Name: A esteira de fadiga de teste: Um ensaio simples, de alta taxa de transferência de Fadiga-like Comportamento para o Mouse (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Aprenda a medir comportamento de fadiga em camundongos usando uma esteira inclinada a 10 graus. Este método de alta taxa de transferência permite avaliar intervenções anti-fadiga com um único equipamento em pesquisa pré-clínica.

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Esta pesquisa foi apoiada pelo Programa de Pesquisa Intramural do NIH, Instituto Nacional de Diabetes e Doenças Digestivas e Renais (NIDDK), Grant 1Z01 DK011006. Gostaríamos de agradecer a Michele Allen por fornecer assistência técnica, Eleni Solomos pela assistência editorial e à equipe veterinária e de cuidados com animais do NIH por cuidar dos camundongos usados no desenvolvimento deste método.

Este procedimento foi aprovado pelo Instituto Nacional de Diabetes e Doenças Digestivas e Renais Animal Care e do Comitê Use. 1. Preparação <ol><li> Para permitir a rápida identificação de cada rato antes do teste, tatuagem as caudas de todos os ratos para serem treinados e testados com marcas de identificação. NOTA: Este passo é opcional. marcador permanente ou outros métodos de identificação pode ser utilizado como uma alternativa à tatuagem. </li><li> Antes da formação e ratinhos de teste, certifique-se de que a esteira é sobre uma superfície plana e definido para o tapete rolante ângulo desejado de inclinação (ângulo recomendado de inclinação: 10 °, para ser mantido consistente ao longo de treinamento e teste) e definir a frequência de choque elétrico e intensidade de forma adequada (recomendado: 2 Hz, 1,22 mA). NOTA: O choque elétrico usado deve produzir não mais do que uma sensação de formigamento leve quando tocado por um dedo sem luva e deve ser entregue em um fash pulsátilion (com cada choque com duração de 200 ms). </li><li> Coloque uma folha de papel de açougueiro ou um pano absorvente debaixo do tapete rolante para recolher boli fecal e urina durante o treinamento e testes. </li><li> Colocar uma folha de papel ou de uma almofada absorvente sobre a terceira esteira do alojamento (isto é, a tampa de plástico transparente que cobre as faixas do tapete rolante) mais afastada da grade de choque. NOTA: Este passo é opcional, mas vai criar um espaço mais escura e podem fornecer o incentivo adicional para evitar a parte inferior do tapete rolante. </li><li> Se pretende utilizar uma escova de aço para fornecer motivação adicional durante o treinamento, garantir que um está prontamente disponível antes de iniciar as sessões de treinamento. </li><li> Certifique-se de que qualquer fármaco ou método para induzir e / ou aliviar a fadiga está disponível e pode ser preparado ou realizada durante o Passo 2,14. </li></ol> 2. Ratos treinamento para usar a escada rolante NOTA: O treinamento é necessário para garantir que os ratosestão familiarizados com a esteira e tarefa e pode executar adequadamente quando testado. Se a maioria dos ratos sendo treinados estão recebendo choques frequentes ou de outra forma um mau desempenho durante uma sessão de treinamento, sessões de formação adicionais devem ser realizados. No primeiro dia, a maioria dos ratos será chocado várias vezes. No segundo dia do treinamento, os ratos deve ser raramente fazer contato com a grade. Se um rato exibe desempenho consistente formação pobre, que devem ser retirados do estudo. Para ratinhos C57BL / 6NCr femininos, esta é uma ocorrência rara (menos do que 1% ter sido removido a partir de estudos, devido a pobre desempenho de formação), mas deve notar-se que outras estirpes podem funcionar de modo diferente durante o treino. <ol><li> Com o tapete rolante (e velocidade definido para 0 m / min), levante individualmente os ratos pelas cauda dos ratos e coloque em pistas separadas de uma escada rolante mouse. Prontamente ativar a grade correspondente após a colocação de cada rato na esteira. Certifique-se de que os ratos são colocados directamente ón o cinto de esteira. NOTA: A quantidade de tempo e distância cada rato é realizada pela cauda deve ser minimizado, colocando a gaiola perto da esteira antes de transferir os ratos para a esteira e / ou permitindo ratos para ficar em uma plataforma sólida (por exemplo, uma tampa de gaiola de arame ) até que eles estão perto da esteira e o experimentador está pronto para colocá-los na esteira. </li><li> Permitir que os ratos de explorar livremente a esteira para 1-3 min ou até que cada rato tem explorado sua pista e / ou receberam pelo menos um choque da