Name: Um modelo de mouse Retinal isquemia-reperfusão Através elevação da pressão intra-ocular (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: Aprenda a criar um modelo de isquemia-reperfusão retinal em camundongos através da elevação da pressão intraocular. Este método permite investigar mecanismos celulares e avaliar abordagens terapêuticas para doenças retinianas com dano mínimo aos tecidos circundantes.

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Este trabalho foi apoiado por bolsas de investigação dos Institutos Nacionais de Saúde (EY022383 e EY022683; EjD) e concessão do núcleo (P30EY001765), imagiologia e Microscopia Core Module.

Declaração de Ética: Todos os procedimentos foram realizados de acordo com as diretrizes estabelecidas pelo Comitê Animal Care Institucional e Use da Universidade Johns Hopkins. Nota: Os ratinhos utilizados durante a filmagem são ratinhos C57BL / 6 de Jackson, embora também possam ser utilizadas outras estirpes ou espécies de roedores. Ao utilizar outras estirpes ou espécies, estar ciente de que as doses de anestesia e cronograma lesão pode variar. É importante para adaptar as condições de I / R para acomodar estirpe, a espécie e variações experimentais. 1. Prepare o Cocktail Anestesia <ol><li> Combinar 1,25 ml de cetamina, xilazina 0,625 ml, 0,375 ml de acepromazina, e 22,75 ml de solução salina tamponada de fosfato num tubo de centrífuga de 50 ml. NOTA: Para o restante do manuscrito, esta solução irá ser referido como o cocktail. </li><li> Filtra-se o cocktail para um novo tubo de centrífuga estéril de 50 ml usando uma seringa de 60 ml e um filtro de 0,20? M. Rótulo e data deste novo tuestar. </li><li> Totalmente envolver o tubo de cocktail em papel de alumínio para evitar a degradação induzida pela luz do anestésico. NOTA: O cocktail pode ser armazenada à temperatura ambiente e reutilizado até a data de expiração do seu ingrediente mais antiga expira. </li></ol> 2. Prepare o Anestesia impulsionador <ol><li> Num tubo de centrífuga de 50 ml, combinar 4 ml de cetamina e 16 ml de solução salina tamponada com fosfato. NOTA: Esta solução será daqui em diante referido como o reforço. </li><li> Filtra-se o reforço para um novo tubo de centrífuga estéril de 50 ml usando uma seringa de 60 ml e um filtro de 0,20? M. Rótulo e data em que este novo tubo. NOTA: O reforço pode ser armazenada à temperatura ambiente e reutilizado até a data de expiração do seu ingrediente mais antiga expira. </li></ol> 3. Prepare o centro cirúrgico <ol><li> Ajuste a temperatura ambiente entre 18 ° C e 21 ° C. </li><li> Vire na mesa de cirurgia, e ajustar o seu calor de superfície ao highetemperatura st. </li><li> Cobrir todas as superfícies de trabalho com underpads cirúrgicos. </li><li> Organizar uma gaiola vazia ou outro recipiente na mesa cirúrgica para aquecer. </li><li> Organizar uma escala e um tagger ouvido na bancada. </li></ol> 4. Preparar a solução de sal equilibrada com a heparina de sódio <ol><li> Adicionar 0,5 ml de heparina de sódio para um frasco de soro de 500 ml de solução salina equilibrada (HBSS). </li><li> Insira a ponta do conjunto principal prepierced tubo Y local dentro da garrafa de 0,1% heparina sódica. </li></ol> 5. Configure o IV Pole <ol><li> Pendure a garrafa de 0,1% heparina sódica da extensão IV pólo, e encaixe abrir a tampa do filtro de ar no conjunto principal prepierced tubo Y-site. </li><li> Elevar a garrafa de heparina de sódio de 0,1% a 163 cm (120 mm Hg). Medir a altura da mesa para o pico do gota a gota a heparina de sódio. </li><li> Remova as bolhas de ar na tubulação IV sacudindo manualmente o conjunto principal prepierced tubo Y-site. </li&gt; </ol> 6. Configure o sódio Heparina Drip <ol><li> Ligue o conjunto principal prepierced tubo Y-site para o colector de cinco válvulas. </li><li> Ligue de calibre 30 ½ polegadas agulhas para o colector de cinco porta usando Luer macho para luer acessórios para tubos do sexo masculino. </li><li> Introduza cada uma das agulhas de calibre 30 ½ polegadas em seu próprio segmento de 10 polegadas de tubo de calibre 30. </li><li> Usando hemostats, quebrar as pontas das agulhas de novas de calibre 30 ½ polegadas agulhas e inserir suas extremidades sem corte no tubo de calibre 30. Esterilidade ou desinfecção das pontas de agulhas, será necessário para o passo 8.3. </li><li> Usando fita, organizar os tubos de calibre 30 com as agulhas de tal modo que os tubos ligados às portas interiores são posicionadas na parte superior dos tubos ligados às portas exteriores. Este acordo vai evitar o enrolamento de tubos durante a punção da câmara anterior. </li><li> Ligue o fluxo de heparina sódica 0,1% para o colector de cinco válvulas e cada porta individual. <ol><li> Certifique-se de que o 0,1%heparina sódica está fluindo fortemente para cada porta. Se uma porta está fluindo fraca, substitua o porto ou limpá-la com ar de uma seringa estéril. </li><li> Permitir que a heparina sódica 0,1% a fluir para 2 - 3 min para remover as bolhas de ar dos tubos de calibre 30 e colector de 5 válvulas. </li></ol></li><li> Desligue todas as portas no colector de 5 válvulas. </li></ol> 7. Prepare os ratos para Cirurgia <ol><li> Traga os ratos para o centro cirúrgico. Fornecer garrafas de água para cada gaiola, a fim de evitar a desidratação dos animais durante a cirurgia. </li><li> Registar o peso de cada rato. </li><li> Injectar cada rato intraperitonealmente com 0,02 ml cocktail por peso corporal grama. </li><li> Marcar e registrar o número de cada rato. </li><li> Coloque todos os ratos para o