Name: Exploração objeto romance como um ensaio de Potencial de ordem superior comportamentos repetitivos em Ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: Aprenda a usar a exploração de objetos novos para identificar comportamentos repetitivos de ordem superior em camundongos. Este ensaio valida modelos animais para estudo de autismo sem treinamento prévio.

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Os autores gostariam de reconhecer o Programa de Verão Iniciação Científica, o Grupo de Usuários de Tecnologia Acadêmica, o Centro de Aprendizagem Digital, e do Centro de Ciências da Universidade de Redlands. Os autores gostaria de dedicar este trabalho à memória de Lou Yango.

O protocolo aqui descrito foi aprovado pelo Comitê de Cuidado e Uso Institucional Animal da Universidade de Redlands. Os ratinhos C58, C57, e FVB utilizados nestes estudos foram criados no biotério da Universidade de Redlands de estoque originalmente obtidos a partir do Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). Sentinelas deste biotério foram rastreados a cada seis meses e verificou-se ser livre de patógenos. 1. Equipamentos e quarto configurar Nota: Foram utilizadas duas arenas diferentes para romance testes objeto: uma gaiola retangular de plástico transparente (45 cm x 24 cm x 20 cm) ou um gaiola circular opaca, com um diâmetro de base de 41 cm; No entanto, pode ser utilizado qualquer gaiola. Pearson et al., Utilizando uma gaiola rectangular menor (20 cm x 30 cm x 20 cm) no seu ensaio. Detalhes deste projeto experimental específico estão incluídas abaixo, mas dada a novidade deste ensaio, não há padrões aceitos dentro do campo da fenotipagem comportamental para qualquer uma das variáveis ​​descritas. <ol><li&gt; Preencha a arena de testes com cerca de ½ pol de cama milho-cob. </li><li> Selecionar quatro diferentes objetos novos. Escolha quatro objectos que são aproximadamente do mesmo tamanho, construídos de plástico de alta densidade para facilitar a limpeza e resistir à mastigação e diferentes umas das outras em forma e cor. Importante, assegurar que os ratinhos de teste não estão expostos a esses objetos até ser executado no ensaio. Nota: Por exemplo, um tijolo rosa brinquedo, um macaco vermelho, um azulejo branco com escrita azul e uma matriz branca padrão foram usados ​​aqui. </li><li> Na arena retangular, colocar esses objetos aproximadamente 3 cm dos cantos. Na arena redondo, colocar os objectos de modo a que eles estão a distâncias iguais uns aos outros e cerca de 10 centímetros a partir dos lados. Grave a colocação de cada objecto como um número diferente, 1-4 (Figura 1). Certifique-se de que os objectos são colocados numa ordem aleatória ou contrapeso ao longo do teste. </li><li> Posicionar uma câmera diretamente acima do testearena para gravar toda a arena durante os períodos de aclimatação e de ensaio. Nota: Tendo investigadores no mesmo quarto com os ratos podem potencialmente influenciar os níveis de atividade e exploração durante os testes. </li></ol> 2. novela objeto Exploração Teste <ol><li> Teste no início do ciclo de luz numa sala iluminada com luz fluorescente a aproximadamente 100 lux. Certifique-se de que a iluminação é uniforme em toda a arena de testes para padronizar a aparência durante a gravação de vídeo. </li><li> Coloque um notecard de dimensões conhecidas na parte inferior da arena de teste e iniciar a gravação vídeo. </li><li> Transferir o rato de ensaio numa arena de teste vazio durante 10 minutos para servir como um período de aclimatação. gravação de vídeo o período de aclimatação. </li><li> Após o período de aclimatação, deixe o mouse na arena, rapidamente adicionar os quatro novos objetos para a arena de teste e registrar o comportamento do rato para um adicional de 10 min. </li><li> Uma vez que o total de 20 minutos de aclimatação PE / testeríodo decorrido, retornar o mouse teste à sua gaiola e