Name: Abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Aprenda o método de Longa para oclusão da artéria cerebral média em ratos, uma técnica cirúrgica essencial para pesquisa de acidente vascular cerebral. Este modelo oferece maior taxa de sobrevivência e reprodutibilidade na indução de isquemia.

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Este trabalho foi financiado pelo Instituto Nacional de Saúde, pelo Instituto Nacional do Coração, Pulmão e Sangue (NIH e NHLBI; HL125572-01A1) e o fundo inicial LSUHSC-S para F.N.E. Gavins.

Este protocolo e os experimentos relatados no vídeo foram aprovados pela Comissão de LSUHSC-S Institutional Animal Care e Use e estão em conformidade com as diretrizes do NIH. NOTA: ratos machos C57BL / 6 ratos pesando 25-29 g foram utilizados neste estudo. Os ratos foram mantidos com uma dieta padrão de comida pellet com livre acesso à água, sob um 12 hr ciclo claro / escuro em gaiolas ventiladas individualmente. O processo será realizado sob condições estéreis, utilizando técnicas de estéril (por exemplo, luvas estéreis, os instrumentos esterilizados). Preparativos 1. Pré-cirúrgicos <ol><li> Induzir a anestesia utilizando uma combinação de cetamina (150 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg) por via intraperitoneal (ip). Monitorizar a profundidade de anestesia por pitada pé inicialmente a cada 3-5 minutos e a cada 10 min uma vez que a anestesia é alcançado. Enquanto o animal está sob anestesia, administrar uma pomada ocular estéril para evitar a secura. A dose inicial de cetamina / xilazina geralmente dura aba 30-40 minutos. Uma dose adicional possa ser administrada, se necessário, o que é verificado pela resposta do animal a uma pitada pé. </li><li> Coloque os ratos em decúbito dorsal em uma esteira de calor temperatura regulada e manter a temperatura corporal a 36,5 ± 0,1 ° C, o que é verificado através de uma sonda retal. </li><li> Raspar o pescoço e desinfectar a pele com álcool etílico a 70%. </li></ol> 2. A oclusão da MCA (Figura 1) <ol><li> Faça uma incisão na linha média do pescoço usando Iris tesoura reta e retrair (com afastadores) os tecidos moles para expor os vasos. </li><li> Dissecar o CCA ea ECA do tecido circundante usando uma pinça Dumont sem danificar o nervo vago. </li><li> Faça uma sutura temporária por amarrar um nó frouxo em torno do CCA usando seda 6-0. </li><li> Faça uma sutura permanente em torno do TCE e as embarcações mais pequenas que se estendem a partir dele por força ligadura dos vasos (distais à bifurcação da CCA). </li><li> Fazer um aro de suturaund proximal ECA à bifurcação CCA. </li><li> Coloque um clipe de microvasos em torno da artéria carótida interna (ICA) e da artéria pterigopalatina (PPA). </li><li> Fazer uma pequena incisão na ECA utilizando micro dissecando tesoura primavera e inserir um monofilamento com ponta de silício de 180 mm. Fazer o corte o mais próximo da sutura permanente quanto possível para uma manipulação mais fácil do filamento. </li><li> Apertar a sutura temporário em torno da ECA com o filamento inserido e remover o clipe de microvasos. </li><li> Corte o ECA entre a sutura permanente, distal e o ponto de entrada do filamento utilizando micro dissecando tesoura primavera. </li><li> Orientar o filamento através do ICA até sentir resistência (aprox. 9 - 10 mm para além da bifurcação da CCA) na ACM. NOTA: No caso de muita resistência é sentida enquanto a maioria do filamento é ainda visível, o filamento pode ter entrado no PPA. Se isso acontecer, puxe o fio de volta para a bifurcação, delicadamente push em frente para os ICA usando uma pinça Dumont, e fazer avançar o filamento até que possa ser visualizado na ICA. </li></ol> 3. A reperfusão <ol><li> Depois de um período de oclusão de 30 minutos, remover o filamento puxando-o suavemente para trás usando fórceps Dumont e seguro o fio de sutura em volta da extremidade aberta do TCE. </li><li> Retirar a sutura temporário em torno da CCA, soltando cuidadosamente a ligadura usando Dumont fórceps e fluxo sanguíneo é retomado através do CCA. </li><li> Fechar a incisão com uma sutura cirúrgica contínua. Encerramento da pele pode ser conseguida, quer por suturas contínuas ou interrompidas. grampos de pele são também um método aceitável. </li><li> Injetar ratos com 1 ml de subcutaneamente solução salina como reposição de volume e com os carprofeno analgésicos (5 mg / Kg, sc) para alívio da dor e desconforto do procedimento cirúrgico, sinais que indicam o alívio da dor adicional é necessária incluem corcunda, casaco ungroomed, diminuição da