Name: Gravação simultânea de Eletrorretinografia e potenciais evocados visuais em ratos anestesiados (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Aprenda a medir simultaneamente eletrorretinografia e potenciais evocados visuais em ratos anestesiados. Este método permite avaliar funções retinianas e corticais para estudos de neurociência visual.

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O financiamento para este projeto foi fornecido pelo Conselho Nacional de Saúde e Pesquisa Médica (NHMRC) 1046203 (BVB, AJV) e Melbourne Neuroscience Institute Fellowship (CTN).

<ol><li>Nguyen, C. T. O., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+omega-3+fatty+acids+and+ganglion+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Dietary omega-3 fatty acids and ganglion cell function.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3586-3594 (2008).</li>
<li>Weymouth, A. E., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+electroretinography%3A+methods+for+extraction+and+interpretation+of+rod+and+cone+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Rodent electroretinography: methods for extraction and interpretation of rod and cone responses.</a> Prog Retin Eye Res. 27, 1-44 (2008).</li>
<li>Tsai, T. I., Bui, B. V., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+acute+intraocular+pressure+challenge+on+rat+retinal+and+cortical+function%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of acute intraocular pressure challenge on rat retinal and cortical function.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55, 1067-1077 (2014).</li>
<li>Cowey, A., Franzini, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+origin+of+uncrossed+optic+nerve+fibres+in+rats+and+their+role+in+visual+discrimination%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The retinal origin of uncrossed optic nerve fibres in rats and their role in visual discrimination.</a> Exp Brain Res. 35, 443-455 (1979).</li>
<li>Weinstein, G. W., Odom, J. V., Cavender, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visually+evoked+potentials+and+electroretinography+in+neurologic+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Clin%22%5BJournal%5D)">Visually evoked potentials and electroretinography in neurologic evaluation.</a> Neurol Clin. 9, 225-242 (1991).</li>
<li>Odom, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+evoked+potentials+standard+%282004%29%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Visual evoked potentials standard (2004).</a> Doc Ophthalmol. 108, 115-123 (2004).</li>
<li>Ridder, W. H., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Causes+of+cataract+development+in+anesthetized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Causes of cataract development in anesthetized mice.</a> Exp Eye Res. 75, 365-370 (2002).</li>
<li>Nixon, P. J., Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+cone+responses+to+rat+electroretinograms%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Experiment+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The contribution of cone responses to rat electroretinograms.</a> Clin Experiment Ophthalmol. 29, 193-196 (2001).</li>
<li>Bui, B. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+electroretinogram+to+understand+how+intraocular+pressure+elevation+affects+the+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Using the electroretinogram to understand how intraocular pressure elevation affects the rat retina.</a> J Ophthalmol. 2013, 262467(2013).</li>
<li>Nguyen, C. T., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+omega-3+fatty+acids+and+ganglion+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Dietary omega-3 fatty acids and ganglion cell function.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3586-3594 (2008).</li>
<li>Hood, D. C., Birch, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+measure+of+the+electrical+activity+of+human+rod+photoreceptors+using+electroretinography%5BTitle%5D)+AND+%22Vis+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A quantitative measure of the electrical activity of human rod photoreceptors using electroretinography.</a> Vis Neurosci. 5, 379-387 (1990).</li>
<li>Birch, D. G., Hood, D. C., Locke, K. G., Hoffman, D. R., Tzekov, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+electroretinogram+measures+of+phototransduction+in+cone+and+rod+photoreceptors+-+Normal+aging%2C+progression+with+disease%2C+and+test-retest+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Quantitative electroretinogram measures of phototransduction in cone and rod photoreceptors - Normal aging, progression with disease, and test-retest variability.</a> Arch Ophthalmol. 120, 1045-1051 (2002).</li>
<li>Bui, B. V., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+receptoral+responses+in+pigmented+and+albino+guinea-pigs+%28Cavia+porcellus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Development of receptoral responses in pigmented and albino guinea-pigs (Cavia porcellus).</a> Doc Ophthalmol. 99, 151-170 (1999).</li>
<li>Robson, J. G., Saszik, S. M., Ahmed, J., Frishman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rod+and+cone+contributions+to+the+a-wave+of+the+electroretinogram+of+the+macaque%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Rod and cone contributions to the a-wave of the electroretinogram of the macaque.</a> J Physiol. 547, 509-530 (2003).</li>
