Name: Arrojo, agressão e Ensaios shoaling para Zebrafish Síndromes Comportamentais (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Aprenda a padronizar ensaios de arrojo, agressão e shoaling em zebrafish para estudar síndromes comportamentais. Esta metodologia facilita comparações entre estudos e permite modificações para diversas questões experimentais.

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Este trabalho foi apoiado por uma bolsa de educação do Howard Hughes Medical Institute e uma bolsa interna do capítulo da Saint Joseph's University da Sigma Xi. Gostaríamos também de agradecer aos três revisores anônimos que ajudaram a fortalecer o protocolo e as interpretações.

Os seguintes metodologias para a habitação, cuidados, e estudo do peixe-zebra foram aprovados pela Universidade IACUC do Saint Joseph. 1. Zebrafish alojamento e cuidados <ol><li> Obter o peixe-zebra assunto a partir de um fornecedor local, ou a partir de populações selvagens capturados. Por favor, note que a habitação o peixe-zebra está sujeito às diretrizes IACUC e autorizações adicionais são necessários para as populações selvagens capturados habitacionais. </li><li> Identificar e peixe-zebra em separado de acordo com o sexo. Como alternativa, ignore este passo ou substituir com um método diferente de separação com base na hipótese do estudo. NOTA: características sexuais são difíceis de determinar no peixe-zebra, especialmente nas fêmeas. Referem-se a estas diretrizes 10 ou manuais on-line úteis para distinguir o sexo. </li><li> Aleatoriamente separar as populações mais para dentro da proporção apropriada de peixe peixes focal ao estímulo. Nota: peixes Focal são os assuntos de teste seguido através da série de behavioensaios de RAL, e peixes de estímulo são as pessoas que irão ocupar as câmaras de estímulo nos ensaios agressão e empolamento. NOTA: Tradicionalmente, entre 1 e 5 estímulo peixe peixes por focal em ensaios de empolamento e uma mistura 1: estímulo proporção de 1: peixes focal em ensaios de agressão 14,17 são usados. No entanto, o pesquisador precisa projetar especificamente o estudo com a hipótese em mente (ou seja, deve estímulo peixes ser mantida constante para manter a consistência no comportamento dos peixes focal, ou deveria estímulo peixes ser rodado entre cada ensaio para assegurar a randomização adequada). </li><li> Armazenar todos os peixes nas prateleiras habitação peixe-zebra (27,5-28,5 ° C) sob uma 00:12 ciclo de luz / escuridão rigorosa. Alimentar todos os alimentos focal e estímulo peixes floco diária e semanal camarão de água salgada, em dias não-investigação. </li><li> Certifique-se de que todos os testes é feito entre ZT1 e ZT5 (hora zeitgeber) para evitar os efeitos do ritmo circadiano 26. </li></ol> 2. A randomização e tanque de Setup <ol><li> Randomize todos os indivíduos a priori a uma sequência específica de ensaios comportamentais. Configurar um esquema de randomização consistente usando um gerador de seqüência aleatória on-line 27 ou um gerador de seqüência aleatória de um pacote de software estatístico (R). <ol><li> Rotular cada ensaio 1-3 e manter essa atribuição consistente. Atribuir uma sequência aleatória para cada indivíduo e mapear a sequência de acordo com a etiqueta de ensaio comportamental. Por exemplo, para três ensaios totais (1 mapeados para shoaling, 2 mapeado para a ousadia, e 3 mapeados para Agressão), um determinado indivíduo pode ter uma sequência aleatória de &#39;2,3,1&#39;, que vai obrigá-los a realizar o específico ensaios comportamentais na seqüência especificada. </li></ol></li><li> Configurar os tanques de ensaio (ousadia, agressão e empolamento) no laboratório em lugares que minimizam a possibilidade de estímulos externos adversos e certifique-se de ter espaço suficiente para uma câmara de vídeo para capturar todo o tanque. Certifique-se de que a câmara de vídeo enough clareza para ver etiquetas tanque, bem como ser capaz de distinguir comportamentos sutis do peixe focal e configuração da câmara de vídeo nesta posição. </li><li> Grave todos os ensaios comportamentais com a câmera mantida na mesma posição com uma vista completa do tanque especificado para minimizar as diferenças inesperadas na pontuação comportamental, como resultado de gravações diferenciais. NOTA: Evite colocar tanques nas áreas de tráfico pesadas e por portas como o movimento e som irá afetar o comportamento do peixe-zebra. </li><li> Estabelecer protocolos jWatcher únicas 24 por conseguir cada ensaio comportamental. Consulte o manual jWatcher para aprender como criar arquivos mestres focais para atribuir comportamentos a teclas e ficheiros de análise focais para resumir dados coletados. NOTA: jWatcher é software de pontuação comportamental que permite a pontuação comportamental, confiável e repetível personalizado 24. </li><li> Definir um sistema de rotulagem para rastrear a data, número de peixes, e número de ensaio para todos os ensaios comportamentais (por exemplo,&#39;F5-B-123115&#39; implicando Peixe 5, ensaio Ousadia, no dia 31 de dezembro de 2015) e rotular o exterior do tanque com fita em vista e no foco da câmera. Manter e gravar essas informações em um caderno de anotações para referência rápida e controle de qualidade futuro. </li><li> Defina-se um tanque de aclimatação que vai ser utilizada entre todos os ensaios, bem como imediatamente após os indivíduos são retirados da carcaça cremalheira. NOTA: Os tanques de aclimatação e tanques do terminal estão aquários pequenos (40 cm x 20 cm x 25 cm) com cascalho e um filtro que se assemelham a cremalheira habitação. </li><li> Após os ensaios estão todos