bem limpa e seca os novos objetos e arena de testes com sabão sem perfume e água. </li></ol> 3. Vídeo Scoring <ol><li> Conclua todos com pontuações comportamento usando o vídeo para facilitar a confiabilidade. Nota: O software de registo comportamental Noldus The Observer foi usado para executar as etapas 22, tal como descrito aqui, mas um programa especializado não é necessário: <ol><li> Antes de marcar o primeiro vídeo, configurar o projeto esquema de codificação do software de registro comportamental através da criação de um novo projeto ou editando um projeto existente, similar. <ol><li> Dentro da caixa de instalação do Projeto, definida aquisição de dados para &#39;Off-line Observação. Dentro da caixa de Comportamento de codificação, o programa &quot;Scrabble&quot;, &quot;Digging&quot;, &quot;Criação&quot;, &quot;grooming&quot; e &quot;Sniff Objeto 1, 2, 3 e 4&quot;, como &#39;Eventos estatais ». Programa &quot;Jumping&quot;, como um &quot;ponto de Evento &#39;. Nota: Definiçãos para estes comportamentos são descritos em detalhe noutro local 11. Nota: Estado Eventos tem um início e parar o tempo, Considerando que o ponto Eventos simplesmente recolher dados de contagem. A combinação de teclas para cada comportamento discreto são gerados pelo software e estas teclas correspondentes são programadas em um teclado secundário (passo 3.1.2). </li><li> Para programar o teclado secundário, abra o software de teclado, clique no botão apropriado secundária teclado exibido na tela, digite a combinação de teclas apropriado e clique em OK. Uma vez que o teclado secundário foi programado, feche o software como o programa será executado no plano de fundo do computador. </li></ol></li><li> Uma vez que o projeto e foi criado, use o software de registro comportamental para marcar o número ea duração das traseiras (definidos como ambas as patas dianteiras serem colocados em uma parede da arena), cava (definida como dois patas dianteiras do rato cavando a roupa de cama da arena), auto-noivos (definida como a mOuse lamber qualquer região do seu próprio corpo e / ou o mouse tocar em qualquer parte do rosto com suas patas dianteiras), e saltos (definida como uma criação do mouse e, em seguida, pulando para que todos os quatro pés estão fora do chão ao mesmo tempo). <ol><li> Para marcar um vídeo, vá em File&gt; Open Project e, em seguida Observe&gt; Observation&gt; Novo. O programa solicita um nome de arquivo. Uma vez nomeado, selecione o arquivo de mídia de vídeo adequado. </li><li> Comece o placar clicando no botão Iniciar Observação. Nota: Quando conseguir rato comportamento repetitivo, todas dos Estados eventos exigem dois toques de tecla, a primeira correspondente ao início do comportamento e o segundo corresponde ao fim do comportamento. Ponto de eventos requerem apenas uma tecla. </li></ol></li><li> Marque o número de vezes que o rato cheirou cada objeto. Sniffs são definidos como qualquer momento um rato move seu nariz no espaço de 0,5 cm de um objeto. Medir a duração cheirar usando software de registo de comportamento, da mesma forma que RePetdurações de comportamento tivo foram medidos (passo 3.1.2). <ol><li> Cada vez que um rato funga um objecto, gravar o número de posição correspondente, o que conduzirá a uma série de números no final do período de teste de 10 min (por exemplo, 1243421 ...). registrar esses dados manualmente. Nota: Para facilitar a eficiência e consistência, enquanto vídeos de pontuação, os números sempre correspondem a uma determinada posição, não se opõe. </li><li> Se um rato fareja um objeto, olha para longe, em seguida, fareja o objeto novamente, contar esse número duas vezes. </li><li> Uma vez que o 10 min vídeo completo foi marcado, visualizar os dados clicando em Analisar&gt; Análise do Comportamento&gt; Novo. Uma vez que os dados aparecem na tela, exportar ou copiar e colar em uma planilha separada. </li></ol></li><li> Grave