rede. </li><li> Ligue o tapete rolante e, lentamente, aumentar a velocidade até que começa a mover (aproximadamente 1,5 a 3,0 m / min). Monitorar todos os ratos para garantir que eles comece a caminhar. Se um rato não comece a andar ou caminha em direção a grade choque, estar preparado para intervir tocando o mouse com uma escova de arame ou cócegas cauda. </li><li> Lentamente, aumente a velocidade da esteira de 8 m / min. Iniciar um temporizador e continuar comportamento de monitoramento. </li><li> Aumentar a velocidade da esteira de9 m / min a 5 min, 10 m / min a 7 min, e parar a esteira em 10 min. </li><li> Permitir que os ratos para explorar rapidamente a escada rolante, em seguida, remover e voltar cada um para sua gaiola. </li><li> Limpar a esteira e grade com álcool e substituir o papel ou pano absorvente por baixo da escada rolante. </li><li> Para treinar ratos, repita os passos 2.1 a 2.7. NOTA: Permitir álcool secar antes de colocar novos ratos na esteira. </li><li> No segundo dia de treinamento, repita o Passo 2.1. Ligue o tapete rolante e aumentar a velocidade de 10 m / min. Iniciar um temporizador. NOTA: a velocidade do tapete rolante pode ser aumentada mais rapidamente do que no primeiro dia de treino. </li><li> Aumentar a velocidade da esteira a 11 m / min a 5 min, 12 m / min a 10 min, e parar a esteira em 15 min. </li><li> Retirar ratos e devolvê-los às suas gaiolas. </li><li> Limpar a esteira e grade com álcool e substituir o papel ou pano absorvente por baixo da escada rolante. Para treinar ratos, repita os passos 2.9 através de 2.12. </li><li>Realizar dias adicionais (3 dias) de formação da mesma maneira como o segundo dia. Nota: Esta etapa é opcional, mas é altamente recomendável se a maioria ou todos os ratos (do mesmo sexo e tensão) sendo treinados dificuldade de exibição com a tarefa. Ratos podem geralmente um bom desempenho na Etapa 3, quando eles foram treinados durante 3 dias (ou seja, com um dia adicional de formação), embora dias adicionais ou menos de treinamento podem ser apropriadas dependendo de seu desempenho durante o segundo dia de treino e da duração passo 2,14. </li><li> Permitir que pelo menos um dia inteiro para passar em que os ratos não têm exposição a esteira antes de prosseguir para a Etapa 3. NOTA: Qualquer fármaco (s) utilizados para induzir e / ou aliviar a fadiga deve ser administrada durante esta etapa. NOTA: Este período de tempo pode variar em comprimento e utilizada para induzir a intervenções de fadiga e / ou de teste para reduzir ou eliminar a fadiga. Se testar ratos mais de 7 dias após a conclusão da formação, um estudo-piloto é recomendado paraverificar se os ratinhos utilizados irá executar durante o teste. </li></ol> 3. esteira teste de fadiga NOTA: Neste teste, o comportamento de fadiga-like é definido como passar 5 segundos consecutivos na &quot;zona de fadiga&quot;. A zona de fadiga é definido como a região que engloba a parte do cinto de esteira dentro de aproximadamente um comprimento do corpo da grade de choque, bem como a grelha, em si. Antes do teste, garantir que o ponto de delinear esta zona é claro para o experimentador, tais como através da aplicação de uma marca para a parte superior ou lateral de pistas de esteira. <ol><li> Defina a velocidade da esteira a 12 m / min. Não inicie o tapete rolante. Certifique-se de que o choque grades estão desligados. </li><li> Individualmente colocar ratos em faixas separadas da esteira. Ativar a grade correspondente imediatamente após a colocação de cada rato na esteira. </li><li> Simultaneamente começar a esteira e um cronômetro. NOTA: Não intervir durante os testes, exceto para remover os ratosque cumprem o critério para a remoção (veja o passo 3.5). </li><li> Aumentar a velocidade da esteira, como indicado na Tabela 1. Observar atentamente todos os ratos durante todo o teste. NOTA: A esteira velocidades listadas na Tabela 1 foram selecionados com base em observações de fêmeas adultas camundongos C57BL / 6NCr. Velocidades mais altas, o tapete rolante pode ser apropriado para a maior (por exemplo, não consanguíneos ratinhos CD-1) ou mais ratinhos atléticos. </li><li> Se um rato permanece na zona de fadiga por 5 s contínua, retire imediatamente o rato da esteira e gravar a duração e distância funcionou. </li><li> Quando há ratos permanecem na esteira, parar a esteira. Limpar a esteira e grade com álcool e substituir o papel ou pano absorvente por baixo da escada rolante. </li><li> Para testar ratos, repita os passos 3.1 a 3.6. NOTA: Este passo é opcional. </li></ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

