tempo em que utiliza uma tesoura para cortar a uretra abaixo da próstata ventral e aproximadamente um centímetro abaixo da base da bexiga.Transfira o UGT colhido para uma placa de Petri de 60 a 100 milímetros contendo aproximadamente cinco a 10 mililitros de PBS e coloque a placa sob um microscópio estereoscópico. Em seguida, pegue um par de pinças finas em cada mão, segurando os instrumentos como lápis, e apoie os antebraços sobre a bancada, em ambos os lados do microscópio, para mantê-los firmes. Posicione o UGT com as pinças de modo que a bexiga esteja voltada para cima, a uretra apontada para baixo e as vesículas seminais posicionadas em ambos os lados da bexiga.Segurando a uretra com uma pinça, use a outra pinça para remover cuidadosamente a gordura sem retirar nenhum tecido prostático. Quando toda a gordura tiver sido removida, rompa o tecido conjuntivo entre os dois lobos ventrais da próstata para separá-los. Em seguida, segurando um dos lobos ventrais próximo à ponta com um par de pinças, agarre a base do lobo o mais próximo possível da uretra.Agora, mova o outro par de pin&ccedil;as para restringir a uretra enquanto puxa o lobo para longe do vaso com um movimento firme e suave. Confirme que nenhum tecido prost&aacute;tico permanece aderido &agrave; uretra. Em seguida, coloque o lobo no meio apropriado, de acordo com o pr&oacute;ximo passo experimental.Após isolar o outro lobo ventral da mesma maneira, use uma pinça para puxar suavemente um dos lobos anteriores para longe da vesícula seminal, tomando cuidado para não perfurar a vesícula seminal. Em seguida, uma vez que o lobo esteja independente da vesícula seminal, remova-o da mesma forma que acabou de ser demonstrado para o lobo ventral. Após isolar o segundo lobo anterior, vire a UGT restante de modo que a próstata dorsal fique visível e use a pinça para romper o tecido conjuntivo entre os dois lobos laterais dorsais e entre os lobos e a região posterior das vesículas seminais.Em seguida, remova os lobos laterais dorsais individuais, conforme acabou de ser demonstrado. Para realizar a castração, comece colocando um camundongo anestesiado sobre uma superfície limpa e estéril em posição supina e confirme o nível adequado de sedação mediante compressão do dedo do pé. Se o camundongo não reagir, use uma máquina de barbear elétrica para depilar a área cirúrgica e esterilize o abdômen.Em seguida, utilize uma tesoura cirúrgica estéril para fazer uma incisão vertical de um centímetro através da pele da linha média do abdômen inferior, aproximadamente um ponto cinco centímetros anterior ao pênis, seguida por uma incisão menor através do peritônio, tomando cuidado para não cortar nenhum órgão. Usando pinças estéreis, levante suavemente a borda cortada do peritônio para visualizar a cavidade peritoneal e use outra pinça estéril para puxar uma das bolsas de gordura testicular até que os testículos apareçam. Em seguida, utilize uma caneta de cauterização para cortar lentamente através da bolsa de gordura, segurando os testículos até que a artéria testicular tenha sido seccionada.Se a artéria for cortada muito rapidamente, o vaso pode sangrar em excesso, exigindo a eutanásia do camundongo. Recomendo aquecer a caneta de cauterização em intervalos curtos, sem deixá-la ficar muito quente, e, em seguida, movimentar o instrumento lentamente através da artéria para que o animal não sangre excessivamente. Após a remoção da bolsa de gordura e da artéria, descarte os testículos e a bolsa de gordura e repita a castração para o outro testículo.Após a remoção do segundo testículo, feche o peritônio com suturas de seda estéril e prenda a pele com clipes cirúrgicos para feridas. Em seguida, administre analgesia para controle da dor e coloque o camundongo em uma gaiola limpa, sobre um aquecedor de gaiola, por 5 a 10 minutos com monitoramento, até que esteja totalmente recuperado. O trato urogenital completo é composto pelos seis lobos prostáticos, a bexiga, as vesículas seminais e a uretra.O ducto deferente se prende à uretra, mas é desnecessário para a microdissecação da próstata e pode, portanto, ser destacado antes da remoção do trato urogenital. O trato urogenital permanecerá íntegro assim que for removido do abdômen, coberto por tecido adiposo que precisa ser removido para acessar os lobos prostáticos. Neste experimento representativo, a castração foi seguida por dois ciclos de regeneração hormonal, e os níveis de testosterona no soro foram monitorados por ELISA.Como esperado, sob condições de castração, os níveis de testosterona praticamente desapareceram. Na presença de tamoxifeno, um modulador seletivo do receptor de estrogênio, nenhuma diferença significativa em relação à condição hormonalmente normal foi observada. Após a castração, entretanto, a reintrodução de testosterona causou um aumento acentuado nos níveis séricos de testosterona.Após a microdissecação, os lóbulos da próstata de camundongos castrados são significativamente reduzidos, enquanto os lóbulos de animais tratados com testosterona se recuperam até o tamanho original. Além disso, a coloração com hematoxilina e eosina do tecido prostático anterior em condições normais, castradas e regeneradas revela uma redução acentuada no crescimento tecidual robusto nas seções provenientes dos animais castrados. Uma vez dominada, esta técnica pode ser concluída em cinco minutos por camundongo, se realizada corretamente.Ao realizar a castração, é importante lembrar-se de manter tudo estéril e garantir o controle da dor sentida pelo camundongo. Após a castração, outros métodos, como a reintrodução de andrógenos, podem ser realizados para responder perguntas adicionais sobre os efeitos da testosterona em tumores da próstata. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores na área do câncer de próstata explorarem a carcinogênese, o desenvolvimento e a resistência à castração em camundongos.