a distância total percorrida o rato dentro da arena durante o teste. Nota: O software de monitoramento de vídeo, calibrado para controlar o mouse de teste e registrar a distância total movimentado em centímetros, foi usadopara realizar esta etapa. Todos os vídeos marcados pelo software de monitoramento de vídeo tinha um notecard de dimensões conhecidas colocados na arena no início do vídeo. <ol><li> Use o notecard para calibrar cada vídeo dentro do software através da criação de uma linha de calibração ao longo de cada extremidade do notecard e introduzir o comprimento adequado dentro da tela de calibração do software. Uma vez que as linhas são traçadas, o comprimento de entrada conhecida e a largura do notecard que correspondem a cada linha. </li><li> Dentro de Configurações Arena, selecione toda a arena. Nota: As áreas separadas da arena pode ser diferenciada no software se, por exemplo, o movimento do mouse ao longo das paredes vs. através do centro era de interesse. </li><li> Dentro de Configurações de controle de avaliação, selecione uma duração de dez minutos. Em Configurações de Detecção, escolha um objeto escuro em um fundo claro. Nota: Isto teria de ser alterado se ratos albinos estavam sendo usados ​​ou se o fundo era um tom mais escuro. </li><li> Uma vez que as configuraçõesforam programados, marcar os vídeos. Clique Aquisição&gt; Abrir Aquisição. Na caixa de Controle de Aquisição, clique em Novo Julgamento e depois começar a experimentação. Depois de dez minutos decorrido, o programa pára e os dados podem ser visualizados. </li><li> Clique em Analisar&gt; calcular as estatísticas. Uma vez que os dados aparecem na tela, exportar ou copiar e colar em uma planilha separada. </li></ol></li></ol></li></ol> 4. Análise Estatística, Sequencing <ol><li> Dentro da cadeia de números correspondentes ao objeto investigações geradas por cada rato, identificar o número total de todas as possíveis combinações de 3 dígitos sem números de repetição (por exemplo 121, 123, 124, mas não 112 ou 122). Nota: Um programa escrito em linguagem de programação Python foi usado para identificar o número de vezes que cada seqüência possível aparece na seqüência de números. Não é necessário o uso de um programa de fora, e esta etapa pode ser completada muitas maneiras diferentes (por exemplo, usandoa função Localização no Microsoft Word ou Excel). </li><li> Registe o número de vezes que cada sequência ocorre e identificar as três sequências mais frequentemente repetidos para cada rato. Nota: sequências individuais podem variar com o mouse ea sequência real é de menos interesse do que o número de vezes que uma sequência foi repetida (ou seja, a adesão a um padrão é mais importante do que o próprio padrão). </li><li> Dado que o número total de sequências de um rato irá repetições correlacionam-se positivamente para o nível de actividade, corrigir estes valores dividindo a quantidade de padrões mais frequentes, o número total de padrões para cada ratinho individual. Isto vai produzir uma sequência de repetição índice que é independente da actividade global. </li><li> Compare o número de vezes que cada rato repete suas sequências mais comuns (corrigido para o nível de atividade) entre os grupos usando uma ANOVA adequado, procedimento de comparação múltipla (teste de Dunnett, por exemplo) e os testes post-hoc. </li></ol><ol><li> Utilizando a mesma sequência de números gerados acima (passo 3.1.3.1), identificar o novo objecto preferências de cada rato através da contagem do número total de vezes que cada objecto foi investigado, ou em outras palavras, a contagem do número total de 1 seg, 2 seg , 3 seg e 4 segundos na seqüência de dados. Correta para o nível de atividade e compará via ANOVA como descrito acima (passos 4,3-4,4). Nota: Estes métodos publicados por nosso laboratório 22 e descrito aqui são fortemente baseada em Pearson et al 17. </li></ol>