O protocolo atual descreve como usar uma escada rolante mouse para medir o comportamento de fadiga-like. Este método possui várias vantagens sobre VWRA, um ensaio pré-clínico comum de comportamento fadiga semelhante. VWRA requer que os ratos escolher para interagir com o aparelho de ensaio. Como resultado, algumas estirpes de ratinhos consanguíneos raramente interagem com a roda 16 e executado tão pouco que pode ser difícil ou impossível de identificar uma diminuição induzida por fadiga em actividade. Em cont...

Fadiga afeta uma ampla gama de pessoas, pode reduzir significativamente a qualidade de vida, e muitas vezes tem uma patogênese obscura ou desconhecida. Fadiga relacionada com o cancro (CRF), por exemplo, é experimentada pela maioria dos pacientes com cancro em tratamento e pode persistir por muito tempo após o tratamento do cancro tenha sido completada e na ausência de cancro detectáveis ​​1. Além disso, a fadiga é também um sintoma proeminente em inúmeras outras doenças e distúrbios, incluindo a síndrome de fadiga crónica, depressão, diabetes, e fibromialgia. Felizmente, existem intervenções não farmacológicas que são capazes de ajudar algumas pessoas que sofrem de fadiga (por exemplo, o exercício pode reduzir CRF para alguns pacientes com cancro da mama 2,3), mas muitas pessoas ainda não têm tratamento eficaz. Além disso, tratamentos com drogas existentes para o CRF não foram encontrados para ser ampla, se de todo, eficaz 4-7. Apesar da necessidade terapêutica e ausência de Drug opções de tratamento, os ensaios pré-clínicos de fadiga para auxiliar na descoberta e no desenvolvimento de novos tratamentos fadiga faltam, especialmente em modelos animais. Um dos únicos ensaios pré-clínicos de fadiga para estudos com roedores é a atividade roda voluntária de corrida (VWRA) 9-15, em que ratos ou outros roedores têm acesso gratuito a uma roda de corrida e sua atividade funcionamento diário é gravado. Em muitos estudos, VWRA é a única medida do comportamento de fadiga-like, com o comportamento de fadiga-like definido (em qualquer VWRA ou o protocolo atual) como uma diminuição da atividade física medida no grupo experimental. Embora VWRA pode fornecer uma medida longitudinal útil de fadiga-como comportamento, é um ensaio relativamente de baixo rendimento, a corrida varia consideravelmente entre linhagens de camundongos puras 16, e requer assuntos a serem alojados individualmente, o que pode causar mudanças no desempenho comportamento e teste 17-19. Outros ensaios, como a casa gaiola monitoramento comportamental eanálise, também pode fornecer a coleta de dados contínua e alguns sistemas podem permitir assuntos a serem alojados em pares 20. Estes ensaios têm utilidade, mas pode ser menos sensível como um meio de detectar comportamento de fadiga-like e, como a roda de corrida, também são de baixo rendimento. Em contraste com VWRA, testes rato esteira não dependem de actividade voluntária e pode ser concluído em um curto período de tempo, permitindo um maior rendimento. Em comparação com VWRA, estes testes empregam motivadores externos. Especificamente, há geralmente uma grade de metal eletrificada localizado na parte traseira da correia em movimento para fornecer os ratos com um choque elétrico deve deixam de funcionar. Além desta grade de choque, os ratos podem ser motivados a correr na esteira por meio de vários outros métodos, incluindo cutucando, cutucando, ou tocá-los com uma mão, escova, ou outra ferramenta e dirigir sopros curtos de ar para eles. Em vez de fadiga, testes rato esteira são