Name: Implantação e Gravação do Wireless Eletrorretinograma e Visual Potencial Evocado em ratos conscientes (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 22 s
Description: Aprenda a implantar sondas de telemetria sem fio para registrar ERG e VEP em ratos conscientes. Esta técnica permite medições simultâneas da retina e córtex visual sem os efeitos confundentes da anestesia geral.

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JC gostaria de agradecer ao David Hay Memorial Fund, da Universidade de Melbourne, pelo apoio financeiro na redação deste manuscrito. O financiamento para este projeto foi fornecido por uma 100200129 de doação ARC Linkage (BVB, AJV, CTON).

Declaração de ética: Experiências com animais foram conduzidos de acordo com o Código australiano para o Cuidado e Utilização de animais para fins científicos (2013). aprovação ética animal foi obtido a partir Comitê de Ética Animal da Universidade de Melbourne. Os materiais aqui são para experiências de laboratório apenas, e não destinados ao uso médico ou veterinário. 1. Os eléctrodos Preparando Nota: Um transmissor três canais é usado para implantação cirúrgica que permite 2 ERG e gravação de 1 VEP a ser realizado simultaneamente. Os três ativa e três eletrodos inativos precisam ser pré-moldado em forma de anel antes da implantação, a fim de anexar ao olho. Para fins de identificação, o fabricante tenha fechado eletrodos ativos na metade branco, metade bainhas de plástico coloridos, enquanto eletrodos inativos são cobertos em bainhas de cor completos. O eletrodo terra (claro bainha de plástico) é deixado inalterado. Para todos electr ativos e inativosconduta odes os passos 1.1, 1.2, 1.3 e 1.7. <ol><li> Destorcer o eletrodo de aço inoxidável de cadeia dupla com dois alicates de ponta fina. </li><li> Apare um dos cordões de aço inoxidável (aproximadamente a 1 cm da ponta), deixando uma cadeia simples mais linear restante para moldar o eléctrodo anular. </li><li> Dobrar o único fio de aço inoxidável para trás sobre si própria e torção, formando um anel liso na ponta do eléctrodo. </li><li> Para o ERG eletrodos ativos moda este laço ~ 0,2 - 0,5 mm de diâmetro por torção da base do loop (para a finalidade descrita aqui, forma dois eletrodos ativos desta forma para gravar ERG de ambos os olhos), e para o ERG inativos e eletrodos VEP faça o diâmetro do laço ~ 0,8 mm de diâmetro (neste exemplo, fazer isso para um eletrodo VEP ativo e todos os três eletrodos inativos). </li><li> Prenda a circular VEP eletrodo ativo em torno de um parafuso de aço inoxidável (diâmetro 0,7 mm, comprimento 3 mm) de modo que o eletrodo fica encostada à cabeça do parafuso. </li><li> Hook os 3 eletrodos inativos (2 ERG, 1 VEP) em torno de um segundo parafuso de aço inoxidável (diâmetro 0,7 mm, comprimento 3 mm). </li><li> Puxe a manga de plástico para a frente sobre as pontas afiadas da vertente dois de aço inoxidável para reduzir a irritação. </li><li> Esterilizar os transmissores de telemetria por imersão em 2% de glutaraldeído durante mais de 10 horas a cerca de 25 ° C. Em seguida, lave o transmissor com solução salina estéril 3 vezes. </li></ol> 2. Transmissor de Implantação <ol><li> Preparação animal <ol><li> Desinfectar a área cirúrgica antes da experimentação por limpeza com etanol a 70%. Autoclave todo o equipamento cirúrgico antes do uso e manutenção do equipamento em clorexidina quando não em uso durante a cirurgia. Cobrir o animal com um penso cirúrgico durante a cirurgia para manter um ambiente estéril. Garantir que todos os experimentadores usar máscaras cirúrgicas, luvas e aventais estéreis. </li><li> Induzir a anestesia com 1,5 - 2% de isoflurano, a um caudal de 3 L / min e manutennido a 1,5 - 2% em 2 L / min durante toda a cirurgia. Confirmar profundidade suficiente de anestesia pela ausência de um reflexo pedal sobre beliscar o