recipiente vazio na mesa de cirurgia. Permitir 5-10 min para todos os ratos para alcançar profunda anesthetization como confirmado pela ausência da resposta de retirada pedal para pitada dedo do pé. </li><li> Para cada ratinho, administrar uma gota deTropicamida em cada olho para a dilatação da pupila e lubrificação de curto prazo. </li><li> Para cada ratinho, administrar uma gota de proximetacaína em cada olho para anestesia local e de lubrificação de curto prazo. </li><li> Dispor os ratos na ordem de anestesia de modo que o primeiro ratinho a ser anestesiado será o primeiro rato para ser canulada. </li><li> Permitir que cerca de 2 min para o colírio para entrar em vigor. </li><li> Prepare pedaços de 4 polegadas rectas de fita puxando firmemente na fita. Separe um pedaço de fita para cada rato. NOTA: Deixar de puxar firmemente na fita irá resultar na ondulação da fita. </li></ol> 8. canular a câmara anterior <ol><li> Organizar o primeiro mouse sob o microscópio cirúrgico, e focar o microscópio sobre a córnea preferido. NOTA: A canulação pode ser realizada em qualquer um dos olhos. Direito à mão cirurgiões dominantes pode encontrar it mais fácil para canular o olho esquerdo, enquanto a mão esquerda cirurgiões dominantes podem preferir a direita. </li><li> Vire na primeira porta heparina sódica 0,1% no colector de cinco válvulas. </li><li> Sob o microscópio cirúrgico, usar um par de pinças para suavemente proptose do olho. Inserir a agulha de uma cânula de calibre 30 na câmara anterior, aproximadamente, a meio caminho entre as fibras zônula e o vértice da córnea. <ol><li> Tome cuidado para evitar arranhar ou perfurar íris, lente, ou interno superfície da córnea. </li><li> Não penetrar a córnea uma segunda vez. </li><li> Usando um movimento de torção suave para vencer o atrito entre a cânula e a córnea, inserir a cânula profundamente na câmara anterior. </li></ol></li><li> Usar uma tira de fita adesiva para fixar o tubo de calibre 30 para a mesa. Para minimizar o movimento da cânula inserida, pressione o tubo de calibre 30 contra a mesa enquanto pegava a fita. </li><li> Grave a hora de início da cirurgia. </li><li> Utilizando o microscópio, verify que nenhum vazamento é aparente. Se a fuga está presente, o movimento do fluido será visível perto do olho. </li><li> Visualmente confirmar distensão ocular por meio da observação de que o olho de I / R é maior do que o olho contralateral. Juntos, a ausência de fugas e a presença de distensão ocular demonstram uma elevação da pressão intra-ocular bem sucedida. </li><li> Aplicar hipromelose para ambos os olhos. Hipromelose serve para lubrificar as microleaks córnea e de vedação. Reaplicar hipromelose, conforme necessário (aproximadamente a cada 30 min) para a lubrificação sustentado. </li><li> Repita a Etapa 8 até todos os animais foram canulados. </li></ol> 9. Anesthesia Monitor de <ol><li> Use a pitada dedo do pé, observação visual dos bigodes, ou observação visual da cauda para verificar se cada rato permanece anestesiado. Se um rato demonstrar uma resposta pedal retirada, espasmos suiça, ou o movimento da cauda, ​​proceder imediatamente à Etapa 9.2. </li><li> Se um rato começa a despertar durante a cirurgia, elevadora cauda para injectar 0,05 ml de reforço intraperitoneal no abdômen inferior de trás do mouse. Permitir 1-2 min para o reforço entrem em vigor. </li><li> Se um rato requer sedação adicionais, repita o Passo 9 conforme necessário. </li></ol> 10. Remover a cânula da câmara anterior <ol><li> Para cada animal, após 90 min de decorridos, puxe a cânula da câmara anterior. </li><li> Untape o rato da mesa cirúrgica, tendo o cuidado para não perturbar a um tubo de cânula de animais adjacentes. </li><li> Lubrifique ambos os olhos com gel lubrificante. </li><li> Como cânulas subsequentes são removidos, organizar os ratos no contentor vazio na mesa cirúrgica para recuperar de uma cirurgia. Não desligue o fogo da mesa cirúrgica. </li><li> Permitir, no mínimo, 2-3 horas para a recuperação na mesa cirúrgica aquecida. Observar os ratos com frequência até que tenham recuperado totalmente da anestesia. </li></ol> 11. Limpe a Equipment <ol><li> Desinfectar as cânulas usando álcool. NOTA: Outros métodos para a desinfecção ou esterilização, tais como esterilização em autoclave, pode ser substituído. </li><li> Expulsar 0,1% de sódio de heparina a partir do colector de 5-válvula, agulhas de calibre 30, tubos de calibre 30, e cânulas usando uma seringa de 60 ml cheia com ar. </li><li> Lavar o colector de 5 válvulas, agulhas de calibre 30, tubos de calibre 30, e cânulas usando um de 60 ml cheia com água destilada. </li><li> Expelir a água destilada a partir do colector de 5-porta, agulhas de calibre 30, tubos de calibre 30, e cânulas usando uma seringa de 60 ml cheia com ar. </li><li> Após a desinfecção das cânulas e enxaguar o aparelho de tubulação, armazenar este equipamento para reutilização. </li><li> Loja, descarte ou desligue todos os outros equipamentos. Deixar o calor da mesa cirúrgica em. </li></ol> 12. Retorno Todos os ratos para suas gaiolas <ol><li> Após os ratos despertar de uma cirurgia (após 2-3 horas), retornar cada animal à sua gaiola. Fornecer alimentos gel para cada gaiola. Retornar todas as gaiolas para seus quartos designados. </li><li> Desligue o fogo da mesa cirúrgica. Descarte todos os resíduos, e limpar a sala de cirurgia. </li></ol> 13. Realizar Avaliação Retinal <ol><li> Conforme o caso, recolher retinas para análise histológica ou ratos adaptar escuro para gravação eletrorretinograma. </li></ol>

