Name: Isolation and Cellular fenotipagem de células-tronco mesenquimais derivadas do líquido sinovial e Medula Óssea de miniporcos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 47 s
Description: Aprenda a isolar e fenotipar células-tronco mesenquimais de líquido sinovial e medula óssea de miniporcos usando centrifugação e citometria de fluxo. Este método não invasivo avança pesquisas em medicina regenerativa e terapias autólogas para doenças articulares.

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Reconhecemos com gratidão o apoio financeiro fornecido pelo Programa Next-Generation BioGreen 21 (No. PJ007969), Administração de Desenvolvimento Rural e a Fundação Nacional de Pesquisa (concessão nº. NRF-2015R1D1A1A01056639) da República da Coreia.

Experimentos em animais foram autorizados pelo Centro animal for Biomedical Experimentação da Universidade Nacional de Gyeongsang. 1. Preparativos para o Procedimento de animal <ol><li> Prepara-se o adulto porquinhos do sexo feminino para a recolha não-invasivo de MSCs a partir de medula óssea e no fluido sinovial. Realizar o exame clínico dos porquinhos um dia antes da anestesia e coleta de amostras. <ol><li> Fornecer animais clinicamente normais de exames físicos, que incluem a temperatura corporal, freqüência respiratória e freqüência cardíaca, e pela observação do comportamento e hematológicos status dos porcos, utilizando hemograma completo. Nota: intervalos de parâmetros para miniporcos clinicamente saudáveis ​​são 11-29 / min para a taxa de respiração, 68-98 / min para o ritmo cardíaco, e 37-38 ° C para a temperatura do corpo. </li></ol></li><li> Remover todas as camas comestível da gaiola durante o período de jejum pré-operatório de 6 - prio 12 hrr para a administração de anestesia para jovens e adultos minipigs, 3 horas de jejum deve ser observado para os recém-nascidos. Fornecer água potável até o momento da anestesia. </li></ol> 2. Preparação dos animais para anestesia <ol><li> Medicar os porquinhos antes da administração da anestesia com acepromazina (0,1 mg / kg), medetomidina (0,03 mg / kg), e atropina (0,04 mg / kg). <ol><li> Injectar todos os medicamentos por via intramuscular (IM) utilizando uma agulha G 21 com um comprimento de pelo menos 30 mm para porquinhos adultos. Realizar a injecção IM 1-3 cm atrás da orelha no músculo cervical lateral ou no músculo da coxa. Nota: Execute todos os procedimentos, sem provocar medo ou estresse nos animais ou que exijam manuseio brusco para injetar com segurança a pré-medicação. </li></ol></li><li> Coloque os porquinhos em posição dorsal-deitada. </li><li> Quinze minutos após a administração da medicação pré-anestésica, iniciar a anestesia utilizando 1,5% de administração de isofluranoregis- por inalação. <ol><li> Continuar a inalação de isoflurano (1,5%) através de um tubo endotraqueal, seguido de um aumento na concentração de 2,5%, com o oxigénio (1,5 L / min) como o gás portador. </li></ol></li><li> Monitorar continuamente a frequência cardíaca, temperatura corporal, e saturação de oxigênio no sangue percutânea (SpO2) dos porquinhos durante a anestesia. Usar um cobertor de água em circulação a uma temperatura de 38-39 ° C para manter a temperatura corporal. Aplicar uma pomada oftalmológica para proteger os olhos de secar durante a anestesia. </li><li> Siga classificação de Guedel para avaliar a profundidade da anestesia 13. </li></ol> 3. Preparativos para o isolamento de células e Cultivo <ol><li> Para cultivar as MSC derivadas de medula óssea e de fluido sinovial, preparar 500 ml de meio de Dulbecco modificado avançada águia (ADMEM) suplementado com 10% de soro fetal de bovino (FBS), 1% Glutamax, 10 ng / mL de crescimento de fibroblastos básico factoR (bFGF), e 1,0% de penicilina-estreptomicina (10.000 UI e 10000 ng / mL, respectivamente, Pen-Strep). <ol><li> Incubar a ADMEM a 38,5 ° C numa atmosfera humidificada de 5% de CO 2 num incubador de CO 2. </li></ol></li><li> Preparar 500 ml de solução salina de tampão de fosfato de Dulbecco (DPBS) de acordo com as instruções do fabricante para o isolamento de células e de lavar roupa. </li></ol> 