actividade, anormalpostura e diminuição do apetite. </li><li> Observar ratinhos toda a recuperação da anestesia numa gaiola 30 ° C aquecida utilizando uma lâmpada de aquecimento regulada usando um controlador de temperatura e colocar Chow triturada numa placa de Petri sobre o chão da gaiola para encorajar a alimentação. Os ratos serão alojados um por gaiola durante o período de reperfusão. </li></ol> 4. Cirurgia Sham <ol><li> ratos sujeitos ao mesmo procedimento sem a inserção de monofilamento. </li></ol> 5. pós-operatórias neurológicos Scores (Tabela 1; Figura 2) <ol><li> Neurologicamente avaliar ratos após o período de reperfusão adequado utilizando um sistema de pontuação de 18 pontos avaliando-Geral; Motor; Sensorial; Propriocepção. A pontuação neurológica maior corresponde à diminuição da função neurológica. NOTA: Os ratos que são julgados insensível e incapaz de andar serão sacrificados. Outros critérios para a eutanásia humanizado incluirá uma perda de peso superior a 20%, di respiratóriastress, e infecção ao redor da área cirúrgica. Uma câmara de CO 2 vai ser utilizado para a eutanásia e o método físico para confirmar a morte será deslocamento cervical ou toracotomia. </li></ol> 6. Medição do volume do enfarte cerebral (Figura 3) <ol><li> Induzir a anestesia utilizando uma combinação de cetamina (150 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg) injectado IP Monitor profundidade de anestesia por pitada pé inicialmente a cada 3-5 minutos e a cada 10 min uma vez que a anestesia é alcançado. </li><li> Coloque os ratos em decúbito dorsal e cortar a pele do abdômen ao pescoço seguida do peritônio usando iris tesoura reta. </li><li> Levante-se o esterno usando uma pinça Dumont e cortar as costelas para expor o coração. </li><li> Abra o esquerdo e o lado direito do peito usando dois pares de pinças hemostáticas, expor o coração. </li><li> Inserir uma agulha de 26 G ligada a uma seringa de 5 ml para o ventrículo esquerdo e cortar o átrio direito. Perfundir com temperatura ambiente soro fisiológico ou fosfate solução salina tamponada (PBS) até que o líquido torna-se clara (normalmente 3-5 minutos). </li><li> Remover cuidadosamente o crânio longe do cérebro utilizando íris tesouras e pinças Dumont rectas. </li><li> Cortar os bulbos olfativos e do cerebelo usando uma lâmina de barbear para que o cérebro vai caber na matriz. Use esta matriz para cortar o cérebro em até segmentos. Relaxar a matriz antes do uso para manter o tecido fresco. Coloque o cérebro na matriz e defini-lo no gelo. </li><li> Cortar o cérebro em segmentos coronais 2 mm utilizando duas lâminas de barbear. Faça o primeiro corte utilizando uma lâmina de barbear começando 2 mm a partir do topo e deixar esta lâmina de barbear no lugar. Fazer mais 2 mm corte atrás da primeira. Remover a primeira lâmina de barbear com o tecido ligado. Repita este processo até que todo o tecido foi cortado. NOTA: Não deve haver 4 - 5 segmentos quando terminar. </li><li> Colocar os segmentos em placa de 24 poços contendo 2% de cloreto de 2,3,5-triphenyltetrazalium (TTC), a qual é então colocada num banho de água superficial umt 37 ° C durante 20 min. Colocar cada segmento em um poço individual ajuda a mantê-los na ordem em que foram cortadas. Assegure-se que a solução de TTC cobre completamente os segmentos de tecido. Após 10 min transformar todas as fatias mais. </li><li> Colocar uma pequena quantidade de formalina a 10% para os poços de uma nova placa de 24 poços e transferir os segmentos a esta placa na ordem em que foram cortadas. </li><li> Digitalizar os segmentos para o computador e analisar o tamanho do enfarte em percentagem de toda a fatia de cérebro 6 usando software de análise de ImageJ (NIH Imagem 1,57 Software) 6. <ol><li> Delinear a área infartada para gerar uma medição da área. Em seguida medir todo o hemisfério contralateral para determinar a área. Dividir a área de enfarte pela área do hemisfério contralateral e multiplicar por 100 para determinar o volume do enfarte. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Desde a sua concepção, há 20 anos, o modelo de acidente vascular cerebral humano MCAo envolvendo a inserção de um filamento foi usado em um grande número de estudos. Isto é principalmente devido ao fato de que ela imita o que acontece clinicamente sob a forma mais comum de acidente vascular cerebral (isto é, acidente vascular cerebral isquémico). O corpo estriado é mais sensível do que a isquemia cerebral, o córtex, e, como tal, o comprimento de tempo de isquemia vai traduzir-se em se tanto o corpo estriado e o...