<ol><li>Osborne, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+ischemia%3A+mechanisms+of+damage+and+potential+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal ischemia: mechanisms of damage and potential therapeutic strategies.</a> Prog Retin Eye Res. 23 (1), 91-147 (2004).</li>
<li>Bonne, C., Muller, A., Villain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Free+radicals+in+retinal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Gen+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Free radicals in retinal ischemia.</a> Gen Pharmacol. 30 (3), 275-280 (1998).</li>
<li>Smith, G. G., Baird, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+time+of+retinal+cells+when+deprived+of+their+blood+supply+by+increased+intraocular+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Survival time of retinal cells when deprived of their blood supply by increased intraocular pressure.</a> Am J Ophthalmol. 35 (5:2), 133-136 (1952).</li>
<li>Buchi, E. R., Suivaizdis, I., Fu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pressure-induced+retinal+ischemia+in+rats%3A+an+experimental+model+for+quantitative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Pressure-induced retinal ischemia in rats: an experimental model for quantitative study.</a> Ophthalmologica. 203 (3), 138-147 (1991).</li>
<li>Block, F., Schwarz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+b-wave+of+the+electroretinogram+as+an+index+of+retinal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Gen+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The b-wave of the electroretinogram as an index of retinal ischemia.</a> Gen Pharmacol. 30 (3), 281-287 (1998).</li>
<li>Katai, N., Yoshimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptotic+retinal+neuronal+death+by+ischemia-reperfusion+is+executed+by+two+distinct+caspase+family+proteases%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Apoptotic retinal neuronal death by ischemia-reperfusion is executed by two distinct caspase family proteases.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 40 (11), 2697-2705 (1999).</li>
<li>Toriu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lomerizine%2C+a+Ca2%2B+channel+blocker%2C+reduces+glutamate-induced+neurotoxicity+and+ischemia%2Freperfusion+damage+in+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Lomerizine, a Ca2+ channel blocker, reduces glutamate-induced neurotoxicity and ischemia/reperfusion damage in rat retina.</a> Exp Eye Res. 70 (4), 475-484 (2000).</li>
<li>Kawai, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+of+risk+factors+for+the+degeneration+of+retinal+ganglion+cells+after+ischemia%2Freperfusion+in+rats%3A+effects+of+age%2C+caloric+restriction%2C+diabetes%2C+pigmentation%2C+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Modeling of risk factors for the degeneration of retinal ganglion cells after ischemia/reperfusion in rats: effects of age, caloric restriction, diabetes, pigmentation, and glaucoma.</a> FASEB J. 15 (7), 1285-1287 (2001).</li>
<li>Chidlow, G., Schmidt, K. G., Wood, J. P., Melena, J., Osborne, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-lipoic+acid+protects+the+retina+against+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Alpha-lipoic acid protects the retina against ischemia-reperfusion.</a> Neuropharmacology. 43 (6), 1015-1025 (2002).</li>
<li>Fei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+Homer1a+Promoted+Retinal+Ganglion+Cell+Survival+After+Retinal+Ischemia+and+Reperfusion+via+Interacting+with+Erk+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Upregulation of Homer1a Promoted Retinal Ganglion Cell Survival After Retinal Ischemia and Reperfusion via Interacting with Erk Pathway.</a> Cell Mol Neurobiol. , (2015).</li>
<li>Xu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+role+of+Nrf2+for+retinal+ganglion+cells+in+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective role of Nrf2 for retinal ganglion cells in ischemia-reperfusion.</a> J Neurochem. 133 (2), 233-241 (2015).</li>
<li>Kim, B. J., Braun, T. A., Wordinger, R. J., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+morphological+changes+and+impaired+retinal+function+associated+with+temporal+regulation+of+gene+expression+after+retinal+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Progressive morphological changes and impaired retinal function associated with temporal regulation of gene expression after retinal ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Mol Neurodegener. 8 (21), (2013).</li>
<li>Portillo, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40+mediates+retinal+inflammation+and+neurovascular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">CD40 mediates retinal inflammation and neurovascular degeneration.</a> J Immunol. 181 (12), 8719-8726 (2008).</li>
<li>Wei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nrf2+has+a+protective+role+against+neuronal+and+capillary+degeneration+in+retinal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Nrf2 has a protective role against neuronal and capillary degeneration in retinal ischemia-reperfusion injury.</a> Free Radic Biol Med. 51 (1), 216-224 (2011).</li>
<li>Abcouwer, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ischemic+preconditioning+and+bevacizumab+on+apoptosis+and+vascular+permeability+following+retinal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of ischemic preconditioning and bevacizumab on apoptosis and vascular permeability following retinal ischemia-reperfusion injury.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (11), 5920-5933 (2010).</li>