4. Recolha de Medula Óssea a partir do miniporcos <ol><li> Seleccionar uma área de aproximadamente 15 x 15 cm de tamanho na crista ilíaca (Figura 1), e remover o cabelo a partir desta área usando lâminas de barbear de segurança esterilizados ou corta-eléctricos. Uma vez que o minipig está posicionado, alternadamente esfregar o local procedimento três vezes com os seguintes agentes de esterilização: iodopovidona e 70% de etanol. Depois que a área está completamente seco, aplique campos estéreis. </li><li> Pré-revestimento da seringa de 10 ml com 100 U / ml de heparina, enxaguando-a com 3 - 4 ml de heparina antes ejecting o agente anti-coagulante. Nota: Execute esta etapa para evitar a coagulação na seringa durante a aspiração de medula óssea. </li><li> Extrair um mínimo de 5 ml de medula óssea a partir do osso da crista ilíaca de minipig sob anestesia, utilizando um extractor de medula óssea (3,0 × 100 mm) firmemente ligado à heparina pré-revestidos seringa de 10 ml. </li></ol> 5. Isolamento de células extraídas da medula óssea e cultivo in vitro <ol><li> Isolar as células da medula óssea extraída. <ol><li> Dilui-se a medula é extraída com um volume igual de DPBS num tubo cónico de 15 ml à temperatura ambiente. </li><li> Adicionar 3 ml de meio de centrifugação de densidade (Ficoll-Paque) para o tubo de 15 ml. </li><li> Dilui-se uma camada de 4 ml de medula óssea com DPBS, que é colocado no suporte de centrifugação de densidade, sem misturar, e centrifuga-se que a 400 x g durante 40 min à temperatura ambiente. </li><li> Colher a camada de células mononucleares(PTM) do creme leucocitário entre as duas camadas contendo o plasma (camada superior) e os meios de centrifugação de densidade (camada inferior), e transferir as multinacionais em um tubo de 15 ml. </li><li> Diluir os EMNs transferidos com 7 - 8 mL de DPBS e centrifugar-los a 500 × g durante 10 min à temperatura ambiente. Descartar o sobrenadante e lavar as células duas vezes com DPBS. </li><li> Suspende-se o sedimento celular em 2 ml de ADMEM e transferi-lo para um prato de cultura de tecidos de 35 mm. Incubar a placa de cultura a 38,5 ° C numa atmosfera humidificada de 5% de CO 2. </li></ol></li><li> O cultivo in vitro de células isoladas a partir de medula óssea. <ol><li> Após 48 horas, aspirar o meio com as células que não se ligaram aos prato, e substitui a 2 ml de ADMEM e incubar-lo a 38,5 ° C numa atmosfera humidificada de 5% de CO 2. Alterar o meio em cada três dias. </li><li> Na 70 - 80% de confluência, lavar as células com DPBS, dissociar-los com 1 ml de 0,25%tripsina / EDTA, e incubar a 37 ° C durante 3-5 minutos até que as células de separar. </li><li> Colher as células por meio de 10 ml de ADMEM, transferi-los para um tubo de 15 ml e centrifugar-los em 300 × g durante 5 min à temperatura ambiente. Descartar o sobrenadante. </li><li> Suspender as células colhidas em 1 ml de ADMEM fresco e contá-los usando um hemocitômetro. </li><li> Colocar as células em de 5 - 7,5 x 10 5 / 25T balão contendo 4 ml de ADMEM e incubar a 38,5 ° C numa atmosfera humidificada de 5% de CO 2. Mudar o meio cada três dias. </li></ol></li></ol> 6. Recolha de líquido sinovial das miniporcos <ol><li> Semelhante ao procedimento de aspiração da medula óssea, selecione uma área adequada de aproximadamente 15 x 10 cm (comprimento / largura) sobre a articulação femoral, e remover o cabelo usando lâminas de barbear de segurança esterilizados ou clippers elétricos, siga por procedimentos de higienização (passo 4.1). </li><li> Inserir uma seringa de 3 ml com um 23 Gagulha na articulação após os marcos de palpação (patela e da crista da tíbia). <ol><li> Aplicar sucção suave para as seringas para a aspiração do líquido sinovial na articulação. O volume aproximado de fluido sinovial recolhidas de uma junta é de 0,5 - 1 ml, mas isto varia de acordo com o tamanho do minipig ou da articulação. Lave através DPBS na cavidade sinovial, se o volume recolhido de fluido sinovial é muito pequeno. </li><li> retirar imediatamente a seringa para evitar a contaminação com sangue. </li></ol></li></ol> 7. cela de isolamento do Collected líquido