<li>Severns, M. L., Johnson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+care+and+fitting+of+Naka-Rushton+functions+to+electroretinographic+intensity-response+data%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The care and fitting of Naka-Rushton functions to electroretinographic intensity-response data.</a> Doc Ophthalmol. 85, 135-150 (1993).</li>
<li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+of+electroretinogram+amplitude+growth+during+light+adaptation+in+pigmented+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Vis+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Origin of electroretinogram amplitude growth during light adaptation in pigmented rats.</a> Vis Neurosci. 23, 155-167 (2006).</li>
<li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> J Physiol. 555, 153-173 (2004).</li>
<li>Tremblay, F., Laroche, R. G., Debecker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Electroretinographic+Diagnosis+of+the+Incomplete+Form+of+Congenital+Stationary+Night+Blindness%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">The Electroretinographic Diagnosis of the Incomplete Form of Congenital Stationary Night Blindness.</a> Vision Res. 35, 2383-2393 (1995).</li>
<li>Bayer, A. U., Keller, O. N., Ferrari, F., Maag, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+glaucoma+with+neurodegenerative+diseases+with+apoptotic+cell+death%3A+Alzheimer%27s+disease+and+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Association of glaucoma with neurodegenerative diseases with apoptotic cell death: Alzheimer's disease and Parkinson's disease.</a> Am J Ophthalmol. 133, 135-137 (2002).</li>
<li>Wostyn, P., Audenaert, K., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+abnormal+high+trans-lamina+cribrosa+pressure+difference%3A+A+missing+link+between+Alzheimer%27s+disease+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Neurology+and+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">An abnormal high trans-lamina cribrosa pressure difference: A missing link between Alzheimer's disease and glaucoma.</a> Clinical Neurology and Neurosurgery. 110, 753-754 (2008).</li>
<li>Yucel, Y. H., Zhang, Q. A., Weinreb, R. N., Kaufman, P. L., Gupta, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+retinal+ganglion+cell+loss+on+magno-%2C+parvo-%2C+koniocellular+pathways+in+the+lateral+geniculate+nucleus+and+visual+cortex+in+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of retinal ganglion cell loss on magno-, parvo-, koniocellular pathways in the lateral geniculate nucleus and visual cortex in glaucoma.</a> Prog Retin Eye Res. 22, 465-481 (2003).</li>
<li>Gupta, N., Yucel, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+changes+can+we+expect+in+the+brain+of+glaucoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Survey+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">What changes can we expect in the brain of glaucoma patients.</a> Survey of Ophthalmology. 52, 122-126 (2007).</li>
<li>Kong, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+aging+and+diet+restriction+on+retinal+function+during+and+after+acute+intraocular+pressure+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Impact of aging and diet restriction on retinal function during and after acute intraocular pressure injury.</a> Neurobiol Aging. 33, 1115-1125 (2012).</li>
<li>Bui, B. V., Sinclair, A. J., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroretinograms+of+albino+and+pigmented+guinea-pigs+%28Cavia+porcellus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aust+N+Z+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Electroretinograms of albino and pigmented guinea-pigs (Cavia porcellus).</a> Aust N Z J Ophthalmol. 26, Suppl 1 98-100 (1998).</li>
<li>Jobling, A. I., Wan, R., Gentle, A., Bui, B. V., McBrien, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+and+choroidal+TGF-beta+in+the+tree+shrew+model+of+myopia%3A+isoform+expression%2C+activation+and+effects+on+function%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal and choroidal TGF-beta in the tree shrew model of myopia: isoform expression, activation and effects on function.</a> Exp Eye Res. 88, 458-466 (2009).</li>
<li>Robson, J. G., Frishman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+the+dark-adapted+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Dissecting the dark-adapted electroretinogram.</a> Doc Ophthalmol. 95, 187-215 (1998).</li>
<li>Robson, J. G., Frishman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rod-driven+a-wave+of+the+dark-adapted+mammalian+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">The rod-driven a-wave of the dark-adapted mammalian electroretinogram.</a> Prog Retin Eye Res. 39, 1-22 (2014).</li>
<li>Hudnell, H. K., Boyes, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparability+of+rat+and+human+visual-evoked+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">The comparability of rat and human visual-evoked potentials.</a> Neurosci Biobehav Rev. 15, 159-164 (1991).</li>
<li>Charng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conscious+wireless+electroretinogram+and+visual+evoked+potentials+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Conscious wireless electroretinogram and visual evoked potentials in rats.</a> PLoS One. 8, e74172(2013).</li>
<li>Hetzler, B. E., Berger, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine-Induced+Modification+of+Photic+Evoked-Potentials+in+the+Superior+Colliculus+of+Hooded+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Ketamine-Induced Modification of Photic Evoked-Potentials in the Superior Colliculus of Hooded Rats.</a> Neuropharmacology. 23, 473-476 (1984).</li>
</ol>

Os autores não têm divulgações relevantes para este trabalho.