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Os autores não têm nada a divulgar.

Aqui, apresentamos um ensaio recentemente desenvolvido, que pode ser útil para quantificar comportamentos de ratos com validade de face de ordem superior comportamentos repetitivos em seres humanos. Ao contrário de ensaios mais estabelecidos, como a Barnes ou T-labirinto, este ensaio objeto de exploração romance não exige qualquer formação rato nem é particularmente provocam ansiedade. Além disso, o romance de exploração objeto não requer qualquer alimento ou estímulos sociais, permitindo maior foco sobre os comportamen...

Transtorno do espectro do autismo (ASD) é um distúrbio neurológico que consiste em três sintomas principais: comprometimento social, dificuldade para se comunicar por meio da linguagem e comportamentos repetitivos estampados 1. Desde 2000, o número de pessoas que foram diagnosticadas com ASD aumentou de 1 em 150 a 1 em 68 no espaço de dez anos 2. Embora a prevalência da doença continua a aumentar, a causa da desordem não é ainda conhecido. Houve um aumento nos esforços para identificar modelos de mouse apropriados para o núcleo e os sintomas associados da ASD, como esses modelos poderiam levar a uma maior compreensão dos sintomas subjacentes e as causas da ASD. Existem várias estirpes puras de mouse que aparecem para exibir comportamentos com validade de face para os sintomas centrais da ASD, incluindo comportamentos repetitivos 3. Restritos, comportamentos repetitivos (RRBs) são um sintoma central de alguns transtornos psiquiátricos, como ASD.RRBs pode aumentar com a gravidade da desordem 4, e pode perturbar drasticamente o estilo de vida dos indivíduos afectados. RRBs são normalmente colocados em duas categorias, de ordem inferior comportamentos repetitivos, que em humanos consistem em ações tais como balançar e mão-agitando; e de ordem superior comportamentos repetitivos, que consistem em estrita adesão a rotina e resistência à mudança 5-8. Lower ordem comportamentos repetitivos têm sido amplamente estudados em roedores onde eles se manifestam como estereotipias motor, que pode ser facilmente observados na criação de um laboratório 9. Esses comportamentos parecem ter boa validade de face para RRBs em seres humanos, e potencialmente forte validade do construto bem 10. Teste para a presença de RRBs ordem inferior pode ser concluída através de monitoramento de vídeo da atividade do rato para estudar as lutas ea duração desses estereotipias motoras 11. ordem superior comportamentos repetitivos representar um desafio para re biomédica básicaprocurar utilizando roedores, uma vez que estes RRBs não são tão facilmente identificados através de simples observação. Devido à dificuldade em identificar esses comportamentos, menos ensaios estabelecidos para o comportamento repetitivo de ordem superior existem. Tradicionalmente, RRBs de ordem superior ter sido medidos em roedores utilizando um paradigma do labirinto em que o animal de teste está treinado para chegar a competência em escapar. A localização de escape é então ligado eo número de ensaios necessários para re-aprender a localização de fuga é registrada 12. Estes ensaios não são ideais como eles exigem um período de treinamento longo, muitas vezes induzem ansiedade, e pode resultar em resultados altamente variáveis. A exploração do furo de bordo também tem sido utilizada para quantificar de ordem superior RRBs 13,14. Esta abordagem não requer treinamentos prolongados, mas não contar com a motivação de alimentos e / ou discriminação olfativa. Os ensaios para RRBs de ordem superior que não são ansiogênica ou exigem treinamento seria um bom complemento para o repertório existente de Exploratio hole-board<html> n e ensaios baseados em Maze atualmente em uso. O C58 / J (C58) estirpe consanguínea rato exemplifica fortemente altos níveis de comportamento estereotipado associado com ASD, ou seja, repetitivos, estereotipias motoras sem propósito e os níveis elevados de auto-preparação 3,11. Além disso, os camundongos C58 exibir RRBs através de altos níveis de dependência, de volta sacudindo e scrabbling 11,14,16. Esta estirpe começa mostrando esses comportamentos no início do período neonatal e continua a exibi-los durante a vida adulta. Seria ideal para ser capaz de testar a presença de elevados de ordem mais elevada RRBs para complementar os de ordem mais baixa RRBs bem documentados presentes nesta estirpe, bem como outras estirpes de ratinho. O ensaio objeto de exploração romance aqui descrito proporciona a oportunidade para pesquisadores observar inferior ordem e RRBs de ordem superior em simultâneo, uma vez que dá a capacidade de medir comportamentos padronizados, bem como estereotipias motoras repetitivas. e_content &quot;&gt; Utilizando nova exploração como objecto um ensaio para a de ordem superior comportamentos repetitivos foi desenvolvido por Pearson et ai. 17. Esta nova avaliação é uma extensão do teste de campo aberto bem estabelecida 18-21 com a adição de quatro novos objectos arena. os ratos foram deixados a investigar livremente estes desconhecidas objectos e o número e ordem das investigações objecto foi registado. as investigações de objecto foram então analisadas para a presença de padrões, com ratinhos BTBR apresentação de números elevados de investigações estampados entre os objectos. Utilizando este ensaio, os ratos podem exibir de ordem superior comportamentos repetitivos e padronizados, eliminando a necessidade de aprender comportamentos, bem como a remoção de estímulos desnecessários. exploração novela objeto induz RRBs de ordem superior, pois permite que os ratos para criar padrões e sequências de formulário através de sua exploração naturais . Utilizando este ensaio permite ao investigador quantificar a presença destes RRBs de ordem superior. Pearson et ai. desenvolveu este ensaio e é usado para testar a presença de potenciais de ordem superior comportamentos repetitivos na estirpe de ratinhos consanguíneos BTBR, com resultados intrigantes 17. Temos publicou recentemente um estudo follow-up olhar para os comportamentos do C58, C57BL / 6J (C57) e / NJ (FVB) estirpes FVB, bem como uma investigação mais detalhada para potenciais variáveis ​​de confusão presentes neste ensaio, e possível abordagens estatísticas para analisar os dados gerados 22.