<li>Abcouwer, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minocycline+prevents+retinal+inflammation+and+vascular+permeability+following+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Minocycline prevents retinal inflammation and vascular permeability following ischemia-reperfusion injury.</a> J Neuroinflammation. 10 (149), (2013).</li>
<li>Zheng, L., Gong, B., Hatala, D. A., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+ischemia+and+reperfusion+causes+capillary+degeneration%3A+similarities+to+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Retinal ischemia and reperfusion causes capillary degeneration: similarities to diabetes.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 48 (1), 361-367 (2007).</li>
<li>Weyker, P. D., Webb, C. A., Kiamanesh, D., Flynn, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+ischemia+reperfusion+injury%3A+a+bench-to-bedside+review%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cardiothorac+Vasc+Anesth%22%5BJournal%5D)">Lung ischemia reperfusion injury: a bench-to-bedside review.</a> Semin Cardiothorac Vasc Anesth. 17 (1), 28-43 (2013).</li>
<li>Raedschelders, K., Ansley, D. M., Chen, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+and+molecular+origin+of+reactive+oxygen+species+generation+during+myocardial+ischemia+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">The cellular and molecular origin of reactive oxygen species generation during myocardial ischemia and reperfusion.</a> Pharmacol Ther. 133 (2), 230-255 (2012).</li>
<li>Di, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNAs+expression+and+function+in+cerebral+ischemia+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">MicroRNAs expression and function in cerebral ischemia reperfusion injury.</a> J Mol Neurosci. 53 (2), 242-250 (2014).</li>
<li>Saidi, R. F., Kenari, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+ischemia%2Freperfusion+injury%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Surg%22%5BJournal%5D)">Liver ischemia/reperfusion injury: an overview.</a> J Invest Surg. 27 (6), 366-379 (2014).</li>
<li>Malek, M., Nematbakhsh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+ischemia%2Freperfusion+injury%3B+from+pathophysiology+to+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Renal+Inj+Prev%22%5BJournal%5D)">Renal ischemia/reperfusion injury; from pathophysiology to treatment.</a> J Renal Inj Prev. 4 (2), 20-27 (2015).</li>
<li>Mallick, I. H., Yang, W., Winslet, M. C., Seifalian, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia-reperfusion+injury+of+the+intestine+and+protective+strategies+against+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Ischemia-reperfusion injury of the intestine and protective strategies against injury.</a> Dig Dis Sci. 49 (9), 1359-1377 (2004).</li>
<li>Hesketh, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+ischaemia+reperfusion+injury%3A+a+mouse+model+of+injury+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Renal ischaemia reperfusion injury: a mouse model of injury and regeneration.</a> J Vis Exp. (88), (2014).</li>
<li>Stefansson, E., Wilson, C. A., Schoen, T., Kuwabara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+ischemia+induces+cell+mitosis+in+the+adult+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Experimental ischemia induces cell mitosis in the adult rat retina.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 29 (7), 1050-1055 (1988).</li>
<li>Honjo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statin+inhibits+leukocyte-endothelial+interaction+and+prevents+neuronal+death+induced+by+ischemia-reperfusion+injury+in+the+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Statin inhibits leukocyte-endothelial interaction and prevents neuronal death induced by ischemia-reperfusion injury in the rat retina.</a> Arch Ophthalmol. 120 (12), 1707-1713 (2002).</li>
<li>Otori, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+c-fos+and+c-jun+mRNA+following+transient+retinal+ischemia%3A+an+approach+using+ligation+of+the+retinal+central+artery+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Expression of c-fos and c-jun mRNA following transient retinal ischemia: an approach using ligation of the retinal central artery in the rat.</a> Surv Ophthalmol. 42, Suppl 1 96-104 (1997).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epac2-deficiency+leads+to+more+severe+retinal+swelling%2C+glial+reactivity+and+oxidative+stress+in+transient+middle+cerebral+artery+occlusion+induced+ischemic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Epac2-deficiency leads to more severe retinal swelling, glial reactivity and oxidative stress in transient middle cerebral artery occlusion induced ischemic retinopathy.</a> Sci China Life Sci. 58 (6), 521-530 (2015).</li>
<li>Zhang, Y., Zhang, Z., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simvastatin+inhibits+ischemia%2Freperfusion+injury-induced+apoptosis+of+retinal+cells+via+downregulation+of+the+tumor+necrosis+factor-alpha%2Fnuclear+factor-kappaB+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Simvastatin inhibits ischemia/reperfusion injury-induced apoptosis of retinal cells via downregulation of the tumor necrosis factor-alpha/nuclear factor-kappaB pathway.</a> Int J Mol Med. , (2015).</li>
<li>Li, B., Pang, I. H., Barnes, G., McLaughlin, M., Holt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+and+device+to+induce+transient+retinal+ischemia+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">A new method and device to induce transient retinal ischemia in the rat.</a> Curr Eye Res. 24 (6), 458-464 (2002).</li>
</ol>