O AVC é a quinta maior causa de morte no mundo, com uma pessoa morrer da doença a cada 4 minutos. Mais de 800.000 americanos sofrem um AVC a cada ano, o que não só é devastador para o paciente, mas também para as suas famílias. O AVC é a principal causa de incapacidade em adultos ea despesa anual é estimada para ser da ordem de 36500000000 $ 1 apesar de muito poucas opções de tratamento que estão disponíveis. ativador do plasminogênio tecidual (tPA) é o único Food and Drug Administration (FDA) licenciado droga para acidente vascular cerebral isquêmico. No entanto, isso só é eficaz se administrada a pacientes dentro de 3-6 horas desde o início do acidente vascular cerebral, e, nestes casos, ele beneficia apenas 4% dos pacientes 2. Portanto, é imperativo que reprodutíveis, modelos animais clinicamente relevantes de acidente vascular cerebral são utilizadas para auxiliar no desenvolvimento de estratégias terapêuticas potenciais e tratamentos para esta doença. É importante notar que, in vitro </em&gt; modelos, enquanto útil para modelar certos aspectos da disfunção cerebral, não são capazes de recapitular as interacções complexas fisiológicas que ocorrem no cérebro e periferia na sequência de um acidente vascular cerebral. Consequentemente, modelos in vivo são essenciais. O tipo mais comum de acidente vascular cerebral é origem isquêmica, sendo responsável por 87% dos acidentes vasculares cerebrais totais. Outros acidentes vasculares cerebrais são a hemorragia intracerebral (9%) e hemorragia subaracnóide (4%), e são causadas mais frequentemente por uma embolia para a artéria cerebral média (MCA). Isto é atribuível à curva proeminente na raiz da MCA, o que faz com que o fluxo sanguíneo laminar entrar no cérebro a tornar-se interrompida. O MCA surge da artéria carótida interna (ACI) e rotas ao longo do sulco lateral, onde se ramifica e projetos para os gânglios basais e as superfícies laterais do frontal, parietal e lobos temporais, incluindo o motor primário e córtex sensorial. O Círculo de Willis é criado por artérias cerebrais posteriores sendoligado às artérias cerebrais e as artérias comunicante posterior. O modelo de filamento ou fio de sutura intraluminal de MCAo é um dos mais amplamente utilizado em pesquisa acidente vascular cerebral. No entanto, há um par de diferentes variações a este modelo, e estes são com base em se a filamentos é inserido na artéria carótida externa (ECA, o denominado método de Longa) 3, ou se for inserida na ICA (denominado a Koizumi método) 4. No método de Koizumi, a artéria carótida comum (ACC) no lado da cirurgia deve ser permanentemente presos se o filamento é removido para impedir o sangramento da incisão no CCA, enquanto no método de Longa é o CEA que tem de ser permanentemente presos 5 . Aqui, o método de Longa será usado como nós sentimos que este é um muito superior e um modelo cirúrgico clinicamente mais relevante do acidente vascular cerebral isquêmico. Além disso, a utilização de um monofilamento com ponta de silicone, especialmente com o método de Longa, produz muitoreprodutível MCAo em oposição aos monofilamentos embotados-chama, que frequentemente produzem oclusão incompleta e / ou hemorragia subaracnóide 6. O método filamento intraluminal pode ser utilizado como um modelo de 4,6 oclusão permanente ou transitória. Para executar o modelo transiente, o filamento é removido após um período de isquémia (por exemplo, 30 min, 60 min, ou 2 horas), e reperfusão é permitido que aconteça. Este modelo, em certa medida, simula o restabelecimento do fluxo sanguíneo após a intervenção espontânea ou terapêutico (por exemplo, a administração de tPA) para lisar um coágulo tromboembólico em humanos. Para o modelo de permanente, o filamento é simplesmente deixada no local por um período de tempo (por exemplo, 24 horas), de modo que não ocorre reperfusão. Outra vantagem do método de filamento intraluminal é o facto de uma craniotomia não necessita de ser executada, permitindo que o crânio para ser deixado intacto e evitando qualquer alteração na pressão intracraniana e da temperatura. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Neste vídeo demonstramos como realizar o método de filamento intraluminal Longa para induzir MCAo e reperfusão. Também mostramos como realizar a pontuação neurológica de 18 pontos e determinar o volume de infarto usando cloreto de 2,3,5-triphenyltetrazalium coloração (TTC).