<table><tbody><tr><td>Gaiola de Roedores de Policarbonato Padrão (45 cm x 24 cm x 20 cm)</td><td></td><td></td> <td>Várias gaiolas são desejáveis para facilitar o teste de vários camundongos&nbsp;</td></tr><tr><td>Arena de teste circular opaca de plástico (41 cm de diâmetro da base)</td><td>United States Plastic Corp.</td><td>13931</td><td>Várias arenas são desejáveis para facilitar o teste de vários camundongos&nbsp;</td></tr><tr><td>Objeto de romance de cama</td><td></td><td></td><td></td>de roedor padrão Corn-Cob</tr><tr><td>- macaco vermelho</td><td>Hasbro, Pawtucket RI</td><td></td><td>do Barrel of Monkeys</td></tr><tr><td>Objeto de romance - retangular 2 x 4 Objeto de romance LEGO</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>- azulejo</td><td>Thinkfun Inc., Alexandria VA</td><td></td><td>de Toot and Otto</td></tr><tr><td>Novel Object - matriz</td><td></td><td></td><td></td>branca padrão</tr><tr><td>Câmera de vídeo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software de Registro Comportamental - The Observer</td><td>Noldus, Wageningen, Holanda</td><td>outros programas podem ser usados</td><td></td></tr><tr><td>Software de Rastreamento de Vídeo - EthoVision</td><td>Noldus, Wageningen, Holanda</td><td>outros programas podem ser usados</td><td></td></tr><tr><td>Teclado de entrada X-Keys</td><td>P.I. Engineering, Williamstown MI</td><td>829484</td><td></td></tr><tr><td>MacroWorks II</td><td>P.I. Engineering, Williamstown MI</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

exploração objeto romance como um ensaio de potencial de ordem superior comportamentos repetitivos em ratos

Novel Object Exploration as a Potential Assay for Higher Order Repetitive Behaviors in Mice

Comportamentos restritos e repetitivos (RRBs) são uma característica central do transtorno do espectro do autismo (TEA) e atrapalham a vida dos indivíduos afetados. Os RRBs são comumente divididos em componentes de ordem inferior e superior, com RRBs de ordem inferior consistindo em estereotipias motoras e RRBs de ordem superior consistindo em comportamentos perseverativos e sequenciais. RRBs de ordem superior são difíceis de modelar em camundongos. Os ensaios atuais para RRBs em camundongos se concentram principalmente nos componentes de ordem inferior, dificultando a pesquisa biomédica básica sobre possíveis tratamentos ou intervenções para RRBs de ordem superior. Aqui descrevemos um novo ensaio, uma nova exploração de objetos. Este ensaio usa uma arena básica de campo aberto com quatro novos objetos colocados ao redor do perímetro. O mouse de teste pode explorar livremente a arena e a ordem em que o mouse investiga os novos objetos é registrada. A partir desses dados, sequências padronizadas de exploração podem ser identificadas, assim como o objeto preferido para cada mouse. Os dados representativos compartilhados aqui e os resultados anteriores usando o novo ensaio de exploração de objetos ilustram que as cepas de camundongos endogâmicos demonstram comportamento diferente neste ensaio e que as cepas com RRBs elevados de ordem inferior também mostram comportamento padronizado elevado. Como tal, o novo ensaio de exploração de objetos parece possuir boa validade de face para RRBs de ordem superior em humanos e pode ser um ensaio valioso para estudos futuros que investigam novas terapêuticas para TEA.