Os autores não têm divulgações.

I retina / lesões R por PIO elevada provou a sua utilidade na modelagem de danos celulares e disfunção, especialmente neurodegeneração, na unidade neurovascular da retina de roedores. Este procedimento fornece um tecido de controle robusto e é facilmente acessível em termos de sofisticação técnica. Tem-se observado neste e em outros modelos de lesão I / R que o aumento da pressão e da duração da isquemia pode aumentar a gravidade da lesão 24. Por esta razão, alguns profissionais têm optado por usar pressões i...

Retinal isquemia-reperfusão (I / R) caracteriza muitas patologias da retina humana, incluindo o glaucoma, retinopatia diabética, e oclusões vasculares retinianas 1. Na retina I / R, redução do fluxo sanguíneo (isquemia) na vasculatura retiniana cria um estado de hipersensibilidade da retina ao oxigénio e outros nutrientes, precipitando oxidativo grave e dano inflamatório quando a circulação é, subsequentemente, reposta (reperfusão) 2. A retina neural parece particularmente vulnerável a estas mudanças, a neurodegeneração da retina sendo talvez a característica mais saliente do dano induzido R I /. Apresentado aqui é um protocolo para a modelagem de lesão de I / R retinal no mouse. Esta técnica permite aos pesquisadores para examinar possíveis mecanismos e estratégias de tratamento para doenças humanas da unidade neurovascular da retina. Foi pioneira em 1952 por cirurgiões que procuram compreender as consequências neurodegenerativas de anemia cirúrgica 3, rodent retinal I / R pela pressão intra-ocular elevada (PIO) foi restabelecida em 1991 com a finalidade de padronizar endpoints neurodegenerativas após lesão isquêmica 4. Usando o gotejamento de um reservatório de solução salina para elevar a PIO acima da pressão arterial sistólica, estes estudos demonstraram que a canulação ocular pressurizado foi suficiente para suspender a circulação da retina e desse modo iniciar a degeneração neuronal. Esforços mais recentes usando retina I / R por PIO elevada começaram a elaborar os mecanismos subjacentes I / neurodegeneração da retina induzida por R 5-12. Vários grupos têm relatado alterações patológicas adicionais, incluindo a inflamação 13,14, permeabilidade vascular 15,16, e degeneração capilar 14,17. Tomados em conjunto, estes estudos estabeleceram lesão da retina de I / R de PIO elevada como um modelo de doença retiniana neurovascular um modo mais geral. Caracterizar os mecanismos de lesão de I / R é essencial para o estudo de VAdoença scular. Lesão da retina de I / R de PIO elevada é um dos diversos modelos de lesão induzida por hipoxia, incluindo lesões de I / R em 18 de pulmão, coração, cérebro 19 20 21, fígado, rim e intestino 22, 23. Estes modelos têm sido fundamental no avanço da nossa compreensão da doença vascular e seus remédios clínicos. Ao estender a investigação de processos I / R para tecidos oculares, I da retina / lesões R por PIO elevada ajuda a pintar um quadro mais abrangente destas condições relacionadas. Correspondente em estreita colaboração com as condições clínicas neurodegenerativas na retina, I da retina / lesões R por PIO elevada apresenta uma ferramenta valiosa para os pesquisadores interessados ​​em explorar patogênese isquêmico. O protocolo aqui descrito é alvo, tratável, e acessível. É bem complementado por pontos de extremidade na degeneração neuronal, tais como a quantificação de neurónios da retina, a medição da espessura da retina, e R electrofisiológicoecording da retina a função do neurônio. Este modelo tem provado a sua utilidade no avanço da investigação neurovascular, e isso mostra a promessa em ganhar status como um protocolo fundamental na pesquisa da medicina visual.