muitas vezes utilizados para medir aeróbio e / ou anaerOBIC capacidade de exercício 21-25. Ratos são motivados a executar até que eles são incapazes de ou não querem continuar a correr na esteira como um meio de escapar novos choques elétricos. Testes em seguida, termina quando os ratos cumprir o critério de exaustão. Nestes protocolos, para garantir que os ratos atingir verdadeira exaustão fisiológico, o critério para a exaustão é geralmente definido como passar cinco segundos contínuos que colocam na parte superior da grade de choque e não para continuar a execução em face de estímulos aversivos repetidas. Assim, o comportamento de fadiga-like podem ser mascarados em testes de esteira típicos devido à forte natureza aversiva da motivação externa e critério para terminar o teste. Curiosamente, e em contraste com muitos outros estudos utilizando esteiras de roedores, uma publicação recente descreve uma outra versão de um teste de fadiga tapete rolante, o qual foi utilizado como parte de um exame dos efeitos do stress social em ratos 26. Embora o método utilizado por este grupo marcadamente diferente do Cuprotocolo rrent (ou seja, eles empregaram uma esteira single-lane e exigiu 10 segundos de choque elétrico como o critério para terminar seu teste), o estudo destaca a utilidade e interesse no desenvolvimento de um teste de fadiga rápida, simples de usar a esteira do rato. A fadiga é provável que seja detectável por outros meios de roda de funcionamento e alterações no comportamento de rotina. CRF torna os pacientes se sentem esgotados por uma menor quantidade de fadiga muscular, como determinado pela análise eletromiográfica, do que as pessoas sem CRF 27. Além disso, motivação reduzida tem sido observado e é medido por várias escalas de medição de fadiga humana 28,29. Assim, um ensaio pré-clínico útil do comportamento de fadiga-like deve distinguir entre ratos saudáveis ​​e cansados ​​com base em uma medida que não seja a capacidade fisiológica e não deve diminuições obscuros em motivação. Para atingir esse fim, evitando limitações de VWRA e outros ensaios, os wa métodos atuaiss desenvolvido por adaptar o teste do rato esteira. Este método usa uma grade de choque como o único motivador externo para fazer camundongos correr na esteira. Ratos aprendem rapidamente que a rede proporciona um estímulo aversivo e prontamente afastar-se dela quando colocado na esteira e manter uma certa distância dele durante a corrida. Quando os ratos fadiga, eles passam cada vez mais tempo na direção da parte de trás da esteira em vez de manter a velocidade em direção à extremidade dianteira. Assim, o critério para a conclusão do teste neste protocolo é passar cinco segundos contínuas na zona de fadiga designado (isto é, a parte traseira do tapete rolante, que varia de cerca de um comprimento do corpo da grade de choque para, e incluindo, a grade de choque). Isso leva vantagem da natureza aversiva da rede sem a necessidade de ratos para receber muitos ou quaisquer choques reais após o treinamento. Ao permitir que os ratinhos para completar o teste usando o critério de corrente em vez de exaustão (como definido acima),este método proporciona um meio de usar a esteira para medir o comportamento de fadiga semelhante ao invés de sua máxima capacidade fisiológica (ou quase máxima). Assim, este método pode proporcionar um ensaio simples e de alto rendimento de comportamento fadiga semelhantes em ratinhos e podem servir quer como uma medida independente ou complementar a outros ensaios de comportamento fadiga semelhante.