sinovial e cultivo in vitro <ol><li> Isolar as células do fluido sinovial aspirado. <ol><li> Dilui-se o fluido sinovial aspirado com um volume igual de DPBS em um tubo de 15 ml à temperatura ambiente. </li><li> Para remover os detritos, filtrar o fluido sinovial diluída usando um coador de células de nylon de 40? M. </li><li> Adicionar 10 ml de DPBS para o tubo contendo o filtrado sinovialfluido e centrifugar-lo a 400 x g durante 10 min à temperatura ambiente. Descartar o sobrenadante e lavar as células duas vezes com DPBS. </li><li> Suspende-se o sedimento celular em 2 ml de ADMEM, colocar as células em um 2 - prato de cultura de tecidos de 3 x 10 5 células / 35 mm, com 2 ml de ADMEM, e incubar a 38,5 ° C numa atmosfera humidificada de 5% de CO 2 . </li></ol></li><li> Repita o passo 5.2 para o cultivo in vitro de MSCs derivadas do líquido sinovial isoladas. </li></ol> 8. pós-procedimento Cuidado dos miniporcos <ol><li> Se necessário, fechar a pele no local da injecção extractor de medula óssea com um único fio de sutura com agrafos da pele, após a recolha de medula óssea. </li><li> Após o processo é completado, administrar uma injecção intramuscular de enrofloxacina (5 mg / kg) e meloxicam (0,2 mg / kg) para os porquinhos uma vez por dia durante 3 dias. </li><li> Após o processo é completado, desinfectar a medula óssea e o local de recolha de fluido sinovialcom 0,1% de iodo povidona, uma vez por dia durante 3 dias. Observe cuidadosamente diariamente para monitorar os sinais de complicações (por exemplo, inchaço, pus ou vermelhidão). </li></ol> 9. A fenotipagem celular utilizando Citometria de Fluxo <ol><li> Quando as MSCs são de 70 - 80% confluentes em passagens 3 - 5, lavar as células com DPBS e tratá-los com 1 ml de 0,25% (v / v) de tripsina / EDTA. Em seguida, incubam-los a 37 ° C durante 3-5 minutos até que as células são separadas. </li><li> Colher as células utilizando 10 mL de DPBS, transferi-los para um tubo de 15 ml e centrifugar-los em 300 × g durante 5 min à temperatura ambiente. Descartar a solução sobrenadante. </li><li> Para fixar as células, suspender o sedimento celular em 10 ml de uma solução de formaldeído a 3,7% e mantê-los a 4 ° C durante um dia antes da análise. <ol><li> Um dia após a fixação, lavar as células duas vezes com DPBS utilizando centrifugação a 300 x g durante 5 min de cada vez. Descartar a solução sobrenadante. </li><li> Suspende-se o sedimento de células em 4 mlde DPBS, que é suplementado com 1% (w / v) de albumina de soro bovino (BSA), e incuba-se o sedimento durante 1 hora a 4 ° C para bloquear interacções não específicas mediada por Fc. </li><li> Distribuir alíquotas de 500 ul da suspensão de células em tubos de 1,5 ml. </li><li> Para os anticorpos não conjugados (CD29 e vimentina), lavar as células por centrifugação a 300 x g durante 3 min. Descartar a solução sobrenadante. </li><li> Suspende-se o sedimento celular em 500 ul de uma diluição de 1: 100 do anticorpo primário e incubar por 1 h a 4 ° C. </li><li> Lavar as células duas vezes com 1% de albumina de soro bovino por centrifugação a 300 x g durante 5 min de cada vez. Descartar a solução sobrenadante. </li><li> Suspende-se o sedimento celular em 500 ul de uma diluição 1: 100 de conjugado de isotiocianato de fluoresceína (FITC) -conjugated anticorpo secundário e incubar-lo durante 1 hora no escuro a 4 ° C. </li></ol></li><li> Para os anticorpos conjugados com FITC (de isotipo, CD34, CD44 e CD45), lavar as células por centrifugação a 300 x g durante 3 min. Descartar a solução sobrenadante. <ol><li> Suspende-se o sedimento celular em 500 uL de anticorpo a 1: 100 conjugado com FITC e incubar-lo durante 1 hora no escuro a 4 ° C. </li><li> Para ambas as condições de coloração, lavar as células duas vezes com DPBS por centrifugação a 300 x g durante 5 min de cada vez. Descartar a solução sobrenadante. </li><li> Suspender as células em 500 ul de DPBS, transferi-los para um tubo de 5 ml de fundo redondo, e analisar os resultados usando um citómetro de fluxo 8. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Os autores declaram não ter conflito de interesses.

