Rápida Detecção Molecular e diferenciação de Influenza vírus A e B
30 de janeiro de 2017
Descreve-se um ensaio rápido, com base molecular da gripe A e B. O ensaio detecta Influenza cada alvo dentro de 15 min, utilizando amplificação isotérmica com iniciadores específicos de influenza, seguido de detecção do alvo com as sondas farol molecular. O ensaio de Influenza A e B é de fácil utilização e necessário hands-on tempo mínimo para executar.
O objetivo geral deste ensaio é diagnosticar ou descartar a infecção pelo vírus influenza em pacientes que apresentam sistema respiratório. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo do diagnóstico clínico, como o diagnóstico das principais causas de infecções respiratórias. A principal vantagem dessa técnica é que é um método rápido que pode ser usado em ambientes de cuidados agendados.
Demonstrando o procedimento estará Sam Kaplan, um técnico do nosso laboratório. Para coletar uma amostra de swab nasal, insira o swab na narina que tem a drenagem mais visível ou que está mais congestionada. Com rotação suave, empurre o cotonete para dentro da narina até encontrar resistência e gire várias vezes contra a parede nasal antes de removê-lo lentamente da narina.
Em seguida, armazene o cotonete e transporte-o em um frasco contendo três mililitros de meios de transporte viral. Em seguida, leve a amostra e o receptor de amostra azul à temperatura ambiente antes do teste. A base de teste laranja pode ser testada sem a necessidade de aquecer à temperatura ambiente.
Deixe todas as peças de teste no papel alumínio até imediatamente antes do uso. Em seguida, ligue o instrumento, insira o ID do usuário e pressione OK.To iniciar o processo de teste, toque em Executar teste na tela do instrumento. Em seguida, insira o ID do paciente usando o teclado na tela ou o leitor de código de barras e pressione OK. Depois disso, abra a tampa e insira o tubo de base de ensaio laranja no suporte da base de teste laranja.
Confirme se o teste correto é exibido na tela e pressione OK. Em seguida, insira o receptor de amostra azul no suporte do receptor de amostra azul e espere que o receptor de amostra aqueça. Em seguida, remova o selo folheado colocando dois dedos na borda do sample receptor para garantir que ele permaneça no lugar. Em seguida, coloque o cotonete do paciente a ser testado no receptor de amostra.
Misture vigorosamente o cotonete e o líquido por 10 segundos e pressione a cabeça do cotonete contra a lateral do receptor de amostra para ajudar a desalojar a amostra do cotonete. Se os cotonetes de teste forem armazenados em meio de transporte viral, faça um vórtice do meio de transporte viral por 10 segundos e adicione 200 microlitros ao receptor de amostra. Em seguida, pressione OK para continuar.
Depois disso, pressione o cartucho de transferência branco no receptor de amostra azul. Continue pressionando o sample receptor até que o indicador laranja suba. Em seguida, levante e conecte o cartucho de transferência à base de teste.
O indicador laranja deve descer assim que a transferência do cartucho estiver conectada corretamente. Feche a tampa e não abra até que a tela Resultados apareça. Agora toque em Executar teste de controle de qualidade na tela inicial.
Selecione o teste de CQ a ser executado. Em seguida, confirme o tipo de teste para corresponder à amostra de CQ destinada ao teste clicando em OK e seguindo as instruções na tela para concluir o teste. Após a conclusão do teste, observe os resultados do teste exibidos na tela com interpretações para a presença de influenza A, B ou subtipos desconhecidos e repita o teste para obter resultados inválidos.
Depois disso, limpe o instrumento e a área da bancada ao redor com 70% de etanol ou solução de alvejante a 10%. Esta figura mostra os valores médios de TC determinados pelo ensaio de FR para as amostras positivas e negativas para cada subtipo de influenza. Os resultados demonstram que as amostras falso-negativas determinadas pelo ensaio de influenza A e B foram devidas a amostras de baixa carga viral.
Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em 15 minutos se for executada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar que, ao configurar inicialmente o ensaio, o cartucho de transferência deve ser conectado à base de teste até que eles se encaixem no lugar. Se essas duas peças não forem presas corretamente, a execução falhará e precisará ser repetida desde o início.
Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar este ensaio de diagnóstico para influenza. Não se esqueça de que trabalhar com amostras de pacientes potencialmente infectados com influenza pode ser extremamente perigoso e precauções, como o uso de equipamentos de proteção individual adequados, devem sempre ser tomadas durante a realização deste procedimento.
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Visão Geral
Este artigo descreve um ensaio molecular rápido para a detecção dos vírus da Influenza A e B. O ensaio utiliza amplificação isotérmica e sondas do tipo beacon molecular, permitindo obter resultados em apenas 15 minutos.