<table><tbody><tr><td>Esteira de Animais Exer 3/6</td><td>Columbus Instruments</td><td>1050-RM Exer-3/6</td><td></td></tr><tr><td>Cronômetro</td><td>Daigger</td><td>EF24490M&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Escova de arame</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-572-5</td><td></td></tr><tr><td>Compressas de ar comprimido</td><td>Dust-Off</td><td>FALDSXLPW</td><td></td></tr><tr><td>Absorventes</td><td>Daigger</td><td>EF2175CX&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Papel de açougueiro</td><td>Newell Paper Company</td><td>4620510</td><td></td></tr><tr><td>Álcool (70%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP82011</td><td></td></tr></tbody></table>

a esteira de fadiga de teste: um ensaio simples, de alta taxa de transferência de fadiga-like comportamento para o mouse

The Treadmill Fatigue Test: A Simple, High-throughput Assay of Fatigue-like Behavior for the Mouse

A fadiga é um sintoma proeminente em muitas doenças e distúrbios e reduz a qualidade de vida para muitas pessoas. A falta de clara patogénese e insuficiência das intervenções actuais para tratar a fadiga adequadamente em todos os pacientes deixa uma necessidade de novas opções de tratamento. Apesar da necessidade terapêutica e importância da investigação pré-clínica para ajudar a identificar novos tratamentos promissores, alguns ensaios pré-clínicos de fadiga estão disponíveis. Além disso, o ensaio pré-clínico mais comum utilizado para avaliar o comportamento fadiga semelhante, roda de corrida voluntária, não é adequado para utilização com algumas estirpes de ratinhos, pode não ser sensível a drogas que reduzem a fadiga, e tem relativamente baixa taxa de transferência. O protocolo atual descreve um romance, ensaio pré-clínico não-voluntária de comportamento à fadiga, como, o teste de fadiga esteira, e fornece provas da sua eficácia na detecção de comportamento à fadiga, como em ratos tratados com um medicamento de quimioterapia conhecido por causar fadiga em seres humanos e fadiga comportamento -como nos animals. Este ensaio pode ser uma alternativa benéfica para roda de corrida, como o comportamento de fadiga-like e potenciais intervenções pode ser avaliado em um maior número de ratos ao longo de um período de tempo mais curto, permitindo assim a descoberta mais rápida de novas opções terapêuticas.

Este protocolo permite comportamento à fadiga do tipo a ser medido em ratos usando uma escada rolante. Os dados apresentados nesta seção foi obtida por treinamento e teste 3 grupos separados de ratos usando o protocolo atual (excluindo Figura 1A e 1C). Para provocar fadiga, 5-fluorouracilo (5-FU), um fármaco quimioterapia citotóxica conhecido por causar fadiga nos seres humanos 30 e o comportamento fadiga semelhante em ratinhos 10,13,</su...

A fadiga é um sintoma comum, subtratado e frequentemente mal compreendido em muitas doenças e distúrbios. Novos ensaios pré-clínicos de fadiga podem ajudar a melhorar a compreensão atual e o tratamento futuro da fadiga. Para esse fim, o protocolo atual fornece um novo meio de medir o comportamento semelhante à fadiga no camundongo.

A esteira de fadiga de teste: Um ensaio simples, de alta taxa de transferência de Fadiga-like Comportamento para o Mouse

Fatigue is a prominent symptom in many diseases and disorders and reduces quality of life for many people. The lack of clear pathogenesis and failure of ...