Os dados representativos mostram que 22 C58 feminino / ratos J exibido um maior número de padrões seqüenciados do que as outras estirpes na arena redonda (Figura 2, painel A), mas não na arena rectangular (Figura 2, painel C). Nenhuma das três estirpes macho diferiam umas das outras (Figura 2, painéis B e D). Os dados representativos mostram que ambos os ratinhos C58 / J machos e fêmeas exibem uma preferência mais forte por ob...

Comportamentos repetitivos e restritos de ordem superior (RRBs) perturbam a vida dos indivíduos afetados. Esses comportamentos são difíceis de modelar em roedores, dificultando a pesquisa biomédica básica sobre possíveis tratamentos ou intervenções para RRBs. Aqui, descrevemos a exploração de novos objetos como um ensaio potencial para RRBs de ordem superior em camundongos.

Exploração objeto romance como um ensaio de Potencial de ordem superior comportamentos repetitivos em Ratos

Restricted, repetitive behaviors (RRBs) are a core feature of autism spectrum disorder (ASD) and disrupt the lives of affected individuals.  RRBs are ...

O objetivo geral deste ensaio comportamental é identificar a presença de comportamentos repetitivos de ordem superior em camundongos. Este ensaio pode ajudar a validar potenciais modelos de camundongos com comportamento semelhante ao autista, como a linhagem consanguínea C 58 J. As principais vantagens desta técnica são que ela não exige nenhum treinamento dos camundongos e não é particularmente provocadora de ansiedade.Comece enchendo a arena de teste. Uma gaiola retangular de plástico transparente com meio centímetro de camação de sabugo de milho. Selecione quatro objetos novos que sejam diferentes em forma e cor.Por exemplo, um tijolo de brinquedo rosa, um macaco vermelho, um ladrilho branco com escrita azul e um dado branco padrão. Certifique-se de que esses objetos tenham aproximadamente o mesmo tamanho e sejam feitos de plástico de alta densidade para facilitar a limpeza e resistir à mastigação. No ambiente retangular, posicione esses objetos a três centímetros dos cantos, em uma ordem aleatória e contrabalanceada ao longo do teste.Registre a posição de cada objeto com um número diferente de um a quatro. Por fim, posicione uma câmera diretamente acima das arenas de teste de forma que toda a arena seja gravada durante os períodos de aclimatação e repouso. Inicie os testes no início do ciclo claro, em uma sala iluminada com luz fluorescente de aproximadamente 100 lux.Certifique-se de que a iluminação seja uniforme em toda a arena de teste para padronizar a aparência durante a gravação em vídeo. Em seguida, coloque um cartão de dimensões conhecidas no fundo da arena de teste para uso posterior como padrão de calibração. E pressione o botão de gravação na câmera de vídeo.Em seguida, transfira um camundongo-teste para a arena de testes vazia por 10 minutos, servindo como período de aclimatação, e continue a gravação. Após o período de aclimatação, deixe o camundongo na arena e adicione rapidamente os quatro objetos novos à arena. Grave o comportamento do camundongo por mais 10 minutos durante este período de teste.Por fim, após o período de teste ter sido concluído, devolva o camundongo testado à sua gaiola de origem. Limpe e seque os objetos novos, bem como a arena de teste, com sabão de louça sem perfume e água. Comece configurando o esquema de codificação do projeto no software de registro comportamental.No interior da caixa de configuração do projeto, defina a aquisição de dados como offline, observação offline. Na caixa de codificação de comportamento, programe scrabble, escavação, ereto, alisamento e farejamento do objeto um, dois, três e quatro como eventos de estado. Programe salto como um evento pontual.Para programar o teclado secundário, abra o software do teclado, clique no botão do teclado secundário exibido na tela, digite a combinação de teclas apropriada e clique em OK. Uma vez que o teclado secundário tenha sido programado, feche o software e deixe o programa executar em segundo plano no computador. Após o projeto ter sido configurado no software, prepare-se para pontuar o número e a duração de cada um dos seguintes comportamentos repetitivos.Empina-se, cava, limpa-se