concluídos, transferir o indivíduo para um tanque de um terminal separado, que servirá como o tanque de destino final para todos os indivíduos focais usados. Use um tanque que é grande o suficiente para abrigar um grupo de indivíduos para o resto de suas vidas (por exemplo, 25 litros). NOTA: É muito importante para manter as temperaturas e condições consistentes e similares água across todos os tanques. Isso inclui habitação, aclimatação, e todos os tanques de teste. </li></ol> 3. Realização do Ensaio Agressão <ol><li> Realizar o ensaio de agressão em um 19 L tanque retangular medindo 30 cm x 15 cm x 10 cm. Equipar o tanque em partições opacas exterior adjacente de três lados do tanque de agressão, deixando exposta a frente para visualização, para reduzir a estímulos exteriores indesejáveis. Divida o tanque com marcações externas em quatro quadrantes iguais retangulares e fixar um espelho permanentemente (com calafetar silicone) no quadrante inferior esquerdo, inclinado a 22,5 ° formando um triângulo direito contra o lado esquerdo do tanque. </li><li> Certifique-se de que a temperatura da água no tanque de depósito de aclimatação e agressão está dentro de 2 ° C da cremalheira habitação. Para fazer isso, ter água fresca e em idade pré-aquecido a 27,5-28,5 ° C pronto para adicionar ao tanque de agressão. Por favor, note que é importante para mudar a água entre cada ensaio para eliminar injustificadapistas olfactivas. </li><li> Transferir, por escavação, um peixe focal da cremalheira carcaça para um tanque de aclimatação separada onde ele vai aclimatar durante 10 min. NOTA: É importante para reduzir estímulos introduzidos para o peixe através do manuseio inadequado. Indivíduos de transferência como descrito anteriormente 27. <ol><li> Especificamente, manualmente e com cuidado colocar um copo de plástico pequena, transparente para o tanque de interesse. Sem interromper o peixe, tanto quanto a transferência usando uma rede, lentamente recolher o peixe no copo. </li></ol></li><li> Certifique-se de que a câmara de vídeo está pronta para gravar, confirmando que o tanque de ensaio de agressão (veja o passo 3.1) está em foco e imediatamente antes de transferir o indivíduo para o tanque de agressão, pressione registro no dispositivo. Transfira o peixe focal através de escavação a partir do tanque para o tanque de aclimatação agressão. NOTA: É importante registrar antes de o pescado que entra no tanque agressão para controlar o tempo exato de entrada. </li><li> Grave a aggrESSÃO tanque durante 10 min e 30 seg e em seguida, o copo de peixe focal do tanque de agressão de volta para o tanque de aclimatação. </li><li> Ao assistir a gravação, espere 30 segundos depois de o peixe foi introduzido para o tanque como um período de aclimatação adicional antes de comportamentos de pontuação. </li><li> Usando o sistema de pontuação jWatcher definido para comportamentos agressivos, quantificar os seguintes comportamentos para 10 min: O tempo gasto perto do espelho, o número de abordagens espelho, número de dardos, número de tentativas de picadas (abertura da boca na direção do espelho), e número de monitores laterais (dorsal, peitoral, anal, e montagem barbatana caudal) 9. </li><li> Marcar um ensaio de agressão única, pelo menos, duas vezes, até que o ensaio é marcado com alta concordância entre as iterações. </li></ol> 4. Realização da Ousadia Assay <ol><li> Conduzir o ensaio ousadia em um pequeno 1.5 L tanque trapezoidal, medindo 15 cm de altura x 26,5 cm x 22,5 cm topo inferior x 6 cm de largura. Enrole papel opaco em torno de todos os lados of do tanque, mas deixar a frente expostos para visualização. Colocar uma peça única, fina de fita externa ao tanque para demarcar o topo da porção inferior do tanque. </li><li> Assegurar que a temperatura da água no tanque é coragem dentro de 2 ° C da cremalheira caixa (ver passo 3.2) </li><li> Transferir o peixe focal da cremalheira carcaça para o tanque de aclimatação (ver passo 3.3) e deixe aclimatar durante 10 min. </li><li> Certifique-se de que a câmera está pronta para gravar o ensaio ousadia e, uma vez pronto para transferir o peixe focal, pressione registro no dispositivo. Transfira o peixe focal do tanque de aclimatação para o tanque de ousadia e recorde de 8 min e 30 seg. </li><li> Ao assistir a gravação, permitir um período adicional de aclimatação de 30 segundos depois de o peixe é introduzido no tanque antes de marcar. </li><li> Usando o software jWatcher, quantificar comportamentos ousadia para 8 min. Especificamente, quantificar os seguintes comportamentos: Tempo perto da superfície, a latência para entrar porção superior, o número de transitions para a parte superior, e número de movimentos erráticos (dardos) 29. </li><li> Marcar um ensaio audácia única, pelo menos, duas vezes, até que o ensaio é marcado com alta concordância entre as iterações. </li></ol> 5. A realização do Ensaio shoaling <ol><li> Conduzir o ensaio shoaling em um tanque de 76 L que tem três compartimentos divididos por dois divisores de vidro selados com silicone calafetar (as resultantes três compartimentos consistem em duas zonas de estímulo e um compartimento focal). Externamente, marcar duas zonas preferenciais designados 6,35 cm de cada uma divisória de vidro nas zonas de estímulo &quot;, indicativo de dois corpos comprimentos 30. Aplicar divisórias opacas externamente em torno de três lados do tanque shoaling, mas deixe a frente expostos para visualização. NOTA: Esta zona de preferência pode ser personalizado para testar hipóteses específicas para diferentes espécies de tamanho. </li><li> Dependendo da natureza do