O objetivo geral deste procedimento é medir o comportamento semelhante à fadiga em camundongos para estabelecer um modelo de fadiga e testar se uma intervenção pode reverter essa condição. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais relacionadas à fadiga, como quais intervenções podem auxiliar na redução da fadiga ou na reversão de modelos de fadiga. A principal vantagem desta técnica é que ela pode avaliar rapidamente comportamentos semelhantes à fadiga e/ou intervenções anti-fadiga utilizando apenas um único equipamento.A demonstração visual deste método é essencial. É importante ver e compreender como os camundongos se comportam para realizar com sucesso esta tarefa. Antes de treinar e testar os camundongos, certifique-se de que a esteira esteja sobre uma superfície plana e ajuste-a para o ângulo de inclinação desejado, que geralmente é de 10 graus.Em seguida, certifique-se de que a frequência e a intensidade do choque elétrico estejam ajustadas adequadamente, o que normalmente corresponde a dois hertz e 1,22 miliampères. Abaixo da esteira, coloque um pedaço de papel ou uma almofada absorvente para coletar fezes e urina. Depois, coloque uma almofada sobre um terço da carcaça da esteira mais distante da grade de choque para criar um espaço escurecido e incentivar os camundongos a permanecerem nessa área.Agora, prossiga com o treinamento dos camundongos. Com a esteira desligada e a velocidade ajustada em zero, coloque rapidamente os camundongos, segurando-os pelas caudas, diretamente sobre a esteira. Após posicionar cada camundongo, ligue imediatamente a grade de choque correspondente.Primeiro, permita que os camundongos explorem livremente. Interrompa o tempo de exploração assim que cada camundongo receber pelo menos um choque, ou após cerca de três minutos. Em seguida, ligue a esteira e aumente lentamente a velocidade até que ela comece a se mover entre 1,5 e 3,0 metros por minuto.Certifique-se de que todos os camundongos comecem a andar. Se um camundongo não começar a andar ou andar em direção à grade de choque, toque-o com a escova de arame ou use o cosquilhamento na cauda para incentivá-lo a andar na esteira. Agora, com todos os camundongos andando, aumente lentamente a velocidade da esteira para oito metros por minuto.Tente garantir que os camundongos estejam andando para frente na esteira enquanto aumenta a velocidade durante esta primeira sessão de treinamento. Se os camundongos estiverem explorando ou virando para encarar a grade de choque, interrompa o aumento da velocidade da esteira até que eles retomem a caminhada. Em seguida, inicie um cronômetro e continue monitorando o comportamento.Após cinco minutos, aumente a velocidade para nove metros por minuto. Após sete minutos, aumente a velocidade para 10 metros por minuto. Após 10 minutos, encerre a sessão de treinamento parando a esteira.Permita que os camundongos explorem brevemente a esteira por um pouco mais de tempo e devolva-os à sua gaiola de origem. Não é necessário que todos os camundongos de uma mesma gaiola corram ao mesmo tempo, mas tente minimizar o número de vezes que os camundongos são retirados de uma determinada gaiola. Entre as sessões, limpe a esteira e as grades de choque com lenços umedecidos com álcool.Além disso, substitua o papel ou a almofada absorvente sob a esteira. No segundo dia de treinamento, repita o processo utilizado no primeiro dia, mas aumente a velocidade da esteira para 10 metros por minuto antes de iniciar o cronômetro. Após cinco minutos, aumente a velocidade da esteira para 11 metros por minuto.Após 10 minutos, aumente a velocidade para 12 metros por minuto e mantenha a esteira em funcionamento até que sejam completados 15 minutos. Em seguida, encerre a sessão de treinamento. Dias adicionais de treinamento podem ser realizados se os camundongos estiverem tendo dificuldades com a tarefa.Após o treinamento, aguarde