e pula. Para pontuar um vídeo, clique em arquivo, abrir projeto, observar, observação e novo. Escolha um nome para o novo arquivo e, em seguida, selecione o arquivo de mídia de vídeo a ser pontuado.Inicie a pontuação dos comportamentos repetitivos clicando no botão iniciar observação. Utilize duas teclas para todos os eventos de estado: uma para indicar o início e outra para o fim do comportamento.E utilize apenas uma tecla para eventos pontuais. Em seguida, use o software para pontuar o número de vezes e a duração durante as quais o camundongo cheirou cada objeto, definido como qualquer momento em que um camundongo movimenta o nariz a uma distância inferior a 0,5 centímetros de um objeto. Cada vez que um camundongo cheira um objeto, registre o número de posição correspondente do objeto e anote manualmente a sequência de números de posição até o final do período de teste de 10 minutos.Conte uma posição duas vezes se um camundongo cheirar um objeto, olhar para outro lado e depois cheirar o objeto novamente. Após a pontuação dos cheiros no vídeo de teste de 10 minutos, visualize os dados clicando em analisar, análise de comportamento e novo. Em seguida, assim que os dados aparecerem na tela, exporte-os para uma planilha separada.Em seguida, registre a distância total percorrida pelo camundongo na arena durante o teste. Para isso, use o cartão de anotações para calibrar cada vídeo, definindo uma linha de calibração em cada extremidade do cartão e inserindo o comprimento apropriado na tela de calibração do software. Após desenhar as linhas, insira o comprimento e a largura conhecidos do cartão de anotações que correspondem a cada linha.Em seguida, nas configurações da arena, selecione toda a arena. Nas configurações de controle de trilha, escolha uma duração de 10 minutos. E nas configurações de detecção, selecione um objeto escuro sobre um fundo claro.Uma vez que essas configurações tenham sido programadas, analise os vídeos clicando em aquisição e abra a aquisição. Na caixa de controle de aquisição, clique em novo ensaio. E então inicie os ensaios.Após decorridos 10 minutos, pare o programa e observe os dados. Por fim, clique em analisar e calcule as estatísticas. Depois que os dados aparecerem na tela, exporte-os para uma planilha separada.O percentual do número de vezes que as três sequências de padrões mais comuns foram repetidas foi observado em três linhagens consanguíneas diferentes de camundongos. As fêmeas C58 exibiram uma forte adesão aos seus padrões preferidos na arena circular, mas não na arena retangular. Já os camundongos machos não diferiram entre si em nenhuma das arenas.Além disso, camundongos machos e fêmeas da linhagem C57BL/6 na arena circular demonstraram uma preferência mais acentuada pelo seu objeto mais preferido do que as outras duas linhagens. Enquanto isso, nenhuma diferença na preferência por objetos foi observada na arena retangular. Uma vez dominada, esta técnica pode ser concluída em menos de uma hora, sendo necessários 15 minutos para a aquisição de dados e 20 minutos para a pontuação do comportamento.Ao realizar este procedimento, é importante lembrar que camundongos são muito sensíveis a alterações em seu ambiente. Certifique-se de que o ambiente de teste permaneça consistente durante todo o experimento. Após este procedimento, outros métodos, como o Labirinto de Barnes ou o Labirinto em Equipe, podem ser utilizados para validar ainda mais a presença de comportamentos repetitivos de ordem superior.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como utilizar a exploração de objetos novos para identificar a presença de comportamentos repetitivos de ordem superior em camundongos.

novel-object-exploration-as-potential-assay-for-higher-order

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Doenças, traumatismo craniano, modificações genéticas e tratamento de camundongos com drogas podem ter efeitos profundos no comportamento. Utilizando abordagens bem caracterizadas e validadas, como enterrar mármore e triturar ninhos, comportamentos compulsivos podem ser documentados com precisão em camundongos como modelos de transtorno obsessivo-compulsivo humano e transtorno do espectro do autismo.