estudo, seleccione cardumes de estímulo a aclimatar durante pelo menos 12 horas antes da suae testar e permanecem no tanque empolamento durante todo o decurso da experiência. NOTA: cardumes estímulo são colecções de peixes individuais que são usados ​​para avaliar a forma como o peixe focal comporta-se na presença ou na ausência desses bancos de areia. Diferentes combinações estímulo cardume pode ser seleccionado para testar um número de diversas hipóteses de empolamento. Certifique-se de que os cardumes de estímulo são rodados entre cada zona de estímulo para evitar viés de lado e também estão autorizados a aclimatar durante pelo menos 12 horas antes do teste. </li><li> Transferir o peixe focal para dentro do tanque de aclimatação como previamente descrito (ver passo 3.3) </li><li> Transferir, por escavação, o peixe focal do tanque de aclimatação intermédia para o compartimento central do tanque de empolamento. </li><li> Permitir para um período de aclimatação de 10 minutos antes de um período de observação live-scoring 10 min. Alternativamente, gravar os ensaios de empolamento e marcar mais tarde usando jWatcher. Os peixes são determinado a ser shoaling quando estão dentro da zona de preferência na câmaraabrigando o cardume alvo. </li><li> Quantificar o tempo gasto em cada zona de preferência e tempo gasto no volume central. </li><li> Como medida descritivas adicionais, calcule &#39;força da shoaling&#39; (SOS). Atribuir um valor entre -1 e +1, onde a magnitude descreve quantas vezes um cardumes de peixes individuais. </li><li> Calcula-se a razão entre o tempo gasto empolamento dividida pela área das zonas de empolamento e subtrair a percentagem de tempo gasto não empolamento e a área das regiões não-empolamento. Coloque esta quantidade através da soma do tempo gasto em cada zona, dividido pelo volume de cada zona individual. Mais informações sobre este cálculo pode ser encontrado em um estudo anterior 14. </li></ol> 6. Controle de Qualidade de Dados <ol><li> Analisar dados usando dados tradicionais ferramentas de análise de 31-32. </li><li> Teste de homogeneidade de variância por meio do teste não paramétrico de Levene para todos os comportamentos. Se um comportamento é não homogênea executar uma log-transformação33. </li><li> Confirmar que não há nenhum efeito de sequência (ou seja, que a ordem de randomização não afectou o comportamento dos indivíduos), utilizando um ANOVA de Kruskal-Wallis nos dados homogéneas 34. </li><li> Confirmar que não há desvios laterais para o ensaio de empolamento criando modelos lineares gerais univariadas em índices SoS com o lado como um fator fixo 35. NOTA: Se houver pouca ou nenhuma problemas com os dados, as análises a jusante pode ser conduzida. Se houver problemas, conciliar com transformações adicionais, racionalizar com explicações biologicamente plausível, e / ou aumentar o tamanho das amostras. </li></ol> 7. Analisar dados <ol><li> Calcule bicaudal de Spearman correlações 36 para todos os comportamentos separadamente nos ensaios de ousadia e agressividade. </li><li> Calcule os coeficientes de correlação intraclasse (CCI) como um modelo misto de duas vias com consistência para ensaios comportamentais que foram realizados mais de um time para um determinado indivíduo 36. Neste cenário, o TPI é uma medida de como consistentemente um peixe comportou-se de um dado ensaio mediu mais de uma vez. </li><li> Preprocess ousadia e agressividade comportamentos de centragem e normatização todos os comportamentos para se preparar para a entrada para a análise de componentes principais (PCA) 25. NOTA: Pré-processamento das medições pela centralização e normatização é um passo vital. Sem este passo de pré-processamento comportamentos que ocorrem com mais frequência e mais variável irá influenciar excessivamente as interpretações dos componentes extraídos. O processo de centralização e normatização irá remover esse viés. </li><li> Execute um APC com uma matriz de correlação para determinar se a ousadia e agressividade estão ligadas entre si como uma síndrome comportamental. Interpretar cargas comportamentais de cada componente significativo em&gt; 0,6. Veja Budaev 2010 24 para um guia completo para relatar PCA para estudos comportamentais. A trama scree vai ser informativo em que eigenvectors deve ser mantido para a interpretação. </li><li> Usando software estatístico, como R ou SPSS 31,32, extrair pontuações para cada componente para cada indivíduo. As contagens representam a quantidade de comportamento do indivíduo dado pode ser explicado por o componente em particular. </li><li> Calcule Spearman correlações entre os escores de regressão de fatores e a força de empolamento 36. NOTA: A síndrome comportamental é considerado presente se ousadia e agressividade comportamentos carregar no mesmo componente ou, se algum componente com cargas interpretáveis ​​significativas correlaciona-se com a força de empolamento. Além disso, observe que a força de shoaling não está incluído no PCA para permitir melhores interpretações das quantificações comportamentais mais complexos (ousadia e agressividade). A APC ortogonalmente colapso ousadia e agressividade apresenta em vectores próprios para maximizar a quantidade de variação explicada e é bem adequado para estas medições complexas. interpretaçãoo que resulta autovetores e regredindo a nossa força de medições empolamento em cada um deles dá uma interpretação muito mais intuitiva de como cada um dos comportamentos complexos (ousadia e agressividade) referem-se a uma medição shoaling binário mais bem definida (ou seja, o peixe é empolamento ou não shoaling). </li></ol>