Miniporcos foram utilizados para estabelecer o isolamento MSCs a partir de medula óssea e no fluido sinovial. Para eliminar várias condições fisiológicas, tais como idade, sexo, e as doenças, minipigs de isogï¿½nicas doadores fundo foram escolhidos para avaliar com precisão a caracterização depende fonte de células. Os porcos são conhecidos por serem anatomicamente, fisiologicamente, e geneticamente semelhantes aos seres humanos, e em particular, podem produzir miniporcos órgãos pareados por tamanho; portanto, eles pode...

As células-tronco mesenquimais (CTMs) multipotentes podem ser classificadas em linhagens de células mesenquimais, e as CTMs foram estabelecidas e isoladas de várias fontes teciduais, como medula óssea, cordões umbilicais, placentas, tecido adiposo, pele dérmica, músculo esquelético, folículos pilosos, membranas sinoviais e dentes1-5. Atualmente, a atenção tem sido dada às CTMs derivadas da sinovial, pois essas células podem ajudar a tratar doenças articulares, como fração óssea, osteoartrite e artrite reumatoide (AR), e devido ao potencial regenerativo das CTMs na cartilagem ou osso danificado, elas também podem ajudar a tratar a modulação imunológica ou doenças autoimunes6-8. A maioria das pesquisas de CTMs derivadas de fontes sinoviais empregou CTMs da membrana sinovial em vez de líquido sinovial2,9; assim, a compreensão biológica das MSCs derivadas do líquido sinovial é limitada.
O líquido sinovial é uma fonte facilmente acessível de MSCs, que pode ser aspirada durante os diagnósticos ou tratamentos de pacientes e durante confirmações diagnósticas de várias condições de artrite que não requerem procedimentos invasivos, como osteoartrite ou AR. A população de CTMs derivadas do líquido sinovial na cavidade sinovial é significativamente aumentada em pacientes artríticos em comparação com pacientes não artríticos10-12. Portanto, o líquido sinovial é uma excelente fonte candidata para MSCs, particularmente para terapia com células-tronco autólogas em pacientes com articulações inflamadas ou lesionadas. Além disso, as MSCs derivadas do líquido sinovial têm capacidade condrogênica, habilidades de imunomodulação e alta taxa de proliferação. Este estudo estabeleceu protocolos para extração de medula óssea e aspiração de líquido sinovial de miniporcos usando métodos não invasivos e para a expansão in vitro de células isoladas e análise de fenótipos celulares.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco Avançado' s meio de águia modificado (ADMEM)</td><td>Gibco</td><td>12491-023</td><td>MSC meio</td></tr><tr><td>de cultura Dulbecco' s solução salina tamponada com fosfato (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>Meio de lavagem celular, livre de Ca2+/Mg2+</td></tr><tr><td>Soro bovino fetal (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td>Componente do meio MSCs</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td>Componente do meio MSCs</td></tr><tr><td>Penicilina/estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>10378-016</td><td>Componente do meio MSCs</td></tr><tr><td>Fator de crescimento básico de fibroblastos (bFGF)</td><td>Simga</td><td>F0291</td><td>Componente de MSCs meio</td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino (BSA)</td><td>Sigma</td><td>A6003</td><td>Componente de MSCs meio</td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-072</td><td>Reagente de dissociação celular&nbsp;</td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoetanol</td><td>Sigma</td><td>M7522</td><td>Componente do meio MSCs</td></tr><tr><td>Anticorpo isotípico</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 550616</td><td>Controle de isotipo</td></tr><tr><td>CD29 