músculo entre os dedos. </li><li> Raspar uma área de 40 mm x 30 mm no abdómen de cima da virilha ao esterno. </li><li> Raspar uma área de 30 mm x 20 milímetros sobre a testa, posterior aos olhos e anterior para os ouvidos. </li><li> Desinfectar as duas áreas raspadas. Para a área da testa desinfectar com 10% de iodopovidona três vezes (evitar o uso de anti-sépticos à base de álcool para a área perto do olho, sendo consistente com o padrão de prática estabelecidos pela Associação dos Tecnólogos cirúrgicos). Durante o abdómen desinfecção com 10% de iodo de povidona e 70% de etanol. </li><li> Aplicar uma gota de proxymetacaine à córnea para a anestesia tópica adicional. </li><li> Aplicar uma gota de carboximetilcelulose de sódio a córnea para evitar a secagem dos olhos. </li></ol></li><li> implantação cirúrgica <ol><li> Adicione uma incisão 10 milímetrosna cabeça ao longo da linha média vertical entre as orelhas com um bisturi cirúrgico. </li><li> Adicione uma incisão cinco milímetros no abdómen através da camada de pele ao longo da linha média abaixo do esterno. </li><li> Túnel a 5 mm de diâmetro de uma cânula subcutânea da incisão abdominal para a incisão cabeça. </li><li> Alimentar os fios dos eléctrodos (3 ativos e inativos 3) do transmissor através da cânula do abdómen para a cabeça. </li><li> Deixe o eletrodo de referência com a base transmissor e cobrir a ponta do eletrodo com gaze asséptica. </li><li> Cubra as pontas dos eléctrodos (3 ativos e inativos 3) com gaze asséptica. </li><li> Fixe a cabeça do rato para uma plataforma estereotáxico. </li><li> Estender a incisão testa a 30mm de comprimento com uma tesoura cirúrgica. </li><li> Expor área cirúrgica retraindo a pele solta com 2 suturas (3 - 0) em ~ 3 e 9 horas. </li><li> Raspe o periósteo que recobre o crânio com gaze esterilizada para expor bregma, lambda e da linha média suturas. </li&gt; <li> Perfurar dois buracos através do crânio no VEP activa (7 milímetros ventral em relação ao bregma 3 milímetros lateral à linha média) e inactiva (5 mm rostral à bregma na linha média) estereotáxicas co-ordenadas. </li><li> Anexar VEP eletrodos ativos e inativos com parafusos pré-inscritos aço inoxidável (diâmetro de 0,7 mm, comprimento 3 mm) para o crânio com uma pequena chave de fenda para ~ 1 mm de profundidade para os buracos premade. Este ancora o parafuso para o osso sem danificar o tecido cortical subjacente. </li><li> Para implantar os eletrodos ativos ERG usar um 8-0 sutura para retrair temporariamente a pálpebra superior. </li><li> Inserir um 16 a 21 G por via subcutânea cânula de trás do olho através do fundo de saco conjuntival superior. </li><li> Remover o guiamento de agulhas. </li><li> Alimente o eletrodo ativo através do cateter de plástico encurtado da testa para o olho. Em seguida, remover o cateter de plástico. </li><li> Utilize uma sutura temporária (8-0), que é enfiada através do laço eléctrodo, para evitar que os electrode de retrair volta para o túnel. </li><li> Adicione uma incisão 0,5 milímetros sobre a conjuntiva superior a 0:00, 1 mm por trás do limbo. Use dissecção cega para expor o esclerótica subjacente. </li><li> Implantar um 8-0 ou 9-0 sutura imediatamente atrás do limbo na metade da espessura da esclera. </li><li> Remover sutura temporária do ERG eletrodo ativo. </li><li> Ancorar o eletrodo ativo ERG à meia escleral sutura espessura amarrando 3 nós consecutivos, garantindo a ponta do eletrodo está situado próximo ao limbo. </li><li> Feche a aba conjuntival utilizando 1 a 2 suturas interrompidas (8 - 0 a 9 - 0). Certifique-se que a conjuntiva cobre completamente o eletrodo ERG para melhorar o conforto. </li><li> Remover a pálpebra retracção sutura. </li><li> Repetir o procedimento para o olho contralateral. </li><li> Aplique o gel de cianoacrilato sobre o crânio para proteger todas as parafusos de aço inoxidável e fios