O ERG e VEP são medidas objetivas da função visual da retina eo córtex, respectivamente. A vantagem de gravação simultânea é que uma visão mais abrangente de toda a via visual é oferecida. Especificamente, as informações complementares na sua avaliação simultânea poderia fornecer uma definição mais clara do local da lesão na via visual (por exemplo, para distúrbios com sobreposição ERG ainda distinta VEP manifestações 18, quando neuropatia óptica pode co-existir com atrofia cerebral primário 19,...

Medição do eletrorretinograma (ERG) e visual potencial evocado (VEP) fornecem avaliações quantitativas úteis da integridade da via visual. O ERG mede as respostas eléctricas do retina para a estimulação pela luz, enquanto o VEP mede a integridade funcional correspondente das vias visuais da retina para o córtex visual primário seguindo o mesmo evento de luz. Este manuscrito descreve um protocolo para a gravação e análise das respostas do ERG e VEP em um modelo de laboratório comumente usado, o rato. O ERG fornece um índice da integridade funcional de um número de classes principais de células da retina quantificando resposta elétrica bruta da retina para um flash de luz. Uma série coordenada de fluxos iônicos iniciado pelo aparecimento de luz e compensar, produzir mudanças detectáveis ​​na tensão que pode ser medido por meio de eletrodos de superfície colocados fora do olho. A forma de onda resultante representa a combinação de um SEries de componentes bem definidas, diferindo na amplitude, tempo e frequência. Um corpo substancial de investigação tem demonstrado que estes componentes são relativamente bem conservada entre muitos retina de vertebrados e que os componentes podem ser separados uns dos outros. Ao seleccionar criteriosamente as condições de estímulo (stimulus flash, fundo, intervalo interstimulus) e escolher características específicas da forma de onda composta para analisar se pode ter a certeza de voltar uma medida de um grupo específico de células da retina 1,2. Estas características são a base da utilidade e, portanto, as aplicações difundidas do ERG como uma medida não-invasiva da função retina. Este manuscrito incide sobre a metodologia para a medição do ERG e analisar suas características para retornar informações sobre alguns dos principais classes de células na retina, nomeadamente fotorreceptores (o componente PIII), células bipolares (o componente PII) e células ganglionares da retina (o positivo limiar de resposta escotópica ou pstr). <p class= &quot;Jove_content&quot;&gt; O VEP proporciona um ensaio da resposta cortical à luz; primeiro proveniente da retina e posteriormente comunicadas em série através do nervo óptico, trato óptico, tálamo (núcleo geniculado lateral, LGN) e radiação óptica para a área do córtex V1 3. Em roedores, a maioria (90-95%) de fibras do nervo óptico de cada olho decussate 4 e inervam o cérebro médio contralateral. Ao contrário do ERG, é como ainda não é possível atribuir diferentes componentes da VEP às classes de células específicas, 5 muda, assim, em qualquer lugar ao longo da via visual pode afetar a forma de onda VEP. No entanto, o VEP é uma medida não-invasivo útil do desempenho visual e integridade da via visual. A VEP, quando usado em conjunto com o ERG, pode proporcionar uma avaliação mais completa do sistema visual (ou seja, a retina / via visual). registos de ERG e VEP pode ser realizada de forma isolada ou em combinação, dependendo da aplicação. A metodologia descrita neste artigo permite a avaliação simultânea de eletrofisiologia visual evocado retina e cortical de ambos os olhos e ambos os hemisférios em ratos anestesiados. Esta é uma maneira útil para avaliar de forma mais abrangente a função da retina e os efeitos a montante que as mudanças na função da retina pode ter em função cortical evocado visual.