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Neste vídeo, descrevemos o procedimento para a dissecção do sistema urogenital ou UGS de um modelo de camundongo macho. Este UGS é posteriormente dissecado ex vivo para isolar a próstata e estudar seu papel no desenvolvimento do câncer de próstata.

Extraindo a próstata do sistema urogenital de camundongo: uma técnica para separar a próstata de outros órgãos do sistema urinário e genital em camundongos machos

Neste vídeo, demonstramos o procedimento para administrar injeção intraprostática de células de câncer de próstata em um modelo de camundongo. Modelos murinos ortotópicos podem ser usados para estudar a origem da doença e a resposta às terapias de tratamento em um ambiente não invasivo e clinicamente relevante.

Injeção intra-prostática de células cancerígenas: uma técnica para entregar células cancerígenas para estabelecer o modelo ortotópico de camundongo com câncer de próstata

Este vídeo descreve um método para editar genes específicos em células da próstata usando um sistema de entrega baseado em adenovírus. A abordagem permite a alteração ortotópica e localizada da expressão gênica utilizando a tecnologia CRISPR para desenvolver novos modelos de camundongos para câncer de próstata.

Modelagem do câncer de próstata em modelos de camundongos geneticamente modificados: uma técnica de edição de genes localizada mediada por CRISPR/Cas9 em células do lobo anterior da próstata de camundongos

Este modelo ortotópico de cancro de próstata humana permite a quantificação do tamanho do tumor, as células tumorais, e a formação de metástases distinta circulante para o pulmão. Como as células deve escapar o principal órgão, entrar na corrente sanguínea, e implantar em um site secundário, este modelo recapitula efetivamente o cenário em seres humanos.

Um Modelo murino de próstata humana Metástase Ortotópico

O câncer de próstata é a segunda causa mais comum de mortes relacionadas ao câncer nos Estados Unidos. Um modelo de câncer ortotópico fornece uma abordagem útil para entender a biologia do câncer de próstata e avaliar a eficácia dos regimes terapêuticos. Este protocolo descreve as etapas detalhadas necessárias para estabelecer um modelo ortotópico de camundongo com câncer de próstata.

Pré-clínica Ortotópico Modelo murino de cancro da próstata humano

O objetivo do presente protocolo é demonstrar a injeção intrabenigna de células de câncer de próstata, com posterior castração. Ortotópico modelos pré-clínicos de câncer de próstata andrógeno-dependentes e resistente a castração são críticos para estudar a doença no contexto de um microambiente do tumor clinicamente relevantes e um host imunocompetentes.

Um modelo murino de ortotópico bioluminescentes e fluorescente Syngeneic de câncer de próstata andrógeno-dependentes e castração resistente

Engenharia de tecido renais construções oferecem uma solução para a escassez de órgãos e os efeitos deletérios da diálise. Aqui, descrevemos um protocolo para micro dissecar murino rins para isolamento dos segmentos córtico-medular. Esses segmentos são implantados livre de andaime celular construções, formando organoids renal.

Microdissection de segmentos de tecido Renal primária e incorporação com tecnologia de construção romance livre de andaime

Este protocolo descreve um método recentemente estabelecido para a entrega do vírus para a próstata murino. Usando tecnologia CRISPR/Cas9, superexpressão do gene ou entrega de recombinase Cre, a técnica permite ortotópico alteração da expressão gênica e implementa um modelo de romance do rato para câncer de próstata.

Entrega de vírus de CRISPR guias de próstata murino para alteração do Gene

Camundongos geneticamente modificados são modelos úteis para investigar mecanismos de câncer de próstata. Aqui nós apresentamos um protocolo para identificar e dissecar os lobos da próstata de um sistema urogenital do rato, diferenciá-los com base em histologia e isolar e cultura primária de células da próstata em vitro como esferoides para análises a jusante.

Identificação, caracterização histológica e dissecação dos lobos da próstata do rato para em Vitro Spheroid 3D modelos de cultura

Nós mostramos um método para a necropsia e a dissecção de modelos do cancro da próstata do rato, focalizando na dissecção do tumor da próstata. Um protocolo passo a passo para a geração de organóides do tumor da próstata do rato é apresentado igualmente.

Geração de organóides tumorais de modelos de camundongo geneticamente modificados de câncer de próstata

Este manuscrito descreve uma maneira consistente de realizar rapidamente orquiectomias e ovariectomias de roedores de sobrevivência.

Orquiectomia murina e ooforectomia para reduzir a produção de hormônios sexuais

Aprenda a microdissecção prostática e castração cirúrgica em camundongos para estudar câncer de próstata e condições hormonais. Este método permite analisar efeitos de privação hormonal em glândulas prostáticas individuais.

Murino próstata Micro-dissecção e castração cirúrgica

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