de eletrodos. Garantir os eletrodos ativos ERG não são puxados muito apertado antes de fixar a enmovimentos oculares capazes. </li><li> Fechar o ferimento na cabeça usando um não-absorvível 3-0 sutura. </li><li> Gire roedor para expor região abdominal. Alongar a incisão dérmica abdominal a 40 mm ao longo da linha alba com uma tesoura cirúrgica. </li><li> Adicione uma incisão 35 milímetros através da parede interior do músculo para expor a cavidade abdominal interior. </li><li> Usando duas suturas (3 - 0) anexar o corpo do transmissor para o lado direito da parede abdominal interna do animal. Evitar o contacto do fígado. </li><li> Passe o eléctrodo de terra e seguro nesta forma com uma sutura (3-0). Coloque-lo flutuando livremente na cavidade abdominal. </li><li> Feche o peritônio usando uma sutura contínua (3-0). </li><li> Feche a incisão na pele usando suturas interrompidas (3 - 0). </li></ol></li><li> Cuidados pós-operatórios <ol><li> Monitorar o animal até que ele recuperou a consciência suficiente para manter decúbito esternal. Casa do animal individualmente após a cirurgia. </li><li> administrar carprofen por via subcutânea para a analgesia (5 mg / kg) uma vez por dia durante 4 dias. </li><li> Adicionar antibióticos orais profiláticos (Enrofloxin, 5 mg / kg) para a água potável durante 7 dias pós-cirurgia. </li><li> Aplicar uma pomada anti-inflamatória a locais de incisão da pele para reduzir a irritação durante os primeiros 7 dias pós-cirurgia. </li></ol></li></ol> 3. Conduta ERG e VEP Recordings em ratos conscientes <ol><li> Escuro adaptar animal durante 12 h antes de registos de ERG e VEP </li><li> Efectuar todas as manipulações experimentais sob iluminação fraca vermelha (17,4 cd.m -2, λ max = 600 nm) </li><li> Aplicar anestesia tópica (0,5% proxymetacaine) e dilatando (0,5% de tropicamida) cai para a córnea. </li><li> Orientar o roedor consciente em um personalizado feito restrainer, claro. Nota: O comprimento deste tubo de plástico pode ser ajustado para acomodar diferentes de tamanhos ratos com o diâmetro total fixado em 60 mm. A extremidade dianteira do dispositivo é afunilada para minimizar cabeça movimento e contém perfurações para permitir a respiração normal. Esta frente afunilada permite o alinhamento e estabilização da cabeça e os olhos do rato para a abertura da esfera Ganzfeld. Note-se que o roedor tem sido aclimatizadas ao limitador (3 a 5 vezes) antes da cirurgia. </li><li> Colocar o roedor na frente da bacia Ganzfeld com os olhos alinhada com a abertura da bacia. </li><li> Ligue o transmissor habitação por meio de um ímã dentro de ~ 5 cm do transmissor. Verifique se o transmissor está ligado, verificando o LED de status na base do receptor. </li><li> Recolhe sinais a uma variedade de energias luminosas (ou seja, -5,6 a 1,52 log cd.sm -2) conforme descrito anteriormente 21. Resumidamente, médios mais sinais nos níveis de intensidade da luz de luz (~ 80 repetições) e menos nas energias mais brilhante luminosos (~ 1 repetição). Gradualmente aumentar o intervalo interstimulus de 1 a 180 segundos do mais obtuso para o nível de luz mais brilhante. </li><li> Para isolar a haste do ERGe as respostas de cone utilizar um paradigma twin-flash 8. Por exemplo, iniciar dois flashes em cd.sm 1,52 log -2 com um intervalo inter-estímulo de 500 ms no meio. </li><li> Para gravar sinais VEP, média de 20 repetições para as energias mais brilhante luminosos (ou seja, 1,52 log cd.sm -2, 5 seg intervalo inter-estímulo). </li><li> Para avaliar a estabilidade do implante, o que é avaliado por variabilidade do sinal ao longo do tempo, realizar registos de ERG e VEP 7, 10, 14, 21 e 28 dias pós-cirurgia. </li><li> Seguindo período experimental, os ratos eutanásia por meio de injecção intracardíaca de pentobarbiturate (1,5 ml / kg) depois de cetamina: xilazina anestesia (12: 1 mg / kg). </li></ol>