<table><tbody><tr><td>Injeção de heparina sódica, USP</td><td>Abraxis Pharmaceutical Products</td><td></td><td>1.000 USP/ml</td></tr><tr><td>BSS Solução de irrigação estéril</td><td>Alcon Laboratories, Inc.</td><td>9007754-0212</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>SC-2 kg Balança de bolso digital</td><td>American Weigh Scales, Inc.</td><td>SC-2 kg</td><td></td></tr><tr><td>Solução Oftálmica de Tropicamida USP 1%</td><td>Bausch + Lomb</td><td></td><td>1% (10 mg/ml)</td></tr><tr><td>Solução Oftálmica de Cloridrato de Proparacaína USP, 0,5%</td><td>Bausch + Lomb</td><td></td><td>0,5% (5 mg/ml)</td></tr><tr><td>Tubo de Polietileno INTRAMEDIC</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>427400</td><td>Diâmetro interno: 427400</td></tr><tr><td>30 G 1/2 Agulhas PrecisionGlide</td><td>Benton Dickinson and Company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seringa 305106 BC 1 ml TB, Ponta Fina com Agulha Biselada Intradérmica, 26 G x 3/8</td><td>Seringa Benton Dickinson and Company</td><td>309625</td><td></td></tr><tr><td>BD 60 ml Ponta Luer-Lok</td><td>Benton Dickinson and Company</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio Zeiss OPMI Visu 200/S8</td><td>Carl Zeiss AG</td><td>000000-1179-101</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de Seringa Estéril</td><td>Corning Inc.</td><td>CLS431224</td><td>0,20 &micro; m</td></tr><tr><td>Durasorb Underpads</td><td>Covidien</td><td>1038</td><td>23 x 24 polegadas</td></tr><tr><td>Preparação de Álcool</td><td>Covidien</td><td>6818 2</td><td>Ply, Médio</td></tr><tr><td>Estudante Dumont #5 Fórceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Hartman Hemostats</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Conjunto Primário, Macrobore, Pré-perfurado Y-Site, 80 Polegadas</td><td>Hospira</td><td>12672-28</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato pH 7,4 (1x)</td><td>Invitrogen</td><td>10010-049</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Água destilada</td><td>Invitrogen</td><td>15230-204</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>C57BL/6J Camundongos</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>AnaSed Injection: Solução estéril de xilazina</td><td>LLOYD, Inc.</td><td></td><td>20 mg/ml</td></tr><tr><td>de geléia lubrificante, bacteriostático solúvel em água</td><td>MediChoice</td><td></td><td>3-Gram Packet</td></tr><tr><td>NAMIC Angiographic Pressure Monitoring Manifold</td><td>Navilyst Medical, Inc.</td><td>70039355</td><td>Coletor de 5 válvulas com sete portas fêmeas</td></tr><tr><td>Goniosoft, Hypromellose 2,5% Solução Oftálmica Emoliente: Hidroxipropilmetilcelulose</td><td>OCuSOFT, Inc.</td><td></td><td>2,5% (25 mg/ml)</td></tr><tr><td>Ketaset CIII: Cloridrato de cetamina</td><td>Pfizer, Inc.</td><td></td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>Trans-Pal I.V. Suporte&nbsp;</td><td>Produtos Pryor</td><td>372</td><td>Fornecido com uma extensão de aço inoxidável de 60 cm construída em casa</td></tr><tr><td>Acepromazina: Injeção de maleato de acepromazina, USP</td><td>Vet One</td><td></td><td>10 mg/ml</td></tr><tr><td>Mesa de cirurgia V-Top/Hidráulico ajustável</td><td>VSSI</td><td>100-4041-21</td><td></td></tr><tr><td>Encaixe de tubo Luer Macho para Luer Macho</td><td>Warner Instruments</td><td>64-1579</td><td></td></tr></tbody></table>