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Os autores (GW e SPM) não têm interesses financeiros concorrentes ou conflitos de interesse.

O protocolo irá determinar se existem associações consistentes em ousadia, agressão e comportamentos empolamento em peixes-zebra. Se existem associações consistentes numa dada população entre qualquer um destes comportamentos, em seguida, uma síndrome comportamental está presente. Ao estudar a síndrome comportamental de uma população, os pesquisadores podem ter uma compreensão mais completa da sua dinâmica comportamental, estrutura populacional e história evolutiva, possivelmente, 3. Além disso, manipulando o...

Há um crescente corpo de literatura investigando as associações entre comportamentos distintos dentro animais individuais a partir de uma dada população. Estas associações são denominadas síndromes comportamentais, e as medidas incluem, tipicamente, a ousadia, a agressão, o comportamento exploratório, e sociabilidade 1-5. síndromes comportamentais são valiosos tanto por razões diretos e indiretos. Diretamente, o conhecimento das síndromes comportamentais podem fornecer uma visão mais completa da teoria da evolução, estrutura populacional e dinâmica populacional 3. Indiretamente, o conhecimento sobre as associações comportamentais podem informar campos que quantificam o comportamento tais como farmacologia 6, toxicologia 7, genética comportamental 8,9, e endocrinologia 10. Devido a estes benefícios diretos e indiretos, o aumento do conhecimento das síndromes comportamentais é especialmente valioso em organismos modelo comumente utilizados, tais como o peixe-zebra. Estudos utilizando peixes-zebra são encontrados ina variedade de disciplinas, incluindo a análise das síndromes comportamentais 11-13. Para avançar o conhecimento em pesquisa síndrome comportamental, e por outras disciplinas também usam as medidas comportamentais para o teste de hipóteses, descrições confiáveis ​​e sucintas de comportamento são necessários para análises e interpretações válidas e protocolos padronizados irá facilitar as comparações inter-estudo dentro das espécies. Nosso protocolo foi desenvolvido para medir uma síndrome comportamental ousadia-agressão shoaling em uma população de peixe-zebra criados em laboratório 14. No entanto, a base do protocolo (rastreamento de cada peixe, assegurando randomização apropriada, e análises apropriadas) pode ser facilmente modificado para uma variedade de medidas comportamentais alternativos. Além disso, ensaios de ousadia, agressão ou empolamento pode ser executado individualmente para o teste de hipóteses distintas. Portanto, ao mesmo tempo que é o nosso objetivo para descrever como conduzir um estudo de síndrome comportamental eo protocolo para o sucesso l indivíduoEvel medição comportamental, cada faceta deste procedimento pode ficar sozinho. A literatura sobre síndromes comportamentais abarca diversos grupos taxonómicos, de artrópodes e para os seres humanos 4, a fim de medir uma síndrome comportamental, pelo menos dois contextos de comportamento tem de ser quantificados. Infelizmente, muitas vezes há pouca consistência nos ensaios que são utilizados para quantificar a medida de comportamento entre os eixos de comportamento. Por exemplo, no peixe, coragem pode ser medida utilizando ensaios de labirinto em T, ensaios de campo aberto, ou a introdução de um novo estímulo ou externa 15. Estudos de agressão em peixes pode envolver interacções díade, ensaios de vídeo de estímulo, ou ensaios modelo de argila 12,16,17. Da mesma forma, a análise do comportamento de empolamento, que tipicamente envolve a medição de preferência shoalmate, pode ser realizada em diferentes tipos de tanques, com diferentes métodos para determinar o tempo de associação 21-23. Neste protocolo de um subconjunto específico do OveraLL repertório comportamental ensaio é apresentado. Especificamente, este protocolo apresenta uma metodologia para rastrear indivíduos através de ousadia, agressão e ensaios de empolamento de uma forma que facilita as comparações dentro dos indivíduos para determinar se as comparações são consistentes em todos os indivíduos dentro de uma população. Efetuamos este protocolo com o peixe-zebra e ciclídeos condenado (Amatitlania nigrofasciata) em estudos anteriores 14,18, e ele vai trabalhar com qualquer peixes de água doce de tamanho similar. Os ensaios de negrito são conduzidas num tanque trapezoidal 1,5 L que tem uma linha horizontal delinear áreas de igual tamanho das porções superior e inferior do tanque. comportamentos quantificados incluem o número de transições através do teste de peixe entre