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RG e RF são funcionários do financiador comercial desta pesquisa (Pfizer Neusentis e Pfizer Global Research). MI foi funcionário da Pfizer Global Research durante esta pesquisa e atualmente é funcionário da Proteostasis Therapeutics (Cambridge, EUA).

Devido à natureza minimamente invasiva da eletrofisiologia visual, registos de ERG e VEP em pacientes humanos são conduzidos sob condições conscientes e exigem o uso apenas de anestésicos tópicos para a colocação do eletrodo. Em contraste, eletrofisiologia visual em modelos animais é convencionalmente realizado sob anestesia geral para permitir a colocação do eletrodo estável, eliminando movimentos oculares e corporais voluntárias. No entanto, anestésicos gerais comumente utilizados alterar as respostas do ERG e VEP com...

O ERG e VEP são minimamente invasivos em ferramentas in vivo para avaliar a integridade das vias da retina e visuais, respectivamente, tanto no laboratório e clínica. O full-campo do ERG produz uma forma de onda característico, que pode ser dividido em componentes diferentes, com cada elemento representando diferentes classes de células da retina 1,2 percurso. O de campo total ERG forma de onda clássica consiste em um declive inicial negativa (a onda), que foi mostrado para representar fotorreceptor atividade pós exposição à luz 2-4. A uma onda é seguido por uma forma de onda positiva substancial (b-ondas), que reflecte a actividade eléctrica da retina meio predominantemente, as células bipolares de ON-5-7. Além disso, pode-se variar a energia luminosa e inter-estímulo-intervalo para isolar cone de respostas haste 8. O flash VEP representa potenciais eléctricos do tronco cerebral e córtex visual em resposta à estimulação da retina luz9,10. Esta forma de onda pode ser dividido em componentes precoce e tardio, com o componente precoce reflectindo uma actividade de neurónios da via retino-geniculo-estriado 11-13 e representando a componente de final de processamento cortical realizada de várias lâminas V1 em ratos 11,13. Portanto medição simultânea do ERG e VEP retorna avaliação abrangente das estruturas envolvidas na via visual. Atualmente, a fim de gravar eletrofisiologia em animais, a anestesia é utilizada para permitir a colocação estável de eletrodos. Tem havido tentativas de medir ERG e VEP em ratos conscientes 14-16 mas estes estudos utilizou uma configuração com fio, que pode ser complicado e pode levar ao estresse dos animais através da restrição da circulação de animais e comportamento natural 17. Com os recentes avanços na tecnologia sem fio, incluindo maior miniaturização e vida útil da bateria, agora é possível implementar uma abordagem de telemetria para ERG umd gravação VEP, diminuindo o estresse associado com as gravações com fio e melhorar a viabilidade a longo prazo. Implantes estáveis ​​totalmente internalizadas de sondas de telemetria provaram ser bem sucedido para monitoramento crônica da temperatura, pressão arterial 18, a atividade 19, bem como eletroencefalograma 20. Tais avanços na tecnologia também vai ajudar com repetibilidade e estabilidade das gravações conscientes, aumentando a utilidade da plataforma para estudos crônicos.

<table><tbody><tr><td>Bioamplificador</td><td>ADInstruments</td><td>ML 135</td><td>Amplifica os sinais ERG e VEP</td></tr><tr><td>Carboximetilcelulose sódica 1,0%</td><td>Allergan</td><td>CAS 0009000-11-7</td><td>Manter a hidratação da córnea durante a cirurgia</td></tr><tr><td>Carprofeno 0,5%</td><td>Pfizer Animal Health Group</td><td>CAS 53716-49-7</td><td>Analgesia pós-cirúrgica, administrada com solução salina injetável para reposição de líquidos</td></tr><tr><td>Clorhexadina 0,5%</td><td>Orion Laboratories</td><td>27411, 80085</td><td>Desinfecção de instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Ativador de gel de cianoacrilato</td><td>RS componentes</td><td>473-439</td><td>Seca rapidamente gel de cianoacrilato</td></tr><tr><td>Gel de cianocrilato</td><td>Componentes RS</td><td>473-423</td><td>Fixar parafusos inoxidáveis ao crânio</td></tr><tr><td>Broca dentária</td><td>Storz Instruments, Bausch and Lomb</td><td>E0824A</td><td>Cabeça de broca em miniatura de ~ 0,7 mm de diâmetro para fazer um pequeno orifício no crânio sobre cada hemisfério para implantar parafusos VEP</td></tr><tr><td>Broca</td><td>Bosch</td><td>Dremel série 300</td><td>Broca automática para trepanação</td></tr><tr><td>Enrofloxin</td><td>Troy Laboratories</td><td></td><td>Posto antibiótico profilático surgey</td></tr><tr><td>Ganzfeld esfera integradora</td><td>Soluções fotométricas Internacional</td><td></td><td>Estimulador de luz personalizado: 36 mm de diâmetro, tamanho da abertura de 13 cm</td></tr><tr><td>Cotonetes de gaze</td><td>Multigate Medical Products Pty Ltd</td><td>57-100B</td><td>Seca a incisão cirúrgica e a superfície do crânio exposta durante a cirurgia</td></tr><tr><td>Isoflurano 99,9%</td> <td>Abbott Australasia Pty Ltd</td><td>CAS 26675-46-7</td><td>Nome Proprietário: Anestésico por inalação Isoflo(TM). Anestésico inalatório de grau farmacêutico misturado com gás oxigênio para cirurgia de implante de eletrodo VEP</td></tr><tr><td>Pomada Kenacomb</td><td>Aspen Pharma Pty Ltd</td><td></td><td>Para reduzir a irritação da pele e coceira após a cirurgia</td></tr><tr><td>Luxeon LEDs</td><td>Phillips Lighting Co.</td><td></td><td>Para estimulação de luz, vinte LEDs de 5 W e um de 1 W, controlados pelo software</td></tr><tr><td>Scope Agulha (macrocirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501959</td><td>para sutura de cirurgia abdominal e de cabeça, usada com sutura 3 - 0, agulha de olho, aresta de corte 5/16 círculo Tamanho 1, 15 mm</td></tr><tr><td>Suporte de agulha (macrocirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>500224</td><td>Para segurar a agulha durante a cirurgia</td></tr> <tr><td>abdominal e de cabeçaPorta-agulha (microcirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>555419NT</td><td>Para segurar a agulha durante a cirurgia ocular</td></tr><tr><td>Cateter Optiva</td><td>Smiths Medical International LTD</td><td>16 ou 21 G</td><td>Guia de eletrodos ativos da córnea do crânio à conjuntiva</td></tr><tr><td>Iodopovidona 10%</td><td>Sanofi-Aventis</td><td>CAS 25655-41-8</td><td>Nome proprietário: Betadine, Antisséptico para preparar a pele raspada para cirurgia 10%, 500 ml</td></tr><tr><td>Sistema de aquisição de dados Powerlab</td><td>ADInstruments</td><td>ML 785</td><td>Adquira sinal do transmissor de telemetria, emparelhado com o conversor de dados de telemetria</td></tr><tr><td>Proxymetacaine 0.5%</td><td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td>CAS 5875-06-9</td><td>Analgesia ocular tópica</td></tr><tr><td>Conector de contenção</td><td>feito</td><td></td><td>na frente do limitador é cônica para minimizar o movimento da cabeça, o comprimento pode ser ajustado para acomodar diferentes comprimentos de rato, o diâmetro total é de 60 mm.&nbsp;</td></tr><tr><td>Lâmina de escapo</td><td>R.G. Medical Supplies</td><td>SNSM0206</td><td>Para incisão cirúrgica</td></tr><tr><td>Tesoura (macrocirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501225</td><td>para cortar tecido no abdmen e na testa</td></tr><tr><td>Tesoura (microcirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501232</td><td>Para dissecar a conjuntiva para fixação do eletrodo</td></tr><tr><td>Scope Software</td><td>ADInstruments</td><td>versão 3.7.6</td><td>Simultaneamente aciona o estímulo através do sistema ADI Powerlab e coleta dados</td></tr><tr><td>Barbeador</td><td>Oster</td><td>Golden A5</td><td>Pele de barbear de áreas cirúrgicas</td></tr><tr><td>Parafusos de aço inoxidável</td><td>MicroFasteners</td><td>L001.003CS304</td><td>Diâmetro do eixo de 0,7 mm, 3 mm de comprimento&nbsp;</td></tr><tr><td>Quadro estereotáxico</td><td>David Kopf</td><td>Modelo 900</td><td>Um instrumento estereotáxico para pequenos animais para localizar os pontos de referência de implantação no crânio</td></tr><tr><td>Campo cirúrgico</td><td>Vital Medical Supplies</td><td>GM29-612EE</td><td>Garantir um ambiente estéril durante a cirurgia</td></tr><tr><td>Sutura (macrocirurgia)</td><td>Agulhas médicas Ninbo</td><td>3-0</td><td>para sutura de cirurgia abdominal e de cabeça, trançado de seda estéril, 60 cm</td></tr><tr><td>Agulha de sutura ( microcirurgia)</td> <td>Agulhas médicas Ninbo</td><td>8-0 ou 9-0</td><td>para cirurgia ocular, incluindo, eletrodo de sutura à esclera e fechamento da ferida conjuntival, sutura de nylon, círculo 3/8 1 &vezes; 5, 30 cm</td></tr><tr><td>Conversor de dados de telemetria&nbsp;</td><td>O DataSciences International</td><td>R08</td><td>permite que o sinal de telemetria faça interface com o software de coleta de dados</td></tr><tr><td>Matriz de troca de dados de telemetria</td><td>DataSciences International</td><td></td><td>Coleta dados de transmissores, emparelha com o receptor Receptor de dados de</td></tr><tr><td>telemetria</td><td>DataSciences International</td><td>RPC-1</td><td>Recebe dados de telemetria do transmissor</td></tr><tr><td>Transmissor de telemetria</td><td>DataSciences Transmissor de</td><td>telemetria de 3 canais</td><td>International F50-EEE</td></tr><tr><td>Tropicamida 0.5%</td><td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td></td><td>Pinças de dilatação da íris</td></tr><tr><td>(macrocirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>500092</td><td>Manipular tecidos durante cirurgias abdominais e de cabeça</td></tr><tr><td>Pinças (microcirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>500342</td><td>Manipular tecidos durante a cirurgia ocular</td></tr></tbody></table>

implantação e gravação do wireless eletrorretinograma e visual potencial evocado em ratos conscientes

Implantation and Recording of Wireless Electroretinogram and Visual Evoked Potential in Conscious Rats

O eletrorretinograma de campo total (ERG) e potencial evocado visual (VEP) são ferramentas úteis para avaliar retina e integridade via visual, tanto em laboratórios e ambientes clínicos. Atualmente, pré-clínicos medições ERG e VEP são realizados com anestesia para assegurar a colocação de eletrodos estáveis. No entanto, a presença de anestesia foi mostrado para contaminar respostas fisiológicas normais. Para superar estes confunde anestesia, desenvolvemos uma plataforma inovadora para ensaiar ERG e VEP em ratos conscientes. Eletrodos são implantados cirurgicamente sub-conjunctivally no olho para ensaiar o ERG e epidural sobre o córtex visual para medir a VEP. A gama de amplitude e sensibilidade / parâmetros de tempo são ensaiadas, tanto para o ERG e VEP a aumentar energias luminosas. Os sinais de ERG e VEP são mostrados para ser estável e repetível para, pelo menos, 4 semanas pós-implantação cirúrgica. Esta capacidade de gravar sinais de ERG e VEP sem anestesia confunde nas s pré-clínicosreparativos deve fornecer uma tradução superior aos dados clínicos.

A resposta de fotorreceptores é analisada por montagem de uma Gaussiana retardada até ao bordo dianteiro do ramo descendente inicial da resposta do ERG no topo 2 energias luminosas (1,20, 1,52 log CSM -2) para cada animal, com base no modelo de carneiro e Pugh 22, formulada por Hood e Birch 23. Esta fórmula retorna uma amplitude e um parâmetro de sensibilidade, (Figura 1C e 1D, respectivamente). Uma função hiperbólica foi...

Mostramos procedimentos de implantação e de gravação cirúrgicos para medir sinais eletrofisiológicos visuais do olho (eletrorretinograma) eo cérebro (potencial evocado visual) em ratos conscientes, que é mais análogo à condição humana, onde as gravações são realizadas sem confunde anestesia.

Implantação e Gravação do Wireless Eletrorretinograma e Visual Potencial Evocado em ratos conscientes

The full-field electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are useful tools to assess retinal and visual pathway integrity in both ...

O objetivo geral deste procedimento é medir os sinais de ERG e VEP conscientes após a implantação cirúrgica de sondas de telemetria sem fio. Esta técnica pode ajudar a responder perguntas-chave na área do campo das neurociências, como o comportamento dos neurônios sem a limitação da anestesia geral em condições saudáveis e em estado de doença. A principal vantagem desta técnica é que ela permite o registro simultâneo da eletrofisiologia da retina e do córtex visual em animais conscientes.Para iniciar este procedimento, prepare os eletrodos sob um microscópio. Para isso, desenrosque um eletrodo de aço inoxidável com duas pontas finas usando duas pinças de ponta fina. Corte um dos filamentos de aço inoxidável a aproximadamente um centímetro da ponta, deixando um único filamento mais longo e reto para moldar o eletrodo em forma de anel.Em seguida, dobre o único filamento de aço inoxidável sobre si mesmo e torça para formar um anel liso na ponta do eletrodo. Em seguida, modele um eletrodo ativo para ERG torcendo a base do laço para formar um círculo com diâmetro de ponto dois a ponto cinco milímetros. Para os dois eletrodos inativos para ERG e um eletrodo inativo para VEP, faça o diâme

implantation-recording-wireless-electroretinogram-visual-evoked

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Este vídeo demonstra a preparação de um modelo de rato para estudar a saúde da retina e a integridade das vias visuais. O potencial evocado visual e a referência de eletrorretinografia e os eletrodos ativos são conectados ao rato, seguidos pelo alinhamento da plataforma com o rato na frente da tigela de Ganzfeld para iluminação retiniana uniforme e fechamento da gaiola de Faraday para evitar interferência externa.