pelo menos um dia inteiro de descanso antes do teste de fadiga. É possível manter um intervalo de até sete dias sem necessidade de re-treinamento. Neste teste, o comportamento semelhante à fadiga é definido como passar cinco segundos consecutivos na zona de fadiga.A técnica correta para remover os camundongos consiste em segurar próximo à base da cauda e levantá-los imediatamente para fora da esteira. A zona de fadiga é a região da esteira localizada a uma distância equivalente ao comprimento do corpo do camundongo em relação à grade de choque, incluindo a própria grade. Antes do teste, faça marcas na parte superior ou lateral das pistas da esteira para delimitar a zona de fadiga.Em seguida, ajuste a velocidade da esteira para 12 metros por minuto, mas não inicie a esteira. Além disso, certifique-se de que as grades de choque estejam desligadas. Agora, coloque individualmente os camundongos em suas respectivas pistas e ligue imediatamente a grade de choque correspondente após a colocação de cada camundongo.Para iniciar o teste, ligue simultaneamente a esteira e o cronômetro. Aumente a velocidade da esteira conforme indicado. Este protocolo baseia-se em testes com camundongos fêmeas C57 Black 6 e pode precisar ser modificado para acomodar camundongos com diferentes capacidades.Observe cuidadosamente todos os camundongos durante todo o teste, mas não interfira para ajudar ou motivar camundongos que entram na zona de fadiga. Não utilize a escova de arame nem as técnicas de estimulação da cauda. Interfira apenas quando um camundongo permanecer na zona de fadiga por cinco segundos consecutivos.Quando isso ocorrer, remova imediatamente o camundongo da esteira e registre a duração e a distância percorrida. É fundamental que o pesquisador observe cuidadosamente todos os camundongos na esteira e remova rapidamente aqueles que permaneceram cinco segundos consecutivos na zona de fadiga. Assim que não houver mais camundongos na esteira, prepare-se para a próxima corrida.Os camundongos foram treinados durante cinco dias e, em seguida, para induzir fadiga, o 5-fluorouracil foi administrado por cinco dias. Sabe-se que essa droga causa fadiga em humanos e comportamento semelhante à fadiga em camundongos. No teste de capacidade física, que utiliza estimulação da cauda e jatos de ar para motivar os camundongos durante o teste, não foi observada diferença entre os grupos.No dia seguinte, no entanto, os camundongos foram testados utilizando o teste de fadiga em esteira. Esse teste revelou uma diferença significativa na distância percorrida durante o teste entre os camundongos tratados com quimioterapia e os camundongos controle. Para validar que o teste de fadiga em esteira estava mensurando um comportamento semelhante à fadiga, a corrida voluntária em roda foi medida em um experimento separado durante os cinco dias de tratamento com 5-fluorouracil e em uma noite adicional além do último dia de tratamento.Resultados semelhantes foram obtidos. Em um experimento diferente, o teste de fadiga em esteira também foi capaz de detectar comportamento semelhante à fadiga em camundongos que haviam sido tratados com uma dose diferente de 5-fluorouracil, uma vez por semana, durante duas semanas. Quando camundongos não tratados foram testados regularmente, tornaram-se menos propensos a correr com testes repetidos.Esses dados sugerem que o teste com este protocolo deve ser limitado a um único teste para evitar uma alta taxa de camundongos não conformes. Ao realizar este procedimento, é importante observar atentamente seus camundongos durante o treinamento e os testes. Não interfira até que o critério de fadiga seja atingido.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como medir comportamentos semelhantes à fadiga em camundongos utilizando este protocolo, como os camundongos se comportam na esteira e como removê-los rapidamente da esteira.

