Arrojo, agressão e Ensaios shoaling para Zebrafish Síndromes Comportamentais

O objetivo geral deste protocolo é padronizar a metodologia utilizada para observar, analisar e interpretar as síndromes comportamentais de ousadia, agressividade e cardume em peixes-zebra. Diretamente, este método pode responder a perguntas sobre teoria evolutiva, estrutura populacional e dinâmica populacional. Quando combinado com técnicas interdisciplinares, pode ser aplicado a campos como farmacologia, toxicologia, genética comportamental e endocrinologia.

A principal vantagem dessa técnica é que a combinação de ousadia, agressividade e cardume abrange muitos comportamentos bem estudados e facilmente quantificáveis no peixe-zebra. E cada ensaio pode ser modificado para responder a perguntas experimentais alternativas. Comece separando aleatoriamente o peixe-zebra na proporção apropriada de peixes focais para peixes de estímulo.

Armazene todos os peixes em racks de alojamento de peixe-zebra sob um ciclo estrito de 12 a 12 horas de luz / escuridão. Alimente todos os peixes focais e de estímulo com alimentos em flocos todos os dias. E alimente o camarão em salmoura apenas uma vez por semana em dias sem pesquisa.

Em seguida, configure três tanques de ensaio no laboratório. Um para agressão, ousadia e cardume em locais que minimizam a possibilidade de estímulos externos adversos. E deixe espaço suficiente para uma câmera de vídeo capturar todo o tanque.

Configure a câmera de vídeo, para que ela tenha clareza suficiente para visualizar os rótulos do tanque, bem como para distinguir comportamentos sutis dos peixes focais. Mantenha a câmera mantida na mesma posição com uma visão completa do tanque durante todas as gravações de ensaios comportamentais, a fim de minimizar diferenças não intencionais na pontuação comportamental como resultado de gravações diferenciais. Em seguida, defina um esquema de rotulagem para rastrear a data, o número de peixes e o número do ensaio para todos os ensaios comportamentais.

Rotule a parte externa do tanque com fita adesiva à vista da câmera. Registre essas informações em um caderno de laboratório para referência rápida e controle de qualidade futuro. Por fim, configure um tanque de aclimatação que será usado entre todos os ensaios, bem como diretamente após os indivíduos serem removidos do rack de alojamento.

Comece obtendo um tanque retangular de 19 litros, medindo 30 por 15 por 10 centímetros. Equipe o tanque com divisórias externas opacas ao redor de três lados do tanque de agressão, deixando a frente exposta para visualização para reduzir estímulos externos indesejáveis. Divida o tanque com marcações externas em quatro quadrantes retangulares iguais.

Use calafetagem de silicone para fixar um espelho dentro do quadrante inferior esquerdo, inclinado a 22,5 graus, formando um triângulo retângulo contra o lado esquerdo do tanque. Tenha água fresca e envelhecida, pré-aquecida a 27,5 a 28,5 graus Celsius, pronta para adicionar ao tanque de agressão para garantir que a temperatura da água no tanque de aclimatação e no tanque de agressão esteja dentro de dois graus Celsius do rack da caixa. Coloque um peixe focal no rack da caixa e transfira-o para um tanque de aclimatação separado, onde ele se aclimatará por 10 minutos.

Confirme se a câmera de vídeo está focada no tanque de ensaio de agressão e pressione gravar. Em seguida, transfira imediatamente o peixe focal por meio de ventosa do tanque de aclimatação para o tanque de agressão. Registre o tanque de agressão por 10 minutos e 30 segundos.

Em seguida, coloque os peixes focais do tanque de agressão de volta no tanque de aclimatação. Ao assistir à gravação após a conclusão do ensaio, aguarde 30 segundos após o peixe ter sido introduzido no tanque como um período adicional de aclimatação antes de pontuar os comportamentos. Finalmente, marque um único ensaio de agressão pelo menos duas vezes até que o ensaio seja pontuado com alta concordância entre as iterações.

Para configurar o ensaio de ousadia, primeiro obtenha um pequeno tanque trapezoidal de 1,5 litro, medindo 15 centímetros de altura com 26,5 centímetros de topo e 22,5 centímetros de fundo e 6 centímetros de largura. Enrole papel opaco em torno de três lados do tanque e deixe a frente exposta para visualização. Coloque um único pedaço fino de fita adesiva externa ao tanque para demarcar a parte superior da parte inferior do tanque.

Em seguida, certifique-se de que a temperatura da água no tanque de ousadia esteja dentro de dois graus Celsius do rack da caixa. Transfira o peixe focal do suporte para o tanque de aclimatação e deixe-o aclimatar por 10 minutos. Certifique-se de que a câmera de vídeo esteja focada no ensaio de ousadia e pressione gravar no dispositivo.

Transfira imediatamente o peixe focal do tanque de aclimatação para o tanque de ousadia e registre por oito minutos e 30 segundos. Ao assistir à gravação após a conclusão do ensaio, aguarde um período adicional de aclimatação de 30 segundos após o peixe ser introduzido no tanque antes de pontuar. Finalmente, marque um único ensaio de ousadia pelo menos duas vezes, até que o ensaio seja pontuado com alta concordância entre as iterações.

Para montar o ensaio de cardume, obtenha um tanque de 76 litros que tenha três compartimentos divididos por duas divisórias de vidro seladas com calafetagem de silicone. Externamente, use fita adesiva para marcar duas zonas de preferência que estão a seis vírgula três e cinco centímetros de cada uma das divisórias de vidro que designam cada zona de estímulo. Aplique divisórias opacas externas ao redor de três lados do tanque de cardume e deixe a frente exposta para visualização.

Em seguida, selecione cardumes de estímulo para aclimatar por pelo menos 12 horas antes do teste e faça com que permaneçam no tanque de cardume durante todo o curso do experimento. Transfira o peixe focal do rack de alojamento para um tanque de aclimatação separado por meio de ventosa, onde ele se aclimatará por 10 minutos. Em seguida, transfira, por ventosa, os peixes focais do tanque de aclimatação para o compartimento central do tanque de cardume.

Permita um período de aclimatação de 10 minutos antes de um período de observação de pontuação ao vivo de 10 minutos, no qual os cardumes de peixes são definidos como estando dentro da zona de preferência na câmara que abriga o cardume alvo. Em seguida, quantifique o tempo gasto em cada zona de preferência, bem como o tempo gasto no volume central. Finalmente, após a conclusão dos ensaios, transfira os peixes para um tanque terminal separado que servirá como tanque de destino final para todos os indivíduos focais usados.

Este protocolo analisou associações consistentes em comportamentos de agressão, ousadia e cardume do peixe-zebra para determinar se uma síndrome comportamental estava presente. Aqui, o componente um representa comportamentos de agressão, enquanto o componente dois está associado a comportamentos de ousadia. Uma vez que os comportamentos de agressão e ousadia não são representados pelo mesmo componente, pode-se concluir que há ausência de síndrome comportamental de agressão de ousadia no peixe-zebra.

Uma vez dominado, todo o protocolo de um peixe focal pode ser feito em 70 minutos. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de se familiarizar e familiarizar sua equipe com cada comportamento-alvo para minimizar o viés do observador. Pontuar a mesma gravação de vídeo várias vezes também aumentará a confiança em seus resultados.

Após esse procedimento, outros métodos nas áreas farmacológica, genética ou fisiológica podem ser realizados para responder a perguntas adicionais sobre quais fatores internos e externos afetam as síndromes comportamentais. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como observar, analisar e interpretar a ousadia, agressividade e síndromes comportamentais de cardume em peixes-zebra. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos!