Gravação simultânea de Eletrorretinografia e potenciais evocados visuais em ratos anestesiados

O objetivo geral deste procedimento é medir simultaneamente o eletrorretinograma e o potencial evocado visual em um rato. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da neurociência da fissura. Por exemplo, se o efeito do envelhecimento ou doenças afetam certos componentes da via visual.

A principal vantagem dessa técnica é que ela permite uma avaliação abrangente da função retiniana e seu efeito a montante na função cortical evocada visual. Para iniciar este procedimento, pré-moldar os eletrodos inativos ERG feitos sob medida, cortando um fio de prata de 70 milímetros de comprimento e formando um laço de oito milímetros de diâmetro para circundar o olho do rato. Prepare um círculo uniforme e ajuste o tamanho do laço moldando-o em uma ponta de cabeça de tubo de um milímetro.

Isso é importante porque um anel muito pequeno pode inadvertidamente aumentar a pressão inarticular, enquanto um anel superdimensionado pode aumentar a variabilidade dos sinais. Em seguida, pré-moldar o eletrodo inativo VEP feito sob medida, cortando um comprimento de prata de 70 milímetros. E formando uma elipse de oito milímetros de diâmetro para se prender aos incisivos do rato.

Em seguida, pré-moldar os eletrodos ativos ERG feitos sob medida, cortando um fio de prata de 30 milímetros de comprimento e formar um pequeno laço de cerca de um a dois milímetros de diâmetro, que é usado para entrar em contato suavemente com a córnea do rato com o mínimo de abrasões da córnea. Depois, prenda firmemente os eletrodos aos fios do eletrodo, entrelaçando a prata com o fio interno exposto. Isole o excesso de metal exposto com fita adesiva para reduzir artefatos fotovoltaicos.

Para os eletrodos ativos ERG, mais camadas de fita adesiva podem ser aplicadas para obter um envoltório mais espesso e rígido, de modo que o eletrodo seja mais fácil de ser segurado com um micromanipulador. Em cada eletrodo inativo do ERG, cole um pequeno pedaço de fecho de velcro na fita adesiva para permitir uma fixação estável à alça do pescoço do roedor. Em seguida, para cada eletrodo ativo VEP, conecte um clipe jacaré ao fio interno do eletrodo.

Imediatamente antes das gravações, eletro as superfícies expostas dos fios de prata com cloreto para melhorar a condução do sinal. Para fazer isso, conecte o cátodo ao terminal negativo da bateria e mergulhe a outra extremidade na solução salina. Em seguida, mergulhe a ponta prateada no fio do ânodo em solução salina normal e conecte a outra extremidade deste fio do eletrodo ao terminal positivo de uma bateria de nove volts.

Desconecte-os após 20 segundos e a ponta prateada do fio do eletrodo deve ser revestida uniformemente de branco. Repita o procedimento de cloração para todos os eletrodos ERG e VEP de prata. Neste procedimento, desinfete a área raspada de um animal anestesiado com iodopovidona a 10% três vezes.

Faça uma incisão sagital ao longo da linha média da cabeça com um bisturi e excise um círculo de 20 milímetros de tecido dérmico de diâmetro para expor o osso craniano. Em seguida, remova o periósteo subjacente raspando e secando com gaze, para expor as suturas cranianas coronal e sagital. Faça dois furos no crânio em ambos os hemisférios.

Aparafuse os parafusos de aço inoxidável nos dois orifícios pré-fabricados até uma profundidade de um milímetro para permitir uma ancoragem firme. Em seguida, prepare a área cirúrgica para o amálgama dentário secando o osso craniano com gaze e retraindo a pele com duas suturas. Em seguida, espalhe o amálgama dentário sobre o crânio exposto para prender os eletrodos dos parafusos no lugar e garantir que cerca de 1,5 milímetros dos parafusos estejam expostos para registro.

Depois disso, remova as suturas de retração. Para gravações escotópicas, todos os procedimentos são realizados em uma sala escura. Para fins ilustrativos, o posicionamento do eletrodo é realizado sob iluminação normal da sala aqui.

O animal foi adaptado ao escuro por 12 horas e anestesiado com cetamina e xilazina. Após a dilatação da pupila e anestesia tópica, prenda o eletrodo VEP inativo ao redor dos incisivos inferiores. Em seguida, coloque o animal na plataforma ERG em frente à tigela Ganzfeld situada na gaiola de Faraday.

Prenda o animal à plataforma com uma tira de velcro colocada firmemente, mas não firmemente ao redor da nuca. Em seguida, posicione os eletrodos inativos do ERG circundando o anel esclaral de forma não invasiva ao redor do equador dos olhos. Aproximadamente três metros atrás do limbo.

Estabilize isso prendendo o eletrodo à tira de velcro ao redor da nuca. Repita o procedimento para o olho contralateral. Agora, aperte os eletrodos ativos do VEP prendendo garras jacaré aos parafusos de aço inoxidável, pré-implantados no crânio.

Antes da colocação do eletrodo ativo ERG, coloque uma pequena gota de 1% de carboximetilcelulose sódica no eletrodo para melhorar a qualidade do sinal. Posicione os eletrodos ativos do ERG para tocar levemente a superfície central da córnea usando um micromanipulador conectado ao braço estereotáxico personalizado. Certifique-se de que a carboximetilcelulose sódica entre em contato apenas com a córnea e não com a clara, limpando o excesso de líquido.

Em seguida, insira dois a cinco milímetros do eletrodo de agulha de aterramento de aço inoxidável, por via subcutânea, na cauda. Deslize a plataforma para mais perto da tigela de Ganzfeld e certifique-se de que os olhos do animal estejam alinhados com a abertura da tigela para permitir uma iluminação uniforme de ambas as retinas. Em seguida, feche a gaiola de Faraday para reduzir ruídos estranhos.

Usando o protocolo acima, uma pilha de formas de onda ERG pode ser registrada em resposta a uma variedade de estímulos com o flash mais fraco mostrado na parte inferior e o mais brilhante na parte superior. Em níveis de luz muito fraca, as respostas do limiar escotópico podem ser registradas. Com o aumento do brilho do estímulo, as formas de onda tornam-se dominadas pela onda B e, em seguida, a onda A negativa emerge nos estímulos mais brilhantes.

A função fotorreceptora da haste pode ser testada usando um P3 para modelar a onda A. Esta figura mostra que a amplitude P2 cresce com o aumento da energia do estímulo. A função das células bipolares dos bastonetes pode ser analisada modelando as teorias de resposta de intensidade do bastonete P2 com uma função naka rushtin.

A função das células ganglionares da retina é testada em energias luminosas fracas e quantificada pela amplitude e tempo de pico de pSTR. A função da célula bipolar do cone é eliciada com um paradime flash emparelhado e quantificada pela amplitude e tempo do pico P2 do cone. A análise de amplitude do VEP é tomada como pico do troph e amplitudes do trof ao pico, o que fornece o tempo dessas respostas.

A amplitude das formas de onda VEP aumenta com o aumento da energia do estímulo. Quando dominada, esta técnica pode ser feita em cerca de 30 a 45 minutos, excluindo o tempo de preparação do eletrodo e colocação do eletrodo e adaptação adak. Ao tentar este procedimento, é particularmente importante prestar atenção à precisão com que você coloca os eletrodos e permitir tempo suficiente para a adaptação.

Após este procedimento, outros procedimentos, como modificação da doença ou terapias, podem ser realizados para responder a perguntas específicas. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como preparar e colocar os eletrodos, bem como registrar e analisar as formas de onda ERG e VEP.