a parte superior e inferior do tanque, o tempo gasto em cada porção, o número de dardos, e a latência para entrar na porção superior. O ensaio de agressão é realizada num tanque rectangular 19L, que incluium espelho x 5 polegadas 3 polegadas inclinada a cerca de 22 ° situadas no canto inferior esquerdo do tanque 19. Comportamentos quantificados incluem a quantidade total de tempo gasto pelos peixes-alvo interage com o espelho 20, juntamente com indicadores agressivos específicas - número de picadas, displays laterais, dardos entre os peixes de ensaio e de sua reflexão. Para estes indicadores específicos, mordidas são definidos como estocadas rápidas para o espelho com uma boca aberta, displays laterais são definidos como a queima de lateral, peitorais, anal e dorsal barbatanas na direção do espelho, e dardos são quaisquer movimentos erráticos que são não dirigido para o espelho. Finalmente, o ensaio de empolamento quantifica o comportamento de um peixe teste na câmara de centro de um tanque de câmaras-tri. As câmaras laterais do tanque são ou vazio, ou conter uma &quot;cardume target&quot; de peixes, eo tempo o peixe teste gasta perto de cada câmara lateral é medido 21-23. A pontuação composta única, referido como StrenGTH de empolamento (SOS), é calculada para cada peixe de teste individual, específica para os estímulos, e pode ser utilizado em análises a jusante 14. Todos os comportamentos são marcados por um único visor, ou vários espectadores usando software quantificação comportamental livre conhecido como jWatcher 24. Testando a presença de uma síndrome comportamental é principalmente um esforço estatística, e é aconselhável seguir as orientações tal como apresentado pela Budeav 2010 25. Especificamente, recomenda-se realizar uma análise de componentes principais (PCA) em dados centralizados e normalizados em que o entradas são os vetores de comportamentos de um indivíduo em ensaios com múltiplas medidas comportamentais (ie, ousadia e agressividade). A APC, realizado em uma matriz de correlação, reduz a dimensionalidade das medições comportamentais, e assim extrai o conhecimento mais importante que explica a maioria da variação. Os componentes extraídos podem então ser interpretada based em cargas elevadas de factor para o comportamento individual de interesse e pontuações de regressão pode ser extraído para cada indivíduo na base dos componentes explicativas. Estas pontuações de regressão pode, então, ser comparado com a medição SOS e outras várias medições não-comportamentais, tais como o tamanho do peixe ou sexo. Esse fluxo de trabalho foi implementado em um estudo das síndromes comportamentais peixe-zebra em que uma síndrome comportamental específica do sexo que existe entre ousadia e shoaling 14 foi descoberto. Nesta situação, ousadas machos de peixe-zebra são mais susceptíveis de se associar com a espécie de maior dimensão, mais agressivos (D. albolineatus), mas esta associação é perdida nas fêmeas. Esse fluxo de trabalho também foi implementado em um estudo de presidiário kin juvenil ciclídeos (Amatitlania nigrofasciata) 18 em que uma síndrome comportamental não foi descoberto, potencialmente indicando plasticidade comportamental da espécie. Portanto, o protocolo seguinte é apresentada Wom um objectivo de delinear a natureza dos três ensaios específicos (coragem, agressão, e de empolamento), no âmbito de um estudo síndrome comportamental nível individual.

<table><tbody><tr><td>Sistema de Rack de Peixe-Zebra</td><td>Aquaneering Inc</td><td>Cat. # ZS550</td><td></td></tr><tr><td>Pet Valu Tropical Fish Food, 224.0 g</td><td>Pet Valu</td><td>Cat. # 31700</td><td></td></tr><tr><td>Ovos de Camarão Salmoura de Grau Premium, 16 oz</td><td>Camarão Salmoura Direct</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5 L Tanque Trapezoidal</td><td>Pentair Aquatic Ecosystems</td><td>Cat. # itsts-a</td><td></td></tr><tr><td>tanque retangular de 19 L</td><td>That Fish Place</td><td></td><td></td>211932</tr><tr><td>Tanque retangular de 76 L</td><td>That Fish Place</td><td>212180</td><td></td></tr><tr><td>Hitachi KP-D20A CCD Camera</td><td>Prescott's, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon AF Nikkor 35-105 mm f/305~4.5s Lente MACRO</td><td>Nikon Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ArtMinds Square Mirror, Value Pack 3" x 3"</td><td>Michaels</td><td>Cat. # 10334162</td><td></td></tr><tr><td>Jwatcher</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SPSS Base de Estatísticas</td><td>IBM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>R</td><td>The R Foundation</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