<table><tbody><tr><td>Clipe jacaré</td><td>marca genérica</td><td>HM3022</td><td>Clipe de aço inoxidável de 26 mm para conectar eletrodos de parafuso VEP a cabos</td></tr><tr><td>Bioamplificador</td><td>ADInstruments</td><td>ML 135</td><td>Para amplificar sinais ERG e VEP</td></tr><tr><td>Carboximetilcelulose sódica 1,0%</td><td>Allergan</td><td>CAS 0009000-11-7</td><td>Fluido viscoso para melhorar a qualidade do sinal do eletrodo ERG ativo</td></tr><tr><td>Carprofeno 0,5%</td><td>Pfizer Animal Health Group</td><td>CAS 53716-49-7</td><td>Nome proprietário: Rimadyl injetável (50 mg/ml). Para analgesia pós-cirúrgica, diluída a 0,5% (5 mg/ml) em solução salina normal</td></tr><tr><td>Clorhexadina 0,5%</td><td>Orion Laboratories</td><td>27411, 80085</td><td>Para desinfetar instrumentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Banho-maria circulante</td><td>Lauda-K&ouml; nigshoffen</td><td>MGW Lauda</td><td>Para manter a temperatura corporal do animal anestesiado durante a cirurgia e registros eletrofisiológicos</td></tr><tr><td>Amálgama dental</td><td>DeguDent GmbH</td><td>64020024</td><td>Para envolver o conjunto eletrodo-crânio para torná-lo mais robusto</td></tr><tr><td>Ferramenta de rebarba dentária</td><td>Storz Instruments, Bausch and Lomb</td><td>#E0824A</td><td>Uma cabeça de broca miniatura de ~ 0,7 mm de diâmetro para fazer um pequeno orifício no crânio sobre cada hemisfério para implantar parafusos VEP</td></tr><tr><td>Broca</td><td>Bosch</td><td>Dremel série 300</td><td>Uma broca automática para trepanação</td></tr><tr><td>Eletrodo de chumbo</td><td>Grama Telefator&nbsp;</td><td>Cabos de platina F-E2-30</td><td>para conectar eletrodos de fio de prata ao amplificador</td></tr><tr><td>Gaiola de Faraday</td><td>feita sob medida</td><td></td><td>Garante à prova de luz para manter a adaptação ao escuro. Envolve a configuração Ganzfeld para melhorar a relação sinal-ruído</td></tr><tr><td>Cotonetes de gaze</td><td>Multigate Medical Products Pty Ltd</td><td>57-100B</td><td>Para secar a incisão cirúrgica e a superfície exposta do crânio durante a cirurgia</td></tr><tr><td>Esfera integradora Ganzfeld</td><td>Soluções Fotométricas Internacional</td><td></td><td>Estimulador de luz personalizado: 36 mm de diâmetro, 13 cm de tamanho da abertura</td></tr><tr><td>Velcro</td><td>VELCRO Australia Pty Ltd</td><td>Marca VELCRO Reutilizável Enrole</td> o <td>fecho de velcro para prender os eletrodos e o animal na plataforma de gravação</td></tr><tr><td>Isoflurano 99,9%</td><td>Abbott Australasia Pty Ltd</td><td>CAS 26675-46-7</td><td>Nome proprietário: Isoflo(TM) Anestésico por inalação. Anestésico inalatório de grau farmacêutico misturado com gás oxigênio para cirurgia de implante de eletrodo VEP</td></tr><tr><td>Cetamina&nbsp;</td><td>Troy Laboratories</td><td>Ilium Ketamil</td><td>Nome proprietário: Ketamil Injection, Marca: Ilium. Anestésico de grau farmacêutico para registro eletrofisiológico</td></tr><tr><td>Luxeon LEDs</td><td>Phillips Lighting Co.</td><td></td><td>Para estimulação de luz vinte LEDs de 5 W e um de 1 W.</td></tr><tr><td>Micromanipulador</td><td>Harvard Apparatus</td><td>BS4 50-2625</td><td>Segura o eletrodo ativo ERG durante as gravações</td></tr><tr><td>Eletrodo de agulha</td><td>Telefator de grama&nbsp;</td><td>F-E2-30</td><td>Inserido subcutaneamente na cauda para servir como eletrodo de aterramento para o ERG e VEP</td></tr><tr><td>Fenilepfrina 2,5% mínimos&nbsp;</td><td>Bausch and Lomb</td><td>CAS 61-76-7</td><td>Instilado com Tropicamida para alcançar dilatação máxima para gravação de ERG</td></tr><tr><td>Iodo povidona 10%</td><td>Sanofi-Aventis</td><td>CAS 25655-41-8</td><td>Nome proprietário: Betadine, Antisséptico para preparar a pele raspada para cirurgia 10%, 500 ml</td></tr><tr><td>Sistema de aquisição de dados Powerlab</td><td>ADInstruments</td><td>ML 785</td><td>Controla os LEDs</td></tr><tr><td>Proxymetacaína 0.5%</td><td>Alcon Laboratories& nbsp;</td><td>CAS 5875-06-9</td><td>Para anestesia da córnea durante gravações de ERG Solução</td></tr><tr><td>salina</td><td>Gelflex</td><td></td><td>Não injetável, para galvanoplastia de eletrodos de fio de prata</td></tr><tr><td>Software</td><td>de escopo ADInstruments</td><td>versão 3.7.6</td><td>Aciona simultaneamente o estímulo através do sistema Powerlab e coleta dados</td></tr><tr><td>Prata (fio redondo fino)</td> <td>A& E metal</td><td>0,3 mm</td><td>Usado para fazer eletrodos ERG ativos e inativos, e o eletrodo VEP inativo</td></tr><tr><td>Parafusos de aço inoxidável</td><td>MicroFasterners</td><td></td><td>0,7 mm de diâmetro do eixo, 3 mm de comprimento para ser implantado sobre o córtex visual primário e servir como eletrodos VEP ativos</td></tr><tr><td>Quadro estereotáxico</td><td>David Kopf</td><td>Modelo 900</td><td>Um instrumento estereotáxico para pequenos animais para localizar os córtices visuais primários de acordo com Paxinos & O atlas do cérebro de rato de Watson de 2007 coordena</td></tr><tr><td>a lâmina cirúrgica</td><td>Swann-Morton Ltd.</td><td>0206</td><td>Para incisão na área da pele que cobre o córtex visual primário para implantar os eletrodos VEP</td></tr><tr><td>Sutura</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd</td><td></td><td>3-0 sutura trançada de seda não absorvível, para retração da pele durante a cirurgia de implantação de eletrodo VEP</td></tr><tr><td>Tobramycine pomada para os olhos 0,3%</td><td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td>CAS 32986-56-4</td><td>Nome proprietário: Tobrex. Pomada antibiótica profilática aplicada ao redor da ferida cutânea após a cirurgia</td></tr><tr><td>Tropicamida 0,5%</td><td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td>CAS 1508-75-4</td><td>Nome proprietário: 0,5% Colírio de midriacil, instilado para obter midríase para gravação de ERG</td></tr><tr><td>Xilazina</td><td>Troy Laboratories</td><td>Ilium Xylazil-100</td><td>Anestésico de grau farmacêutico para gravação eletrofisiológica</td></tr><tr><td>Ponta de pipeta</td><td>Eppendorf Pty Ltd</td><td>0030 073.169</td><td>Eppendorf epTIPS 100 - 5.000 ml, para eletrodos feitos sob medida</td></tr><tr><td>Microsoft Office Excel</td><td>Microsoft</td><td>software de planilha versão 2010</td><td>para análise de dados</td></tr><tr><td>Lethabarb Euthanazia Injection</td><td>Virbac (Australia) Pty Ltd</td><td>LETHA450</td><td>325 mg/ml de pentobarbital sódico para eutanásia rápida</td></tr></tbody></table>