<table><tbody><tr><td>Camundongos C57BL / 6 machos</td><td>Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME</td> <td># 000664</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato de cetamina</td><td>Morris & Dickson, Shreveport, LA</td><td>67457-108-10</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn, Inc, Lake Forest, IL</td><td>NADA # 139-236</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de controle de temperatura DC</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>Mini sonda de termistor retal</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-80-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>Almofada de aquecimento</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-90-2-06</td><td></td></tr><tr><td>Clippers</td><td>Amazon, Bellevue, WA</td><td>#64800</td><td></td></tr><tr><td>70% etanol</td><td>Worldwide Medical Products, Bristol, PA</td><td>#51011023</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de dissecação</td><td>Olympus, Center Valley, PA</td><td>SZ40</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de íris (reta)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps Dumont (45&deg; ponta dobrada)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>Clipe de micro vaso</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de mola de microdissecação (reta)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>Afastadores (rombos)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>18200-11 (Helen usou 17022-13)</td><td></td></tr><tr><td>Aplicadores com ponta de algodão</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>Esponjas de gaze</td><td>Covidien, Mansfield, MA</td> <td># 9023</td><td></td></tr><tr><td>7-0 sutura cirúrgica trançada de seda</td><td>Braintree Scientific, Braintree, MA</td><td>SUT-S103</td><td></td></tr><tr><td>0,9% cloreto de sódio</td><td>Morris & Dickson, Lake Forest, IL</td><td>0409-4888-20</td><td></td></tr><tr><td>6-0 sutura MCAO média (monofilamento revestido de borracha de silicone)</td> <td>Doccol Corporation, Sharon, MA</td><td>6023PKRe</td><td></td></tr><tr><td>Seda trançada revestida de silicone Sofsilk 6-0</td><td>Covidien, Mansfield, MA</td><td>SUT-14-1</td><td></td></tr><tr><td>Carprofeno</td><td>Pfizer, Nova York, NY</td><td>NADA # 141-199</td><td></td></tr><tr><td>Puralube</td><td>Dechra, Norwich, Reino Unido</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Physitemp controlador de temperatura</td><td>Harvard Apparatus, Holliston, MA</td><td>TCAT-2AC</td><td></td></tr><tr><td>Lâmpada de calor</td><td>Harvard Apparatus, Holliston, MA</td><td>HL-1</td><td></td></tr><tr><td>Sonda doppler a laser</td><td>AD Instruments, Colorado Springs, CO</td><td>MSP100XP</td><td></td></tr><tr><td>placas de 24 poços</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td> <td># 353226</td><td></td></tr><tr><td>Tamponamento de fosfato solução salina (PBS)</td><td>Life Technologies, Carlsbad, CA</td><td>20012-050</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de barbear de borda única</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazálio (TTC)</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>T8877-50G</td><td></td></tr><tr><td>Fatiador de matriz cerebral de camundongo</td><td>Braintree Scientific, Braintree, MA</td><td>BS-A 5000C</td><td></td>Banho-maria</tr><tr><td></td><td>VWR, Radnor, PA</td><td>#182</td><td></td></tr><tr><td>10% formalina</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>HT501128-4L</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ software de análise</td><td>NIH, Bethesda, MD</td><td>download</td><td></td>grátis</tr><tr>Compra de dispositivo médico<td>retrator</td><td>, Newcastle, CA</td><td>MP-740</td><td></td></tr></tbody></table>

abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Acidente vascular cerebral é a principal causa de morte em todo o mundo e continua a ser uma das principais causas de deficiência adultos longo prazo. Cerca de 87% dos acidentes vasculares cerebrais são isquêmicos na origem e ocorrem no território da artéria cerebral média (MCA). Actualmente a única Food and Drug Administration (FDA) aprovou o medicamento para o tratamento desta doença devastadora é o activador do plasminogénio tissular (tPA). No entanto, o tPA tem uma pequena janela terapêutica para a administração (3-6 h), e só é eficaz em 4% dos pacientes que recebem efectivamente ele. A investigação actual centra-se na compreensão da fisiopatologia de acidente vascular cerebral, a fim de encontrar potenciais alvos terapêuticos. Assim, modelos fiáveis ​​são cruciais, e o modelo de oclusão MCA (MCAo) (também denominado o modelo de filamento ou fio de sutura intraluminal) é considerado como sendo o modelo cirúrgico mais clinicamente relevante de acidente vascular cerebral isquémico e é relativamente não invasivo e facilmente reprodutível. Tipicamente, o modelo é utilizado MCAo com roedores, especialmente ratinhos com devidasa todas as variações genéticas disponíveis para esta espécie. Aqui nós descrevemos (e presente no vídeo) como executar com sucesso o modelo MCAo (com reperfusão) em ratinhos para gerar dados confiáveis ​​e reprodutíveis.

Os ratinhos foram submetidos a 30 min de isquemia cerebral induzida por MCAo (Figura 1), seguido por um período de reperfusão (24 horas e 1 semana são apresentados aqui, mas o comprimento da reperfusão pode ser variada). A mortalidade durante MCAo foi mínimo (aproximadamente 2%). Pós isquemia, a taxa de mortalidade (nas primeiras 24 horas) foi de cerca de 26%. Laser Doppler fluxometria foi usada para confirmar...