Preparando um modelo de rato para avaliar a integridade da via visual usando uma configuração de eletrofisiologia

Este vídeo demonstra o procedimento detalhado para preparar um rato anestesiado para registros eletrofisiológicos da atividade cerebral de vários locais. O couro cabeludo é dissecado para acessar o crânio e os orifícios são feitos em locais precisos para instalar e prender os eletrodos. Os eletrodos de microfios de tungstênio são então inseridos no local de destino para registrar os dados.

Registros eletrofisiológicos in vivo de atividades cerebrais de vários locais em ratos

O vídeo demonstra um procedimento para implantar uma unidade de eletrodo multicanal bidirecional sem fio em um cérebro de rato para gravar e estimular redes neurais multicanal.

Implantando um sistema de microeletrodo bidirecional sem fio em um cérebro de rato

Este vídeo demonstra o processo de medição de potenciais evocados visuais ou VEPs em um rato anestesiado e adaptado ao escuro com eletrodos cranianos pré-implantados, que registram os sinais elétricos do córtex visual do cérebro em resposta a estímulos luminosos.

Registro de potenciais evocados visuais através dos eletrodos do crânio em um modelo de rato

Este vídeo demonstra o método de implantação de um sistema de eletrodos na cabeça em um rato anestesiado para detecção de convulsões em tempo real. O procedimento inclui a colocação de eletrodos de estimulação e gravação, prendendo-os com cimento dental e conectando-os a um amplificador montado na cabeça.

Implantando um sistema de eletrodo na cabeça em um modelo de rato para detecção de convulsões em tempo real

Este vídeo demonstra como registrar o eletrorretinograma (ERG) e o potencial evocado visual (VEP) em um rato consciente. O rato, com eletrodos implantados cirurgicamente, é primeiro adaptado ao escuro. Após a aplicação de gotas dilatadoras, o animal é colocado em uma contenção e posicionado em uma tigela Ganzfeld. Os sinais ERG e VEP são então registrados.

Registro do Eletrorretinograma e do Potencial Evocado Visual em um Rato

O vídeo demonstra a gravação de sinais de eletroencefalograma (EEG) de filhotes de ratos induzidos por convulsões. Pegue um filhote em movimento livre implantado com eletrodos conectados a um sistema de aquisição de dados. Uma neurotoxina é administrada para induzir crises epilépticas e a atividade de explosão elétrica resultante é monitorada usando o sinal de EEG.

Registro de Convulsões Induzidas por Eletroencefalografia em Filhotes de Rato em Movimento Livre

Este protocolo descreve a medição simultânea do eletrorretinograma e dos potenciais evocados visuais em ratos anestesiados.

Gravação simultânea de Eletrorretinografia e potenciais evocados visuais em ratos anestesiados

Uma rede sem fio, sistema bidirecional para multi-canal neurais gravações e estimulação em livremente se comportando ratos é introduzido. O sistema é leve e compacto, tendo assim um impacto mínimo sobre o repertório comportamental de animal´s. Além disso, este sistema bidirecional fornece uma ferramenta sofisticada para avaliar relações causais entre os padrões de ativação do cérebro e comportamento.

Uma rede sem fio, Interface bidirecional para gravação na Vivo e estimulação da atividade Neural em livremente, comportando-se ratos

Aqui, apresentamos um implante exclusivo e imprimível em 3D para ratos, denominado TD Drive, capaz de gravações bilaterais simétricas de eletrodos de fio, atualmente em até dez áreas cerebrais distribuídas simultaneamente.

O TD Drive: um implante paramétrico de código aberto para registros eletrofisiológicos de várias áreas em ratos que se comportam e dormem

Aprenda a implantar sondas de telemetria sem fio para registrar ERG e VEP em ratos conscientes. Esta técnica permite medições simultâneas da retina e córtex visual sem os efeitos confundentes da anestesia geral.

Implantação e Gravação do Wireless Eletrorretinograma e Visual Potencial Evocado em ratos conscientes

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