gravação simultânea de eletrorretinografia e potenciais evocados visuais em ratos anestesiados

Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats

O eletrorretinograma (ERG) e o potencial evocado visual (VEP) são comumente usados para avaliar a integridade da via visual. O ERG mede as respostas elétricas da retina à estimulação da luz, enquanto o VEP mede a integridade funcional correspondente das vias visuais da retina ao córtex visual primário após o mesmo evento de luz. A forma de onda do ERG pode ser dividida em componentes que refletem as respostas de diferentes classes de células neuronais e gliais da retina. Os primeiros componentes da forma de onda VEP representam a integridade do nervo óptico e dos centros corticais superiores. Essas gravações podem ser realizadas isoladamente ou em conjunto, dependendo da aplicação. A metodologia descrita neste trabalho permite a avaliação simultânea da eletrofisiologia evocada visual retiniana e cortical de ambos os olhos e ambos os hemisférios. Esta é uma maneira útil de avaliar de forma mais abrangente a função da retina e os efeitos a montante que as mudanças na função da retina podem ter na função cortical evocada visual.

O ERG uma onda (&gt; -1,38 log cd.sm -2), b-ondas (&gt; - 4,99 log cd.sm -2) STRs (&lt;- 4,99 log cd.sm -2) e os PEVs (&gt; - 0,52 cd.sm log -2) foram gravadas simultaneamente (Figura 1 e 3). No flashes muito fraca, a STR positivo (pstr) é visto em cerca de 110 milissegundos após o flash, e uma STR negativo (NSTR) a cerca de 220 ​​ms (Figuras 1 e 2). Um ERG com um grande da onda b, picos entre 50 a 100 ms após ...