A fim de compreender a patofisiologia de acidente vascular cerebral, é importante o uso de modelos fiáveis. Este documento descreve um dos modelos de AVC mais utilizados em camundongos, denominado o meio modelo de oclusão da artéria cerebral (MCAo) (também denominado o filamento intraluminal ou modelo de sutura) com a reperfusão.

Abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

O objetivo geral do método de Longa é reproduzir a isquemia na origem da artéria cerebral média, ou ACM, já que os acidentes isquêmicos em humanos ocorrem mais comumente devido à oclusão da ACM. Este método pode nos ajudar a responder perguntas fundamentais na área de acidente vascular cerebral, como por exemplo como identificar um alvo terapêutico adequado para o tratamento dessa doença. A principal vantagem do método de Longa em comparação com técnicas alternativas é a taxa de sobrevida.Observa-se também um aumento nas interações entre células leucocitárias e endoteliais e no volume do infarto com esta técnica. A demonstração deste procedimento será feita por Shantel Vital, gerente do meu laboratório. Após induzir anestesia em um camundongo macho C57 black six de acordo com o protocolo descrito, monitore a profundidade da anestesia por meio de uma pinça no pé e aplique uma pomada ocular estéril para prevenir ressecamento.Em seguida, depile o pescoço do animal. Posicione o camundongo em posição supina sobre um tapete com temperatura regulada e insira uma sonda retal para monitorar e manter a temperatura corporal em 36,5 mais ou menos 0,1 graus Celsius. Em seguida, use álcool etílico 70% para desinfetar a pele.Em seguida, utilizando uma tesoura reta de Iris, faça uma incisão mediana e retrai os tecidos moles para expor os vasos. Com pinça de Dumont, dissecar a artéria carótida comum, ou ACC, e a artéria carótida externa, ou ACE, do tecido circundante sem danificar o nervo vago. Com seda 7-0, faça uma sutura temporária amarrando um nó solto ao redor da ACC.Em seguida, faça uma sutura permanente ao redor da AEC e dos vasos menores que se estendem a partir dela, ligando firmemente os vasos. Agora, coloque uma sutura ao redor da AEC proximal à bifurcação da ACC. Então, posicione um clipe de microvaso ao redor da artéria carótida interna, ou ACI, e da artéria pterigopalatina, ou APP.Usando tesoura cirúrgica de mola para microdissecação, faça uma pequena incisão na AEC o mais próximo possível do ponto de sutura permanente e insira um monofilamento com ponta de silicone de 180 micrômetros. Com o filamento inserido, aperte a sutura temporária ao redor da AEC e remova o clipe de microvasos. Use a tesoura cirúrgica de mola para microdissecação para cortar a AEC entre a sutura distal permanente e o ponto de entrada do filamento.Guie o filamento através da ICA até sentir resistência na MCA. Consulte os detalhes adicionais no protocolo descrito no texto. Após um período de oclusão de 30 minutos, remova o filamento utilizando pinças Dumont para puxá-lo suavemente para trás e amarre o fio ao redor da extremidade aberta da ECA.Remova o ponto temporário ao redor da artéria carótida comum (CCA) afrouxando cuidadosamente a ligadura para permitir que o fluxo sanguíneo seja restabelecido pela CCA. Remova os retratores e, em seguida, utilize um ponto cirúrgico contínuo para fechar a incisão. Administre no camundongo um mililitro de solução salina por via subcutânea para reposição de volume e o analgésico carprofeno para alívio da dor e desconforto decorrentes do procedimento cirúrgico.Observe o camundongo durante toda a recuperação da anestesia em uma gaiola dedicada aquecida a 30 graus Celsius e coloque ração triturada em uma placa de Petri no piso da gaiola para estimular a alimentação. Utilizando um sistema de pontuação de 18 pontos, avalie neurologicamente os camundongos após o período apropriado de reperfusão, avaliando as pontuações geral, motora, sensorial e de propriocepção. Uma pontuação neurológica mais alta corresponde a uma função neurológica diminuída.Para medir o volume de infarto cerebral, após induzir anestesia e monitorar a profundidade conforme o protocolo descrito no