Componentes Principais do Estudo
Área de Ciência
- Diagnóstico clínico
- Biologia molecular
- Doenças infecciosas
Contexto
- Os vírus da influenza são causas significativas de infecções respiratórias.
- O diagnóstico rápido é crucial para o manejo eficaz do paciente.
- Os métodos atuais podem exigir tempos mais longos de processamento.
- Este ensaio tem como objetivo fornecer resultados rápidos em um formato fácil de usar.
Objetivo do Estudo
- Desenvolver um ensaio rápido para o diagnóstico de infecções pelo vírus da influenza.
- Melhorar a eficiência dos diagnósticos clínicos em doenças respiratórias.
- Facilitar decisões terapêuticas imediatas em ambientes de saúde.
Métodos Utilizados
- Amplificação isotérmica com primers específicos para influenza.
- Detecção de alvos utilizando sondas do tipo beacon molecular.
- Coleta de amostras por meio de swab nasal.
- Tempo mínimo de manipulação necessário para o ensaio.
Resultados Principais
- O teste fornece resultados em até 15 minutos.
- Procedimento de fácil utilização, adequado para ambientes clínicos.
- Detecção eficaz dos vírus da Influenza A e B.
- Apresentado por um técnico de laboratório.
Conclusões
- O teste é uma ferramenta rápida e eficiente para o diagnóstico de influenza.
- Ele pode melhorar significativamente o atendimento ao paciente em infecções respiratórias.
- Estudos futuros podem ampliar sua aplicação em diagnósticos clínicos.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
A detecção molecular rápida de vírus da influenza apoia a tomada precoce de decisões diagnósticas no manejo de doenças respiratórias. O tempo de resposta do ensaio de 15 minutos permite um triagem oportuno em ambientes de atendimento imediato, reduzindo a latência diagnóstica. Essa capacidade auxilia na redução de riscos no desenvolvimento precoce de antivirais, fornecendo dados confiáveis sobre o status de infecção.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia e Farmacêuticos
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Permite a confirmação do status de infecção por influenza em modelos pré-clínicos, apoiando estudos de validação de alvos.
- Valor Operacional: Fornece um resultado rápido em sistema fechado, reduzindo o tempo de manipulação e o risco de contaminação.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Valor Científico: Gera sinais de detecção quantitativos por meio de sondas beacon moleculares para otimização de ensaios.
- Valor Operacional: Fornece resultados reprodutíveis em espécimes nasofaríngeos congelados e arquivados, apoiando a robustez do ensaio.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Valor Científico: Facilita o monitoramento longitudinal da carga viral em sistemas relevantes para a doença, auxiliando na redução de riscos mecanicistas.
- Valor Operacional: Permite o alinhamento entre equipes de virologia e toxicologia por meio de resultados padronizados.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
O ensaio se insere em fluxos de trabalho de descoberta inicial, nos quais é necessário confirmar rapidamente o status de infecção antes de prosseguir para a otimização do fármaco líder.
- Biologia da Descoberta: Apoia a verificação de hipóteses ao distinguir infecção por influenza A e B em coortes experimentais.
- Triagem: Permite a preparação de amostras biológicas padronizadas para triagem antiviral subsequente.
- Análises: Fornece resultados qualitativos e semi-quantitativos que ajudam a comparar a eficácia antiviral entre diferentes condições.
- Pesquisa Translacional: Conecta a detecção precoce da infecção à continuidade pré-clínica por meio de detecção viral consistente.
- Reutilização Empresarial: Representa um módulo diagnóstico reutilizável para estudos de vírus respiratórios em múltiplos projetos.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Reduz a ambiguidade mecanicista em modelos de infecção ao fornecer diferenciação clara entre subtipos de influenza.
- Valor Operacional: Garante padronização e reprodutibilidade por meio de operação sem pipeta e em sistema fechado.
- Valor Estratégico: Melhora as decisões de prosseguir ou interromper programas antivirais ao permitir confirmação rápida da infecção.
- Impacto sobre o Portfólio: Apoia a priorização ajustada ao risco de compostos com base em dados oportunos de interação com o alvo.
Considerações sobre a Implementação
- Exige treinamento na coleta de swab nasofaríngeo e no manuseio de amostras em meio de transporte viral.
- Depende da manutenção do instrumento e da estabilidade dos reagentes para desempenho consistente.
- Necessita alinhamento de protocolo entre equipes para rastreamento das amostras e interpretação dos resultados.
- Deve levar em conta a sensibilidade reduzida em amostras com baixa carga viral, conforme observado em comparações com espécimes congelados.
- Beneficia-se de controles ambientais para prevenir contaminação por amplicons em ambientes de alto rendimento.