anticorpo</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 552369</td><td>Integrina beta-1 MSCs marcador</td></tr><tr><td>CD44 anticorpo</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 553133</td><td>Glicoproteína de superfície celular MSCs marcador</td></tr><tr><td>CD45 anticorpo</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 340664</td><td>Marcador de células-tronco hematopoiéticas</td></tr><tr><td>anticorpo CD34</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 555821</td><td>Marcador de células-tronco hematopoiéticas</td></tr><tr><td>anticorpo CD90</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD 555595</td><td>Marcador de glicoproteína de membrana Thy-1 MSCs MHC</td></tr><tr><td>Anticorpo Classe II</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-32247 Marcador de</td><td>células apresentadoras de antígeno</td></tr><tr><td>Anticorpo Vimentina</td><td>Sigma Sigma-S6389</td><td></td><td>Marcador de MSCs de filamento intermediário tipo III</td></tr><tr><td>Fosfatase alcalina</td><td>Promega</td><td>S3841</td><td>Mistura de 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato (BCIP) e nitro azul de tetrazólio (NBT)</td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02</td><td>Centrifugação com gradiente de densidade</td></tr><tr><td>Filtro de células</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td>40 &micro; m filtro de células de nylon</td></tr><tr><td>tubo cônico de poliestireno de 15 ml</td><td>BD Falcon</td><td>351095</td><td>Coleta de amostras e isolamento celular</td></tr><tr><td>Placas de 35 mm</td><td>Nunc</td><td>153066</td><td>Placa de cultura de células</td></tr><tr><td>Extrator de medula óssea</td><td>GmbH Medizintechnologie, Alemanha</td><td>1145-1W010</td><td>TrokaBone, 3,0 x 100 mm</td></tr><tr><td>Câmara de hematócrito</td><td>Marinfeld</td><td>640130</td><td>Câmara</td></tr> <tr>de contagem de células<td>Atropina</td><td>Jeil Pharmaceutical Co, Coreia</td><td></td> do Sul <td>Sulfato de Atropina Hidrato</td></tr><tr><td>Acepromazina</td><td>Samu Median, Coreia</td><td></td> do Sul <td>Medicamento pré-anestésico sedativo e antiemético</td></tr><tr><td>Medetomidina</td><td>Pfizer</td><td></td><td>Anestésico e analgésico</td></tr><tr><td>Enrofloxacina</td><td>Bayer Healthcare, Alemanha</td><td></td><td>Antibióticos</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Sobre Medicina Veterinária, Argentina</td><td></td><td>Anti-inflamatório e analgésico</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Hana pharm, Coreia</td><td></td> do Sul <td>Anestesia inalatória</td></tr><tr><td>Povidona iodo&nbsp;</td><td>Korea Pharma, Coreia</td><td></td> do Sul <td>Agente de esterilização</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma</td><td>E7023</td><td>Agente de esterilização</td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td>Agente anticoagulante</td></tr><tr><td>Formaldeído</td><td>Sigma</td><td>F8775</td><td>Agente de fixação celular</td></tr><tr><td>Pomada oftalmológica&nbsp;</td><td>Pfizer</td><td></td><td>Oxitetraciclina HCl com sulfato de polimixina B Manta</td></tr><tr><td>de água circulante</td><td>Gaymar Industries</td><td></td><td>Sistema de aquecimento durante e após a anestesia</td></tr><tr><td>Grampeador de pele</td><td>Covidien, EUA</td><td></td><td>Sutura fechamento da pele</td></tr><tr><td>CO2 Incubadora</td><td>Thermo Forma</td><td>3111</td><td>Equipamento de cultura de células</td></tr><tr><td>Citômetro de fluxo</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Analisador celular</td></tr><tr><td>Minipig</td><td>PWG Genetics Korea, Ltd.</td><td>Porco miniatura</td> <td>tipo T</td></tr></tbody></table>