Este protocolo descreve a medição simultânea do eletrorretinograma e dos potenciais evocados visuais em ratos anestesiados.

Gravação simultânea de Eletrorretinografia e potenciais evocados visuais em ratos anestesiados

The electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are commonly used to assess the integrity of the visual pathway. The ERG measures the ...

O objetivo geral deste procedimento é medir simultaneamente o eletroretinograma e o potencial evocado visual em uma rata. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área da neurociência da fissura, como, por exemplo, se o efeito do envelhecimento ou de doenças afeta certos componentes na via visual.A principal vantagem desta técnica é que ela permite uma avaliação abrangente da função retiniana e seu efeito ascendente na função cortical evocada visual. Para iniciar este procedimento, prepare os eletrodos inativos de ERG personalizados cortando um segmento de fio de prata com 70 milímetros de comprimento e formando um laço com diâmetro de oito milímetros para circundar o olho do rato. Confeccione um círculo uniforme e ajuste o tamanho do laço moldando-o sobre a ponta de um bico de tubo de um milímetro de diâmetro.Isso é importante porque um anel muito pequeno pode inadvertidamente aumentar a pressão intra-articular, enquanto um anel excessivamente grande pode aumentar a variabilidade dos sinais. Em seguida, prepare previamente o eletrodo inativo personalizado para PVE cortando um segmento de 70 milímetros de prata e formando uma elipse de oito milímetros de diâmetro para prender nos incisivos do rato.Em seguida, prepare previamente os eletrodos ativos personalizados para ERG cortando um segmento de 30 milímetros de fio de prata e formando um pequeno laço de cerca de um a dois milímetros de diâmetro, que será usado para tocar suavemente a córnea do rato com mínimas abrasões corneanas. Posteriormente, fixe os eletrodos firmemente aos cabos dos eletrodos entrelaçando o fio de prata com o fio interno exposto. Isole qualquer metal exposto excedente com fita adesiva para reduzir artefatos fotoelétricos.Para os eletrodos ativos de ERG, pode-se aplicar mais camadas de fita adesiva para obter um envoltório mais espesso e rígido, facilitando a manipulação com um micromanipulador. Em cada eletrodo inativo de ERG, fixe um pequeno pedaço de velcro na fita adesiva para permitir uma fixação estável na tira cervical do roedor. Em seguida, para cada eletrodo ativo de VEP, conecte um clipe de jacaré ao fio interno da haste do eletrodo.Imediatamente antes das gravações, eletrodeposite cloreto nas superfícies expostas dos fios de prata para melhorar a condução do sinal. Para tanto, conecte o cátodo ao terminal negativo da bateria e mergulhe a outra extremidade na solução salina. Posteriormente, mergulhe a ponta de prata do fio anódico na solução salina normal e conecte a outra extremidade desse fio eletrodo ao terminal positivo de uma bateria de nove volts.Desconecte-os após 20 segundos e a ponta de prata do fio do eletrodo deve estar uniformemente revestida de branco. Repita o procedimento de cloração para todos os eletrodos de ERG e VEP de prata. Neste procedimento, desinfete a área depilada de um animal anestesiado com iodo-povidona a 10% três vezes.Realize uma incisão sagital ao longo da linha média da cabeça com um bisturi e remova um círculo de tecido dérmico com diâmetro de 20 milímetros para expor o osso craniano. Em seguida, remova o periósteo subjacente raspando e secando com gaze, para expor as suturas cranianas coronal e sagital. Faça dois orifícios através do crânio em ambos os hemisférios.Parafuse parafusos de aço inoxidável nos dois orifícios pré-fabricados até uma profundidade de um milímetro para permitir uma fixação firme. Em seguida, prepare a área cirúrgica para a aplicação de amálgama dental secando o osso craniano com gaze e retratando a pele com dois pontos cirúrgicos. Posteriormente, espalhe o amálgama dental sobre o crânio exposto para fixar os eletrodos-parafuso no lugar e assegure que cerca de 1,5 milímetros dos parafusos permaneçam expostos para a gravação.Depois disso, remova os pontos de retração. Para gravações escotópicas, todos os procedimentos são realizados em uma sala escura. Para fins de ilustração, o posicionamento