um modelo de mouse retinal isquemia-reperfusão através elevação da pressão intra-ocular

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Retinal isquemia-reperfusão (I / R) é um processo patofisiológico contribuir para os danos celulares em várias condições oculares, incluindo o glaucoma, retinopatia diabética, e oclusões vasculares retinianas. modelos de roedores de lesão de I / R estão fornecendo insights significativos em mecanismos e estratégias de tratamento para o homem I / lesão R, especialmente no que diz respeito a danos neurodegenerativa na unidade neurovascular da retina. Apresentado aqui é um protocolo para a indução de lesões retinianas I / R em ratos através da elevação da pressão intra-ocular (PIO). Neste protocolo, a câmara anterior ocular é canulada com uma agulha, por onde corre o gotejamento de um reservatório de solução salina elevada. Usando este gotejamento para elevar a PIO acima da pressão arterial sistólica, um praticante de pára temporariamente o fluxo sangüíneo da retina interna (isquemia). Quando a circulação é reposta (reperfusão) por remoção da cânula, o dano celular grave resulta, em última instância, resulta na neurodegeneração da retina. garanhão recentes demonstrar inflamação, da permeabilidade vascular, e degeneração capilar como elementos adicionais desse modelo. Em comparação com metodologias I / R retina alternativas, como a ligadura arterial da retina, retinal I / lesão R por PIO elevada oferece vantagens na sua especificidade anatómica, tractability experimental, e acessibilidade técnica, apresentando-se como uma ferramenta valiosa para examinar patogênese neuronal e terapia em a unidade neurovascular da retina.

Os efeitos neurodegenerativos da retina de I / R de elevada pressão intra-ocular são geralmente avaliadas utilizando duas abordagens convencionais. NeuN imunomarcação dos núcleos neuronais revelou perda de células neuronais significativa após I / R insulto (Figura 1). Em resumo, os olhos enucleados 7 dias após I / R, foram fixadas em paraf ormaldeído, marcado com o marcador da célula neuronal NeuN, e todo-montado. As imagens foram capturadas usando microscopia confocal, ...

Este artigo descreve um processo para induzir a lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada em ratos. lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada serve para modelar patologias humanas caracterizadas por oxigénio e entrega de nutrientes comprometida na retina, permitindo aos investigadores para examinar os mecanismos celulares e potenciais tratamentos para doenças humanas da unidade neurovascular da retina.

Um modelo de mouse Retinal isquemia-reperfusão Através elevação da pressão intra-ocular

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

O objetivo geral desta técnica é fornecer um modelo experimental de lesão por isquemia-reperfusão retiniana e suas consequências patológicas. Este método é comumente utilizado para investigar os mecanismos subjacentes à isquemia-reperfusão retiniana, bem como para avaliar abordagens terapêuticas potenciais para o tratamento das patologias associadas. A principal vantagem desta técnica é que ela cria uma lesão altamente direcionada às estruturas oculares, causando danos mínimos aos tecidos circundantes.A utilidade desta técnica estende-se à compreensão dos múltiplos aspectos da lesão retiniana por isquemia-reperfusão ao longo de três meses, incluindo: inflamação, estresse oxidativo e disfunção da via de sinalização no componente neurovascular da retina. A demonstração em vídeo deste método é fundamental, pois as técnicas cirúrgicas para colocação da cânula podem ser difíceis de reproduzir sem um guia visual. Antes de iniciar o procedimento, aqueça uma gaiola vazia sobre a mesa.Em seguida, insira a extremidade afiada da tubulação primária com entrada Y pré-perfurada em um frasco de Heparina sódica a 0,1% e pendure a base do frasco de Heparina sódica em um suporte prolongador de soro.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Glaucoma é uma das principais causas de cegueira no mundo. Pressão intraocular elevada é um importante fator de risco. Fotocoagulação a laser hipertensão ocular induzida é um dos modelos animais bem estabelecidos. Este vídeo demonstra como para induzir hipertensão ocular por fotocoagulação com laser de argônio em ratos.