arrojo, agressão e ensaios shoaling para zebrafish síndromes comportamentais

Boldness, Aggression, and Shoaling Assays for Zebrafish Behavioral Syndromes

A síndrome comportamental existe quando comportamentos específicos interagem sob diferentes contextos. Peixe-zebra foram cobaias em estudos recentes e é importante para padronizar protocolos para garantir análises e interpretações adequadas. Em nossos estudos anteriores, temos medido ousadia monitorando uma série de comportamentos (tempo perto da superfície, a latência em transições, número de transições, e dardos) em um tanque trapezoidal 1,5 L. Da mesma forma, nós quantificamos a agressão por mordidas de observação, monitores laterais, dardos e tempo perto de um espelho inclinado em um tanque de 19 L rectangular. Ao dividir um tanque de 76 L em três partes, que também examinou as preferências empolamento. O ensaio shoaling é um ensaio altamente customizável e pode ser adaptado para hipóteses específicas. No entanto, os protocolos para este ensaio também deve ser padronizado, mas suficientemente flexível para personalização. Em estudos anteriores, as câmaras finais eram ou vazio, continha 5 ou 10 peixes-zebra, ou 5 Danios pérola (D. albolineatus). No folmugindo manuscrito, apresentamos um protocolo detalhado e dados representativos que acompanham aplicações bem sucedidas do protocolo, que irá permitir a replicação de experiências síndrome comportamental.

Dependendo da natureza do estudo, e protocolo específico empregue, vários resultados distintos são possíveis através de uma experiência síndromes comportamentais. As tabelas e figuras, onde indicado a seguir, são adaptados de nosso estudo anterior publicado na revista Behavioural Processes 14 e do jornal Zebrafish 17. Quando a proposta (como descrito acima) é levada a cabo na sua totalidade, dois conjuntos de resultados, &quot;dentro de correlações de ensaio&quot; e...

Este manuscrito descreve a configuração, implementação e análise de ousadia, agressão e cardume em peixe-zebra e testes para a presença de uma síndrome comportamental. Uma abordagem padronizada para quantificação comportamental permitirá uma comparação mais fácil entre os estudos. Modificações neste protocolo são possíveis, pois cada ensaio pode ser executado individualmente.

Arrojo, agressão e Ensaios shoaling para Zebrafish Síndromes Comportamentais

A behavioral syndrome exists when specific behaviors interact under different contexts. Zebrafish have been test subjects in recent studies and it is ...