isolation and cellular fenotipagem de células-tronco mesenquimais derivadas do líquido sinovial e medula Óssea de miniporcos

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

As células-tronco mesenquimais (MSCs) foram estabelecidas após o isolamento de várias fontes de tecido, incluindo medula óssea e líquido sinovial. Recentemente, foi relatado que as MSCs derivadas do líquido sinovial têm potencial de diferenciação de múltiplas linhagens e características imunomoduladoras, o que indica que essas células podem ser usadas para engenharia de tecidos e tratamentos sistêmicos. Este estudo apresenta um protocolo para isolamento simples e não invasivo de CTMs derivadas da medula óssea e líquido sinovial de minipigs para análise de marcadores de superfície celular para fenotipagem celular e cultura in vitro. Usando miniporcos de seis meses de idade sexualmente maduros, a medula óssea foi extraída do osso da crista ilíaca usando um extrator de medula óssea e o líquido sinovial foi aspirado da articulação femorotibial. Os procedimentos para a coleta de amostras de ambas as fontes foram não invasivos. São fornecidos os protocolos para o isolamento efetivo de MSCs de fontes de células colhidas e para a criação de condições de cultivo in vitro para expandir MSCs estáveis de minipigs e a aplicação de tratamentos autólogos sistêmicos. Para a fenotipagem celular, os marcadores de superfície celular de ambas as células foram analisados por citometria de fluxo. Nos resultados, as MSCs foram isoladas do líquido sinovial dos minipigs e mostraram que as MSCs derivadas do líquido sinovial têm morfologia e fenótipo celular semelhantes às MSCs derivadas da medula óssea. Portanto, o líquido sinovial obtido de forma não invasiva é uma fonte valiosa de MSCs.

Estabelecimento de MSCs derivadas da medula óssea e do fluido sinovial de miniporcos MSCs foram isolados com sucesso a partir da medula óssea e das articulações sinoviais articulares dos porquinhos e expandidas in vitro (Figura 2). Seringa de aspiração de fluido sinovial é simples, e é possível obter células aderentes suficientes durante a cultura in vitro das células primári...

Um protocolo que estabelece células-tronco mesenquimais (MSCs) isoladas do líquido sinovial e da medula óssea de miniporcos e coletadas de forma não invasiva por aspiração com seringa é apresentado. A fenotipagem celular foi realizada por citometria de fluxo após isolamento celular e cultivo in vitro de medula óssea e fluidos sinoviais derivados de MSCs.

Isolation and Cellular fenotipagem de células-tronco mesenquimais derivadas do líquido sinovial e Medula Óssea de miniporcos

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

O objetivo geral deste procedimento é a coleta não invasiva de líquido sinovial e medula óssea de miniporcos para obter células-tronco mesenquimais a serem utilizadas em estudos de regeneração e imunomodulação. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área de terapia com CSM para otologistas, como a forma de estabelecer o líquido sinovial em CSM e como caracterizá-las em comparação com as CSM derivadas de medula óssea. A principal vantagem desta técnica é a possibilidade de estabelecer efetivamente as propriedades-chave das CSM derivadas de líquido sinovial e de medula óssea de miniporcos, o que será útil para aplicações em pacientes.As implicações dessa técnica estendem-se à terapia de diversas doenças articulares, pois a população de MSC derivadas do líquido sinovial na cavidade sinovial é significativamente aumentada em pacientes atléticos. Embora este método possa fornecer subsídios para a medicina regenerativa, também pode ser aplicado a outros estudos, como a pesquisa sobre doenças autoimunes. Como as MSC de miniporco são autólogas, a imunossupressão pode interessar aos seres humanos.Além dos outros cientistas, os responsáveis por demonstrar o procediment