Laser-Induced Ocular Modelo Hipertensão crônica em ratos SD

Fonte: Lani-Louzada, R., et al., Cauterização de círculo completo do plexo vascular límbico para glaucoma induzido cirurgicamente em roedores. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra a indução e monitoramento da pressão intraocular (PIO) elevada em um modelo de rato. O processo envolve a cauterização dos vasos sanguíneos límbicos, resultando em oclusão do vaso e PIO elevada. O rato é então autorizado a se recuperar e a PIO é monitorada regularmente nos olhos experimental e de controle para...

 Indução de Pressão Intraocular Elevada em Modelo de Rato

Hipertensão ocular crônica é induzida pelo uso de fotocoagulação a laser da malha trabecular em rato olhos. A pressão intra-ocular (IOP) é ​​elevada durante vários meses após o tratamento com laser. A diminuição da acuidade visual e sensibilidade ao contraste de animais experimentais são monitorados por meio do teste optomotor.

Um modelo de rato induzida por laser de crônica Ocular Hypertension para Caracterizar defeitos visuais

A retina de roedores tem sido reconhecida como uma janela de acesso para o cérebro. Neste documento técnico que proporcionam um protocolo que utiliza o modelo de ratinho de retinopatia induzida por oxigénio para estudar os mecanismos que levam à insuficiência de regeneração vascular dentro do sistema nervoso central após a lesão isquémica. O sistema descrito também pode ser aproveitada para explorar estratégias para promover o crescimento de vasos sanguíneos funcionais dentro da retina e do...

Assessment of Vascular regeneração no SNC Usando o rato Retina

Aqui, nós apresentamos um protocolo para induzir hipertensão ocular no olho murino que resulta na perda de células ganglionares da retina observada no glaucoma. microesferas magnéticas são injectados na câmara anterior e atraído para o ângulo iridocorneal utilizando um magnete para bloquear o escoamento do humor aquoso.

A Magnetic Microbead Oclusão Modelo para induzir Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma em Ratos

Hipertensão ocular crônica é induzida pela aplicação de uma sutura de circumlimbal em ratos e camundongos, levando à deterioração funcional e estrutural das células ganglionares da retina consistentes com glaucoma.

Um modelo de Glaucoma induzido por sutura Circumlimbal em ratos e camundongos

Aqui, apresentamos um protocolo para induzir hipertensão ocular e neurodegeneração glaucomatous nos olhos do rato por injeção intracameral de óleo de silicone e o procedimento para a remoção de óleo de silicone da câmara anterior para retornar pressão intraocular elevada para Normal.

Um modelo reversível da hipertensão ocular óleo-induzida do silicone nos ratos

A retinopatia induzida pelo oxigênio (OIR) pode ser usada para modelar doenças isquêmicas da retina, como a retinopatia da prematuridade e a retinopatia diabética proliferativa e servir de modelo para estudos de prova de conceito na avaliação de drogas antiangiogênicas para doenças neovasculares. O OIR induz a neovascularização robusta e reprodutível na retina que pode ser quantificada.

Modelo de Retinopatia Induzida por Oxigênio para Doenças Isquêmicas da Retina em Roedores

Aqui, descrevemos um modelo de camundongo de isquemia de retina por oclusão da artéria carótida comum bilateral transitória usando suturas simples e um grampo. Este modelo pode ser útil para entender os mecanismos patológicos da isquemia da retina causada por anormalidades cardiovasculares.

Um modelo murino de lesão isquêmica da retina induzida pela oclusão da artéria da carótida comum bilateral transitória

Este protocolo descreve um método detalhado para a preparação e a coloração da imunofluorescência de montagem e análise plana de retina de camundongos. O uso de fluoresceína fundus angiography (FFA) para filhotes de camundongos e processamento de imagem também são descritos em detalhes.

Monitoramento do crescimento dinâmico dos vasos retinais no modelo de rato de retinopatia induzido pelo oxigênio

Este protocolo modela a lesão de isquemia-reperfusão retiniana em um olho de camundongo, induzindo isquemia retiniana por meio de canulação da câmara anterior e elevação da pressão intraocular, seguida de normalização da pressão intraocular para iniciar a reperfusão.

Indução de lesão de isquemia-reperfusão retiniana em um modelo de olho de camundongo

Aprenda a criar um modelo de isquemia-reperfusão retinal em camundongos através da elevação da pressão intraocular. Este método permite investigar mecanismos celulares e avaliar abordagens terapêuticas para doenças retinianas com dano mínimo aos tecidos circundantes.

Um modelo de mouse Retinal isquemia-reperfusão Através elevação da pressão intra-ocular

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