O objetivo geral deste protocolo é padronizar a metodologia utilizada para observar, analisar e interpretar os síndromes comportamentais de ousadia, agressividade e agrupamento em cardumes de peixe-zebra. Diretamente, este método pode responder perguntas na teoria evolutiva, estrutura populacional e dinâmica de populações. Quando combinado com técnicas interdisciplinares, pode ser aplicado a áreas como farmacologia, toxicologia, genética comportamental e endocrinologia.A principal vantagem dessa técnica é que a combinação de comportamentos como ousadia, agressividade e agrupamento abrange muitos comportamentos bem estudados e facilmente quantificáveis em peixes-zebra. Além disso, cada ensaio pode ser modificado para responder a perguntas experimentais alternativas. Comece separando aleatoriamente os peixes-zebra na proporção apropriada entre peixes focais e peixes estímulo.Armazene todos os peixes em racks de alojamento para Peixe-zebra sob um ciclo rigoroso de 12 horas de luz e 12 horas de escuro. Alimente todos os peixes focais e de estímulo com ração em flocos diariamente. E alimente somente com artêmias uma vez por semana, em dias sem pesquisa.Em seguida, monte três tanques de ensaio no laboratório. Um para avaliação de agressividade, ousadia e agregação em locais que minimizem a possibilidade de estímulos externos adversos. E deixe espaço suficiente para que uma câmera de vídeo capture todo o tanque.Configure a câmera de vídeo de modo que tenha nitidez suficiente para visualizar as etiquetas dos tanques, bem como para distinguir comportamentos sutis do peixe focal. Mantenha a câmera na mesma posição, com visão completa do tanque durante todas as gravações dos ensaios comportamentais, a fim de minimizar diferenças não intencionais na pontuação comportamental decorrentes de gravações distintas. Em seguida, defina um esquema de rotulagem para acompanhar a data, o número do peixe e o número do ensaio em todos os ensaios comportamentais.Rotule o exterior do tanque com fita adesiva em local visível para a câmera. Registre essas informações em um caderno de laboratório para referência rápida e controle de qualidade futuro. Por fim, monte um tanque de aclimatação que será utilizado entre todos os ensaios, bem como imediatamente após a remoção dos indivíduos da prateleira de alojamento.Inicie obtendo um tanque retangular de 19 litros, medindo 30 por 15 por 10 centímetros. Equipe o tanque com divisórias opacas externas ao redor de três lados do tanque de agressão, deixando a frente exposta para observação, a fim de reduzir estímulos externos indesejáveis. Divida o tanque com marcações externas em quatro quadrantes retangulares iguais.Use selante de silicone para fixar um espelho no quadrante inferior esquerdo, inclinado em 22,5 graus, formando um triângulo retângulo contra o lado mais à esquerda do tanque. Tenha água fresca e envelhecida, pré-aquecida a 27,5–28,5 graus Celsius, pronta para adicionar ao tanque de agressão, de modo a garantir que a temperatura da água no tanque de aclimatação e no tanque de agressão esteja dentro de dois graus Celsius em relação à temperatura da estante de alojamento. Capture cuidadosamente um peixe focal da estante de alojamento e transfira-o para um tanque de aclimatação separado, onde permanecerá por 10 minutos para aclimatação.Confirme que a câmera de vídeo está focada no tanque do ensaio de agressividade e pressione gravar. Em seguida, transfira imediatamente o peixe focal, por meio de copo, do tanque de aclimatação para o tanque de agressividade. Grave o tanque de agressividade por 10 minutos e 30 segundos.Em seguida, transfira o peixe focal do tanque de agressão de volta para o tanque de aclimatação. Ao assistir à gravação após a conclusão do ensaio, espere 30 segundos após a introdução do peixe no tanque, como um período adicional de aclimatação, antes de pontuar os comportamentos. Por fim, pontue um único ensaio de agressão pelo menos duas vezes, até que o ensaio seja pontuado com alta concordância entre as iterações.Para montar o ensaio de ousadia, obtenha primeiro um pequeno tanque trapezoidal de 1,5 litro, com 15 centímetros de altura, 26,5 centímetros na parte superior, 22,5 centímetros na base e 6 centímetros de largura. Envolva papel opaco em três lados do tanque, deixando a frente exposta para visualização. Coloque um único pedaço fino de fita adesiva na parte externa do tanque para delimitar a parte superior da inferior do tanque.Em seguida, certifique-se de que a temperatura da água no tanque de ousadia esteja dentro de dois graus Celsius da temperatura do suporte de alojamento. Transfira o peixe focal do suporte de alojamento para o tanque de aclimatação e deixe-o aclimatar-se por 10 minutos. Certifique-se de que a câmera de vídeo esteja focada no ensaio de ousadia e pressione gravar no dispositivo.Transfira imediatamente o peixe focal do tanque de aclimatação para o tanque de ousadia e grave por oito minutos e 30 segundos. Ao assistir à gravação após a conclusão do ensaio, permita um período adicional de aclimatação de 30 segundos após a introdução do peixe no tanque antes de pontuar. Por fim, pontue um único ensaio de ousadia pelo menos duas vezes, até que o ensaio seja pontuado com alta concordância entre as iterações.Para montar o ensaio de agregação, obtenha um tanque de 76 litros com três compartimentos divididos por dois divisores de vidro selados com vedante de silicone. Externamente, use fita para marcar duas zonas de preferência localizadas a 6,35 centímetros de cada divisor de vidro, que delimitam cada zona de estímulo. Coloque divisórias opacas externas ao redor de três lados do tanque de agregação, deixando a frente exposta para observação.Em seguida, selecione cardumes estímulo para aclimatação por pelo menos 12 horas antes do teste e mantenha-os no tanque de agrupamento durante todo o experimento. Transfira o peixe focal da estante de alojamento para um tanque de aclimatação separado por meio de copagem, onde permanecerá por 10 minutos. Em seguida, transfira, por copagem, o peixe focal do tanque de aclimatação para o compartimento central do tanque de agrupamento.Permita um período de aclimatação de 10 minutos antes de um período de observação ativa de 10 minutos, no qual os peixes em cardume são definidos como aqueles localizados dentro da zona de preferência na câmara que contém o cardume-alvo. Em seguida, quantifique o tempo gasto em cada zona de preferência, bem como o tempo gasto no volume central. Por fim, após a conclusão dos ensaios, transfira os peixes para um tanque terminal separado, que servirá como tanque de destino final para todos os indivíduos focais utilizados.Este protocolo analisou associações consistentes nos comportamentos de agressividade, ousadia e agrupamento em cardumes de peixe-zebra para determinar se havia uma síndrome comportamental presente. Aqui, o componente um representa comportamentos de agressividade, enquanto o componente dois está associado a comportamentos de ousadia. Como os comportamentos de agressividade e ousadia não são representados pelo mesmo componente, pode-se concluir que não há uma síndrome comportamental de agressividade-ousadia no peixe-zebra.Uma vez dominado, todo o protocolo para um peixe focal pode ser realizado em 70 minutos. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar-se de familiarizar você e sua equipe com cada comportamento-alvo para minimizar o viés do observador. Pontuar a mesma gravação de vídeo várias vezes também aumentará a confiança em seus resultados.Após este procedimento, outros métodos nas áreas farmacológica, genética ou fisiológica podem ser realizados para responder perguntas adicionais sobre quais fatores internos e externos afetam as síndromes comportamentais. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como observar, analisar e interpretar as síndromes comportamentais de ousadia, agressividade e agrupamento em peixe-zebra. Obrigado por assistir e boa sorte em seus experimentos!

boldness-aggression-shoaling-assays-for-zebrafish-behavioral

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Nós desenvolvemos o Response Visual-Motor para quantificar a saída do motor de zebrafish larval em resposta aos aumentos de luz e diminui. Também examinamos os mutantes visão zebrafish, incluindo a resposta não optocinético (NRC) mutantes, que foram pensados ​​para serem completamente cego quando testado por um outro ensaio de visão, o reflexo optocinético.