do eletrodo é realizado aqui sob iluminação ambiente normal.O animal foi mantido em escuridão total por 12 horas e anestesiado com cetamina e xilazina. Após a dilatação da pupila e anestesia tópica, prenda o eletrodo inativo de PEV ao redor dos incisivos inferiores. Em seguida, posicione o animal sobre a plataforma de ERG diante da cúpula de Ganzfeld situada dentro da cabine de Faraday.Fixe o animal à plataforma com uma tira de fecho de velcro colocada firmemente, mas sem apertar, ao redor da nuca. Em seguida, posicione os eletrodos inativos de ERG envolvendo o anel escleral de forma não invasiva ao redor do equador dos olhos, aproximadamente a três metros atrás da limbo.Estabilize isso fixando o eletrodo na tira de fixação com gancho e laço ao redor da nuca. Repita o procedimento para o olho contralateral. Agora, prenda os eletrodos ativos de PVE conectando clipes de jacaré aos parafusos de aço inoxidável pré-implantados no crânio.Antes da colocação do eletrodo ativo de ERG, coloque uma pequena gota de carboximetilcelulose sódica a 1% no eletrodo para melhorar a qualidade do sinal. Posicione os eletrodos ativos de ERG para tocar suavemente a superfície central da córnea, utilizando um micromanipulador acoplado ao braço estereotáxico personalizado. Certifique-se de que a carboximetilcelulose sódica entre em contato apenas com a córnea e não com a esclera, removendo o excesso de fluido.Em seguida, insira dois a cinco milímetros da agulha de aço inoxidável com eletrodo de terra, subcutaneamente na cauda. Deslize a plataforma para mais perto da cúpula Ganzfeld e certifique-se de que os olhos dos animais estejam alinhados com a abertura da cúpula para permitir uma iluminação uniforme de ambas as retinas. Posteriormente, feche a gaiola de Faraday para reduzir ruídos externos.Utilizando o protocolo descrito acima, pode-se registrar uma série de formas de onda do ERG em resposta a uma variedade de estímulos, sendo o flash mais fraco exibido na parte inferior e o mais intenso na parte superior. Em níveis de luz muito baixos, podem ser registradas as respostas limiares escotópicas. Com o aumento da intensidade do estímulo, as formas de onda passam a ser dominadas pela onda B, e posteriormente surge a onda A de sentido negativo, nos estímulos mais intensos.A função dos fotorreceptores bastonetes pode ser avaliada utilizando-se um P3 para modelar a onda A. Esta figura mostra que a amplitude do P2 aumenta com o aumento da energia do estímulo. A função das células bipolares de bastonetes pode ser avaliada modelando-se as teorias de resposta à intensidade do P2 de bastonetes com uma função de Naka-Rushton.A função das células ganglionares da retina é avaliada com baixas energias luminosas e quantificada pela amplitude e tempo de pico do pSTR. A função das células bipolares cônicas é provocada com um paradigma de flash emparelhado e quantificada pela amplitude e tempo de pico do P2 cônico. A análise de amplitude da PVE é feita a partir das amplitudes de pico ao trofo e de trofo ao pico, o que fornece o tempo dessas respostas.A amplitude das formas de onda do PEO aumenta com o aumento da energia do estímulo. Quando dominada, esta técnica pode ser realizada em cerca de 30 a 45 minutos, excluindo o tempo necessário para preparar o eletrodo, posicionar o eletrodo e a adaptação. Ao tentar realizar este procedimento, é particularmente importante prestar atenção à precisão com que os eletrodos são posicionados e reservar tempo suficiente para a adaptação.Após este procedimento, outros procedimentos, como modificações da doença ou terapias, podem ser realizados para responder perguntas específicas. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como preparar e posicionar os eletrodos, bem como de como registrar e analisar as formas de onda do ERG e do PVE.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este vídeo demonstra a preparação de um modelo de rato para estudar a saúde da retina e a integridade das vias visuais. O potencial evocado visual e a referência de eletrorretinografia e os eletrodos ativos são conectados ao rato, seguidos pelo alinhamento da plataforma com o rato na frente da tigela de Ganzfeld para iluminação retiniana uniforme e fechamento da gaiola de Faraday para evitar interferência externa.