the-treadmill-fatigue-test-simple-high-throughput-assay-fatigue-like

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Aqui descritos são protocolos utilizados para visualizar o processo dinâmico de MG53 mediada por reparação de membrana celular em animais inteiros e em nível celular. Estes métodos podem ser aplicados para investigar a biologia das células do plasma resealing membrana e medicina regenerativa.

Visualização de MG53 mediada Repair Membrana Celular Usando In vivo E In vitro Sistemas

O teste de tail-suspensão é validado como um procedimento experimental para avaliar a eficácia antidepressiva de tratamentos com drogas em camundongos. Os ratos são suspensos por suas caudas de seis minutos e escapar comportamentos relacionados são avaliados. Descrevemos os procedimentos utilizados na condução do teste de suspensão da cauda.

O Teste de Suspensão da cauda

Dois paradigmas de exercício foram testadas em um modelo de rato menopausa induzido quimicamente recém-desenvolvido para examinar o impacto da menopausa na capacidade de exercício e adaptação cardíaca ao exercício.

Um método para estudar o impacto da falência ovariana quimicamente induzida em Exercício Capacidade e Cardiac Adaptação em Ratos

O desfecho primário em ensaios clínicos para doenças neuromusculares é geralmente melhora da função muscular. Portanto, avaliar o efeito de potenciais compostos terapêuticos sobre o desempenho muscular pré clinicamente em modelos do rato é de grande importância. Nós aqui descrever vários testes funcionais para resolver esta questão.

Avaliação do Desempenho Funcional no<em&gt; Mdx</em&gt; Mouse Modelo

Um método para avaliar a resistência ao exercício em camundongos de laboratório sem o uso de uma grade de choque é demonstrado. Este método é um refinamento humano que pode diminuir os efeitos de confusão do estresse nos parâmetros experimentais.

Avaliação da Murino exercício de resistência sem o uso de um choque grade: uma alternativa para o exercício forçado

Nós descrevemos um método que utiliza a irradiação periférica direcionada para induzir comportamento à fadiga, como em ratos. A dose de irradiação não letal selecionado leva a uma redução de uma semana em atividade de execução roda voluntária.

Um mouse modelo de fadiga induzida por irradiação periférica

Testes comportamentais é utilizado em ensaios pré-clínicos para avaliar os efeitos fenotípicos de uma doença ou tratamento no bem-estar do animal. Para globalmente avaliar o funcionamento do motor, nós selecionamos testes para locomoção geral, força muscular e coordenação: teste do campo aberto, a malha e o teste de rotarod, respectivamente.

Bateria de comportamental testes de avaliação geral de locomoção, coordenação e força Muscular em camundongos

Este protocolo descreve um sistema flexível e de baixo custo para medir a deambulação do mouse em um ensaio de atividade de campo aberto. Mostramos que um ensaio de 6 minutos de deambulação com base neste sistema detecta uma diminuição no movimento voluntário em camundongos mdx e distingue com precisão a melhoria em um músculo específico resgate destes animais.

Um ensaio simples e de baixo custo para medir a deambulação em modelos de Mouse de Distrofia Muscular

Aqui, apresentamos um protocolo para apresentar um modelo do rato de fadiga central usando o modificado método de plataforma múltipla (MMPM).

Um rato do modelo de fadiga Central usando um modificado método de plataforma múltipla

Uma bateria de testes comportamentais abrangente das habilidades motoras, humor — incluindo a interação social, depressão e ansiedade — e cognição destina-se a avaliação repetida das alterações comportamentais relacionadas à neurodegeneração em camundongos.

Uma bateria de testes comportamentais para a avaliação repetida das habilidades motoras, humor e cognição em ratos

Sessão curta (≤ 10 min) alta treinamento intervalado de intensidade (HIIT) surge como uma alternativa para as modalidades de exercício mais longos, no entanto, as variantes mais curtas raramente são modeladas em estudos com animais. Aqui, descrevemos um 10 min, 3 dias por semana, protocolo HIIT subir escada rolante que melhora o desempenho físico em macho e fêmea com idade de ratos.

Avaliação de esteira em ratos envelhecidos e curta sessão de alta intensidade de treinamento intervalado

Aprenda a medir comportamento de fadiga em camundongos usando uma esteira inclinada a 10 graus. Este método de alta taxa de transferência permite avaliar intervenções anti-fadiga com um único equipamento em pesquisa pré-clínica.

A esteira de fadiga de teste: Um ensaio simples, de alta taxa de transferência de Fadiga-like Comportamento para o Mouse

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