Um Ensaio Comportamental para Medida de capacidade de resposta a alterações em Zebrafish intensidades de luz

O vídeo descreve o ensaio de evitação e tigmotaxia de larvas de peixe-zebra. O vídeo examina o comportamento das larvas de peixe-zebra em resposta ao estímulo visual aversivo.

Ensaio de evitação e timotaxia do peixe-zebra: um método de alto rendimento para examinar o comportamento larval em resposta a estímulos visuais aversivos

O artigo descreve um ensaio para estudar a agressividade do peixe-zebra. O método usa um espelho simples e observa a resposta comportamental do peixe-zebra em relação ao seu próprio reflexo no espelho.

Ensaio de agressão: um método para estudar o comportamento agressivo do peixe-zebra em resposta a um espelho

O nosso laboratório desenvolveu um novo sistema de imagem automatizado de alto débito, que é útil para a detecção de vários comportamentos diferentes em larvas de peixe-zebra de 7 dias de idade. O sistema pode ser utilizado para detectar alterações subtis no comportamento após as larvas foram expostas a agentes tóxicos ambientais ou de produtos farmacêuticos.

Automatizados análises comportamentais de alto rendimento em larvas do peixe

O uso de um sistema de vídeo automático 3D que pode rastrear indivíduos e grupos de peixes-zebra é descrito. Como exemplo de aplicação, exploramos os efeitos do antagonista do receptor NMDA MK-801 em cardumes de peixe-zebra.

Usando um sistema automatizado de rastreamento 3D para registrar indivíduos e cardumes de peixes-zebra adultos

Este manuscrito descreve um método simples para medir o stress comportamentalmente no zebrafish adulto. A abordagem tira proveito da tendência inata que zebrafish preferem a metade inferior de um tanque quando em um estado estressante. Nós igualmente descrevemos métodos para acoplando o ensaio com farmacologia.

Abordagens comportamentais para estudar estresse inato em zebrafish

Apresentamos uma câmara comportamental projetada para avaliar o desempenho cognitivo. Fornecemos dados mostrando que uma vez adquiridos, zebrafish se lembram da tarefa 8 semanas depois. Também mostramos que os zebrafish hiperglicêmicos alteraram o desempenho cognitivo, indicando que esse paradigma é aplicável a estudos que avaliam a cognição e a memória.

A Tarefa Comportamental de Escolha de Três Câmaras usando zebrafish como um sistema modelo

O objetivo do protocolo atual é delinear as etapas necessárias para estabelecer e usar um ensaio de preferência social para peixes-zebra adultos e demonstrar que ele pode ser usado para caracterizar defeitos sociais induzidos por etanol.

Modelagem de distúrbios do espectro alcoólico fetal em peixe-zebra para caracterizar o impacto de um ambiente embrionário adverso no comportamento social adulto

Aqui, apresentamos uma bateria de teste comportamental abrangente, incluindo o novo tanque, Shoaling e testes de preferência social, para determinar efetivamente os potenciais efeitos neurotóxicos de produtos químicos (por exemplo, metanfetamina e glifosato) em peixes-zebra adultos usando um único tanque. Este método é relevante para neurotoxicidade e pesquisa ambiental.

Avaliação da Neurotoxicidade em Danio rerio Adulto utilizando uma Bateria de Testes Comportamentais em um Único Tanque

Esse protocolo estabelece um paradigma de fenotipagem comportamental em larvas de peixe-zebra tratadas com MPTP para avaliar déficits motores e não motores, semelhantes à doença de Parkinson.

Perfilamento fenotípico de fenótipos comportamentais semelhantes ao parkinsoniano induzidos por MPTP em larvas de peixe-zebra com base em experimento comportamental

Tarefas de preferência social multi-câmara foram adaptadas de roedores para peixe-zebra, facilitando o estudo do comportamento social em organismos modelo. Esse protocolo valida uma tarefa de baixo custo de 3 câmaras em tanque aberto, usando webcams e software de código aberto para medir a preferência social dos peixes-zebra, tornando-a acessível para pesquisa e ensino de graduação.

Alternativa de baixo custo para examinar preferência social em peixe-zebra (Danio rerio) usando a tarefa de 3 câmaras em aquário aberto e natação livre

Aprenda a padronizar ensaios de arrojo, agressão e shoaling em zebrafish para estudar síndromes comportamentais. Esta metodologia facilita comparações entre estudos e permite modificações para diversas questões experimentais.

Arrojo, agressão e Ensaios shoaling para Zebrafish Síndromes Comportamentais

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