texto, posicione o camundongo em posição supina e use tesoura reta tipo íris para cortar a pele desde o abdômen até o pescoço, antes de cortar o peritônio. Usando pinça Dumont, levante o esterno e corte as costelas. Em seguida, use dois pares de hemostatos para abrir os lados esquerdo e direito do tórax, expondo o coração.Insira uma agulha de 26 gauge acoplada a uma seringa de cinco milímetros no ventrículo esquerdo e corte o átrio direito. Em seguida, perfunda o coração com solução salina normal ou PBS à temperatura ambiente até que o fluido fique transparente. Com tesoura Iris reta e pinça, remova a cabeça do animal e retire cuidadosamente o cérebro do crânio.Em seguida, utilize uma lâmina de barbear para remover o bulbo olfatório e o cerebelo para que o cérebro caiba na matriz. Após resfriar a matriz, coloque o cérebro no interior e coloque-o sobre gelo. Em seguida, com uma lâmina de barbear, faça um primeiro corte no cérebro a dois milímetros do topo, mantendo a lâmina no lugar.Com uma segunda lâmina de barbear, faça outro corte de dois milímetros atrás do primeiro. Em seguida, remova a primeira lâmina de barbear com o tecido aderido. Repita este processo até que todo o tecido tenha sido seccionado.Coloque cada segmento na ordem em que foram cortados em um poço de uma placa de 24 poços contendo cloreto de 2,3,5-trifenil-tetrazólio, ou TTC, a 2% e coloque a placa em um banho-maria raso a 37 graus Celsius por 20 minutos. Após incubação por 10 minutos, vire as fatias. Em seguida, coloque uma pequena quantidade de formalina a 10% nos poços de uma nova placa de 24 poços e transfira os segmentos para os poços com formalina, na ordem em que foram cortados.Após digitalizar os segmentos no computador, utilize o software de análise ImageJ para analisar o tamanho do infarto como uma porcentagem da fatia inteira do cérebro, delimitando a área infartada para gerar uma medida de área. Em seguida, meça todo o hemisfério contralateral para determinar a área. Por fim, divida a área do infarto pela área do hemisfério contralateral e multiplique por 100 para determinar o volume do infarto.Como mostrado aqui, a fluxometria a laser Doppler foi utilizada para confirmar a perfusão do fluxo sanguíneo na região da ACM antes e após a reperfusão da ACM. Quando o laço temporário da ACC é solto após 30 minutos de isquemia, para permitir a remoção do filamento e a ocorrência da reperfusão, há um aumento na perfusão que atinge pouco menos de 100% da perfusão basal cinco minutos após o início da reperfusão. Listadas nesta tabela estão as pontuações neurológicas referentes à avaliação de déficits gerais, sensoriais, motores e proprioceptivos.Este gráfico ilustra que a pontuação de 27 camundongos após 24 horas foi de 12,56 mais ou menos 0,7 e permaneceu elevada uma semana depois, em 11,50 mais ou menos 1,5. Uma pontuação neurológica mais alta representa uma função neurológica diminuída. Os volumes de infarto mostraram padrões semelhantes à pontuação neurológica após 24 horas.Como apresentado aqui, 24 horas após a oclusão da artéria cerebral média (MCAo), os camundongos apresentaram grandes volumes de infarto, que aumentaram uma semana após o acidente vascular cerebral. Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em até 15 minutos, se for feita corretamente. Ao realizar este procedimento, é importante manter a temperatura em 36,5 graus Celsius.Após este procedimento, outros métodos também podem ser realizados, como a ligadura e punção do ceco. Isso nos permite responder a questões adicionais, como os efeitos da sepse antes e após um acidente vascular cerebral. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como induzir isquemia inserindo um monofilamento na artéria cerebral média e removendo-o para permitir a reperfusão.Não se esqueça de que trabalhar com instrumentos como tesouras Iris e pinças pode ser perigoso e sempre devem ser tomadas precauções.

surgical-approach-for-middle-cerebral-artery-occlusion-reperfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Filamentosas de oclusão da artéria cerebral média é um modelo comum para o estudo de AVC isquêmico em ratos.