Enterrar mármore e triturar ninhos como testes de comportamentos repetitivos e compulsivos em camundongos

Descreve-se aqui uma abordagem de rastreio comportamental escalonada que pode ser utilizada para pesquisar compostos que exibem eficácia in vivo sobre comportamentos motores cognitivos e funcionais em modelos de ratinho transgénicos de β-amiloidose e tauopatia. Esses métodos são otimizados para pesquisar compostos para atividades em tarefas de memória de curto prazo e de trabalho.

Avaliação de Alternância Espontânea, Reconhecimento de Objetos Novos e Clasping de Membros em Modelos de Rato Transgênico de Neuropatologia Amilóide-β e Tau

O teste de reconhecimento de objeto (ORT) é um ensaio simples e eficiente para a avaliação da aprendizagem e memória em camundongos. A metodologia é descrita abaixo.

Teste de reconhecimento de objeto romance para a investigação da aprendizagem e memória em ratos

Este protocolo descreve um ensaio comportamental, com base no teste de labirinto de Barnes, para estudar como instintiva defensiva ações são modificadas pelo conhecimento do ambiente espacial.

Um ensaio comportamental para investigar o papel da memória espacial durante uma defesa instintiva em ratos

Este protocolo mede aprendizagem espacial e memória usando o labirinto de Barnes. Um novo paradigma de donzela em apuros é usado para avaliar a atividade locomotora e comportamento pró-social em camundongos.

Analisando a aprendizagem espacial e comportamento pró-social nos ratos usando o labirinto de Barnes e paradigmas de donzela em apuros

Aqui nós fornecemos um protocolo que inclui instruções abrangentes para o estabelecimento econômico da localização de murino objeto e objeto romance reconhecimento testes comportamentais, incluindo o custo, projeto e construção de equipamentos necessários, bem como execução de testes comportamentais, coleta de dados e análise.

Reconhecimento de objetos novos e localização de objeto comportamental testes em ratos em um orçamento

Uma bateria de testes comportamentais abrangente das habilidades motoras, humor — incluindo a interação social, depressão e ansiedade — e cognição destina-se a avaliação repetida das alterações comportamentais relacionadas à neurodegeneração em camundongos.

Uma bateria de testes comportamentais para a avaliação repetida das habilidades motoras, humor e cognição em ratos

O papel dos genes recentemente descobertos associados à doença na patogênese das doenças neuropsiquiátricas permanece obscuro. Um bilateral modificado na técnica de eletroporação uterómis permite a transferência genética em grandes populações de neurônios e o exame dos efeitos causadores das mudanças na expressão genética no comportamento social.

Um pipeline usando eletroporação bilateral no útero para interrogar influências genéticas no comportamento dos roedores

Modelos de roedores são ferramentas valiosas para estudar comportamentos centrais relacionados ao transtorno do espectro do autismo (TEA). Neste artigo, expomos dois testes comportamentais para modelar as principais características do TEA em camundongos: auto-limpeza, que avalia o comportamento repetitivo, e o teste de interação social de três câmaras, que documenta deficiências sociais.

Estratégias para avaliar comportamentos semelhantes aos autistas em camundongos

O presente estudo descreve um teste de comportamento motor fino para examinar déficits motores em modelos de roedores, incluindo o rato TgF344-AD, usando aprendizado de máquina.

Uma tarefa motora fina para estudar a cinemática articular em um modelo pré-clínico de doença neurodegenerativa

Aprenda a usar a exploração de objetos novos para identificar comportamentos repetitivos de ordem superior em camundongos. Este ensaio valida modelos animais para estudo de autismo sem treinamento prévio.

Exploração objeto romance como um ensaio de Potencial de ordem superior comportamentos repetitivos em Ratos

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