Preparando um modelo de rato para avaliar a integridade da via visual usando uma configuração de eletrofisiologia

Este vídeo demonstra o processo de medição de potenciais evocados visuais ou VEPs em um rato anestesiado e adaptado ao escuro com eletrodos cranianos pré-implantados, que registram os sinais elétricos do córtex visual do cérebro em resposta a estímulos luminosos.

Registro de potenciais evocados visuais através dos eletrodos do crânio em um modelo de rato

Este vídeo demonstra o procedimento para gravações simultâneas de eletroencefalografia co-localizada (EEG) e potenciais de campo local (LFPs) em um rato anestesiado. O processo envolve preparar o rato e anexar eletrodos estimulantes às almofadas do bigode. Um eletrodo de aranha EEG é colocado no crânio do rato para medições de EEG de superfície. Ao mesmo tempo, um microeletrodo multicanal é inserido em uma região específica do cérebro através de um orifício no crânio para registrar a atividade...

Registros Eletroencefalográficos Simultâneos e Potenciais de Campo Local em um Rato Anestesiado

Este vídeo demonstra como registrar o eletrorretinograma (ERG) e o potencial evocado visual (VEP) em um rato consciente. O rato, com eletrodos implantados cirurgicamente, é primeiro adaptado ao escuro. Após a aplicação de gotas dilatadoras, o animal é colocado em uma contenção e posicionado em uma tigela Ganzfeld. Os sinais ERG e VEP são então registrados.

Registro do Eletrorretinograma e do Potencial Evocado Visual em um Rato

Este vídeo demonstra a gravação de um eletrorretinograma de acoplamento direto (DC-ERG) em um epitélio pigmentar da retina (EPR) de camundongo anestesiado e adaptado ao escuro. Após a aplicação de gotas dilatadoras, o animal é colocado em uma configuração de gravação e o eletrodo capilar preenchido com um tampão de sal é colocado na córnea. Depois de estabelecer a linha de base, o DC-ERG é registrado.

Registro de eletrorretinograma acoplado direto do epitélio pigmentar da retina em um camundongo

O eletrorretinograma (ERG) é um potencial elétrico gerado pela retina em resposta à luz. Este artigo descreve como usar o ERG para avaliar a função retiniana, em ratos adaptados ao escuro, e como ele pode ser usado para avaliar uma intervenção neuroprotetora, no presente caso o pré-condicionamento isquêmico remoto.

Usando o Eletrorretinograma na Avaliação da Função na Roedor Retina e os efeitos protetores do remoto Limb Pré-Condicionamento Isquêmico

A desmielinização focal é induzida no nervo óptico usando microinjeção de lisolecitina. Os potenciais evocados visuais são registrados por meio de eletrodos cranianos implantados sobre o córtex visual para examinar a condução do sinal ao longo da via visual in vivo. Este protocolo detalha os procedimentos cirúrgicos subjacentes ao implante do eletrodo e à microinjeção do nervo óptico.

Visual Gravação Potencial Evocado em um modelo de rato de Experimental Nervo Óptico desmielinização

Mostramos procedimentos de implantação e de gravação cirúrgicos para medir sinais eletrofisiológicos visuais do olho (eletrorretinograma) eo cérebro (potencial evocado visual) em ratos conscientes, que é mais análogo à condição humana, onde as gravações são realizadas sem confunde anestesia.

Implantação e Gravação do Wireless Eletrorretinograma e Visual Potencial Evocado em ratos conscientes

Este protocolo descreve um método simples para gravação simultânea de co localizada Eletroencefalografia (EEG) e multi-laminar local campo potencial em um rato anestesiado. Um orifício de trépano, perfurado o crânio para a inserção de um microeléctrodo é mostrado para produzir distorção negligenciável do sinal EEG.

Gravação simultânea de eletroencefalografia co localizada e potencial do campo Local em roedores

Aderir aos padrões internacionais e manter a adaptação escura da retina são fundamentais para adquirir respostas válidas de eletroretinograma em campo integral no diagnóstico e manejo de doenças herdadas da retina. Um protocolo prático usando uma sala escura portátil é fornecido para obter eletroretinograma de campo inteiro para bebês e crianças sob sedação ou anestesia geral no ambiente da sala de cirurgia.

Gravação de eletroretinograma para bebês e crianças sob anestesia para alcançar adaptação escura ideal e padrões internacionais

O objetivo deste protocolo é caracterizar um novo modelo de neurodegeneração glaucomatosa baseado na cauterização térmica 360° do plexo vascular limbal, induzindo hipertensão ocular subaguda.

Cauterização em círculo completo do plexo vascular limbal no glaucoma induzido cirurgicamente em roedores

Aprenda a medir simultaneamente eletrorretinografia e potenciais evocados visuais em ratos anestesiados. Este método permite avaliar funções retinianas e corticais para estudos de neurociência visual.

Gravação simultânea de Eletrorretinografia e potenciais evocados visuais em ratos anestesiados

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