Curso de modelagem em Ratos - Oclusão da Artéria Cerebral Média com o modelo de Filamento

Demonstramos no vídeo um método para produzir uma oclusão da artéria cerebral média em ratos adultos utilizando um monofilamento intraluminal. Também mostramos como avaliar a extensão do infarto cerebral por 2,3,5-trifeniltetrazólio cloreto de coloração (TTC).

Modelo do rato de Oclusão da Artéria Cerebral Média

Descrevemos um modelo de camundongo de AVC induzido pela oclusão da artéria cerebral média usando uma sutura revestida de silicone. O protocolo pode ser aplicado para induzir oclusão permanente ou isquemia temporária, seguida de reperfusão.

Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área

Oclusão de filamento intraluminal da artéria cerebral média é o modelo mais frequentemente utilizadas na vivo do acidente vascular cerebral experimental em roedores. Uma abordagem alternativa cirúrgica para permitir a reparação de artéria carótida comum é realizada aqui, que permite a reperfusão da artéria carótida comum e uma reperfusão completa no território da artéria cerebral média.

Oclusão de artéria Cerebral média, permitindo a reperfusão através de reparação de artéria carótida comum em ratos

Para investigar a fisiopatologia do AVC, é criado um modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral. Nós distalmente ligate da artéria cerebral média direita e artéria carótida comum direita e restaurar o fluxo sanguíneo após 10 ou 40 min de isquemia.

Modelo de Mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão Cerebral

O protocolo tem como objetivo fornecer métodos para encefalomiossinangiose - enxerto de um retalho vascular do músculo temporal na superfície pial do tecido cerebral isquêmico - para o tratamento de acidente vascular cerebral isquêmico agudo não-moyamoya. A eficácia da abordagem no aumento da angiogênese é avaliada usando um modelo transitório de oclusão da artéria cerebral média em camundongos.

Um modelo para o tratamento da encefalomiossinangiose após acidente vascular cerebral induzido pela oclusão da artéria cerebral média em camundongos

Este protocolo demonstra um modelo único de acidente vascular cerebral em camundongo com um infarto de tamanho médio e uma excelente taxa de sobrevida. Esse modelo permite que os pesquisadores pré-clínicos do AVC estendam a duração da isquemia, usem camundongos envelhecidos e avaliem os resultados funcionais a longo prazo.

Modelo de Oclusão Transcraniana da Artéria Cerebral Média Modificada para Estudo de Resultados de Acidente Vascular Cerebral em Camundongos Idosos

Este protocolo descreve o modelo de isquemia cerebral focal transitória em camundongos através da oclusão intraluminal da artéria cerebral média. Além disso, exemplos de avaliação de resultados são mostrados usando ressonância magnética e testes comportamentais.

Modelo de Oclusão Transitória da Artéria Cerebral Média do Acidente Vascular Encefálico

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de oclusão da artéria cerebral média distal (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6J e avaliar o comportamento neurológico subsequente e as características histopatológicas.

Indução de AVC Isquêmico Agudo em Camundongos Usando a Técnica de Oclusão Distal da Artéria Média

Este protocolo descreve o processo de preparação para a reperfusão da oclusão da artéria cerebral média através da artéria carótida comum.

Preparação de um modelo modificado para reperfusão de oclusão da artéria cerebral média

Aprenda o método de Longa para oclusão da artéria cerebral média em ratos, uma técnica cirúrgica essencial para pesquisa de acidente vascular cerebral. Este modelo oferece maior taxa de sobrevivência e reprodutibilidade na indução de isquemia.

Abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos

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