isolation-cellular-phenotyping-mesenchymal-stem-cells-derived-from

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este protocolo descreve o isolamento de células-tronco derivadas do tecido adiposo de porco (pADSC) de tecidos adiposos subcutâneos com exame de multipotência. O pADSC multipotente é usado para delinear processos de diferenciação de adipócitos e estudar a transdiferenciação em múltiplas linhagens celulares de mesênquima mesodérmico ou outras linhagens de ectoderma e endoderme para estudos regenerativos.

Isolamento e diferenciação de células tronco derivadas de tecido adiposo de Suínos Subcutânea tecidos adiposos

Este artigo apresenta um protocolo simples e económico para o simples isolamento e purificação de células-tronco mesenquimais do líquido sinovial do coelho branco Nova Zelândia.

Magnético-ativado da pilha classificação estratégias para isolar e purificar sinovial fluidos derivados mesenquimais células-tronco de um modelo de coelho

As células-tronco mesenquimais da almofada de gordura infrapatelar (IFP-MSCs) podem ser facilmente isoladas da almofada de gordura infrapatelar da articulação do joelho. Eles proliferam bem in vitro, formam colônias de UFC-F e se diferenciam em linhagens adipogênicas, condrogênicas e osteogênicas. Aqui, a metodologia para o isolamento, expansão e diferenciação de IFP-MSCs da articulação de sufocamento de cabra é fornecida.

Isolamento, Expansão e Diferenciação de Células-Tronco Mesenquimais do Coxim de Gordura Infrapatelar da Articulação Sufocante de Cabra

O presente estudo fornece um protocolo modificado para isolar macrófagos sinoviais e fibroblastos do tecido da artrite inflamatória murina.

Isolamento e Cultura de Macrófagos e Fibroblastos Sinoviais Primários de Tecido de Artrite Murina

O tecido adiposo é uma excelente fonte de células-tronco mesenquimais. Aqui, trazemos a extração, cultivo e caracterização passo a passo de células-tronco derivadas do tecido adiposo (ADSCs) do tecido adiposo epididimal de camundongos suíços.

Isolamento, expansão in vitro e caracterização de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo epididimal de camundongos

O isolamento de MSCsaltasde MFGE8BAMBI , um dos três principais subgrupos que constituem UC-MSCs humanas heterogêneas, é útil para entender completamente as características e funções desse subtipo para sua futura aplicação para melhorar a eficácia clínica em doenças específicas. Aqui, apresentamos um método para classificar BAMBIaltoMFGE8alto UC-MSCs.

Isolamento de células estromais mesenquimais derivadas do cordão umbilical alto BAMBIhumanoMFGE8alto

O método descrito o isolamento e caracterização de células pulpares humanas estaminais (hDPSCs)...

Isolamento, caracterização e comparativa Diferenciação de células-tronco da polpa dentária Derivado de dentes permanentes usando dois métodos diferentes

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Cultura de Células e Isolamento paciente Derivado de CD133<sup&gt; +</sup&gt; Células-tronco de câncer putativos Melanoma

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Este protocolo descreve a radiomarcação de células-tronco mesenquimais equinas e sua implantação em lesões tendinosas no cavalo, a fim de determinar a sobrevivência celular e a distribuição tecidual usando cintilografia gama.

In Vivo Imaging and Rastreamento de Tecnécio-99m Rotulado de Medula Óssea Células-Tronco Mesenquimais em Equine Tendinopatia

Aprenda a isolar e fenotipar células-tronco mesenquimais de líquido sinovial e medula óssea de miniporcos usando centrifugação e citometria de fluxo. Este método não invasivo avança pesquisas em medicina regenerativa e terapias autólogas para doenças articulares.

Isolation and Cellular fenotipagem de células-tronco mesenquimais derivadas do líquido sinovial e Medula Óssea de miniporcos

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